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富含血小板血浆凝胶的超微结构 被引量:8
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作者 马健 李放 +1 位作者 任大江 叶超群 《中国康复理论与实践》 CSCD 2011年第3期223-225,共3页
目的观察富含血小板血浆(PRP)凝胶的超微结构。方法采用二次离心法制备PRP,分别计数全血和PRP血小板,用酶联免疫吸附法测定全血和PRP凝胶中转移生长因子(TGF)-β1及血小板源性生长因子(PDGF)-AB的浓度;同时,对PRP凝胶行大体观察、HE染... 目的观察富含血小板血浆(PRP)凝胶的超微结构。方法采用二次离心法制备PRP,分别计数全血和PRP血小板,用酶联免疫吸附法测定全血和PRP凝胶中转移生长因子(TGF)-β1及血小板源性生长因子(PDGF)-AB的浓度;同时,对PRP凝胶行大体观察、HE染色、透射及扫描电镜观察。结果 PRP中的血小板浓度达到全血的4.58倍;PRP凝胶中含有高浓度的TGF-β1、PDGF-AB;扫描电镜及透射电镜观察均显示PRP凝胶主要由大量纤维蛋白网和血小板构成。结论 PRP可能是构建可注射组织工程髓核的理想支架材料。 展开更多
关键词 富含血小板血浆凝胶 生长因子 透射电镜 扫描电镜 组织工程 髓核
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富含血小板血浆凝胶复合脂肪间充质干细胞构建可注射组织工程髓核 被引量:8
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作者 马健 李放 +3 位作者 任大江 吴坤 万中元 李进珍 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期353-357,共5页
目的:探讨以自体富含血小板血浆(PRP)凝胶复合脂肪间充质干细胞(ADSCs)构建可注射组织工程髓核的可行性。方法:将体外扩增的第3代兔ADSCs经流式细胞仪鉴定后接种至自体PRP凝胶中,体外立体培养2周、4周、8周时分别行大体观察、组织学检查... 目的:探讨以自体富含血小板血浆(PRP)凝胶复合脂肪间充质干细胞(ADSCs)构建可注射组织工程髓核的可行性。方法:将体外扩增的第3代兔ADSCs经流式细胞仪鉴定后接种至自体PRP凝胶中,体外立体培养2周、4周、8周时分别行大体观察、组织学检查、5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)免疫荧光法观察细胞在PRP凝胶中的分布及存活情况;分光光度法检测PRP凝胶-细胞复合体中糖胺聚糖(GAG)含量,实时荧光定量PCR法检测低氧诱导因子(HIF-1α)、蛋白多糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)基因表达情况。结果:流式细胞仪检测显示体外扩增的第3代细胞CD90阳性率为95.2%,CD45阳性率为0.9%。培养2、4、8周时PRP凝胶细胞复合体均为表面光滑的凝胶状,弹性较好;番红O染色2周时细胞外基质几乎不着色,4周时可见细胞周围呈粉色的弱阳性染色,8周时多数细胞周围呈红色阳性染色。HE染色和扫描电镜各时间点均可见细胞均匀分布于网络状支架内;BrdU免疫荧光法显示细胞在支架中生存状态良好,培养4周时阳性细胞数较培养2周时明显增多(P<0.05),8周时较4周时明显增多(P<0.05)。培养4周时GAG含量较培养2周时明显增高(P<0.05),8周时较4周时明显增高(P<0.05);培养4周时与培养2周时比较3个目的基因mRNA表达量均增高,差异有显著性(P<0.05),8周时与4周时比较亦明显增高(P<0.05)。结论:以兔自体PRP凝胶与ADSCs构建的复合体在体外培养时细胞可以向类髓核样细胞分化,用此方法构建可注射组织工程髓核具有可行性。 展开更多
关键词 组织工程髓核 富含血小板血浆凝胶 脂肪间充质干细胞
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仿生髓核组织工程细胞支架的构建及初步理化指标分析 被引量:5
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作者 李长青 周跃 张传志 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第13期1351-1354,共4页
目的设计构建一种新型仿生髓核组织工程的细胞支架,以用于髓核组织工程的实验研究.方法以猪Ⅱ型胶原和透明质酸在pH 1~2的环境下混合,先行制备Ⅱ型胶原/透明质酸海绵,再以水溶性碳化二亚胺交联并复合6-硫酸软骨素,从而获得与生理条件... 目的设计构建一种新型仿生髓核组织工程的细胞支架,以用于髓核组织工程的实验研究.方法以猪Ⅱ型胶原和透明质酸在pH 1~2的环境下混合,先行制备Ⅱ型胶原/透明质酸海绵,再以水溶性碳化二亚胺交联并复合6-硫酸软骨素,从而获得与生理条件下髓核细胞外基质主要成份相同的仿生髓核组织工程细胞支架.并对其理化指标进行初步分析.结果所制备的支架材料为多孔结构,其孔径为89~132μm,孔隙率为94.8%.含水能力为79.2%,热变性温度为74.6℃,糖胺多糖含量为224.6 mg/g,弹性模量为0.673 MPa.结论我们对所制备支架材料的理化指标初步分析认为:该支架符合理想支架材料的结构要求.可对该支架的性能进行深入的研究. 展开更多
关键词 Ⅱ型胶原 透明质酸 6-硫酸软骨素 支架 组织工程 髓核
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组织工程椎间盘支架材料的初步构建及理化性能分析 被引量:5
4
作者 庄颖 陈建明 +2 位作者 李长青 黄博 周跃 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第13期1334-1339,共6页
[目的]设计构建一种新型组织工程椎间盘的复合支架材料,为组织工程椎间盘的实验研究奠定基础。[方法]应用冷冻干燥、化学交联等组织工程技术构建一种包含有纤维环和髓核两部分、全新的组织工程化椎间盘支架材料,并对其理化性能进行初步... [目的]设计构建一种新型组织工程椎间盘的复合支架材料,为组织工程椎间盘的实验研究奠定基础。[方法]应用冷冻干燥、化学交联等组织工程技术构建一种包含有纤维环和髓核两部分、全新的组织工程化椎间盘支架材料,并对其理化性能进行初步分析。[结果]所制备的组织工程支架材料为三维立体多孔结构,外周纤维环部分平均孔径为(251±147)μm;中间髓核部分平均孔径为(102±29)μm;支架材料孔隙率平均为84.3%。吸水力平均为73.3%,体外生物降解率平均为(37.1±3.5)%。生物力学测试结果表明,组织工程椎间盘支架材料具有与天然椎间盘相似的弹性以及抗压强度。[结论]作者所制备的组织工程椎间盘支架材料符合理想支架材料的结构要求,可对其生物学性能进行进一步实验研究。 展开更多
关键词 椎间盘 组织工程 支架材料
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兔髓核细胞体外培养和重组人转化生长因子-β1对其代谢影响的研究 被引量:5
5
作者 张传志 周跃 +4 位作者 李长青 周琳 郭国宁 曹国勇 李华壮 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2006年第4期280-283,i0001,共5页
目的:探讨体外单层和立体培养兔髓核细胞时的变化及重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1,10ng/ml)对其代谢的影响。方法:体外培养兔髓核细胞,分为3组。A组,单层培养组;B组,Ⅱ型胶原支架立体培养组;C组,Ⅱ型胶原支架立体培养+rhTGF-β1(10n... 目的:探讨体外单层和立体培养兔髓核细胞时的变化及重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1,10ng/ml)对其代谢的影响。方法:体外培养兔髓核细胞,分为3组。A组,单层培养组;B组,Ⅱ型胶原支架立体培养组;C组,Ⅱ型胶原支架立体培养+rhTGF-β1(10ng/ml)组。利用倒置显微镜、扫描电镜、RT-PCR、3H-proline掺入法观察髓核细胞形态学、基因表达水平和总胶原合成的变化。结果:B、C组兔髓核细胞由A组的多角形转为类圆形;与A组相比,B组Ⅱ型胶原、集聚蛋白多糖基因表达水平升高(P<0.05),总胶原合成升高(P<0.01)。与B组相比,C组Ⅱ型胶原、集聚蛋白多糖、核心蛋白多糖基因表达水平增高(P<0.01、P<0.01、P<0.05),总胶原合成升高(P<0.01)。结论:兔髓核细胞由单层培养转到Ⅱ型胶原支架上培养时其基因表达和总胶原合成增强。rhTGF-β1(10ng/ml)可增强立体培养的兔髓核细胞基因表达和总胶原合成。 展开更多
关键词 组织工程 细胞培养 髓核细胞 重组人转化生长因子-β1
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hTGF-β1基因增强组织工程化髓核修复退变腰椎间盘的实验研究 被引量:3
6
作者 李旭 侯筱魁 +4 位作者 汤亭亭 李惠武 陈炅昊 郭刚 裴国献 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2007年第9期700-705,I0010,共7页
目的:探讨人转化生长因子-β1(hTGF-β1)基因修饰山羊骨髓基质干细胞(BMSCs)为种子细胞构建的组织工程化髓核对山羊退变腰椎间盘的修复作用。方法:用粗针穿刺山羊L1/2~L5/6纤维环抽取髓核制作椎间盘退变模型,同时体外培养山羊自体BMSC... 目的:探讨人转化生长因子-β1(hTGF-β1)基因修饰山羊骨髓基质干细胞(BMSCs)为种子细胞构建的组织工程化髓核对山羊退变腰椎间盘的修复作用。方法:用粗针穿刺山羊L1/2~L5/6纤维环抽取髓核制作椎间盘退变模型,同时体外培养山羊自体BMSCs并分为3组:实验组以携hTGF-β1基因重组腺病毒(Ad/hTGF-β1)转染;阴性对照组以携lacZ基因腺病毒(Ad/LacZ)转染,空白对照组为未转染细胞。抽取髓核后15d,收集3组细胞与透明质酸(HA)复合为组织工程化髓核,以细针从椎间盘原穿刺孔回植入髓核中央。L1/2至L3/4依次植入实验组、阴性对照组及空白对照组细胞;L4/5注入不含细胞的HA;L5/6不注入任何物质。术后观察24周,定期行放射学、组织学和生化检测。结果:X线片椎间隙测量显示,24周时L1/2~L4/5的椎间隙狭窄均较L5/6明显延迟(P<0.05);4周以内L2/3间隙的X-gal染色保持阳性;组织学评估示L1/2~L4/5退变均较L5/6为轻;免疫组化示L1/2在4周内高表达hTGF-β1、CollagenⅡ和Aggrecan,但8周后L1/2至L4/5未见显著性差异;GAG定量显示整个观察期内L1/2~L4/5均高于L5/6,其含量依次为L1/2>L2/3=L3/4>L4/5;对4周时L1/2至L3/4髓核组织的RT-PCR显示,L1/2的hTGF-β1、CollagenⅡ及Aggrecan的mRNA表达显著增强(P<0.05)。结论:体外构建的组织工程化髓核回植可延缓椎间盘早期退变的进程,经hTGF-β1基因增强的组织工程化髓核对退变延缓作用尤为显著,但均无法完全逆转整个椎间盘退变进程。 展开更多
关键词 椎间盘退变 组织工程 髓核 转化生长因子-β1 骨髓基质干细胞 山羊
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脂肪间充质干细胞复合血小板凝胶修复兔椎间盘退变 被引量:4
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作者 孟繁星 李放 +2 位作者 叶超群 阴彦斌 高阳 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第21期3801-3808,共6页
背景:富含血小板的血浆凝胶作为三维支架使其中干细胞可以呈立体生长,同时富含血小板的血浆凝胶又释放大量生长因子,促进脂肪间充质干细胞增殖及分化。目的:探讨脂肪间充质干细胞-富含血小板的血浆凝胶复合体注入兔椎间盘退变模型后的... 背景:富含血小板的血浆凝胶作为三维支架使其中干细胞可以呈立体生长,同时富含血小板的血浆凝胶又释放大量生长因子,促进脂肪间充质干细胞增殖及分化。目的:探讨脂肪间充质干细胞-富含血小板的血浆凝胶复合体注入兔椎间盘退变模型后的修复作用。方法:取兔动脉血采用二次离心法制备自体富血小板血浆,取兔肩胛间区脂肪分离培养脂肪间充质干细胞,制备脂肪间充质干细胞-富含血小板的血浆凝胶复合体。新西兰大白兔随机分为对照组、模型组、富含血小板的血浆凝胶组和脂肪间充质干细胞-富含血小板的血浆凝胶复合体组,后 3 组以穿刺法制备椎间盘退变模型,退变模型制备完成 2 周后,富含血小板的血浆凝胶组和脂肪间充质干细胞-富含血小板的血浆凝胶复合体组分别对退变间盘中注射相应材料。结果与结论:兔椎间盘退变后,间隙明显降低,髓核信号明显降低,髓核内基质高,密度染色较深;而经富含血小板的血浆凝胶和脂肪间充质干细胞-富含血小板的血浆凝胶复合体治疗后,上述症状明显改善,且脂肪间充质干细胞-富含血小板的血浆凝胶复合体的治疗效果更好。提示对退变椎间盘内注射富含血小板的血浆凝胶支架及脂肪间充质干细胞-富含血小板的血浆凝胶复合体均有利于减少退变对椎间盘的影响,其中脂肪间充质干细胞-富含血小板的血浆凝胶复合体注射效果更为突出。 展开更多
关键词 生物材料 组织工程骨材料 椎间盘退行性变 富血小板血浆 脂肪间充质干细胞 组织工程 髓核细胞 影像学观察
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微重力环境下体外构建组织工程化椎间盘 被引量:4
8
作者 刘洋 朱书涛 +2 位作者 李国军 王晓 张永乐 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期291-295,共5页
[目的]利用微重力培养环境,构建高质量组织工程化椎间盘。[方法]选用成年新西兰大白兔椎间盘细胞作为种子细胞,复合聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)支架,分别在微重力培养环境和普通培养板环境下培养,利用倒置显微镜、MTT比色法、扫描电镜、组织... [目的]利用微重力培养环境,构建高质量组织工程化椎间盘。[方法]选用成年新西兰大白兔椎间盘细胞作为种子细胞,复合聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)支架,分别在微重力培养环境和普通培养板环境下培养,利用倒置显微镜、MTT比色法、扫描电镜、组织学观察椎间盘细胞、支架和复合结构质量。[结果]体外单层培养的椎间盘细胞呈多角形符合传代要求,微重力环境比普通培养环境能更好地促进椎间盘细胞的增殖,同时椎间盘细胞在支架内分布更加均匀。[结论]微重力培养环境更适于椎间盘细胞在三维培养结构中均匀增殖,有利于构建高质量组织工程化椎间盘用于深入研究。 展开更多
关键词 微重力 细胞培养 椎间盘 组织工程 髓核细胞
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腰椎间盘髓核组织工程研究进展
9
作者 李强 丁凡 刘晓柳 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期88-97,共10页
腰椎间盘退行性病变(退变)是脊柱外科常见多发疾病之一,临床以腰痛、下肢麻木和大小便功能障碍等为主要症状,其发生发展由多个因素共同决定,但目前病理生理学和细胞生物学机制尚未完全清晰。髓核组织工程是结合生物组织学和材料科学治... 腰椎间盘退行性病变(退变)是脊柱外科常见多发疾病之一,临床以腰痛、下肢麻木和大小便功能障碍等为主要症状,其发生发展由多个因素共同决定,但目前病理生理学和细胞生物学机制尚未完全清晰。髓核组织工程是结合生物组织学和材料科学治疗疾病的一种新兴生物疗法,可有效治疗腰椎间盘退变。临床医师正确认识髓核组织工程和腰椎间盘退变之间的复杂关系,了解髓核组织工程在腰椎间盘退变中的应用及其机制,有利于临床上腰椎间盘退变治疗、腰椎间盘退变治疗后康复和人群腰椎间盘退变预防工作开展。 展开更多
关键词 腰椎间盘退行性病变 组织工程 髓核修复 细胞移植
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不同浓度的葡聚糖/明胶复合水凝胶支架性能表征及其对体外构建组织工程髓核的影响 被引量:3
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作者 甘翼搏 李培 +5 位作者 周强 莫秀梅 宋磊 徐源 李松涛 李素凯 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期707-712,共6页
目的研究不同浓度的葡聚糖/明胶复合水凝胶支架材料对体外构建组织工程髓核的影响,对其性能进行表征,探索适用于组织工程髓核的水凝胶浓度。方法通过Schiff交联反应制备葡聚糖/明胶复合水凝胶支架材料,对不同浓度(6%、8%、10%、12%、14... 目的研究不同浓度的葡聚糖/明胶复合水凝胶支架材料对体外构建组织工程髓核的影响,对其性能进行表征,探索适用于组织工程髓核的水凝胶浓度。方法通过Schiff交联反应制备葡聚糖/明胶复合水凝胶支架材料,对不同浓度(6%、8%、10%、12%、14%)水凝胶的内部形态结构、孔径、孔隙率、杨氏模量和细胞相容性进行评估,分离培养猪原代髓核细胞,以P1代细胞在不同浓度的水凝胶内部进行三维培养,MTT染色观察细胞活性,Real-time PCR法检测髓核细胞特异性基因aggrecan和typeⅡcollagen表达。结果葡聚糖/明胶复合水凝胶在电镜扫描下呈现多孔网络结构,随着浓度的升高,水凝胶的孔径(38.182-82.675μm)和孔隙率(95.5%-98.3%)持续下降,杨氏模量不断升高(0.135-11.366 k Pa);该水凝胶具有较好的细胞相容性,但是6%、8%的水凝胶分别在接种细胞后第4、7天后细胞的黏附和增殖显著下降(P〈0.05)。接种1周后,浓度为10%的水凝胶内部三维培养的髓核细胞活性显著高于其他浓度水凝胶(P〈0.05),同时aggrecan、typeⅡcollagen基因表达显著高于其他各组(P〈0.05)。结论浓度为10%的葡聚糖/明胶复合水凝胶兼具有适宜的三维多孔网络结构、稳定的力学结构以及较好的细胞相容性,适用于构建组织工程髓核。 展开更多
关键词 支架 复合水凝胶 浓度 组织工程 髓核
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椎间盘组织工程学髓核种子细胞的研究新进展 被引量:3
11
作者 杨泽龙 冯刚 《川北医学院学报》 CAS 2013年第2期107-111,共5页
椎间盘退行性变是临床的常见病,其病因尚不明确,可引起的一系列疾病如腰椎间盘突出症、颈椎病、椎间盘源性疼痛、椎管狭窄症以及脊柱节段不稳等,是导致腰腿痛和影响患者生活质量的常见原因之一。目前临床上的各种治疗办法或多或少存在... 椎间盘退行性变是临床的常见病,其病因尚不明确,可引起的一系列疾病如腰椎间盘突出症、颈椎病、椎间盘源性疼痛、椎管狭窄症以及脊柱节段不稳等,是导致腰腿痛和影响患者生活质量的常见原因之一。目前临床上的各种治疗办法或多或少存在着许多难以克服的问题,随着椎间盘髓核细胞组织工程学研究的不断深入,为椎间盘退行性变的治疗带来了新的希望,但其种子细胞的来源和鉴定等方面仍有许多问题亟待解决。 展开更多
关键词 椎间盘退行性变 组织工程 髓核细胞 干细胞
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不同细胞接种密度构建组织工程椎间盘的实验研究 被引量:2
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作者 辛洪奎 张超 阮狄克 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2008年第12期925-928,I0009,I0010,共6页
目的:探索构建组织工程椎间盘时合理的细胞接种数量。方法:取孕20周自然流产的人胚胎椎间盘细胞为种子细胞,聚乳酸-羟基乙酸(polylactic-glycolic acid,PLGA)材料为支架分别构建细胞接种密度为0(A组,空白对照组)、104个/150μl(B组)、10... 目的:探索构建组织工程椎间盘时合理的细胞接种数量。方法:取孕20周自然流产的人胚胎椎间盘细胞为种子细胞,聚乳酸-羟基乙酸(polylactic-glycolic acid,PLGA)材料为支架分别构建细胞接种密度为0(A组,空白对照组)、104个/150μl(B组)、105个/150μl(C组)、106个/150μl(D组)的细胞-支架复合物,体外培养48h后植入裸鼠背部皮下,8周后取材行形态及HE和免疫组织化学染色组织学观察,生化测定Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白和糖胺聚糖,观察BrdU(5-bromo-2-deoxyuridine,5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷)标记细胞。结果:人胚胎椎间盘细胞可与PLGA支架在体外及裸鼠体内实现良好的复合并初步发挥生理功能。8周时,实验组复合物维持了良好的外形,有效阻挡了外源纤维组织长入支架内部。细胞-支架复合物内有大量BrdU阳性细胞。C组及D组细胞-支架复合物中胶原蛋白及糖胺多糖的表达量明显高于A组和B组,差异有显著性(P<0.01)。结论:人胚胎椎间盘细胞在体外培养条件下可与PLGA支架完成良好的立体结合,细胞可顺利完成贴附及增殖。构建组织工程椎间盘时比较理想的细胞接种密度应不低于105个/150μl。 展开更多
关键词 椎间盘 组织工程 髓核细胞 支架材料
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体外培养人退变髓核组织细胞的活力和表型变化 被引量:1
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作者 钱忠来 高锋 +4 位作者 倪莉 施琴 顾巧丽 杨惠林 唐天驷 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2010年第5期951-954,1125,共5页
目的建立人退变髓核组织细胞体外培养体系,探索最佳培养条件,为髓核退变机制研究和组织工程研究筛选种子细胞。方法采用酶消化法分离人退变髓核组织细胞,进行单层培养,通过CellCountingKit-8评估细胞活性,采用免疫细胞化学染色等方法比... 目的建立人退变髓核组织细胞体外培养体系,探索最佳培养条件,为髓核退变机制研究和组织工程研究筛选种子细胞。方法采用酶消化法分离人退变髓核组织细胞,进行单层培养,通过CellCountingKit-8评估细胞活性,采用免疫细胞化学染色等方法比较不同代次细胞形态结构及软骨样表型和增殖活性。结果成功进行细胞单层培养和鉴定,P1~P3代细胞活性和Ⅱ型胶原的表达有明显降低(P<0.05)。结论 P1、P2和P3代细胞表型保持符合软骨样细胞特征,能够为髓核退变体外研究和组织工程研究提供种子细胞。 展开更多
关键词 组织工程 髓核 表型
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丝素蛋白来源的一体化纤维环-髓核支架的制备与评估 被引量:2
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作者 杜立龙 徐宝山 +7 位作者 杨强 马信龙 李秀兰 张杨 郭悦 丁晓明 祁霁舟 赵家宁 《天津医药》 CAS 2015年第6期603-606,I0005,共5页
目的评估以丝素蛋白为材料构建的一体化纤维环-髓核双相支架作为组织工程椎间盘支架的可行性。方法以丝素蛋白溶液为原料,分别采用石蜡球致孔法和相分离法制备三维多孔一体化纤维环-髓核支架。采用体视显微镜、扫描电镜观察支架内部结构... 目的评估以丝素蛋白为材料构建的一体化纤维环-髓核双相支架作为组织工程椎间盘支架的可行性。方法以丝素蛋白溶液为原料,分别采用石蜡球致孔法和相分离法制备三维多孔一体化纤维环-髓核支架。采用体视显微镜、扫描电镜观察支架内部结构,测定双相支架纤维环相和髓核相的孔径、孔隙率及一体化压缩弹性模量;分离培养兔纤维环细胞和髓核细胞,接种至双相支架的相应部位,体外培养48 h,扫描电镜、死活(Live/dead)细胞染色评价支架与细胞的生物相容性;CCK-8检测细胞的增殖活性。结果体视显微镜和扫描电镜可见双相支架纤维环相和髓核相均呈相互连通的多孔结构,孔隙高度连通,纤维环髓核交接区域结合紧密;纤维环相孔径为(220.0±23.1)μm,髓核相孔径为(90.0±17.8)μm;孔隙率分别为91%和93%;一体化支架压缩弹性模量为(150.7±6.8)k Pa。扫描电镜可见均匀地黏附在支架表面,细胞周围有细胞外基质分泌;Live/dead染色显示细胞在支架上活性良好,无死细胞;CCK-8增殖分析显示纤维环细胞和髓核细胞均具有良好的增殖活性。结论以天然丝素蛋白构建一体化纤维环-髓核双相支架,具有良好的孔径、孔隙率和细胞相容性,一体化支架两部分结合紧密,并且具有优越的力学性能,是构建组织工程椎间盘的理想支架载体。 展开更多
关键词 组织工程 丝素蛋白 椎间盘 支架 纤维环 髓核
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基于高分子材料的椎间盘组织工程:研究重点和热点 被引量:2
15
作者 杨林 石军 +3 位作者 郭中华 王中汉 刘贺 李秋菊 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2021年第16期2589-2596,共8页
背景:近年迅速发展的组织工程学技术为椎间盘退行性变治疗提供了新的思路,即利用生物材料重新构建破坏的椎间盘结构。目的:总结适宜用于椎间盘组织工程构建的高分子材料,并对其优缺点和使用进展进行综述。方法:检索PubMed、Web of Scie... 背景:近年迅速发展的组织工程学技术为椎间盘退行性变治疗提供了新的思路,即利用生物材料重新构建破坏的椎间盘结构。目的:总结适宜用于椎间盘组织工程构建的高分子材料,并对其优缺点和使用进展进行综述。方法:检索PubMed、Web of Science、中国知网数据库建库至2020年2月发表的相关文献,英文检索词为"polymer,intervertebral disc,tissue engineering,nucleus pulposus,annulus fibrosus",中文检索词为"高分子、椎间盘、组织工程、髓核、纤维环"。共检索到相关文献189篇,按照纳入与排除标准,最终纳入109篇文献进行总结。结果与结论:椎间盘主要由2种组分构成,包括中心软质的髓核和外周较硬的纤维环。进行椎间盘组织工程构建时,也需根据2种组分不同的结构和功能需要选择合适的高分子材料并予以适当改性,获得适合的组织工程学材料。壳聚糖、海藻酸钠、透明质酸等天然高分子因其溶胀性佳、并可诱导细胞分泌髓核基质,适用于作为髓核的构建材料。丝素蛋白、胶原、聚乙二醇、聚乳酸、聚乙醇酸、聚己内酯等材料的生物力学强度较好,作为纤维环组织工程构建材料可有效发挥力学支撑作用。在此基础上进行材料改性,可提高材料的细胞相容性,使得材料支架在体内植入后可进一步融合。 展开更多
关键词 材料 高分子材料 组织工程 椎间盘 退行性变 髓核 纤维环 综述
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PKH26荧光标记牛尾髓核细胞的实验研究 被引量:2
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作者 丁晓明 徐宝山 +6 位作者 伍耀宏 许海委 杨强 马信龙 张春秋 李秀兰 张扬 《天津医药》 CAS 北大核心 2014年第9期849-852,I0001,共5页
目的探讨PKH26荧光标记在牛尾髓核细胞的应用,为髓核组织工程的体内研究提供可示踪的种子细胞。方法从牛尾椎间盘中分离髓核组织,通过酶消化法获取原代细胞,倒置显微镜下观察,P1代髓核细胞进行番红O、甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染... 目的探讨PKH26荧光标记在牛尾髓核细胞的应用,为髓核组织工程的体内研究提供可示踪的种子细胞。方法从牛尾椎间盘中分离髓核组织,通过酶消化法获取原代细胞,倒置显微镜下观察,P1代髓核细胞进行番红O、甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色,对P1代髓核细胞进行PKH26荧光染料标记,并对标记后细胞的活性、荧光强度(0、14、28 d)、增殖特性及基因表达进行评估。结果分离得到的髓核细胞数为(1.56±0.35)×106/g,倒置显微镜下,原代细胞培养4 d开始贴壁,细胞成群生长,14 d铺满瓶底,原代细胞、P1代细胞均呈类软骨样细胞形态;P1代髓核细胞甲苯胺蓝染色异染、番红O染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色阳性;PKH26标记前后细胞活性均在95%以上,1、14、28 d呈递减趋势,但28 d时细胞仍可检测出较强的荧光,标记后的细胞增殖及基因表达(Ⅰ、Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖)与标记前的细胞相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论牛尾髓核组织中可以分离出数量满意的髓核细胞,且具有软骨样细胞的表型,可以用作种子细胞;PKH26标记后的髓核细胞无生物学特性的变化,可以用作髓核细胞体内研究的示踪染料。 展开更多
关键词 组织工程 椎间盘 牛尾 髓核细胞 PKH26
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新型丝素蛋白支架复合兔髓核细胞体内初步构建组织工程髓核的研究 被引量:1
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作者 赵家宁 徐宝山 +5 位作者 曾超 杨强 马信龙 张春秋 李秀兰 张扬 《天津医药》 CAS 北大核心 2014年第11期1076-1079,I0002,共5页
目的探讨新型丝素蛋白多孔支架复合经PKH26标记的兔髓核细胞初步构建组织工程髓核的可行性。方法消化分离兔髓核细胞,培养获取P1代细胞,对P1代髓核细胞行番红O以及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色;PKH26标记兔髓核细胞,MTT法检测标记前后髓核... 目的探讨新型丝素蛋白多孔支架复合经PKH26标记的兔髓核细胞初步构建组织工程髓核的可行性。方法消化分离兔髓核细胞,培养获取P1代细胞,对P1代髓核细胞行番红O以及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色;PKH26标记兔髓核细胞,MTT法检测标记前后髓核细胞增殖情况,将标记后的细胞接种支架,体外培养4 d后,将细胞-支架复合物植入裸鼠皮下,体内培养12周后,进行活体荧光成像技术检测、HE染色、甲苯胺蓝染色、番红O染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色。结果 P1代髓核细胞番红O染色阳性,Ⅱ型胶原免疫组织化学染色阳性;标记后细胞荧光强度分布均匀,标记前后髓核细胞光密度(OD)值比较差异无统计学意义(P>0.05);活体成像技术显示裸鼠皮下植入的细胞-支架复合体呈现强烈荧光;HE染色见多孔支架内壁有大量髓核细胞填满并分泌大量细胞外基质;甲苯胺蓝染色、番红O染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色均呈阳性,细胞周围大量细胞外基质分泌。结论以新型丝素蛋白多孔支架复合兔髓核细胞经体内培养形成的类髓核样组织,可用于组织工程化髓核的构建。 展开更多
关键词 丝素蛋白 组织工程 免疫组织化学 髓核 PKH26
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高分子材料在髓核组织工程中的应用与研究 被引量:1
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作者 祝昊 尚晖 +3 位作者 张洋 陈瑞 沈天宇 向治成 《中国医学工程》 2022年第5期53-58,共6页
椎间盘退行性疾病的发生与发展造成了严重的个人困扰与社会负担。椎间盘内炎症的侵扰、髓核细胞的凋亡、细胞外基质含量降低等问题,目前临床上的治疗手段尚不能有效解决。通过组织工程的手段实现髓核的修复与再生成为近年研究的热点。... 椎间盘退行性疾病的发生与发展造成了严重的个人困扰与社会负担。椎间盘内炎症的侵扰、髓核细胞的凋亡、细胞外基质含量降低等问题,目前临床上的治疗手段尚不能有效解决。通过组织工程的手段实现髓核的修复与再生成为近年研究的热点。细胞支架则是组织工程重要的组成部分,高分子材料在支架载体的构建上得到了广泛的应用。不同的高分子材料与种子细胞、生长因子可以产生不同的作用,因此,选择合适的材料,最大程度发挥不同高分子材料的自身特性,对以组织工程方法构建方案的治疗手段具有重要的意义。 展开更多
关键词 高分子材料 组织工程 髓核 椎间盘 修复 退变
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髓核去细胞基质复合骨髓间充质干细胞体外构建组织工程髓核的研究 被引量:1
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作者 谭伟 吕海 +3 位作者 曹纬 张朋 杨刘柱 周初松 《重庆医学》 CAS 北大核心 2015年第23期3176-3179,共4页
目的体外培养兔骨髓间充质干细胞(rBMSCs)-髓核去细胞基质支架(NPAMS)复合体(rBMSCs-NPAMS)构建组织工程髓核。方法制备若干NPAMS,接种BMSCs至NPAMS体外培养分为NPAMS组、实验组和正常对照组(正常髓核)。肉眼及显微镜观察复合体形态变化... 目的体外培养兔骨髓间充质干细胞(rBMSCs)-髓核去细胞基质支架(NPAMS)复合体(rBMSCs-NPAMS)构建组织工程髓核。方法制备若干NPAMS,接种BMSCs至NPAMS体外培养分为NPAMS组、实验组和正常对照组(正常髓核)。肉眼及显微镜观察复合体形态变化,并行扫描电镜(SEM)、苏木素-伊红(HE)染色、免疫组织化学、实时定量PCR(qRT-PCR)、支架的生物力学等检测。结果肉眼下rBMSCs-NPAMS形态接近正常髓核;SEM显示细胞在支架表面大量黏附、并向深部迁移,表面细胞密度比横截面细胞密度大;HE染色表明随时间延长,rBMSCs-NPAMS内细胞量递增,分布更广泛;免疫组织化学显示细胞外基质2型胶原(CollagenⅡ)分泌量随时间递增,且实验组CollagenⅡ表达量大于NPAMS组,小于正常对照组;qRT-PCR结果:NPAMS组未提取到mRNA,实验组CollagenⅡ、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)mRNA相对表达量呈时间依赖性递增,但均小于正常对照组(P<0.01),支架与正常髓核在相同位移下的压缩载荷差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用髓核体外NPAMS复合rBMSCs可成功构建组织工程髓核。 展开更多
关键词 组织工程 支架 髓核 去细胞 骨髓间充质干细胞
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椎间盘退变细胞组织工程研究进展
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作者 胡秀年 叶君健 《医学综述》 2011年第23期3533-3536,共4页
椎间盘退变是多因素引起的脊柱疾病,目前尚无有效的治疗方法。近年兴起的椎间盘细胞组织工程,内容涉及种子细胞、支架、生长因子及基因转染调控等,其中以细胞和支架为核心。细胞移植通过增加椎间盘细胞的数量使细胞外基质合成增加,支架... 椎间盘退变是多因素引起的脊柱疾病,目前尚无有效的治疗方法。近年兴起的椎间盘细胞组织工程,内容涉及种子细胞、支架、生长因子及基因转染调控等,其中以细胞和支架为核心。细胞移植通过增加椎间盘细胞的数量使细胞外基质合成增加,支架则为细胞提供附着部位。同时,诱导细胞合成更多的细胞外基质,替代原有退变的椎间盘,相关研究尚处于初级阶段。 展开更多
关键词 椎间盘退变 组织工程 髓核细胞 骨髓间充质干细胞 支架
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