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Utility of MtCOI polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism in differentiating between Q and B whitefly Bemisia tabaci biotypes 被引量:5
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作者 Wei-Hua Ma Xian-Chun Li +4 位作者 Timothy J. Dennehy Chao-Liang Lei Mo Wang Benjamin A. Degain Robert L. Nichols 《Insect Science》 SCIE CAS CSCD 2009年第2期107-114,共8页
The invasive, insecticide-resistant, Q whitefly biotype, has gradually spread to other countries including the US via human-mediated movement of plant materials. We assessed the utility of the VspI-based mtCOI (mitoc... The invasive, insecticide-resistant, Q whitefly biotype, has gradually spread to other countries including the US via human-mediated movement of plant materials. We assessed the utility of the VspI-based mtCOI (mitochondrion cytochrome oxidase I) polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) technique as a rapid, cost-effective, and reliable alternative for differentiating the Q from the dominant B biotype in Arizona. Using the standard mtCOI gene sequencing and mtCOI PCR-RFLP techniques, we biotyped eight whitefly strains of five individuals each collected from poinsettia and cotton at different locations in Arizona. Complete concordance was observed between the two methods, with three strains being identified as the Q biotype and five samples as the B biotype. We also scanned the mtCOI gene sequences for VspI polymorphisms in the B and Q biotype whiteflies currently available in the GenBank database. This global screening revealed the existence of three and four VspI polymorphic types for the Q and B biotypes, respectively. Nevertheless, all three VspI polymorphic Q biotype whiteflies shared a common and unique VspI site that can be used to differentiate Q biotype from the four VspI polymorphic B biotype whiteflies identified. These results demonstrate that the VspI-based mtCOI gene PCR-RFLP provides a reliable diagnostic tool for differentiating the Q and B biotype whiteflies in the US and elsewhere. 展开更多
关键词 Bemisia tabaci BIOTYPE diagnosis tool mtCOI gene PCR-RFLP Vspl enzyme
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人鼻病毒3C蛋白酶基因的克隆、表达、纯化及活性 被引量:5
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作者 李鸿钧 王文举 +4 位作者 施锐 张光明 李敏 马雁冰 孙茂盛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期240-243,共4页
目的获得重组3C蛋白酶,开发一种新型的基因工程工具酶。方法通过RT-PCR方法获得人鼻病毒3C蛋白酶基因,克隆入表达载体pBV220,构建非融合表达载体pBV220-3C,转化大肠杆菌BL21(Gold)进行表达。表达产物经变性阳离子交换层析纯化后复性,再... 目的获得重组3C蛋白酶,开发一种新型的基因工程工具酶。方法通过RT-PCR方法获得人鼻病毒3C蛋白酶基因,克隆入表达载体pBV220,构建非融合表达载体pBV220-3C,转化大肠杆菌BL21(Gold)进行表达。表达产物经变性阳离子交换层析纯化后复性,再经Superdex-75凝胶过滤进一步纯化,获得的3C蛋白酶在4℃条件下,酶切融合蛋白IL-11,进行活性测定。结果3C蛋白酶在大肠杆菌中获得了稳定、高效表达,表达量约占菌体总蛋白的25%,以包涵体形式存在。经过纯化、复性,纯度达90%以上,获得的3C蛋白酶能够有效切割含3C酶切位点的融合蛋白。结论已成功开发了一种新型的基因工程工具酶。 展开更多
关键词 人鼻病毒 蛋白酶 工具酶 基因工程
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制备条斑紫菜原生质体的工具酶研究 被引量:2
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作者 许星鸿 王萍 赵素珍 《淮海工学院学报(自然科学版)》 CAS 2007年第3期66-69,共4页
通过比较自制的4种海螺酶(分别取自单齿螺、锈凹螺、短滨螺和石鳖)及国产的纤维素酶、果胶酶等对条斑紫菜细胞壁的降解效果,探索经济高效制备条斑紫菜原生质体的工具酶,并进一步研究了最佳酶解条件。结果表明,单独使用海螺酶及市售的纤... 通过比较自制的4种海螺酶(分别取自单齿螺、锈凹螺、短滨螺和石鳖)及国产的纤维素酶、果胶酶等对条斑紫菜细胞壁的降解效果,探索经济高效制备条斑紫菜原生质体的工具酶,并进一步研究了最佳酶解条件。结果表明,单独使用海螺酶及市售的纤维素酶、果胶酶制备紫菜原生质体的效果都不好,而用单齿螺酶与质量分数为1.5%的纤维素酶制成的混合酶液(体积比1∶1)效果最佳,在25℃,pH为6.5时酶解能力最强,酶解时间以1 h为宜,酶解率可达80.4%。温度和酸碱性过高、酶解时间过长都会造成紫菜细胞的死亡。加入2 mol/L的葡萄糖作为渗压剂可使制备的原生质体成活率从65.0%提高到80.7%。 展开更多
关键词 条斑紫菜 原生质体 工具酶 酶解条件
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从石鳖(Chiton sp.)和帽贝(Patella sp.)中提取海藻解壁酶的初步研究 被引量:1
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作者 余长缨 沈颂东 +1 位作者 戴继勋 韩宝琴 《海洋通报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期92-95,共4页
本研究尝试从两种海洋贝类──石鳖和帽贝的消化腺中提取混合消化酶,以获得对海藻原生质体分离更有效的工具酶。通过对19种青岛海滨常见藻类酶解效果的比较发现;(l)该酶对各种藻类均有一定的解离作用,尤其对红藻效果好,对绿藻... 本研究尝试从两种海洋贝类──石鳖和帽贝的消化腺中提取混合消化酶,以获得对海藻原生质体分离更有效的工具酶。通过对19种青岛海滨常见藻类酶解效果的比较发现;(l)该酶对各种藻类均有一定的解离作用,尤其对红藻效果好,对绿藻次之;(2)解离时间相对较短,一般在1h左右,对甘紫菜10min即可见效。石鳖和帽贝混合消化酶由于综合两种贝的食性特征,具有比单一动物消化酶更广泛的消化作用.同时还对这一混合工具酶的酶解条件进行了研究。 展开更多
关键词 海藻工具酶 石鳖 帽贝 原生质体 海藻解壁酶
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自剪切重组麦芽糖结合蛋白-人鼻病毒3C蛋白酶融合蛋白在大肠杆菌表达系统中表达、纯化及活性检测 被引量:2
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作者 董哲君 赵海舰 +3 位作者 许小毛 方保民 郭健 肖飞 《国际检验医学杂志》 CAS 2014年第20期2721-2722,2725,共3页
目的利用大肠杆菌表达系统高效表达一种可以自剪切的重组的麦芽糖结合蛋白-人鼻病毒3C蛋白酶融合蛋白酶,获得一种可溶性好、酶切特异性强,且在低温下仍保持酶活性的新型基因工程工具酶。方法将编码人鼻病毒3C蛋白酶的遗传微粒克隆入表... 目的利用大肠杆菌表达系统高效表达一种可以自剪切的重组的麦芽糖结合蛋白-人鼻病毒3C蛋白酶融合蛋白酶,获得一种可溶性好、酶切特异性强,且在低温下仍保持酶活性的新型基因工程工具酶。方法将编码人鼻病毒3C蛋白酶的遗传微粒克隆入表达载体pRSF-duet,转化大肠杆菌BL21(DE3),经镍柱亲和层析纯化得到人鼻病毒3C蛋白酶。通过自身体内酶切实验进行活性检测。结果人鼻病毒3C蛋白酶在大肠杆菌表达系统中得到了高效的表达,并可特异性识别及剪切人鼻病毒3C蛋白酶酶切位点。结论获得了新型的基因工程工具酶。 展开更多
关键词 人鼻病毒3C蛋白酶 表达 工具酶
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4'-去甲基表鬼臼毒素的酶法糖基化 被引量:1
6
作者 解可波 陈日道 +2 位作者 张玉娇 陈大伟 戴均贵 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2323-2328,共6页
4'-去甲基表鬼臼毒素(4'-demethylepipodophyllotoxin,DMEP)的糖苷衍生物具有多种药理活性,但其化学合成面临位置及立体选择性和基团的保护与脱保护等诸多挑战。该研究从库拉索芦荟Aloe barbadensis中克隆得到1个新颖糖基转移酶... 4'-去甲基表鬼臼毒素(4'-demethylepipodophyllotoxin,DMEP)的糖苷衍生物具有多种药理活性,但其化学合成面临位置及立体选择性和基团的保护与脱保护等诸多挑战。该研究从库拉索芦荟Aloe barbadensis中克隆得到1个新颖糖基转移酶(glycosyltransferase,GT)基因Ab GT5,并成功进行了外源表达及蛋白纯化。重组Ab GT5能够催化4'-去甲基表鬼臼毒素进行糖基化,获得的产物经MS,~1H-NMR,^(13)C-NMR,HSQC以及HMBC等波谱技术鉴定为4'-去甲基表鬼臼毒素-4'-O-β-D-葡萄糖苷。酶学性质研究发现AbGT5的最适反应温度为20℃,最适pH 9.0,且不依赖金属离子。在最适反应条件下,4'-去甲基表鬼臼毒素的转化率可达80%。该研究表明利用新颖糖基转移酶AbGT5可实现4'-去甲基表鬼臼毒素的高效酶法糖基化,为其糖基化提供新方法。 展开更多
关键词 糖基转移酶 酶法糖基化 工具酶 4'-去甲基表鬼臼毒素 库拉索芦荟
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核酸工具酶辅助的金属稳定同位素标记方法在生物分析中的应用
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作者 周静 李紫嫣 +2 位作者 胡建煜 刘睿 吕弋 《中国无机分析化学》 CAS 北大核心 2022年第4期55-62,共8页
主要概述了近年来核酸工具酶辅助的基于金属稳定同位素标记的电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法在生物分析中的发展和应用,简要介绍了该方法在蛋白质、核酸及一些生物小分子检测中的应用。最后对核酸工具酶辅助的基于金属稳定同位素标记... 主要概述了近年来核酸工具酶辅助的基于金属稳定同位素标记的电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法在生物分析中的发展和应用,简要介绍了该方法在蛋白质、核酸及一些生物小分子检测中的应用。最后对核酸工具酶辅助的基于金属稳定同位素标记的电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)检测方法的发展前景作了展望。 展开更多
关键词 ICP-MS 金属稳定同位素标记 核酸工具酶 生物分析
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石鳖和拟帽贝消化酶解离海藻效果的研究
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作者 余长缨 戴继勋 +2 位作者 韩宝芹 沈颂东 陈莉莉 《中国海洋大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2000年第z1期-,共5页
以藻类为食的石鳖和拟帽贝的消化腺中 含有酶解藻类的消化酶,从这两种海产贝类中提取混合酶能够成为对海藻细胞遗传学研究有 效的工具酶。通过对20种青岛海滨常见藻类酶解效果的比较发现:(1)该酶对各种藻类均有 一定的解离作用,尤其... 以藻类为食的石鳖和拟帽贝的消化腺中 含有酶解藻类的消化酶,从这两种海产贝类中提取混合酶能够成为对海藻细胞遗传学研究有 效的工具酶。通过对20种青岛海滨常见藻类酶解效果的比较发现:(1)该酶对各种藻类均有 一定的解离作用,尤其对红藻效果好,对绿藻次之;(2)解离时间相对较短,一般在1h左右 ,解离甘紫菜30min即可有50%的单细胞游离。贝类混合消化酶由于综合多种贝类的食性特 征,具有比单一动物消化酶更广泛的消化作用。 展开更多
关键词 海藻工具酶 石鳖 拟帽贝 原生质体
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