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肝细胞Lamp-2a时间特异性基因敲除大鼠的构建及评估
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作者 张苗 周霞 +5 位作者 王敏 孙可帅 马硕怡 郑小红 王敬博 韩英 《现代生物医学进展》 CAS 2019年第7期1206-1211,共6页
目的:构建肝细胞Lamp-2a时间特异性基因敲除大鼠模型(L2AKO)并对其评估,为后续胆汁酸代谢研究提供研究基础。方法:将引进的Lamp-2^(aloxp/-)大鼠和Alb-Cre^(ERT2)工具鼠杂交繁殖,得到基因型Lamp-2a^(loxp/-)Alb-Cre^(ERT2+)大鼠;后者再... 目的:构建肝细胞Lamp-2a时间特异性基因敲除大鼠模型(L2AKO)并对其评估,为后续胆汁酸代谢研究提供研究基础。方法:将引进的Lamp-2^(aloxp/-)大鼠和Alb-Cre^(ERT2)工具鼠杂交繁殖,得到基因型Lamp-2a^(loxp/-)Alb-Cre^(ERT2+)大鼠;后者再与Lamp-2a^(loxp/loxp)杂交得到双臂loxp阳性和Alb-Cre^(ERT2)阳性的大鼠,于4-6周时经他莫昔芬的诱导实现对肝细胞Lamp-2a基因的时间特异性敲除。分别通过qPCR方法、Western-Blot技术、免疫组织化学方法对Lamp-2a的敲除结果进行验证。结果:免疫组织化学结果显示:该模型可选择性敲除肝细胞Lamp-2a,而肾脏Lamp-2a正常表达;Western和qPCR结果显示肝脏Lamp-2a的水平明显降低。L2AKO与WT大鼠相比体重变化无明显差别。肝功生化检测发现L2AKO大鼠AST明显高于WT组大鼠。结论:采用Cre/loxp系统及他莫昔芬诱导的方法成功构建肝细胞Lamp-2a时间特异性基因敲除大鼠,并且L2AKO大鼠生长未受影响,为胆汁酸代谢研究建立了较好的动物模型。 展开更多
关键词 他莫昔芬 Lamp-2a CRE/LOXP系统 时间特异性敲除
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