蛋白质组研究进展 被引量：29

1

作者 胡志远 贺福初 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第3期202-205,共4页

蛋白质组研究技术是后基因组时代的重要研究手段．综述了流感嗜血杆菌、细菌、酵母、线虫。

关键词 蛋白质组 双向电泳 数据库

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山黧豆叶片蛋白质双向电泳技术的建立 被引量：19

2

作者 吴庆丰 王崇英 +2 位作者 王新宇 李志孝 王亚馥 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期1330-1336,共7页

以山黧豆叶片为材料,比较分析了蛋白质的不同提取方法,在此基础上着重于样品制备.对IPG胶条的选择,第一向等电聚焦和第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的电泳程序及参数、染色方法等相关技术进行了比较和条件优化.结果显示:采用TCA-丙酮沉... 以山黧豆叶片为材料,比较分析了蛋白质的不同提取方法,在此基础上着重于样品制备.对IPG胶条的选择,第一向等电聚焦和第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的电泳程序及参数、染色方法等相关技术进行了比较和条件优化.结果显示:采用TCA-丙酮沉淀法提取蛋白质,裂解液中加入Tris-base作为蛋白酶抑制剂,等电聚焦电泳时延长低电压的电泳时间(30 V1、2 h,500 V1、h,1 000 V2、h)以促进盐离子泳出的方法对山黧豆叶片蛋白质进行双向电泳,并用考马斯亮蓝和银染复合染色法进行凝胶染色,能够获得蛋白点清晰的双向电泳图谱,说明用优化后的方法建立起的山黧豆叶片蛋白质双向电泳技术,蛋白质样品制备质量好,电泳分辨率高,完全适合于进一步的蛋白质组学研究. 展开更多

关键词 山黧豆 蛋白质提取 SDS-PAGE双向电泳 蛋白质组学

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中药益气解毒颗粒对鼻咽癌裸鼠移植瘤蛋白质表达的影响 被引量：12

3

作者 唐发清 田道法 +5 位作者 邓富良 龚志君 周辉 梁湘辉 李茂玉 肖志强 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期577-582,共6页

目的 :探讨中药复方益气解毒颗粒抑制鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤生长的分子机制。方法 :将鼻咽癌细胞系HNE1接种至BABL/c裸小鼠 ,2 0只 ,每只 0 .5× 10 7个 ,待移植瘤生长至一定大小 (约 1cm× 1cm× 1cm) ,随机分为两组。中药... 目的 :探讨中药复方益气解毒颗粒抑制鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤生长的分子机制。方法 :将鼻咽癌细胞系HNE1接种至BABL/c裸小鼠 ,2 0只 ,每只 0 .5× 10 7个 ,待移植瘤生长至一定大小 (约 1cm× 1cm× 1cm) ,随机分为两组。中药组灌喂益气解毒颗粒药液 ,对照组灌喂生理盐水 ,30d后处死裸鼠 ,解剖获取肿瘤组织 ,测量瘤体体积大小 ,称量瘤体重量。取 10 0mg瘤体组织 ,常规提取总蛋白质 ,用固相 pH梯度双向凝胶电泳分离移植瘤组织的总蛋白质 ,银染显色 ,ImageMaster 2DElite 4 .0 1软件分析差异蛋白质点。随机选取表达差异点共 19个 ,4个点为只在中药组表达 ,4个点仅在对照中表达 ,余下 11个为表达相差 5倍以上的点 ,进行质谱鉴定和生物信息学分析。结果 :益气解毒颗粒药液能明显抑制鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的生长 ,灌喂中药组瘤体积和重量分别为 (0 .2 0 7± 0 .0 2 3)cm3和 (0 .132± 0 .0 2 1) g ,对照组为 (1.342± 0 .2 98)cm3 和 (1.0 17± 0 .0 15 ) g(P <0 .0 5 ) ;制率为 84 .5 8%。双向电泳图像分析蛋白质表达 ,益气解毒颗粒药物处理组平均蛋白质数为 5 6 7± 4 9,未处理组的平均蛋白质数为 6 79± 5 9;差异蛋白质有 2 4 3个 ,其中有 112个表达增强 ,有 131蛋白质表达下降 ;差异蛋白质的质谱鉴定和生物? 展开更多

关键词 益气 解毒 中药 瘤体 裸鼠移植瘤 药组 蛋白质表达 蛋白质 固相PH梯度 特异表达

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茵陈五苓散对动脉粥样硬化大鼠蛋白质组学的影响 被引量：7

4

作者 王东生 陈方平 +1 位作者 袁肇凯 郭志华 《浙江中医学院学报》 2005年第1期41-44,共4页

目的:探讨茵陈五苓散对动脉粥样硬化(AS)大鼠作用的分子机制,方法:20只雄性 Wistar大鼠采用高脂饲料喂饲法复制大鼠AS模型,造模1月后抽样检测大鼠主动脉,以发现动脉粥样硬化斑块为造模成功指标。茵陈五苓散治疗 1 个月后分别用固相pH梯... 目的:探讨茵陈五苓散对动脉粥样硬化(AS)大鼠作用的分子机制,方法:20只雄性 Wistar大鼠采用高脂饲料喂饲法复制大鼠AS模型,造模1月后抽样检测大鼠主动脉,以发现动脉粥样硬化斑块为造模成功指标。茵陈五苓散治疗 1 个月后分别用固相pH梯度双向凝胶电泳分离茵陈五苓散组和模型组的AS大鼠主动脉组织总蛋白质,银染显色,PDQuest 2 de软件分析差异蛋白质点。结果: 双向电泳图象分析茵陈五苓散组图象的平均蛋白质数为 1077±68,模型组的平均蛋白质数为 1106±84;差异蛋白质有556个,其中有196个表达增强,有360蛋白质表达下降。结论: 茵陈五苓散的抗 AS作用与这些差异表达蛋白质有关,这些差异蛋白质有待质谱分析鉴定,为茵陈五苓散作用的分子机理研究提供了新的思路。 展开更多

关键词 茵陈五苓散 大鼠 造模 主动脉 动脉粥样硬化 蛋白质 治疗 质数 结论 差异

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布鲁氏菌外膜蛋白免疫蛋白质组学方法的建立 被引量：8

5

作者 吴朔 赵忠鹏 +3 位作者 罗德炎 叶艺 王希良 于三科 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期385-388,共4页

目的建立布鲁氏菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法,筛选布鲁氏菌保护性抗原。方法利用双向电泳技术对实验条件下培养的布鲁氏菌疫苗株M5外膜蛋白进行分离,结合WB(Western blotting)技术寻找发生免疫反应的蛋白质。结果21个免疫蛋白点... 目的建立布鲁氏菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法,筛选布鲁氏菌保护性抗原。方法利用双向电泳技术对实验条件下培养的布鲁氏菌疫苗株M5外膜蛋白进行分离,结合WB(Western blotting)技术寻找发生免疫反应的蛋白质。结果21个免疫蛋白点经胶内酶切、肽提取后用基质辅助激光解析/电子飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定。每个蛋白点的肽质量指纹图谱用Mascot进行检索后,代表了12个开放阅读框。这些蛋白不全是外膜蛋白,还存在胞浆蛋白,其功能涉及生物合成和物质代谢等领域,还有一个功能未知的蛋白。结论成功建立了布鲁氏菌外膜蛋白的免疫蛋白质组学研究方法,为寻找保护性抗原及为新型疫苗抗原候选提供新思路。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 外膜蛋白 双向电泳 质谱 免疫蛋白质组学

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蛋白质组技术研究进展 被引量：2

6

作者 上官斌 虞鹏程 简少卿 《江西科学》 2004年第4期260-264,共5页

探讨了蛋白质组的由来,分析了蛋白质组学研究的特点和内容。综述了研究蛋白质组的技术和方法,其主要包括:双向电泳技术、质谱分析、生物信息学等,并对蛋白质组研究的前景作出了展望。

关键词 蛋白质组技术 研究进展 双向电泳技术 蛋白质组学 生物信息学 综述 质谱分析

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渗透胁迫诱导转Cu／ZnSOD和APX基因甘薯根系差异蛋白质组学研究 被引量：4

7

作者 康乐 李红兵 +2 位作者 陈显让 郭尚洙 邓西平 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第10期88-96,共9页

【目的】利用蛋白质组学手段,研究短期渗透胁迫条件下,转Cu/Zn SOD和APX基因甘薯(T)及非转基因甘薯(NT)根系蛋白质的表达差异。【方法】以水培转Cu/Zn SOD和APX基因甘薯(T)及非转基因甘薯(NT)根系为材料,用100g/L PEG6000渗透胁迫处理2... 【目的】利用蛋白质组学手段,研究短期渗透胁迫条件下,转Cu/Zn SOD和APX基因甘薯(T)及非转基因甘薯(NT)根系蛋白质的表达差异。【方法】以水培转Cu/Zn SOD和APX基因甘薯(T)及非转基因甘薯(NT)根系为材料,用100g/L PEG6000渗透胁迫处理24h,以未胁迫的NT为对照,提取根总蛋白,进行双向电泳分离,考染法凝胶染色,扫描凝胶图像用于软件检测。【结果】在T、NT和对照中分别检测到836,812,881个蛋白点;t测验发现,与对照相比,T和NT有34个蛋白点丰度发生1.5倍以上显著变化(P<0.05,Fold>1.5,Quality>80)。经基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析,34个差异表达蛋白点中23个得到了有效鉴定。在鉴定的23个蛋白中,有10个蛋白在T和NT中共同上调或下调表达,包括ATP合酶F1β亚基、烯醇酶、26S蛋白酶体调节亚基6、ACC合成酶2等;另外13个蛋白在T和NT中表达各异,包括核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶结合蛋白β亚基和蔗糖合成酶等。【结论】10个在T和NT中共同上调或下调表达的蛋白,是甘薯应答渗透胁迫的普遍应答蛋白,反映了T和NT根系对短期渗透胁迫共同的响应机制;另外13个在T和NT中表达各异的蛋白,表明转基因使甘薯根系蛋白质在短期渗透胁迫下表现出特异的响应机制。 展开更多

关键词 转基因甘薯 蛋白质组学 双向电泳 基质辅助激光解吸飞行时间质谱

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大豆叶片蛋白质双向电泳技术的改良 被引量：4

8

作者 顾宪鹏 罗秋兰 +1 位作者 高继国 李文滨 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期663-667,共5页

以大豆叶片为材料,比较分析了3种蛋白质的提取方法,讨论了等电聚焦时间和染色方法等关键因素对双向电泳的影响,同时选择不同的IPG胶条,设定了第1向等电聚焦和第2向SDS-PAGE电泳的电泳程序及参数。结果表明：采用TCA-丙酮沉淀法提取蛋白... 以大豆叶片为材料,比较分析了3种蛋白质的提取方法,讨论了等电聚焦时间和染色方法等关键因素对双向电泳的影响,同时选择不同的IPG胶条,设定了第1向等电聚焦和第2向SDS-PAGE电泳的电泳程序及参数。结果表明：采用TCA-丙酮沉淀法提取蛋白质,选择pH 4~7（17 cm）IPG胶条,适当延长和改变等电聚焦的第2步和第3步的时间和参数,并且用考马斯亮蓝和银染复合染色法对12%的凝胶进行染色,能够获得清晰蛋白点的双向电泳图谱,说明优化出的双向电泳技术更加适合于大豆叶片总蛋白质分离。 展开更多

关键词 蛋白质提取 SDS-PAGE 双向电泳 蛋白质组学

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双向电泳技术及其在植物抗性研究中的应用 被引量：2

9

作者 申永锋 赵锦 刘孟军 《河北林果研究》 2007年第4期351-354,共4页

双向电泳技术是蛋白质组学研究中的核心技术之一,其作为高效、高分辨率的蛋白分析手段,在现代生命科学研究中扮演着重要的角色。本文主要对其基本原理、特点以及在植物抗性研究中的应用作了简要介绍,并对其今后的发展方向作了展望。

关键词 双向电泳 植物抗性 胁迫 应用

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恩施碎米荠种子蛋白质双向电泳初探 被引量：3

10

作者 雷红灵 付明 吴永尧 《湖北农业科学》 北大核心 2008年第10期1114-1116,共3页

对湖北恩施高硒地区生长的具有超富硒能力的植物恩施碎米荠的种子蛋白质用TCA-丙酮沉淀提取,等电聚焦采用固相梯度胶条,双向电泳分离蛋白质。结果表明,蛋白质样品制备的质量高;银染胶图背景干净,蛋白点清晰,且呈现较好的聚焦结果,无明... 对湖北恩施高硒地区生长的具有超富硒能力的植物恩施碎米荠的种子蛋白质用TCA-丙酮沉淀提取,等电聚焦采用固相梯度胶条,双向电泳分离蛋白质。结果表明,蛋白质样品制备的质量高;银染胶图背景干净,蛋白点清晰,且呈现较好的聚焦结果,无明显拖尾或横纹现象;蛋白质集中分布在pH5～10的范围之内,分子量主要在20～60kμ的范围之内。 展开更多

关键词 恩施碎米荠 超富集硒植物 种子 蛋白质 双向电泳

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鸭疫里默氏杆菌血清1型和2型的比较蛋白质组分析 被引量：3

11

作者 潘艳 谢宇舟 +6 位作者 陈泽祥 谢永平 李军 许力干 杨威 禤雄标 胡帅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期603-608,共6页

应用双向电泳和质谱技术对鸭疫里默氏杆菌(RA)血清1型和2型的菌体蛋白进行了比较蛋白质组学研究,分析了血清1型和2型鸭疫里默氏杆菌的菌体蛋白表达特点,研究了差异表达蛋白与血清型及细菌毒力的关系。结果显示,质谱分析鉴定出17个差异蛋... 应用双向电泳和质谱技术对鸭疫里默氏杆菌(RA)血清1型和2型的菌体蛋白进行了比较蛋白质组学研究,分析了血清1型和2型鸭疫里默氏杆菌的菌体蛋白表达特点,研究了差异表达蛋白与血清型及细菌毒力的关系。结果显示,质谱分析鉴定出17个差异蛋白,代表11种蛋白质,其中有7个是RA的外膜蛋白,5个是酶类,3个是热休克蛋白家族,另外2个蛋白参与蛋白质的合成过程。推测它们可能与RA的血清型及毒力密切相关。 展开更多

关键词 鸭疫里默氏杆菌 蛋白质组 双向电泳 质谱

原文传递

不同地区人群血浆标本中大肠杆菌O157∶H7的抗体谱差异分析 被引量：2

12

作者 张巍 马莉 +5 位作者 王宗奎 徐俊 黄耀敬 雷敏 叶生亮 李长清 《中国输血杂志》 CAS 2020年第1期4-7,共4页

目的分析来自不同地区、具有不同遗传背景的献血浆者血浆抗体谱差异。方法收集血型、年龄、性别相匹配的来自巴马长寿地区有家族长寿背景和无家族长寿背景的血浆以及某东部地区的血浆各22份、即为3个大组,共66份血浆标本。每大组设置2... 目的分析来自不同地区、具有不同遗传背景的献血浆者血浆抗体谱差异。方法收集血型、年龄、性别相匹配的来自巴马长寿地区有家族长寿背景和无家族长寿背景的血浆以及某东部地区的血浆各22份、即为3个大组,共66份血浆标本。每大组设置2个生物学重复,共6个小组,每个小组均为11份血浆各50μL等体积混合而成。以肠出血性大肠杆菌O157∶H7蛋白质组作为抗原库,利用蛋白质双向电泳技术和蛋白免疫印迹杂交技术获得不同血浆标本IgG的抗体谱,采用双向电泳图像分析软件进行差异分析。结果通过建立的方法获得了较高质量的血浆标本IgG抗体谱,3组标本中的IgG分别识别198、190和149个大肠杆菌蛋白质点;巴马地区有家族长寿背景和无家族长寿背景的血浆标本IgG抗体谱未见明显差异;但二者与东部地区血浆标本IgG抗体谱相比差异较为明显,如识别抗原数量不同,目标抗原点分布也不同。结论 3组血浆标本均含有针对大肠杆菌O157∶H7的广谱抗体;来自同一地区的血浆标本IgG抗体谱较为一致,来自不同地区人群的血浆标本IgG抗体谱差异明显,提示生活环境及遗传背景可能会影响人血浆中针对外来抗原的抗体的种类与多样性。 展开更多

关键词 血浆IgG抗体谱 大肠杆菌O157∶H7 双向电泳 免疫印迹

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西施舌肠蛋白质双向电泳图谱的建立 被引量：2

13

作者 田美 申欣 +1 位作者 孟学平 程汉良 《淮海工学院学报（自然科学版）》 CAS 2010年第1期76-79,共4页

以西施舌的肠组织为研究对象,经破碎、裂解、离心等抽提方法提取肠组织蛋白样品,利用Bradford蛋白定量试剂盒作蛋白定量后,进行一向等电聚焦电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。电泳后的凝胶用考马斯亮蓝染色,利用ImageScannerⅢ扫描仪扫描... 以西施舌的肠组织为研究对象,经破碎、裂解、离心等抽提方法提取肠组织蛋白样品,利用Bradford蛋白定量试剂盒作蛋白定量后,进行一向等电聚焦电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。电泳后的凝胶用考马斯亮蓝染色,利用ImageScannerⅢ扫描仪扫描凝胶,获得凝胶图像。首次得到西施舌肠蛋白质双向电泳图谱,构建了西施舌肠蛋白质组的双向电泳技术体系。图谱分析显示,所获得的肠蛋白质等电点介于pH4～7,大部分蛋白为酸性蛋白,高分子质量及高等电点蛋白含量相对较少。 展开更多

关键词 西施舌 肠 蛋白质组学 双向电泳

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鸭疫里默氏杆菌菌体蛋白双向电泳技术的建立 被引量：2

14

作者 潘艳 谢宇舟 +4 位作者 陈泽祥 谢永平 李军 杨威 许力干 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2010年第10期12-14,共3页

为了建立鸭疫里默氏杆菌菌体蛋白的双向电泳技术,获得分辨度高、重复性好的双向电泳图谱。利用适当的裂解液处理鸭疫里默氏杆菌,提取全菌蛋白;采用pH值4～7,24cm干胶条,0.8 mg菌体蛋白进行双向电泳;硝酸银染色后获得的双向电泳图谱,并利... 为了建立鸭疫里默氏杆菌菌体蛋白的双向电泳技术,获得分辨度高、重复性好的双向电泳图谱。利用适当的裂解液处理鸭疫里默氏杆菌,提取全菌蛋白;采用pH值4～7,24cm干胶条,0.8 mg菌体蛋白进行双向电泳;硝酸银染色后获得的双向电泳图谱,并利用I mage MasterTM2D Platinum5.0图象分析软件进行分析,所得的数据用SPSS 15.0软件进行统计分析。结果得到了(800±26)个蛋白斑点,蛋白主要集中在pI值4.13～7.40之间,重复胶的匹配点数为(600±20),匹配率为75.2%。建立了鸭疫里默氏杆菌菌体蛋白双向电泳技术,2-DE图谱中蛋白位点的分辨率和重复性比较高,为进一步研究其蛋白质组学奠定了基础。 展开更多

关键词 鸭疫里默氏杆菌 蛋白质组 双向电泳

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国产2种静注人免疫球蛋白大肠杆菌O157∶H7的IgG抗体谱比较研究 被引量：2

15

作者 叶生亮 雷敏 +4 位作者 李长清 张贤达 袁靖 马莉 陈云华 《中国输血杂志》 CAS 北大核心 2016年第5期476-479,共4页

目的利用本研究室建立的抗体谱检测方法,考察比较我国2家血液制品企业市售静注人免疫球蛋白p H4(IVIG)的抗体谱情况。方法以大肠杆菌O157:H7总蛋白为抗原,利用蛋白质双向电泳技术结合蛋白免疫印迹法进行检测。结果经本实验获得了较高质... 目的利用本研究室建立的抗体谱检测方法,考察比较我国2家血液制品企业市售静注人免疫球蛋白p H4(IVIG)的抗体谱情况。方法以大肠杆菌O157:H7总蛋白为抗原,利用蛋白质双向电泳技术结合蛋白免疫印迹法进行检测。结果经本实验获得了较高质量的IVIG制品Ig G抗体谱图,厂家A IVIG制品中含有针对大肠杆菌O157:H7的Ig G抗体202个,厂家B IVIG制品含有针对大肠杆菌O157:H7的Ig G抗体130个,且二者识别的抗原种类不完全相同。结论检测的2个厂家IVIG制品中均具有针对大肠杆菌O157:H7的广谱抗体,但2者抗体谱不一致,反映出2个厂家IVIG制品的独特性。 展开更多

关键词 静注人免疫球蛋白 双向电泳 免疫印迹 IgG抗体谱

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周围神经18KD诱向因子的生化分析 被引量：1

16

作者 沈勤 严志强 +4 位作者 姚登兵 谭湘陵 曹铮 李炳源 顾晓松 《南通医学院学报》 1996年第4期449-452,共4页

神经诱向生长是神经科学前沿中一个重要研究方向，提取与纯化诱向生长因子更是神经生物化学研究中的一个重要技术课题。本研究采用自然系统凝胶电泳，分离周围神经损伤过程中产生的具有诱向生长活性作用的１８ＫＤ蛋白，再以等电点聚焦... 神经诱向生长是神经科学前沿中一个重要研究方向，提取与纯化诱向生长因子更是神经生物化学研究中的一个重要技术课题。本研究采用自然系统凝胶电泳，分离周围神经损伤过程中产生的具有诱向生长活性作用的１８ＫＤ蛋白，再以等电点聚焦凝胶电泳与神经组织联合培养，揭示了ＰＩ为５．２的１８ＫＤ蛋白具有诱导神经生长的作用。高效液相色谱仪分析提示，通过以上方法可获得较纯的１８ＫＤ诱向因子。本研究为神经诱向因子的分离，纯化与进一步的蛋白序列分析提供了可行的途径。 展开更多

关键词 双相电泳 诱向因子 神经再生 周围神经 18KD蛋白

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霍乱弧菌分型噬菌体VP3蛋白的双向电泳分析 被引量：1

17

作者 王瑞白 李伟 +1 位作者 邱海燕 阚飙 《生物技术通讯》 CAS 2007年第3期446-448,共3页

目的:噬菌体-生物分型方案具有区分霍乱弧菌潜在致病力的作用,VP3是5个霍乱弧菌分型噬菌体之一。对VP3成熟颗粒的蛋白组成进行测定和分析,以补充基因组注释信息。方法:在全基因组测序及生物信息学分析的基础上,利用双向电泳技术及质谱鉴... 目的:噬菌体-生物分型方案具有区分霍乱弧菌潜在致病力的作用,VP3是5个霍乱弧菌分型噬菌体之一。对VP3成熟颗粒的蛋白组成进行测定和分析,以补充基因组注释信息。方法:在全基因组测序及生物信息学分析的基础上,利用双向电泳技术及质谱鉴定,对纯化的成熟VP3噬菌体的结构蛋白进行分离及鉴定。结果:双向电泳分离得到近20个蛋白点,质谱鉴定出了其中的10个,对应于4个VP3蛋白和4个霍乱弧菌蛋白。结论:VP3结构蛋白的组成和T7具有很高的相似性。与噬菌体颗粒一起被纯化分离的宿主蛋白可能在VP3的转染过程中起作用。 展开更多

关键词 霍乱弧菌 噬菌体 结构蛋白 双向电泳

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DMSO处理后中国仓鼠卵巢细胞的蛋白质组变化分析

18

作者 黄珍玉 李军辉 +2 位作者 王胜 张元兴 杨芃原 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期607-613,共7页

在培养基中添加二甲基亚砜(DMSO)可使基因工程中国仓鼠卵巢细胞(CHO)外源蛋白乙肝表面抗原(HBsAg)的比生产速率提高4倍以上.为了进一步研究DMSO的作用机理,采用双相凝胶电泳技术分离在培养基中添加1.5%的DMSO后CHO细胞的总蛋白,胶态考... 在培养基中添加二甲基亚砜(DMSO)可使基因工程中国仓鼠卵巢细胞(CHO)外源蛋白乙肝表面抗原(HBsAg)的比生产速率提高4倍以上.为了进一步研究DMSO的作用机理,采用双相凝胶电泳技术分离在培养基中添加1.5%的DMSO后CHO细胞的总蛋白,胶态考马斯亮蓝G-250染色,GS-800凝胶扫描仪获取凝胶图像,并用PDQUEST软件分析,测得每张图谱平均斑点数量为1852±123,以其中一块胶为参考胶进行4块胶间的斑点匹配,其平均匹配的点数达1326±100,平均匹配率为71.6%以上.通过分析得到18个蛋白质点在添加了DMSO后表达量有明显变化(其中12个蛋白表达量明显降低,6个蛋白表达量明显增加.用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其胶内酶解后的肽质指纹谱图和串级质谱图,用GPS软件查询NCBI数据库进行了鉴定.鉴定结果表明,这些差异蛋白中一些是与细胞周期有关的蛋白,一些是与细胞能量代谢相关的蛋白,还有一些是与蛋白翻译后修饰有关的酶,这些结果进一步深化了对DMSO提高CHO细胞表达HBsAg的机理的理解. 展开更多

关键词 蛋白质组 双相凝胶电泳 中国仓鼠卵巢细胞 质谱 二甲基亚砜 乙肝表面抗原

原文传递

鼠疫耶尔森菌EV76免疫蛋白质组学初步分析

19

作者 郭凤华 胡源 +5 位作者 赵飞 徐冬蕾 蔡虹 肖迪 顾一心 张建中 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期308-310,共3页

目的建立鼠疫耶尔森菌的免疫蛋白质组学研究方法 ,初步筛选鼠疫耶尔森菌特异性抗原。方法利用双向电泳技术对37℃培养的鼠疫耶尔森菌EV76株全菌蛋白进行分离,结合免疫印迹技术寻找能与鼠疫耶尔森菌免疫兔血清发生免疫反应的蛋白质,并用... 目的建立鼠疫耶尔森菌的免疫蛋白质组学研究方法 ,初步筛选鼠疫耶尔森菌特异性抗原。方法利用双向电泳技术对37℃培养的鼠疫耶尔森菌EV76株全菌蛋白进行分离,结合免疫印迹技术寻找能与鼠疫耶尔森菌免疫兔血清发生免疫反应的蛋白质,并用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对阳性蛋白点进行鉴定。结果与鼠疫耶尔森菌免疫兔血清反应的鼠疫EV76株蛋白点共472个,经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定出277个,对应于159种蛋白,其中,35种蛋白为耶尔森菌特有,5种蛋白[F1荚膜抗原(F1 capsule antigen)、鼠毒素(murine toxin)、鼠疫菌素(pesticin)、纤维蛋白溶解酶原激活因子(Pla)、F1抗原伴侣蛋白(F1 chaperone protein)]为鼠疫耶尔森菌特有。结论初步完成鼠疫耶尔森菌EV76株的免疫蛋白质组学分析,筛选出具有抗原活性的鼠疫耶尔森菌特有蛋白,为后续特异性诊断技术的建立和疫苗研究奠定良好的基础。 展开更多

关键词 鼠疫耶尔森菌 免疫蛋白质组学 双向电泳 免疫印迹 质谱

原文传递

应用双向电泳分析结核性脑膜炎与隐球菌性脑膜炎脑脊液的蛋白差异

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作者 黄绍梅 杨瑜 +4 位作者 邱薇 吴睿彦 谢贝 刘志辉 陈志成 《国际医药卫生导报》 2016年第3期300-302,共3页

目的比较分析结核性脑膜炎（TBM）与隐球菌性脑膜炎脑脊液的差异蛋白质，筛选二者的鉴别诊断标志物。方法采用双向凝胶电泳技术对4例TBM和4例隐球菌性脑膜炎脑脊液蛋白进行电泳分离，以PDQuest8．0软件根据蛋白的等电点PI、分子量、匹... 目的比较分析结核性脑膜炎（TBM）与隐球菌性脑膜炎脑脊液的差异蛋白质，筛选二者的鉴别诊断标志物。方法采用双向凝胶电泳技术对4例TBM和4例隐球菌性脑膜炎脑脊液蛋白进行电泳分离，以PDQuest8．0软件根据蛋白的等电点PI、分子量、匹配率、灰度值等进行差异蛋白描述性分析。结果结核性、隐球菌性两组脑脊液分别检测到蛋白点数为111和114，蛋白点分子量均分布为10～130kDa，等电点PI为4．4～6．7间。两组脑脊液蛋白图谱匹配率为95％，产生24个差异蛋白点，其中3个蛋白点只在TBM中表达，2个蛋白点只在隐球菌性脑膜炎中表达，19个匹配蛋白点存在2倍差异表达。结论双向电泳技术可得到分辨率和重复率较高的结核性与隐球菌性脑膜炎脑脊液蛋白质凝胶图谱，二者存在差异蛋白点。 展开更多

关键词 双向电泳 结核性脑膜炎 隐球菌性脑膜炎 脑脊液

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