日本血吸虫(中国大陆株)磷酸丙糖异构酶DNA疫苗的研制及其保护性免疫的研究 被引量：24

1

作者 司进 朱荫昌 +6 位作者 D.A.Harn 余传信 何伟 华万全 殷旭仁 梁幼生 徐明 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2000年第6期324-329,共6页

目的　研究日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶 DNA疫苗诱导 C5 7BL /6小鼠的保护性免疫作用。方法　分别以 p U C19- Sj CTPI和 pc DNA1.1- IL - 12为模板设计引物 ,将 PCR扩增到的Sj CTPI基因以及 IL - 12的亚单位 P35 和 P40 基因... 目的　研究日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶 DNA疫苗诱导 C5 7BL /6小鼠的保护性免疫作用。方法　分别以 p U C19- Sj CTPI和 pc DNA1.1- IL - 12为模板设计引物 ,将 PCR扩增到的Sj CTPI基因以及 IL - 12的亚单位 P35 和 P40 基因克隆到真核表达载体 pc DNA .3.1中。大量制备 pc D-NA3.1- Sj CTPI和 pc DNA 3.1- P35 、pc DNA3.1- P40 的质粒 DNA。把 45只 5～ 6周龄 C5 7BL /6小鼠分成 3组 ,对照组 (pc DNA组 )肌肉注射 10 0μg的 pc DNA3.1;实验组 (TPI组 )肌肉注射 10 0μg的pc DNA3. 1- Sj CTPI;加强组 (TPI+ IL - 12组 )肌肉注射 10 0μg的 pc DNA 3.1- Sj CTPI及 10 0μg的pc DNA3.1- P35 和 pc DNA3.1- P40 的混合物 ,分别于第 1、5周各免疫 1次 ,第 9周每鼠用 45条尾蚴攻击感染 ,攻击后 45 d剖杀小鼠 ,计数成虫、肝内虫卵。采用免疫组化法检测 Sj CTPI在局部肌组织内的表达 ,用脾细胞培养法检测特异性抗原刺激后的 IL - 2、IL - 4、IL - 10、IFN-γ在攻击前后的水平。分别于 2次免疫前和攻击前及攻击后 2周经尾静脉采血 ,分别采用 EL ISA和 Western- blot检测血清中抗 TPI抗体。结果　 Sj CTPI可在 C5 7BL /6小鼠骨骼肌细胞膜、细胞浆中得到表达。细胞因子 IL -2的水平在攻击前、后 。 展开更多

关键词 日本血吸虫 磷酸丙糖异构酶 DNA疫苗 保护性免疫

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上海某宠物医院犬猫隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫感染率及基因型鉴定 被引量：1

2

作者 张璟 秦源 +4 位作者 沈玉娟 王雅雪 曹建平 苏雅馨 刘华 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期258-262,共5页

目的了解上海市某宠物医院犬、猫隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)感染情况,并对感染虫种或基因型进行分析。方法2021年11月至2022年6月,采集在上海市某宠物医院就诊的犬、猫新鲜粪便样本145份(犬粪99份、猫粪46份)。采用巢式PCR... 目的了解上海市某宠物医院犬、猫隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)感染情况,并对感染虫种或基因型进行分析。方法2021年11月至2022年6月,采集在上海市某宠物医院就诊的犬、猫新鲜粪便样本145份(犬粪99份、猫粪46份)。采用巢式PCR方法分别扩增隐孢子虫核糖体小亚基rRNA(SSU rRNA)基因和贾第虫磷酸丙糖异构酶(triosephosphate isomerase,TPI)基因,对阳性产物进行双向测序,利用Clustal X 2.1软件对测序结果进行拼接,采用BLAST软件进行分析比对,使用MEGA 11.0软件基于邻接法构建系统发育进化树,鉴定寄生虫虫种或基因型。结果共检测145份犬、猫粪便样本,隐孢子虫和贾第虫总检出率为20.00%(29/145);其中隐孢子虫检出率为0.69%(1/145),贾第虫检出率为19.31%(28/145)。在犬粪便样本中仅检测到贾第虫,检出率为18.18%(18/99);在猫粪便样本中,隐孢子虫和贾第虫检出率分别为2.17%(1/46)和21.74%(10/46)。经核苷酸序列分析,1份隐孢子虫阳性样本鉴定为猫隐孢子虫;28份贾第虫阳性样本均为贾第虫集聚体A,与人源贾第虫序列同源性为100%。系统进化树构建结果表明,获得的贾第虫基因序列与人源贾第虫集聚体A属同一分支。结论上海市某宠物医院就诊的犬和猫存在隐孢子虫和贾第虫感染,相关虫种和基因型均有人兽共患风险,有必要加强宠物及其饲养者隐孢子虫和贾第虫感染监测,并加强宠物饲养管理。 展开更多

关键词 隐孢子虫 蓝氏贾第鞭毛虫 核糖体小亚基rRNA 磷酸丙糖异构酶 基因型 宠物

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人磷酸丙糖异构酶在大肠埃希菌中的表达、纯化及鉴定

3

作者 刘洁 金科华 《湖北科技学院学报（医学版）》 2023年第4期298-302,共5页

目的本研究拟在大肠埃希菌中表达并纯化人磷酸丙糖异构酶(TPI),为其后续研究奠定基础。方法根据TPI编码序列(CDS)设计一对引物,其5′端分别添加Nde I和Xho I位点,PCR扩增TPI CDS。Nde I和Xho I酶切PCR产物和质粒pET-28a,胶回收酶切的质... 目的本研究拟在大肠埃希菌中表达并纯化人磷酸丙糖异构酶(TPI),为其后续研究奠定基础。方法根据TPI编码序列(CDS)设计一对引物,其5′端分别添加Nde I和Xho I位点,PCR扩增TPI CDS。Nde I和Xho I酶切PCR产物和质粒pET-28a,胶回收酶切的质粒和PCR产物,并用DNA连接酶连接,连接产物转化DH5α感受态细胞,用含卡那霉素的抗性平板筛选抗性菌落。将抗性菌落接种于含卡那霉素的LB培养基,于37℃250r/min培养过夜,抽提质粒,双酶切和测序鉴定重组质粒pET-28a-TPI。将重组质粒pET-28a-TPI转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,于含卡那霉素的抗性平板筛选抗性菌落。将一个抗性菌落接种于100mL含卡那霉素的LB培养基,于37℃摇床中250r/min培养至A600约0.9,加入0.1mmol/L IPTG诱导TPI表达4h,收集菌体,超声裂解细胞,裂解液上清中的TPI用Ni^(2+)亲和层析柱纯化。用SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的表达产物,纯化的TPI经超滤浓缩后,保存于-20℃。结果pET-28a-TPI序列正确,可溶性TPI在大肠埃希菌中获得表达,产量达300mg/L,纯度约90%。结论高产率、高纯度的TPI为后续研究奠定了良好基础。 展开更多

关键词 磷酸丙糖异构酶 可溶性 表达 纯化 超滤

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日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶特异性肽段的基因克隆表达及特性鉴定 被引量：1

4

作者 娄培安 朱荫昌 +4 位作者 余传信 殷旭仁 华万全 何伟 刘韵娟 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2001年第1期9-13,共5页

目的　应用基因工程方法制备 Sj C- TPI中特有抗原表位区域的肽段。方法　用 PCR法对Sj C- TPI与人的 TPI相应部分同源性较低的两个亲水区 15～ 6 6 aa和 12 9- 16 3aa的 DNA的基因序列进行扩增。采用基因拼接法连接后 ,克隆入表达质粒... 目的　应用基因工程方法制备 Sj C- TPI中特有抗原表位区域的肽段。方法　用 PCR法对Sj C- TPI与人的 TPI相应部分同源性较低的两个亲水区 15～ 6 6 aa和 12 9- 16 3aa的 DNA的基因序列进行扩增。采用基因拼接法连接后 ,克隆入表达质粒载体 p MAL - c2 x,转化入大肠杆菌 TB1 ,进行表达和鉴定。结果　该目的基因片段被成功地克隆入表达质粒载体 p MAL - c2 x,并能融合表达。经进一步纯化获得特异的重组肽段具有良好的抗原性 ,能被日本血吸虫病人血清识别 ,而不被正常人血清识别。结论　获得与人的 TPI同源性较低的特异重组肽段 。 展开更多

关键词 日本血吸虫 磷酸丙糖异构酶 重组肽段 基因克隆 基因表达

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用噬菌体肽库筛选SjC-TPI的模拟抗原表位 被引量：15

5

作者 余传信 朱荫昌 +3 位作者 殷旭仁 何伟 许永良 管晓虹 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期11-14,共4页

目的　筛选日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶 (SjC TPI)分子的模拟抗原表位 ,研究其免疫学特性。方法　用纯化的抗重组SjC TPI抗体 (IgG)筛选 12肽库 ,获取SjC TPI的模拟抗原表位 ,并研究其抗原特性。结果　获得SjC TPI分子的两个模... 目的　筛选日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶 (SjC TPI)分子的模拟抗原表位 ,研究其免疫学特性。方法　用纯化的抗重组SjC TPI抗体 (IgG)筛选 12肽库 ,获取SjC TPI的模拟抗原表位 ,并研究其抗原特性。结果　获得SjC TPI分子的两个模拟抗原表位M1和M2 ,Westernblotting分析结果表明由这两个模拟抗原表位免疫小鼠产生的免疫血清能识别SjC TPI分子和含此两抗原表位的噬菌体外壳蛋白。DNA测序结果显示这两个模拟抗原表位的氨基酸序列与SjC TPI无同源性。结论　本研究获得的模拟抗原表位M1及M2为SjC TPI的空间构型抗原的模拟表位 。 展开更多

关键词 日本血吸虫 磷酸丙糖异构酶 模拟抗原表位 噬菌体 肽库

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用PCR扩增tim基因检测蓝氏贾第鞭毛虫 被引量：9

6

作者 丁慧萍 卢思奇 +2 位作者 戎煜 李凤舞 王凤云 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2002年第2期65-69,共5页

采用聚合酶链反应 (PCR)对蓝氏贾第鞭毛虫 (Giardialamblia)的磷酸丙糖异构酶 (triosephosphateisomerase ,缩写为tim)基因进行特异性扩增 ,结果扩增出 1条 6 83bp的DNA片段。此方法的特异性可高达10 0 % ,而其它DNA样本 ,如日本血吸虫 ... 采用聚合酶链反应 (PCR)对蓝氏贾第鞭毛虫 (Giardialamblia)的磷酸丙糖异构酶 (triosephosphateisomerase ,缩写为tim)基因进行特异性扩增 ,结果扩增出 1条 6 83bp的DNA片段。此方法的特异性可高达10 0 % ,而其它DNA样本 ,如日本血吸虫 (Schistosomajaponicum)、刚地弓形虫 (Toxoplasmagondii)、微小隐孢子虫 (Cryptosporidiumparvum)、溶组织内阿米巴 (Entamoebahistolytica)、旋毛虫 (Trichinellaspiralis)和阴道毛滴虫 (Trichomonasvaginalis) ,以及人体血细胞等均未出现扩增反应。本法的敏感性也很高 ,可检测到0 4pg贾第虫包囊的DNA。 13株来自不同地理位置和 或宿主的贾第虫DNA样本在PCR中均各产生 1条长为 6 83bp的目的片段。 展开更多

关键词 PCR扩增 tim基因 检测 蓝氏贾第鞭毛虫 聚酶链反应 磷酸丙糖异构酶

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两种机会性寄生原虫——微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫基因检测方法的建立 被引量：6

7

作者 卢思奇 王凤云 +1 位作者 张可 徐莲芝 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期884-888,共5页

目的建立两种机会性寄生原虫——微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫(贾第虫)基因检测方法。方法从微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫感染者粪便标本内分离纯化卵囊和包囊,提取基因组DNA。根据微小隐孢子虫18S rRNA基因和贾第虫磷酸丙糖异构酶(t... 目的建立两种机会性寄生原虫——微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫(贾第虫)基因检测方法。方法从微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫感染者粪便标本内分离纯化卵囊和包囊,提取基因组DNA。根据微小隐孢子虫18S rRNA基因和贾第虫磷酸丙糖异构酶(tim)基因各设计或合成两对特异性引物,采用PCR技术分别对从卵囊和包囊提取的和6种对照。DNA样本(日本血吸虫、刚地弓形虫、溶组织内阿米巴、旋毛虫和阴道毛滴虫以及人体血细胞DNA等),以及此二种虫相互间的DNA样本进行检测,以确定该法的特异性和敏感性。方法建立后,取艾滋病患者粪便标本对之进行检测。结果从微小隐孢子虫和贾第虫的DNA样本中分别扩增出各自相应基因的500 bp和683 bp长度的片段;最少可检测出20 pg隐孢子虫和0．4 pg贾第虫DNA;几种对照DNA样本均不发生交叉反应;受检的30例艾滋病患者粪便标本中,7例显示微小隐孢子虫阳性,未检出贾第虫。结论建立的基因检测方法,对微小隐孢子虫和贾第虫的检测具有高度的特异性和敏感性,可用于临床艾滋病合并感染的早期诊断和人群流行病学筛查。 展开更多

关键词 微小隐孢子虫 蓝氏贾第鞭毛虫 18S RRNA基因 磷酸丙糖异构酶基因

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磷酸丙糖异构酶的折叠及稳定性研究 被引量：4

8

作者 刘江红 石毅 周筠梅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第5期465-472,共8页

从鸡胸肌中纯化出磷酸丙糖异构酶(triosephosphateisomerase,TIM),通过蛋白质内源荧光,圆二色性,紫外吸收二阶导数光谱等多种研究溶液构象的方法,对TIM被盐酸胍和热变性过程进行了详细的研究.结果表明,用不同测量方法得到TIM的变性过程... 从鸡胸肌中纯化出磷酸丙糖异构酶(triosephosphateisomerase,TIM),通过蛋白质内源荧光,圆二色性,紫外吸收二阶导数光谱等多种研究溶液构象的方法,对TIM被盐酸胍和热变性过程进行了详细的研究.结果表明,用不同测量方法得到TIM的变性过程均高度协同,没有观察到折叠中间态,应用单分子二态去折叠模型计算了TIM去折叠的热力学参数.通过圆二色光谱在222nm处的变化监测的TIM热变性过程也是高度协同的二态过程,天然态TIM的表观Tm为64.6℃.在低浓度盐酸胍存在下,TIM的热稳定性降低.讨论了二体蛋白质的可能去折叠机制,证明在使用的实验条件下磷酸丙糖异构酶去折叠过程中二级结构与三级结构的变化是同时发生的,其去折叠遵循观察不到二体解离的表观二态过程. 展开更多

关键词 磷酸丙糖异构酶 变性 构象变化 折叠中间态 二态模型

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腹泻患者艰难梭菌的检测及分析 被引量：3

9

作者 唐海先 肖洪广 +2 位作者 杨玉静 陈定强 吴爱武 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2013年第17期3328-3331,共4页

目的了解广州地区腹泻病人中艰难梭菌(CD)及其毒素基因的分布情况并进行相关分析。方法收集261例住院及门诊腹泻病人粪便标本并提取宏基因组DNA,用PCR方法检测CD的种特异性基因tpi和毒素基因,包括毒素A基因(tcdA)、毒素B基因(tcdB)及二... 目的了解广州地区腹泻病人中艰难梭菌(CD)及其毒素基因的分布情况并进行相关分析。方法收集261例住院及门诊腹泻病人粪便标本并提取宏基因组DNA,用PCR方法检测CD的种特异性基因tpi和毒素基因,包括毒素A基因(tcdA)、毒素B基因(tcdB)及二元毒素基因,并对检测患者的临床资料与CD携带的关联性进行分析。结果 261例腹泻病人粪便标本中,tpi基因阳性的有14例(5.4%),毒素阳性的6例(2.3%),均为A、B毒素同时阳性,未发现产二元毒素菌株。在14例tpi阳性标本中,71.4%(10/14)为住院病人,28.6%(4/14)为门诊病人;57.1%(8/14)为大于60岁患者,35.7%(5/14)为儿童。基因序列分析发现tpi基因有2种基因型,tcdA有2个基因型,tcdB有4个基因型,未发现明显优势基因型。结论目前在广州,CD的感染为散发;不能忽视儿童及社区获得性CD相关性腹泻的监测。 展开更多

关键词 腹泻 艰难梭菌 PCR tpi基因 毒素 基因型

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蓝氏贾第鞭毛虫基因分型—磷酸丙糖异构酶(tim)基因序列分析 被引量：2

10

作者 卢思奇 Rodney D.Adam 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 1998年第3期148-153,共6页

蓝氏贾第鞭毛虫（简称贾第虫）细胞内的磷酸丙糖异构酶（ｔｉｍ）基因编码磷酸丙糖异构酶。对扩增后的ｔｉｍ基因做序列分析，可对来源于不同地理位置和／或不同宿主的贾第虫株进行基因分型，并以此确定它们之间的遗传学关系。为了确定... 蓝氏贾第鞭毛虫（简称贾第虫）细胞内的磷酸丙糖异构酶（ｔｉｍ）基因编码磷酸丙糖异构酶。对扩增后的ｔｉｍ基因做序列分析，可对来源于不同地理位置和／或不同宿主的贾第虫株进行基因分型，并以此确定它们之间的遗传学关系。为了确定中国虫株的基因型，我们对分离自北京（Ｃ１），四川（Ｃ２）和福建（Ｃ３）３株人源贾第虫ｔｉｍ基因序列进行了分析。结果表明，Ｃ１和Ｃ２具有相同的遗传学特性，可划归为目前公认的分型系统中的第３型（ＧＳ）。Ｃ３含有两种不同的遗传学类型，即第１型（ＷＢ）和第３型（ＧＳ），表明Ｃ３可能为两种不同遗传学类型的混合株。本研究结果进一步表明，用ｔｉｍ基因扩增和序列分析方法，可探寻世界范围内贾第虫株之间的遗传学关系。 展开更多

关键词 蓝氏鞭毛贾第虫 磷酸丙糖异构酶 序列分析

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TPI1在肺腺癌中的表达及预后分析 被引量：1

11

作者 郝玮 卢元丽 +3 位作者 张轶华 李秀荣 李莉 赵丽波 《中国实验诊断学》 2022年第3期323-326,共4页

目的 探讨磷酸丙糖异构酶1(TPI1)在肺腺癌中的表达及其与患者临床预后的联系。方法 通过免疫组化法检测54例肺腺癌及其配对的癌旁肺组织中TPI1表达,分析肺腺癌中TPI1表达和肿瘤的临床病理特征及患者临床预后之间的相关性。结果 TPI1在... 目的 探讨磷酸丙糖异构酶1(TPI1)在肺腺癌中的表达及其与患者临床预后的联系。方法 通过免疫组化法检测54例肺腺癌及其配对的癌旁肺组织中TPI1表达,分析肺腺癌中TPI1表达和肿瘤的临床病理特征及患者临床预后之间的相关性。结果 TPI1在肺腺癌中高表达(36/54,66.7%)与年龄(P=0.026)、N分期和肿瘤分期均相关(均P<0.001)。单因素分析结果显示,TPI1高表达是肺腺癌患者预后的影响因素(log-rank test,P=0.02)。多因素分析结果显示,TPI1高表达(P=0.012)和N分期(P=0.008)是肺腺癌患者临床预后的独立危险因素。结论TPI1在肺腺癌中高表达与肿瘤的转移和临床预后密切相关,TPI1可能成为未来肺腺癌个体化精准治疗的靶点。 展开更多

关键词 磷酸丙糖异构酶1 肺腺癌 临床预后 肿瘤转移

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长春地区猪十二指肠贾第鞭毛虫感染的分子流行病学调查 被引量：1

12

作者 赵春艳 张西臣 +3 位作者 张洪波 宫鹏涛 李建华 杨举 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第5期553-556,共4页

目的调查长春地区猪十二指肠贾第鞭毛虫(简称贾第虫)感染的分子流行病学特征。方法选择长春地区两个猪场,随机采集60份猪粪便样品,根据贾第虫磷酸丙糖异构酶(triose phosphate isomerase,TPI)基因设计巢式PCR引物,以提取的猪粪便基因组... 目的调查长春地区猪十二指肠贾第鞭毛虫(简称贾第虫)感染的分子流行病学特征。方法选择长春地区两个猪场,随机采集60份猪粪便样品,根据贾第虫磷酸丙糖异构酶(triose phosphate isomerase,TPI)基因设计巢式PCR引物,以提取的猪粪便基因组DNA为模板进行巢式PCR扩增,PCR产物经测序及序列比对,并建立贾第虫系统进化树。结果 60份样品中,27份为阳性,阳性率为45%(27/60),基因型均为人兽共患型集聚体A。结论长春地区两个猪场存在较严重的贾第虫感染,基因型均为集聚体A,有较大的散播风险,需加强猪场卫生监督管理,以避免疫病流行。 展开更多

关键词 十二指肠贾第鞭毛虫 猪 磷酸丙糖异构酶基因 巢式PCR

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实验感染C57 BL/6N小鼠粪内蓝氏贾第鞭毛虫tim基因检测

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作者 罗晓冰 陈小宁 +1 位作者 卢思奇 王凤云 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2004年第1期1-4,共4页

建立蓝氏贾第鞭毛虫感染动物模型 ,用PCR技术对感染动物粪内该虫tim基因进行检测 ,探讨蓝氏贾第鞭毛虫基因检测方法。用人源蓝氏贾第鞭毛虫河北株 (CD)和江苏株 (XZ)的包囊分别接种两组C5 7BL 6N小鼠 ,于接种后第 6天、1 0天和 1 4天收... 建立蓝氏贾第鞭毛虫感染动物模型 ,用PCR技术对感染动物粪内该虫tim基因进行检测 ,探讨蓝氏贾第鞭毛虫基因检测方法。用人源蓝氏贾第鞭毛虫河北株 (CD)和江苏株 (XZ)的包囊分别接种两组C5 7BL 6N小鼠 ,于接种后第 6天、1 0天和 1 4天收集粪便标本 ,采用酚 氯仿法提取总DNA。将提取液分别按 1 0 0 、 1 0 - 1 、 1 0 - 2 和 1 0 - 3稀释并纯化。根据该虫磷酸丙糖异构酶 (Triosephosphateisomerase,tim)基因合成 1对特异性引物 ,采用PCR技术分别扩增各个稀释度的样本。结果贾第虫阳性样本均被扩增出相应基因的 1条 683bp长的片段 ,纯化后的各个稀释度样本的PCR检测阳性率随稀释倍数的增加而增高。本研究结果为贾第虫感染基因检测方法的进一步研究提供了实验资料。 展开更多

关键词 蓝氏贾第鞭毛虫 小鼠 磷酸丙糖异构酶基因 动物模型

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日本血吸虫中国大陆株TPI DNA疫苗诱导BALB/c小鼠保护性免疫力的研究 被引量：20

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作者 司进 朱荫昌 +5 位作者 Harn DA 殷旭仁 余传信 何伟 任建功 华万全 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2001年第3期207-209,共3页

目的　研究日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶 (Sj CTPI) DNA疫苗诱导 BAL B/ c小鼠的保护性免疫作用。方法　将 39只 BAL B/ c小鼠随机分成 3组 :A组 (对照组 ) ,肌注 pc DNA3.1质粒 DNA10 0 μg/鼠 ;B组 (实验组 ) ,每鼠肌注 pc DNA... 目的　研究日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶 (Sj CTPI) DNA疫苗诱导 BAL B/ c小鼠的保护性免疫作用。方法　将 39只 BAL B/ c小鼠随机分成 3组 :A组 (对照组 ) ,肌注 pc DNA3.1质粒 DNA10 0 μg/鼠 ;B组 (实验组 ) ,每鼠肌注 pc DNA3.1- Sj CTPI10 0 μg;C组 (加强组 ) ,每鼠肌注 pc DNA3.1- Sj CTPI10 0 μg及 pc DNA3.1- P35和 pc DNA3.1-P40的混合物 10 0 μg。每两周免疫 1次 ,共计 3次。末次免疫 4周后 ,每鼠用 45条尾蚴进行攻击 ,45 d后剖杀小鼠 ,计数成虫以及每鼠肝组织内虫卵数 ;于攻击前每组各取两只小鼠采用 51 Cr释放法测定 Sj CTPI介导的特异性细胞毒作用 ;EL ISA检测攻击前后的抗 TPI的抗体水平。　结果　用 EL ISA检测抗 TPI抗体的结果表明 ,攻击前 A组的 10份血清均为阴性 ,B组 5 / 10份血清出现弱阳性 ,C组也有 6 / 10份血清出现弱阳性反应。51 Cr释放法测定细胞毒活性结果表明 ,A、B、C组细胞毒活性分别为 9.1%、2 7.6 %和 5 4.4%。与对照组相比 ,实验组的减虫率、减卵率分别为 30 .2 %、5 2 .9% ;加强组的减虫率、减卵率分别为 32 .7%、47.0 %。　结论　进一步证实了 Sj CTPI DNA疫苗作为抗血吸虫病核酸疫苗的潜力。 展开更多

关键词 日本血吸虫 磷酸丙糖异构酶 核酸疫苗 保护性免疫 BALB/C小鼠

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日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶DNA疫苗对猪保护性免疫作用研究 被引量：14

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作者 朱荫昌 司进 +9 位作者 D.A.Harn 徐明 余传信 任建功 叶萍 殷旭仁 何伟 许永良 曹国群 华万全 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2001年第5期260-264,共5页

目的　探讨日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶 (Sj CTPI) DNA疫苗诱导猪的保护性免疫作用。方法　分别构建并制备 pc DNA 3.1- Sj CTPI DNA疫苗及 pc DNA3.1- P35和 P40 (IL - 12的两个亚单位 )的 DNA疫苗。取上海松江本地猪 (自幼阉... 目的　探讨日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶 (Sj CTPI) DNA疫苗诱导猪的保护性免疫作用。方法　分别构建并制备 pc DNA 3.1- Sj CTPI DNA疫苗及 pc DNA3.1- P35和 P40 (IL - 12的两个亚单位 )的 DNA疫苗。取上海松江本地猪 (自幼阉割 ) 30头 ,分为 A、B、C 3组 ,每组 10头。 A组 (TPI组 )每头猪于两侧臂部肌肉注射 5 0 0 μg Sj CTPI DNA疫苗 ;B组 (TPI+IL- 12组 )每头猪肌肉注射 5 0 0 μg Sj CTPI DNA及 5 0 0 μg P35 DNA疫苗、5 0 0 μg P40 DNA疫苗。C组 (对照组 )每头猪肌肉注射 5 0 0 μg pc DNA3.1质粒 DNA。共免疫 3次 ,每次间歇 3周。末次免疫后 30 d,每猪攻击 6 0 0条日本血吸虫尾蚴 (背部贴片法 )。攻击后 45 d剖杀 ,经胸主动脉灌注 ,并从门静脉处收集成虫计数。从肝脏上同一部位切下小块肝组织 ,置 5 % KOH内溶解 ,后计算每克虫卵数。比较各组间的减虫率、减雌率和减卵率。在免疫前、末次免疫后和攻击后从猪耳静脉采血 ,分离血清 ,用 EL ISA法测抗体。结果　 TPI组和 TPI+IL- 12组与质粒对照组相比 ,分别获得 48.3%和 46 .2 %的减虫率 ,5 3.6 %和5 9.6 %的减雌率 ,49.4%和 6 5 .8%的减卵率。TPI组的 10头猪中有 6头在免疫后可检出抗 r Sj CTPI抗体 ,TPI+IL- 12组 10头猪中有 展开更多

关键词 日本血吸虫中国大陆株 磷酸丙糖异构酶 DNA疫苗 猪 保护

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基于磷酸丙糖异构酶基因序列的蓝氏贾第鞭毛虫分子系统发育的研究 被引量：4

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作者 李继红 卢思奇 +2 位作者 张亚平 王凤芸 文建凡 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第3期141-145,共5页

[目的 ]探讨蓝氏贾第鞭毛虫种内系统发育及遗传多样性。 [方法 ]对不同来源虫株的磷酸丙糖异构酶(tim)基因进行 PCR扩增、序列测定后 ,用简约法和 NJ法构建分子系统树进行系统学分析。 [结果 ]在所测序列中共有 12 4个位点存在变异 (2 3... [目的 ]探讨蓝氏贾第鞭毛虫种内系统发育及遗传多样性。 [方法 ]对不同来源虫株的磷酸丙糖异构酶(tim)基因进行 PCR扩增、序列测定后 ,用简约法和 NJ法构建分子系统树进行系统学分析。 [结果 ]在所测序列中共有 12 4个位点存在变异 (2 3% ) ,且大多数为发生在第三密码子的同义突变 ,两种构树方法所得两树的分枝结构相似 ,均将受试的 16株蓝氏贾第鞭毛虫分为明显的两组。 [结论 展开更多

关键词 蓝氏贾第鞭毛虫 磷酸丙糖异构酶 遗传标记 序列

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山西省草地贪夜蛾的生物型鉴定 被引量：2

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作者 李大琪 任美凤 +4 位作者 王升琛 蒋晓玲 龙佳敏 张东霞 陆俊姣 《中国植保导刊》 北大核心 2022年第10期5-8,19,共5页

2019年7月山西首次发现草地贪夜蛾入侵,当地农业生产受到严重影响。采用细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)和磷酸甘油醛异构酶(Tpi)的两个分子标记对山西草地贪夜蛾样本进行遗传特征分析。基于母系遗传特征COⅠ基因片段的序列分析表明,样本... 2019年7月山西首次发现草地贪夜蛾入侵,当地农业生产受到严重影响。采用细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)和磷酸甘油醛异构酶(Tpi)的两个分子标记对山西草地贪夜蛾样本进行遗传特征分析。基于母系遗传特征COⅠ基因片段的序列分析表明,样本中水稻型所占比例为97.6%,玉米型所占比例为2.4%;基于父系遗传特征Tpi基因片段的序列分析则表明所有样本均为玉米型,并在174、175位点存在3种碱基特征:87.80%的样本为玉米型碱基特征(AT),9.76%为水稻型碱基特征(GA),2.43%为杂合型特征(AA)。由此可见,入侵山西的草地贪夜蛾主要是母系水稻型和父系玉米型的杂合型。研究结果可为研究草地贪夜蛾迁飞过程中的种群遗传特征变化提供理论依据,为农业部门监测及制定防控策略提供参考。 展开更多

关键词 草地贪夜蛾 遗传特征 生物型 COⅠ基因 Tpi基因

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日本血吸虫磷酸丙糖异构酶Th1型表位的免疫学鉴定 被引量：1

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作者 陶方方 王新军 +6 位作者 刘丰 王慧 孙新娟 王勇 苏川 吴海玮 张兆松 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第4期266-271,共6页

目的筛选和鉴定日本血吸虫磷酸丙糖异构酶(SjTPI)的Th1型细胞表位,为构建短肽疫苗奠定基础。方法用BLAST比对并预测SjTPI的T细胞表位SjTPI-P18及其对照表位SjTPI-P9。设计并合成其编码DNA,重组入原核表达载体pET-32c(+)后进行表达,获得... 目的筛选和鉴定日本血吸虫磷酸丙糖异构酶(SjTPI)的Th1型细胞表位,为构建短肽疫苗奠定基础。方法用BLAST比对并预测SjTPI的T细胞表位SjTPI-P18及其对照表位SjTPI-P9。设计并合成其编码DNA,重组入原核表达载体pET-32c(+)后进行表达,获得纯化的重组融合蛋白rSjTPI-P18和rSjTPI-P9。用rSjTPI、rSjTPI-P18及rSjT-PI-P9刺激经照射致弱尾蚴免疫、rSjTPI加强免疫的C57BL/6和C3H/HeJ小鼠淋巴细胞,3H-TdR掺入法检测淋巴细胞的增殖效果及细胞培养上清中IL-2水平;分别用重组rSjTPI-P18和合成SjTPI-P18刺激rSjTPI-P18、SjTPI-P18或PBS加弗氏佐剂两次免疫的C57BL/6小鼠淋巴细胞,并检测其细胞培养上清中IFN-γ及IL-4水平。结果参照曼氏血吸虫TPI T细胞表位预测的SjTPI-P18及SjTPI-P9,获得了与Trx融合表达的重组肽rSjTPI-P18及rSjTPI-P9。与rSjTPI-P9相比,rSjTPI及rSjTPI-P18均可刺激辐照致弱尾蚴免疫、rSjTPI加强免疫的C57BL/6或C3H/HeJ小鼠的淋巴细胞增殖且IL-2分泌量增加(P均<0.05);SjTPI-P18及rSjTPI-P18刺激经rSjTPI-P18或SjTPI-P18免疫两次的C57BL/6小鼠淋巴细胞分泌IFN-γ水平升高(P均<0.05),而IL-4水平较低。结论筛选和鉴定出的SjTPI-P18是C57BL/6小鼠特异的Th1型表位。 展开更多

关键词 血吸虫 日本 磷酸丙糖异构酶 Th1型表位 免疫学鉴定

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