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使用不同组织裂解液提取人心房组织膜蛋白的研究 被引量：1
1
作者 李涛 毛亮 +3 位作者 黄文俊 谭晓秋 杨艳 曾晓荣 《泸州医学院学报》 2012年第3期245-247,共3页
目的:寻找一种适用于Western boltting实验的提取人心房组织膜蛋白的组织裂解液的配制方法。方法:配制两种不同的组织裂解液A、B。应用组织裂解液A、B及Bio-Rad公司提取膜蛋白的试剂盒,分别对人右心耳组织进行膜蛋白提取,聚丙烯酰胺凝... 目的:寻找一种适用于Western boltting实验的提取人心房组织膜蛋白的组织裂解液的配制方法。方法:配制两种不同的组织裂解液A、B。应用组织裂解液A、B及Bio-Rad公司提取膜蛋白的试剂盒,分别对人右心耳组织进行膜蛋白提取,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蛋白进行分离,免疫印迹法检测SK2膜蛋白的表达,比较三种裂解方法的裂解效果。结果:三种不同的裂解方法提取的膜蛋白,其中用组织裂解液A和组织裂解液B提取的膜蛋白能满足Western blotting的实验要求,比用试剂盒提取的方法实验效果好。结论:组织裂解液A和组织裂解液B可作为人心房组织提取SK2膜蛋白的组织裂解液。 展开更多
关键词 组织裂解液 膜蛋白提取 WESTERN BLOTTING
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基于质谱的银屑病免疫复合物鉴定技术的建立
2
作者 杨柳慧 邓静文 +9 位作者 王贵宾 韩凌 闫玉红 姚丹霓 邓浩 代佳宇 段虎 蒋继志 卢传坚 于晓波 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期438-441,共4页
目的建立基于质谱的血清免疫复合物(IC)鉴定技术,研究机体自身免疫病的发生机制。方法以银屑病为模式,采用自身配对设计,用protein A/G beads与血清及组织裂解液混合物进行孵育,免疫沉淀抗原抗体复合物,并用质谱鉴定。结果对实验中关键... 目的建立基于质谱的血清免疫复合物(IC)鉴定技术,研究机体自身免疫病的发生机制。方法以银屑病为模式,采用自身配对设计,用protein A/G beads与血清及组织裂解液混合物进行孵育,免疫沉淀抗原抗体复合物,并用质谱鉴定。结果对实验中关键参数进行了摸索和优化,建立了鉴定IC的方法。利用建立的方法测定48份银屑病患者的混合血清样本,鉴定出360个IC自身抗原,为过去鉴定的8倍。结论建立了银屑病血清IC鉴定技术,为今后开展银屑病的分子机制和临床诊治研究提供了依据。 展开更多
关键词 银屑病 抗原抗体复合物 质谱分析法 血清 组织裂解液 自身免疫疾病
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不同部位心肌组织裂解液诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞 被引量：1
3
作者 韦雅淑 刘红静 +3 位作者 王慧丰 王珺铎 赵文婧 陈维平 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2021年第1期32-37,共6页
背景:骨髓间充质干细胞可定向诱导分化形成心肌组织样结构,但利用不同部位的心肌组织制备心肌组织裂解液构建有差异的微环境,探讨骨髓间充质干细胞定向诱导效率以及相关基因表达的研究甚少。目的:探究不同部位心肌组织裂解液对骨髓间充... 背景:骨髓间充质干细胞可定向诱导分化形成心肌组织样结构,但利用不同部位的心肌组织制备心肌组织裂解液构建有差异的微环境,探讨骨髓间充质干细胞定向诱导效率以及相关基因表达的研究甚少。目的:探究不同部位心肌组织裂解液对骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞的影响,评价诱导过程中相关基因的表达与心肌组织工程构建的关联。方法:选择第3代SD大鼠乳鼠骨髓间充质干细胞,采用全心组织裂解液、心房肌组织裂解液、心室肌组织裂解液构建不同的微环境诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞。倒置显微镜、透射电镜观察细胞的形态变化及其超微结构;免疫荧光染色检测α-actin、cTnI的表达;qRT-PCR检测诱导后ANP、HCN4及MLC-2v基因的表达。结果与结论:①各诱导组的细胞均遵循相似的形态学变化规律,心肌样细胞都能够发生自律性搏动、节律性的收缩和舒张,透射电镜可见大量整齐排列的肌丝,免疫荧光染色α-actin、cTnI均有阳性表达;②全心组织裂解液诱导组能够形成米粒大小、含胶原纤维的心肌组织样结构;③心房肌组织裂解液诱导骨髓间充质干细胞定向分化形成的心房肌样细胞,自律性搏动出现较早、但搏动频率和时间较短,培养液中出现大量分泌颗粒,ANP和HCN4在心房肌样细胞中高表达;④心室肌组织裂解液诱导形成的心室肌样细胞无分泌颗粒,MLC-2v在心室肌样细胞高表达;⑤结果表明,全心组织裂解液可诱导骨髓间充质干细胞形成心肌组织样结构,心房肌组织裂解液可诱导骨髓间充质干细胞向心房肌样细胞分化,心室肌组织裂解液可诱导骨髓间充质干细胞向心室肌样细胞分化。通过构建特定的微环境,骨髓间充质干细胞可以定向分化形成不同部位的心肌样细胞,为心肌组织工程的构建积累实验室数据。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 全心组织裂解液 心房肌组织裂解液 心室肌组织裂解液 心房肌 心室肌 心肌样细胞
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3种方法提取胸腺组织蛋白双向电泳纯化结果比较 被引量：4
4
作者 王桂叶 高峰 +5 位作者 李静孟 方华 张清勇 王玉玲 张建立 赵明理 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第4期660-662,共3页
目的:选择合适的胸腺组织蛋白质提取和纯化方法。方法:分别采用组织裂解液法、丙酮沉淀法和蛋白纯化试剂3种方法提取7例重症肌无力患者胸腺组织蛋白质,上样量为1mg蛋白,以17cmpI3～10固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦,SDS-PAGE垂直电泳... 目的:选择合适的胸腺组织蛋白质提取和纯化方法。方法:分别采用组织裂解液法、丙酮沉淀法和蛋白纯化试剂3种方法提取7例重症肌无力患者胸腺组织蛋白质,上样量为1mg蛋白,以17cmpI3～10固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳(2-DE),考马斯亮蓝染色,图像分析软件分析电泳图谱。结果:利用蛋白纯化试剂法提取的胸腺组织蛋白2-DE凝胶图像纵条纹、横条纹以及背景都明显减少,获得蛋白点数量较其他2种方法增加(P均<0.05)。结论:采用蛋白纯化试剂法提取胸腺组织蛋白,能够获得较好2-DE凝胶图像,为胸腺组织蛋白质组学的研究打下基础。 展开更多
关键词 双向电泳 蛋白纯化 胸腺 组织裂解法 丙酮沉淀法 蛋白质纯化试剂法
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不同诱导剂定向诱导BMSCs分化为胰岛样结构的比较 被引量：1
5
作者 王慧丰 吴丽情 +4 位作者 徐亦辰 韦雅淑 刘红静 赵文婧 陈维平 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期1691-1696,共6页
为了探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）定向诱导分化成胰岛样结构的变化规律,本研究以胰腺组织裂解液为诱导剂,同时采用尼克酰胺诱导剂作为对照,以双硫腙染色筛选诱导所获得的细胞团,采用Mallory染色... 为了探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）定向诱导分化成胰岛样结构的变化规律,本研究以胰腺组织裂解液为诱导剂,同时采用尼克酰胺诱导剂作为对照,以双硫腙染色筛选诱导所获得的细胞团,采用Mallory染色鉴别胰岛细胞,RT-PCR检测Insulin基因的表达。实验结果表明：诱导形成的胰岛样结构具有结缔组织样被膜包裹,Mallory染色可见胰岛样结构内有α、β样细胞,RT-PCR可检测到胰岛样结构内Insulin基因表达的阳性细胞。以上结果说明：胰腺组织裂解液能更好地模拟体内胰腺组织结构的微环境,诱导BMSCs分化为多种细胞,最终形成比较复杂的胰岛样结构。本研究结果为BMSCs定向诱导分化成胰腺细胞,提供了新的思路和方法。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 胰腺组织裂解液 环境依赖性分化 胰岛样结构
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3种诱导法诱导CD73^+脂肪间充质干细胞成心肌细胞效果的比较
6
作者 齐立杰 郭康 +1 位作者 李琼 郭志坤 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期339-344,共6页
目的从脂肪来源的间充质干细胞(ADMSCs)的混合细胞群中分离纯化出CD73阳性的细胞亚群,证明几种不同诱导法诱导CD73细胞的成心肌分化潜能。方法体外分离培养1～3月龄小鼠的ADMSCs,利用流式细胞仪从ADMSCs中分选出CD73+和CD73-两个细胞亚... 目的从脂肪来源的间充质干细胞(ADMSCs)的混合细胞群中分离纯化出CD73阳性的细胞亚群,证明几种不同诱导法诱导CD73细胞的成心肌分化潜能。方法体外分离培养1～3月龄小鼠的ADMSCs,利用流式细胞仪从ADMSCs中分选出CD73+和CD73-两个细胞亚群。分别培养两组细胞,利用5-氮杂胞苷(5-aza)、心肌组织裂解液和5-aza+心肌组织裂解液对两组分选出的细胞分别进行成心肌的诱导。利用免疫细胞化学技术检测3种诱导法的成心肌效果。结果未分选的ADMSCs可分化为成脂和成骨细胞,分选的CD73+细胞具备分化为心肌细胞的良好潜能。3种诱导法均能诱导CD73+ADMSCs向心肌方向分化,5-aza诱导CD73+ADMSCs分化为心肌细胞率为(22.99±6.72)%,心肌组织裂解液组心肌细胞率(14.12±5.42)%,5-aza+心肌组织裂解液组心肌细胞率(26.94±6.11)%。3种方法比较,5-aza+心肌组织裂解液的诱导效果最佳(P<0.05)。结论 CD73+比CD73-的ADMSCs更易于分化为心肌细胞。化学诱导因素和体外模拟心肌微环境,可高效诱导脂肪间充质干细胞分化为心肌细胞。 展开更多
关键词 CD73 5-氮杂胞苷 心肌组织裂解液 脂肪源间充质干细胞 细胞培养 免疫荧光 小鼠
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胚胎组织浸液降低无关个体混合淋巴细胞培养中的HLA基因表达
7
作者 李丹 张萍 +5 位作者 刘海燕 于妍 郗斌 刘方 王申五 陆道培 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1996年第2期172-176,共5页
用3—4月龄的治疗性引产胎儿的肝、胸腺制成二种组织浸液,分别加入无关个体混合淋巴细胞培养(MLC)体系中,培养120小时后掺入~3H-TdR,测CPM值,计算刺激指数(SI);用经PCR生物素掺入的HLA-Ⅰ、Ⅱ类特异性探针进行细胞原位杂交,图像扫描定... 用3—4月龄的治疗性引产胎儿的肝、胸腺制成二种组织浸液,分别加入无关个体混合淋巴细胞培养(MLC)体系中,培养120小时后掺入~3H-TdR,测CPM值,计算刺激指数(SI);用经PCR生物素掺入的HLA-Ⅰ、Ⅱ类特异性探针进行细胞原位杂交,图像扫描定量。与不含胚胎组织浸液的对照组相比,胎肝、胸腺浸液组MLC的SI明显降低,混合淋巴细胞培养的细胞HLA-Ⅰ、Ⅱ类基因mRNA表达均有显著降低,胎肝浸液作用更明显。 展开更多
关键词 胚胎组织浸液 混合淋巴细胞培养 HLA基因 基因表达
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