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一种改良后的大脑皮质神经元细胞的原代培养模型建立及鉴定
被引量：
2
1
作者
张磊
韩延峰
+4 位作者
戴朝
李阳
胡玉奇
陈富雷
赵冬
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2022年第1期100-105,共6页
目的在传统的大脑皮质神经元的提取和培养方法基础上进行优化改良以获得高收率、高纯度、高质量、低死亡率、背景干净的皮质神经元细胞。方法分别采用传统的含EDTA的0.25%Trypsin分离培养的皮质神经元,与改良后用混有Tryple Express和Dn...
目的在传统的大脑皮质神经元的提取和培养方法基础上进行优化改良以获得高收率、高纯度、高质量、低死亡率、背景干净的皮质神经元细胞。方法分别采用传统的含EDTA的0.25%Trypsin分离培养的皮质神经元,与改良后用混有Tryple Express和DnaseI的消化液,经弹拨分散、手法震荡,提前一次离心后种植培养的皮质神经元。接种后的第1、3、5、6、7 d,显微镜观察细胞形态,第7 d用免疫荧光法对神经元细胞进行鉴定以及检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量。结果与传统的胰酶提取方法相比,改良后获得的皮质神经元生长状态更优,突触发育良好,双极神经元形态典型,杂质细胞及碎片含量少,背景干净,且具有高纯度和高存活率的特性。结论本研究在组织细胞分离消化,弹拨分散、手法震荡,提前一次离心,多重细节方面进行了探索与改良后成功建立了一种结果稳定,简单可行的皮质神经元原代培养方法,是研究神经科学领域较为理想的模型。
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关键词
大脑皮质神经元
tryple
express
神经元特异性烯醇化酶
乳酸脱氢酶
免疫荧光染色
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职称材料
一种改进的小脑颗粒神经元原代培养方法及其性质鉴定
被引量：
3
2
作者
陈海云
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第10期1476-1480,共5页
目的在已报导的原代小脑颗粒细胞(cerebellar granule neurons,CGNs)的提取培养方法基础上进行改进,以获得较少杂质、更高存活率及更高纯度的CGNs,为后续体外研究做准备。方法将Tryple Express消化液消化及前后两次离心后得到的单细胞悬...
目的在已报导的原代小脑颗粒细胞(cerebellar granule neurons,CGNs)的提取培养方法基础上进行改进,以获得较少杂质、更高存活率及更高纯度的CGNs,为后续体外研究做准备。方法将Tryple Express消化液消化及前后两次离心后得到的单细胞悬液,经台盼蓝活细胞计数后接种在预先用多聚赖氨酸(poly-L-lysine,PLL)包被的培养板中。接种20~24 h后,加入10μmol·L-1的阿糖胞苷(cytosine arabinoside,Ara-C),以及从d 4开始每隔3天加入终浓度5 mmol·L-1的Glucose。借助荧光显微镜及神经元特异性标志物微管蛋白(β-Ⅲ-tubulin)对CGNs细胞进行形态观察及纯度鉴定。结果与原有的胰酶提取方法相比,改进后的CGNs提取方法细胞生长状态良好、突触发育完善、细胞碎片等杂质含量较少,并具有较高存活率及纯度(97%)。结论该方法简便可行,结果稳定,可以为体外神经元的生长发育、轴突再生和神经系统疾病的研究提供有力支持。
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关键词
小脑颗粒神经元
tryple
express
阿糖胞苷
提取
β-Ⅲ-tubulin
免疫荧光染色
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职称材料
题名
一种改良后的大脑皮质神经元细胞的原代培养模型建立及鉴定
被引量：
2
1
作者
张磊
韩延峰
戴朝
李阳
胡玉奇
陈富雷
赵冬
机构
石河子大学医学院第一附属医院神经外科
新疆生产建设兵团第十师疾病预防控制中心
新疆生产建设兵团第十师北屯医院
出处
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2022年第1期100-105,共6页
基金
国家自然科学基金项目(81960222)
新疆兵团中青年科技创新领军人才(2020CB011)
石河子大学国际科技合作促进计划项目(GJHZ201704)。
文摘
目的在传统的大脑皮质神经元的提取和培养方法基础上进行优化改良以获得高收率、高纯度、高质量、低死亡率、背景干净的皮质神经元细胞。方法分别采用传统的含EDTA的0.25%Trypsin分离培养的皮质神经元,与改良后用混有Tryple Express和DnaseI的消化液,经弹拨分散、手法震荡,提前一次离心后种植培养的皮质神经元。接种后的第1、3、5、6、7 d,显微镜观察细胞形态,第7 d用免疫荧光法对神经元细胞进行鉴定以及检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量。结果与传统的胰酶提取方法相比,改良后获得的皮质神经元生长状态更优,突触发育良好,双极神经元形态典型,杂质细胞及碎片含量少,背景干净,且具有高纯度和高存活率的特性。结论本研究在组织细胞分离消化,弹拨分散、手法震荡,提前一次离心,多重细节方面进行了探索与改良后成功建立了一种结果稳定,简单可行的皮质神经元原代培养方法,是研究神经科学领域较为理想的模型。
关键词
大脑皮质神经元
tryple
express
神经元特异性烯醇化酶
乳酸脱氢酶
免疫荧光染色
Keywords
cerebral
cortical
neurons
tryple
express
neuron-specific
enolase
NSE
LDH
immunofluorescence
staining
分类号
R331 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
一种改进的小脑颗粒神经元原代培养方法及其性质鉴定
被引量：
3
2
作者
陈海云
机构
广东药科大学药学院药理系
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第10期1476-1480,共5页
基金
国家自然科学基金青年基金(No 81803512)
广东省自然科学基金博士科研启动项目(No 2018A030310562)。
文摘
目的在已报导的原代小脑颗粒细胞(cerebellar granule neurons,CGNs)的提取培养方法基础上进行改进,以获得较少杂质、更高存活率及更高纯度的CGNs,为后续体外研究做准备。方法将Tryple Express消化液消化及前后两次离心后得到的单细胞悬液,经台盼蓝活细胞计数后接种在预先用多聚赖氨酸(poly-L-lysine,PLL)包被的培养板中。接种20~24 h后,加入10μmol·L-1的阿糖胞苷(cytosine arabinoside,Ara-C),以及从d 4开始每隔3天加入终浓度5 mmol·L-1的Glucose。借助荧光显微镜及神经元特异性标志物微管蛋白(β-Ⅲ-tubulin)对CGNs细胞进行形态观察及纯度鉴定。结果与原有的胰酶提取方法相比,改进后的CGNs提取方法细胞生长状态良好、突触发育完善、细胞碎片等杂质含量较少,并具有较高存活率及纯度(97%)。结论该方法简便可行,结果稳定,可以为体外神经元的生长发育、轴突再生和神经系统疾病的研究提供有力支持。
关键词
小脑颗粒神经元
tryple
express
阿糖胞苷
提取
β-Ⅲ-tubulin
免疫荧光染色
Keywords
cerebellar
granule
neurons
tryple
express
cytosine
arabinoside
culture
β-Ⅲ-tubulin
immunofluorescence
staining
分类号
R-332 [医药卫生]
R322.81
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种改良后的大脑皮质神经元细胞的原代培养模型建立及鉴定
张磊
韩延峰
戴朝
李阳
胡玉奇
陈富雷
赵冬
《石河子大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2022
2
下载PDF
职称材料
2
一种改进的小脑颗粒神经元原代培养方法及其性质鉴定
陈海云
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
3
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