刚地弓形虫感染对孕鼠胎盘细胞凋亡的影响 被引量：13

1

作者 赵普英 侯玉英 +5 位作者 李艳伟 饶华祥 杨瑞 刘智深 张淑萍 侯丽萍 《国际医学寄生虫病杂志》 CAS 2007年第2期61-65,F0004,共6页

目的 探讨刚地弓形虫对孕鼠胎盘细胞凋亡及其相关基因bax、bcl-2表达的影响。方法 建立刚地弓形虫感染的孕鼠模型，采用胎盘组织压片及病理切片，观察胎盘组织的损伤情况；采用DNA缺口末端标记技术（TUNEL）检测胎盘细胞的凋亡情况；采... 目的 探讨刚地弓形虫对孕鼠胎盘细胞凋亡及其相关基因bax、bcl-2表达的影响。方法 建立刚地弓形虫感染的孕鼠模型，采用胎盘组织压片及病理切片，观察胎盘组织的损伤情况；采用DNA缺口末端标记技术（TUNEL）检测胎盘细胞的凋亡情况；采用免疫组织化学法（SP法）观察细胞凋亡调控基因bax和bcl-2在胎盘细胞中的表达。结果 与对照组相比，随着感染时间的延长，感染组胎盘组织压片中可见弓形虫虫体逐渐增加，HE染色可见有大量的淋巴细胞浸润及凋亡小体；TUNEL证实感染组胎盘滋养层细胞凋亡显著增强（P〈0．05）；免疫组织化学结果显示，感染组胎盘滋养层细胞凋亡相关基因bax表达显著增强、bcl-2表达减弱（P〈0．05）。结论 刚地弓形虫侵入胎盘组织，可通过上调滋养层细胞bax基因表达，下调bcl-2基因表达而诱导胎盘滋养层细胞凋亡增加，从而影响胎盘组织结构和功能，导致不良妊娠。 展开更多

关键词 刚地弓形虫 胎盘 滋养层 细胞凋亡

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弓形虫GRA4基因体外扩增、克隆及在耻垢分枝杆菌中的表达 被引量：9

2

作者 李俊华 吴少庭 +7 位作者 翁亚彪 甘燕 刘洪波 刘茂铃 张仁利 高世同 黄达娜 耿艺介 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第6期428-431,共4页

目的体外扩增弓形虫RH株致密颗粒蛋白4(GRA4)基因,构建大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒ps3000-GRA4,重组耻垢分枝杆菌,鉴定重组蛋白的抗原性。方法用聚合酶链式反应(PCR)方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA4基因,克隆入pGEM-T载体,然后亚... 目的体外扩增弓形虫RH株致密颗粒蛋白4(GRA4)基因,构建大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒ps3000-GRA4,重组耻垢分枝杆菌,鉴定重组蛋白的抗原性。方法用聚合酶链式反应(PCR)方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA4基因,克隆入pGEM-T载体,然后亚克隆法构建ps3000-GRA4大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒,经电转化方法,将GRA4基因片断的穿梭质粒转化到耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatismc2155)中,用重组耻垢分枝杆菌免疫小鼠,Western blot方法检测免疫小鼠血清中的弓形虫抗体。结果成功扩增了弓形虫的GRA4基因并构建克隆质粒pGEMT-GRA4、穿梭质粒ps3000-GRA4,Western blot分析显示,GRA4重组蛋白能被重组质粒免疫小鼠血清识别,分子质量单位约为40.0 ku。结论重组耻垢分枝杆菌在小鼠体内表达出了重组蛋白GRA4,具有抗原性,刺激小鼠机体产生了抗弓形虫的抗体,为弓形虫重组BCG(Bacillus Calmette-Guerin)疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 弓形虫 GRA4 耻垢分枝杆菌 BCG

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弓形虫新基因wx2表位疫苗免疫小鼠的保护研究 被引量：11

3

作者 谭逵 张琼 +4 位作者 范久波 谢荣华 蒋立平 吴翔 舒衡平 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1051-1058,共8页

采用生物信息学方法对弓形虫新基因wx2进行表位分析预测,PCR扩增基因中编码2个表位的片段W2b和W2a,成功构建新基因的单表位疫苗质粒pcDNA3-W2b、pcDNA3-W2a和双表位疫苗pcDNA3-W2b2a,接种小鼠,观察表位疫苗的免疫保护作用.将表位疫苗分... 采用生物信息学方法对弓形虫新基因wx2进行表位分析预测,PCR扩增基因中编码2个表位的片段W2b和W2a,成功构建新基因的单表位疫苗质粒pcDNA3-W2b、pcDNA3-W2a和双表位疫苗pcDNA3-W2b2a,接种小鼠,观察表位疫苗的免疫保护作用.将表位疫苗分别通过肌肉注射免疫小鼠,对照组注射pcDNA3空质粒.ELISA法检测血清IgG抗体水平,取脾细胞用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群.各组小鼠末次免疫后第4周每只小鼠经腹腔注射弓形虫速殖子500个,观察小鼠的生存时间.结果显示,pcDNA3-W2a2b双表位疫苗组小鼠血清IgG抗体水平显著高于对照组(P<0.05),且pcDNA3-W2a2b双表位疫苗组小鼠脾细胞CD4+T与CD8+T淋巴细胞比值明显低于两单表位疫苗组,pcDNA3-W2a2b双表位疫苗组小鼠存活时间明显长于两单表位疫苗组(P<0.05).实验结果表明,弓形虫新基因wx2表位疫苗能够诱导小鼠产生抗弓形虫感染保护性免疫,并且弓形虫pcDNA3-W2b2a双表位疫苗的免疫保护性优于pcDNA3-W2b、pcDNA3-W2a两单表位疫苗. 展开更多

关键词 弓形虫 表位疫苗 重组质粒 B细胞表位 保护力

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重组人IL-2联合STAg鼻内免疫BALB/c小鼠诱导的免疫应答 被引量：6

4

作者 刘转转 张宇斌 +3 位作者 殷国荣 孟晓丽 刘娟娟 刘红丽 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2009年第2期105-107,共3页

目的观察重组人白细胞介素-2(rhuIL-2)联合弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答,探讨rhuIL-2的佐剂效应及适宜剂量。方法5～6周龄BALB/c小鼠60只,随机分为6组,每组10只。实验组以STAg20μg或分别加rhuIL-2250、500... 目的观察重组人白细胞介素-2(rhuIL-2)联合弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答,探讨rhuIL-2的佐剂效应及适宜剂量。方法5～6周龄BALB/c小鼠60只,随机分为6组,每组10只。实验组以STAg20μg或分别加rhuIL-2250、500、1000、2000 IU滴鼻免疫,抗原与佐剂溶于20μlPBS中,对照组以PBS滴鼻,免疫2次,间隔2周。末次免疫后30d,颈椎脱臼处死全部小鼠,ELISA法检测血清IgG和粪便sIgA水平;分离脾淋巴细胞、肠上皮内淋巴细胞(iIEL),并计数。结果与PBS组相比,各佐剂组血清IgG水平都有增高,其中STAg+500 IU IL-2组IgG水平增高最显著(P<0.01);STAg+500 IU IL-2组和STAg+1000 IU IL-2组粪便sIgA抗体水平显著高于PBS组和STAg组(P<0.05)。联合IL-2佐剂免疫小鼠脾淋巴细胞和产生了增殖性应答,其中STAg+500 IU IL-2组和STAg+1000 IU IL-2组脾淋巴细胞数显著高于PBS组和STAg组(P<0.05);TAg+500 IU IL-2组iIEL高于PBS组(P<0.05)。结论rhuIL-2作为佐剂联合STAg鼻内免疫小鼠可有效诱导粘膜免疫、系统的细胞免疫和体液免疫应答;500 IU IL-2为鼻内免疫小鼠的适宜剂量。 展开更多

关键词 刚地弓形虫 STAG 重组人IL-2 鼻内免疫 粘膜佐剂

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医院病人弓形虫感染血清流行病学调查 被引量：8

5

作者 崔黎明 霍威 +1 位作者 李淑红 刘妮 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第5期390-391,共2页

目的了解住院病人弓形虫感染情况。方法采集吉林大学第一医院637例住院病人和400名在读大学生血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测弓形虫抗体,检测结果通过χ2检验进行组间感染率差异分析。结果住院病人弓形虫抗体阳性率为16.95%(108/... 目的了解住院病人弓形虫感染情况。方法采集吉林大学第一医院637例住院病人和400名在读大学生血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测弓形虫抗体,检测结果通过χ2检验进行组间感染率差异分析。结果住院病人弓形虫抗体阳性率为16.95%(108/637),在校大学生阳性率为1.75%(7/400),差异具统计学意义(P<0.001)。其中肿瘤及系统性红斑狼疮病人阳性率为15.43%(29/188),心血管病人阳性率为17.57%(13/74),肝胆胃肠疾病病人阳性率为25.00%(19/76),脑血管病人阳性率为14.29%(7/49),炎症病人阳性率为17.82%(18/101),糖尿病病人和其他疾病病人阳性率分别为0(0/12)和16.06%(22/137),差异有统计学意义(P<0.05);男性阳性率19.29%(65/337),女性阳性率14.33%(43/300),差异无统计学意义(P>0.05);儿童阳性率21.74%(5/23),成人阳性率16.78%(103/614),差异无统计学意义(P>0.05);城镇病人阳性率17.18%(84/489),农村病人阳性率16.22%(24/148),差异无统计学意义(P>0.05)。结论吉林大学第一医院住院病人弓形虫抗体阳性率显著高于健康人。提示医院就诊病人中可能有弓形虫感染或患弓形虫病。 展开更多

关键词 弓形虫 医院 抗体 住院病人

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刚地弓形虫PTS核酸疫苗的构建及免疫保护力评价 被引量：4

6

作者 朱伟宁 王金磊 +2 位作者 陈凯 黄思扬 朱兴全 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2344-2349,2357,共7页

旨在构建弓形虫磷脂酰苏氨酸合成酶(Toxoplasma gondii phosphatidylthreonine synthase,PTS)基因DNA疫苗,评价其抗弓形虫的免疫保护力。利用RT-PCR技术扩增得到弓形虫PTS基因,构建真核表达质粒pVAXTgPTS,然后转染HEK 293-T细胞,分析pVA... 旨在构建弓形虫磷脂酰苏氨酸合成酶(Toxoplasma gondii phosphatidylthreonine synthase,PTS)基因DNA疫苗,评价其抗弓形虫的免疫保护力。利用RT-PCR技术扩增得到弓形虫PTS基因,构建真核表达质粒pVAXTgPTS,然后转染HEK 293-T细胞,分析pVAX-TgPTS在细胞中的表达情况。利用真核表达质粒pVAX-TgPTS对BABL/c小鼠进行3次免疫,并用空质粒pVAX1作为对照,在每次免疫前和第3次免疫后2周收集小鼠血清,经ELISA方法检测小鼠血清中的IgG水平。第3次免疫后2周每组取3只小鼠,将其剖杀取脾脏,CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖能力,流式细胞仪测定CD4+和CD8+T细胞百分比。小鼠脾细胞经STAg刺激后,利用ELISA试剂盒检测脾细胞细胞因子的表达情况。第3次免疫后2周,每只小鼠腹腔注射1 000个弓形虫RH株速殖子,观察记录小鼠的存活时间。结果显示,pVAX-TgPTS能够在HEK 293-T细胞中表达;第3次免疫后2周pVAX-TgPTS组血清中IgG含量相比对照组有了显著提高;pVAX-TgPTS组淋巴细胞刺激指数(SI)略微高于对照组;CD4+和CD8+T细胞百分比含量明显高于对照组;pVAX-TgPTS组中脾细胞经STAg刺激后能够明显提高IFN-γ的表达量。攻虫试验结果表明,pVAX-TgPTS组小鼠存活时间比对照组明显增长。本试验成功构建真核表达质粒pVAX-TgPTS,证明pVAX-TgPTS能够诱导小鼠产生一定的体液免疫和细胞免疫反应,并对弓形虫感染产生一定程度的免疫保护力,该研究结果为进一步研发弓形虫核酸疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 弓形虫 磷脂酰苏氨酸合成酶(PTS) 真核表达质粒 免疫保护 小鼠

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刚地弓形虫GJS株微线体蛋白基因MIC3的克隆与原核表达 被引量：4

7

作者 苟惠天 王艳华 +3 位作者 李文卉 李航 付宝权 张德林 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第5期1-5,共5页

根据Genbank中编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术对刚地弓形虫GJS株微线体蛋白基因MIC3进行克隆、表达及鉴定.结果表明:克隆的MIC3基因的开放阅读框与Genbank收录的MIC3基因在核菌酸和氨基酸水平上高度一致,说明弓... 根据Genbank中编码MIC3的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术对刚地弓形虫GJS株微线体蛋白基因MIC3进行克隆、表达及鉴定.结果表明:克隆的MIC3基因的开放阅读框与Genbank收录的MIC3基因在核菌酸和氨基酸水平上高度一致,说明弓形虫MIC3蛋白的高度保守性;构建的原核细胞表达质粒PET-MIC3表达产物分子量为46 ku,且经Western-blot显示可被猪抗弓形虫免疫血清识别. 展开更多

关键词 刚地弓形虫 微线体 克隆 表达

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弓形虫与宿主行为——微妙的关系 被引量：2

8

作者 包安裕 王惠玲 蒋明森 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第5期389-392,共4页

本文综述了弓形虫感染对人类和动物中间宿主行为的影响及其可能的机制,以期为进一步揭示寄生虫感染与宿主行为的关系提供参考。

关键词 弓形虫 宿主 隐性感染 行为 综述

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弓形虫GRA1基因的克隆与原核表达 被引量：3

9

作者 孙玲 刘慧颖 +3 位作者 李淑红 宫鹏涛 张西臣 宁静 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期631-635,共5页

目的:克隆并构建PET-28a-GRA1重组表达载体,转化入大肠杆菌E.coli BL21,诱导表达并鉴定,为进一步研究GRA1的生物学特性和免疫保护作用奠定实验基础。方法:根据GenBank中编码GRA1的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术扩增GRA1基... 目的:克隆并构建PET-28a-GRA1重组表达载体,转化入大肠杆菌E.coli BL21,诱导表达并鉴定,为进一步研究GRA1的生物学特性和免疫保护作用奠定实验基础。方法:根据GenBank中编码GRA1的已知基因序列设计并合成一对引物,应用PCR技术扩增GRA1基因,插入原核表达载体PET-28a中,构建重组表达质粒PET-28a-GRA1,转化E.coli BL21,IPTG诱导后,进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定。结果:克隆的GRA1基因与GenBank收录的基因序列同源性为100%。对重组质粒进行酶切和PCR鉴定,获得573bp大小的目的基因片段,与预期结果相符,成功地构建了重组质粒PET-28a-GRA1。SDS-PAGE电泳分析表明重组蛋白条带的相对分子质量约为24 000,Western blotting显示重组蛋白能被鼠抗弓形虫血清识别。结论:成功获取GRA1基因,构建了PET-28a-GRA1重组质粒并获得了高效表达。 展开更多

关键词 GRA1基因 原核表达载体 弓形虫 克隆 GRAl SDS-PAGE BLOTTING 重组表达载体

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弓形虫可溶性速殖子抗原和霍乱毒素滴鼻免疫小鼠诱导的鼻通道细胞免疫应答 被引量：3

10

作者 刘晋平 殷国荣 +2 位作者 孟晓丽 杨亚波 刘红丽 《热带医学杂志》 CAS 2006年第7期758-760,778,共4页

目的研究弓形虫可溶性速殖子抗原(solubletachyzoiteantigen,STAg)和霍乱毒素(choleratoxin,CT)佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠后鼻通道(nasalcavity,NC)的免疫效应及持续时间。方法BALB/c小鼠96只随机分为实验组和对照组,实验组以STAg(20!g/只... 目的研究弓形虫可溶性速殖子抗原(solubletachyzoiteantigen,STAg)和霍乱毒素(choleratoxin,CT)佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠后鼻通道(nasalcavity,NC)的免疫效应及持续时间。方法BALB/c小鼠96只随机分为实验组和对照组,实验组以STAg(20!g/只)为抗原,CT(1!g/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻。滴鼻2次(间隔2周)后分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死6只小鼠。分离NC的淋巴细胞,计数并涂片,用免疫细胞化学法检测其CD4+T、CD8+T细胞亚群水平。结果小鼠免疫后,NC淋巴细胞第1周至第10周持续显著增生(P<0.05);NC中CD4+T细胞水平第1周至第8周持续显著增高(P<0.05),CD8+T细胞在第1、2、3周(P<0.05)显著增高,持续至免疫后第3周,CD4+/CD8+比值无明显变化。结论STAg和CT佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导NC的免疫应答,并可持续较长时间。 展开更多

关键词 弓形虫 可溶性速殖子抗原 霍乱毒素 鼻内免疫 鼻通道 T细胞亚群

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刚地弓形虫代谢分泌抗原对山羊IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-4表达水平的影响 被引量：2

11

作者 芦赟 张燕丽 +5 位作者 曹丽艳 王艳华 苟惠天 付宝权 李文卉 张德林 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期395-400,共6页

为了探索刚地弓形虫代谢分泌抗原(E/SA)对山羊的免疫保护机制,将山羊随机分为6组,即E/SA组、E/SA+CpG组(未乳化)、E/SA+CpG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CpG组、对照组,每组3只,分别于免疫前、免疫后第2周、免疫后第4周、感染后第1周及... 为了探索刚地弓形虫代谢分泌抗原(E/SA)对山羊的免疫保护机制,将山羊随机分为6组,即E/SA组、E/SA+CpG组(未乳化)、E/SA+CpG组、E/SA+IL-2组、E/SA+IL-2+CpG组、对照组,每组3只,分别于免疫前、免疫后第2周、免疫后第4周、感染后第1周及感染后第2周采集山羊血清,用ELISA法检测IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4的表达水平。结果显示,各免疫组免疫后IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4的含量分别为175.40～215.60、89.95～253.80、230.40～301.50、39.20～54.20pg/mL,而免疫前分别为14.00～18.75、30.91～42.20、10.75～18.30、20.40～24.60pg/mL,对照组分别为16.50～36.56、37.75～58.20、11.50～21.75、21.61～27.60pg/mL,免疫组在免疫后体内IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4的含量明显升高,均显著高于对照组(P<0.05)。表明,E/SA可引起IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4水平的升高,说明E/SA免疫后可引起山羊较强的细胞免疫和体液免疫应答。 展开更多

关键词 刚地弓形虫 代谢分泌抗原 干扰素-Γ 肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-2 白细胞介素-4

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弓形虫表面抗原SAG3基因表达干扰体系的建立 被引量：2

12

作者 陈莎丽 张玉英 +4 位作者 覃姗姗 金小宝 朱家勇 汪琦 江钢锋 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2009年第7期509-514,共6页

目的建立弓形虫SAG3基因RNAi体系,为近一步研究SAG3的功能奠定基础。方法以弓形虫SAG3基因3′-UTR区及CDS区为靶目标体外转录合成dsRNAs,通过电转法化将其分别导入弓形虫速殖子体内,用转染后的弓形虫感染SMMC7721细胞,半定量RT-PCR分析... 目的建立弓形虫SAG3基因RNAi体系,为近一步研究SAG3的功能奠定基础。方法以弓形虫SAG3基因3′-UTR区及CDS区为靶目标体外转录合成dsRNAs,通过电转法化将其分别导入弓形虫速殖子体内,用转染后的弓形虫感染SMMC7721细胞,半定量RT-PCR分析鉴定RNAi效果。结果分别于转染12、24和48h后,RT-PCR检测SAG3基因mRNA,显示dsRNA转染组SAG3mRNA水平明显低于未转染dsRNA的空白对照组和阴性对照组。其中以电压0.4kV,时间延迟为9ms的3′UTRdsRNA转染组效果最好。转染12h后,即有较明显的干扰效果。转染24h后,干扰效果最为显著。结论筛选出了可以有效抑制弓形虫SAG3基因的dsRNA序列,初步确定了RNAi发生及持续时间,为进一步研究SAG3基因功能奠定了基础。 展开更多

关键词 弓形虫 SAG3 RNAI DSRNA

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重组刚地弓形虫GRA10蛋白的表达纯化与鉴定

13

作者 杨谌 申邦 《长江大学学报（自然科学版）》 CAS 2018年第2期41-45,68,共6页

为构建表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)致密颗粒蛋白10(dense granule protein 10,GRA10)N端(AA 4-478)的重组质粒并在大肠杆菌中表达纯化该重组蛋白,以用于后续的诊断检测试剂盒设计。根据GRA10的基因序列设计并合成特异性引物,通过... 为构建表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)致密颗粒蛋白10(dense granule protein 10,GRA10)N端(AA 4-478)的重组质粒并在大肠杆菌中表达纯化该重组蛋白,以用于后续的诊断检测试剂盒设计。根据GRA10的基因序列设计并合成特异性引物,通过PCR方法从弓形虫ME49虫株cDNA中扩增GRA10(AA 4-487)的编码片段,利用同源重组的方法将其连接到pE-SUMO载体上。经测序鉴定后,将重组质粒转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)后并用IPTG诱导SUMO-GRA10的表达,产物通过SDS-PAGE分析并用亲和层析方法纯化,然后采用Western blot分析其免疫反应性。结果表明,已成功构建了表达弓形虫GRA10蛋白的重组质粒并利用原核表达系统表达纯化了具有良好免疫反应性的蛋白,为弓形虫病诊断奠定了基础。 展开更多

关键词 弓形虫(Toxoplasma gondii) 致密颗粒蛋白 GRA10 免疫诊断

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弓形虫环核苷酸依赖性蛋白激酶真核表达载体构建及在Vero细胞内的定位分析 被引量：1

14

作者 孙洪超 黄冶川 +3 位作者 杨怡 庄浩瀚 陈学秋 杜爱芳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1157-1163,共7页

为研究弓形虫环核苷酸依赖性蛋白激酶（PKAR）基N在Vero细胞内的定位情况，本研究构建弓形虫TgPKAR—RFP—C2真核表达质粒，并将其真核转染至Vero细胞内。试验中利用PKAR基N序列设计引物，以反转录获得的cDNA模板进行PCR扩增，成功获得... 为研究弓形虫环核苷酸依赖性蛋白激酶（PKAR）基N在Vero细胞内的定位情况，本研究构建弓形虫TgPKAR—RFP—C2真核表达质粒，并将其真核转染至Vero细胞内。试验中利用PKAR基N序列设计引物，以反转录获得的cDNA模板进行PCR扩增，成功获得目的片段，并构建克隆质粒pMD-PKAR。经BglⅡ和HindⅢ双酶切后构建真核表达质粒PKAR-RFP-C2，利用脂质体转染法将其导至Vero细胞内，利用Leica激光共聚焦显微镜观察PKAR基因在Vero细胞内的表达情况及其定位。结果显示，成功获得了PKAR基因，与GenBank公布的基因序列相似性为100％，并成功构建真核表达质粒及在Vero细胞内表达。Western blot试验成功检测到目的条带；激光共聚焦显微镜观察发现PKAR基因主要在Vero细胞的细胞质中呈点状表达。结果为进一步研究PKAR基因生物学功能及核酸疫苗研制奠定基础。 展开更多

关键词 弓形虫 PKAR VERO细胞 真核表达

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弓形虫GJS株表面抗原1基因的原核细胞表达及其抗原性分析 被引量：1

15

作者 曹丽艳 张德林 +4 位作者 张燕丽 芦赟 蔡志杰 王艳华 赵晋军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期804-809,共6页

目的构建弓形虫GJS株表面抗原1(SAG1)重组表达质粒,研究SAG1蛋白疫苗诱导的保护性免疫作用。方法根据RH株弓形虫SAG1基因序列设计1对引物,利用PCR方法获得SAG1基因,克隆入pMD18-T载体,测序后进行序列分析;重新设计引物将其亚克隆至原核... 目的构建弓形虫GJS株表面抗原1(SAG1)重组表达质粒,研究SAG1蛋白疫苗诱导的保护性免疫作用。方法根据RH株弓形虫SAG1基因序列设计1对引物,利用PCR方法获得SAG1基因,克隆入pMD18-T载体,测序后进行序列分析;重新设计引物将其亚克隆至原核表达载体pET-30a中,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达;重组抗原经纯化和复性后免疫小鼠,ELISA法测定其抗体滴度的变化,并用弓形虫速殖子攻击检测免疫保护力。结果与已知的SAG1基因核苷酸序列(S76248)及其编码氨基酸序列的同源性分别为99%、97%;表达的SAG1蛋白以包涵体形式存在,该重组抗原能被羊抗弓形虫阳性血清所识别;经间接ELISA检测,小鼠免疫后产生了较高的抗体;动物保护性实验表明,虽然与对照组相比免疫组小鼠存活时间有一定的延长,但差异无显著性。结论成功构建了弓形虫SAG1重组表达质粒,SAG1蛋白疫苗诱导小鼠的免疫保护力不强。 展开更多

关键词 弓形虫 表面抗原1 克隆表达 抗原性分析

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刚地弓形虫钙依赖蛋白激酶9对小鼠Ana-1巨噬细胞功能的影响

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作者 马群山 刘欣超 +5 位作者 孙晓妮 王帅 徐立新 宋小凯 严若峰 李祥瑞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期731-739,共9页

本试验旨在探究刚地弓形虫钙依赖蛋白激酶9(CDPK9)对小鼠Ana-1巨噬细胞活性及功能的影响。利用激光共聚焦技术验证CDPK9与Ana-1巨噬细胞的结合情况;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测不同浓度CDPK9处理24h对Ana-1巨噬... 本试验旨在探究刚地弓形虫钙依赖蛋白激酶9(CDPK9)对小鼠Ana-1巨噬细胞活性及功能的影响。利用激光共聚焦技术验证CDPK9与Ana-1巨噬细胞的结合情况;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测不同浓度CDPK9处理24h对Ana-1巨噬细胞增殖活性的影响;利用流式细胞术检测不同浓度CDPK9处理48h对Ana-1巨噬细胞凋亡及吞噬功能的影响;采用总一氧化氮试剂盒检测不同浓度CDPK9处理48h对Ana-1巨噬细胞NO分泌量的影响;利用细胞因子ELISA试剂盒检测不同浓度CDPK9处理48h对Ana-1巨噬细胞TNF-α、TGF-β1、IL-10、IL-1β分泌的影响。结果如下:CDPK9能够与Ana-1巨噬细胞结合。CDPK9对Ana-1巨噬细胞增殖具有抑制作用,较高浓度时抑制作用明显。CDPK9能够显著提高Ana-1巨噬细胞的凋亡比例,同时促进其吞噬能力。CDPK9上调了Ana-1巨噬细胞NO产量。细胞因子IL-1β和TNF-α的表达量上升,而TGF-β1和IL-10的表达量有所下降。CDPK9能够与巨噬细胞结合并通过多种途径影响其活性及免疫功能。 展开更多

关键词 刚地弓形虫 钙依赖蛋白激酶9 巨噬细胞 流式细胞术 细胞因子

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弓形虫疫苗研究的现状与展望 被引量：14

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作者 杨翠萍 万红娇 蔡长春 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第3期232-234,共3页

本文对弓形虫疫苗的种类及其研究现状进行了综述,并展望了弓形虫疫苗的研究前景。

关键词 弓形虫疫苗 现状 展望 综述

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犬弓形虫抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：4

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作者 贾艳 陈玉环 +1 位作者 杨丽娜 刘跃生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第7期90-94,共5页

试验以利用重组弓形虫SAG1基因转染蜥蜴利什曼原虫所表达获得的目的蛋白作为包被抗原,建立了一种快速、特异、可检测犬弓形虫抗体的间接ELISA方法。确定了抗原最佳包被浓度为6.75μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,对已知阳性血清检测的下... 试验以利用重组弓形虫SAG1基因转染蜥蜴利什曼原虫所表达获得的目的蛋白作为包被抗原,建立了一种快速、特异、可检测犬弓形虫抗体的间接ELISA方法。确定了抗原最佳包被浓度为6.75μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,对已知阳性血清检测的下限可达1∶6400,批间和批内重复性试验的变异系数均小于10%,包被抗原的酶标板在4、-20℃环境中可保存8个月以上。建立的间接ELISA方法应用于犬弓形虫抗体的检测具有较好的敏感性及特异性。 展开更多

关键词 犬 弓形虫抗体 间接ELISA

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香菇多糖抗小鼠急性弓形虫感染免疫机制的初步探讨 被引量：2

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作者 聂清 刘德辉 +3 位作者 李东英 聂丹丹 陈伟 李琳 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第11期997-1001,共5页

目的从香菇多糖对弓形虫感染小鼠Th1/Th2免疫应答建立的影响及二者平衡维持的角度探讨香菇多糖抗小鼠急性弓形虫感染的免疫机制。方法 RH株弓形虫速殖子腹腔感染小鼠前及感染后进行香菇多糖处理,观察各组小鼠的存活率,同时用ELISA法动... 目的从香菇多糖对弓形虫感染小鼠Th1/Th2免疫应答建立的影响及二者平衡维持的角度探讨香菇多糖抗小鼠急性弓形虫感染的免疫机制。方法 RH株弓形虫速殖子腹腔感染小鼠前及感染后进行香菇多糖处理,观察各组小鼠的存活率,同时用ELISA法动态检测小鼠脾细胞培养液中Th1/Th2免疫反应关键细胞因子IFN-γ/IL-4水平及血清中IgG2a/IgG1抗体的含量。结果与对照组相比香菇多糖可以明显提高两处理组小鼠的存活率,香菇多糖处理组(LTN组)第10d全部死亡,而香菇多糖预处理组(pre-6dLTN组)第13d存活率仍达18.4%;pre-6dLTN组及LTN组在感染后第3d建立Th1型免疫应答,IFN-γ含量分别为186.28pg/ml及117.07pg/ml,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);IgG2a含量为0.332(A490)及0.320(A490),与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),且于第7d达峰值。同时Th2型免疫应答开始建立,IL-4含量分别为121.28pg/ml及94.47pg/ml,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);IgG1含量分别为0.382(A490)及0.354(A490),与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),随后维持较高水平。结论香菇多糖能辅助小鼠建立Th1/Th2免疫应答,且能适时转化并维持二者平衡,避免因任何一种免疫反应过度表达而导致的免疫病理反应,从而增强小鼠抵抗弓形虫感染的能力。 展开更多

关键词 香菇多糖 弓形虫 免疫机制

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