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重编程骨髓间充质干细胞治疗缓慢型心律失常的研究 被引量：2
1
作者 胡雁南 李宁 +2 位作者 刘良 郎希龙 张浩 《国际心血管病杂志》 2017年第4期221-225,共5页
目的:利用Tbx18重组慢病毒转染骨髓间充质干细胞,移植到猪窦房结损毁模型的右室心外膜下心肌,探索治疗缓慢型心律失常的新方法。方法:10只健康未成年猪随机分为实验组和对照组,每组各5只,通过电刀烧灼窦房结建立窦房结毁损模型,实验组... 目的:利用Tbx18重组慢病毒转染骨髓间充质干细胞,移植到猪窦房结损毁模型的右室心外膜下心肌,探索治疗缓慢型心律失常的新方法。方法:10只健康未成年猪随机分为实验组和对照组,每组各5只,通过电刀烧灼窦房结建立窦房结毁损模型,实验组移植携带Tbx18基因的骨髓间充质干细胞,对照组移植等量携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的骨髓间充质干细胞。观察两组猪的心率变化及对儿茶酚胺的反应性,免疫荧光法检测细胞移植部位心肌组织中Tbx18的表达。结果:窦房结毁损前,实验组与对照组猪心率无明显差异[(108.8±4.2)次/min对(106.6±6.8)次/min,P>0.05];窦房结毁损后,实验组与对照组猪心率无明显差异[(42.0±7.3)次/min对(43.4±5.1)次/min,P>0.05]。细胞移植后第2周实验组的心率明显高于对照组[(84.0±3.1)次/min对(53.6±2.5)次/min,P<0.05];细胞移植后第3周起实验组心率开始出现下降趋势,但仍明显高于对照组(P均<0.05);细胞移植后第5周两组猪心率无明显差异[(65.2±2.5)次/min对(50.3±2.0)次/min,P>0.05]。细胞移植后第3周时,给予微泵异丙肾上腺素后,实验组心率由(78.0±2.5)次/min上升至(103.0±2.1)次/min,对照组心率由(54.0±3.3)次/min上升至(64.0±2.0)次/min,实验组心率上升幅度明显高于对照组(33.2%对18.5%,P<0.05)。免疫荧光染色可见移植部位心肌细胞表达Tbx18蛋白。结论:将携带Tbx18的骨髓间充质干细胞移植入窦房结损毁猪模型的右室心外膜下,可以显著改善猪的心率,且对异丙肾上腺素具有良好的反应性。 展开更多
关键词 tbx18基因 生物起搏器 基因治疗 缓慢型心律失常
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TBX18腺病毒使成鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究 被引量：2
2
作者 李艳君 唐艳红 +1 位作者 陈元秀 杨媚 《疑难病杂志》 CAS 2019年第1期72-75,85,共5页
目的研究TBX18腺病毒能否转染成鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),并诱导其向心肌样细胞分化。方法实验于2015年5月—2016年10月在武汉大学心血管病研究所/心血管病湖北省重点实验室进行。全骨髓贴壁法分离培养BMSCs,采用流式细胞仪分析细胞纯... 目的研究TBX18腺病毒能否转染成鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),并诱导其向心肌样细胞分化。方法实验于2015年5月—2016年10月在武汉大学心血管病研究所/心血管病湖北省重点实验室进行。全骨髓贴壁法分离培养BMSCs,采用流式细胞仪分析细胞纯度,随机数字表法分为实验组(TBX18组)、空白病毒对照组(GFP组)和空白对照组(B组),用TBX18或GFP重组腺病毒载体分别转染BMSCs,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测α-SMA基因的表达,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测α-SMA和cTnI蛋白的表达。结果通过全骨髓贴壁法可分离获得纯度较高的BMSCs(97%～99%)。TBX18组的α-SMA mRNA表达(2. 66±0. 08)明显高于GFP组(1.49±0.09)和B组(1.00±0.00),差异均有统计学意义(t=16. 743、36. 813,P <0. 01); TBX18组α-SMA蛋白的表达(0.66±0.00)明显高于GFP组(0.36±0.08)和B组(0. 17±0.03),差异均有统计学意义(t=6. 751、23.761,P<0.01);cTnI蛋白的表达(0.57±0.12)明显高于GFP组(0.32±0.04)和B组(0.09±0.00),差异均有统计学意义(t=3.298、6.660,P<0.01)。结论 TBX18腺病毒能成功转入骨髓间充质干细胞,并在细胞内稳定表达;TBX18可诱导成鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞。 展开更多
关键词 tbx18基因 腺病毒 骨髓间充质干细胞 分化 心肌样细胞 大鼠
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Tbx18在生物起搏中的研究进展 被引量：2
3
作者 邹强 黄从新 《疑难病杂志》 CAS 2017年第1期95-98,共4页
电子起搏器自应用于临床拯救了无数生命,尽管其不断改进,但仍存在许多弊端,极大地促进了生物起搏器的发展。在过去10年,生物起搏器取得了显著的改善,窦房结发育的关键调控因子Tbx18能直接将心肌细胞转化为起搏样细胞发挥作用,取得了瞩... 电子起搏器自应用于临床拯救了无数生命,尽管其不断改进,但仍存在许多弊端,极大地促进了生物起搏器的发展。在过去10年,生物起搏器取得了显著的改善,窦房结发育的关键调控因子Tbx18能直接将心肌细胞转化为起搏样细胞发挥作用,取得了瞩目的成就,但仍遗留有与长期预后和安全相关的问题。文章对Tbx18在生物起博中研究进展进行综述。 展开更多
关键词 窦房结 基因编程 生物起搏器 tbx18
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重编程心肌细胞治疗大鼠心动过缓 被引量：1
4
作者 胡雁南 薛祥 +1 位作者 张浩 郞希龙 《中国体外循环杂志》 2017年第1期47-50,共4页
目的将Tbx18基因导入窦房结损毁模型的大鼠左室心尖部,探索治疗缓慢型心律失常疾病的新方法。方法取24只成年的Sprague Dawley雄性大鼠,随机分为实验组(n=12)和对照组(n=12),实验组注入Tbx18起搏基因,对照组植入等量绿色萤光蛋白(GFP),... 目的将Tbx18基因导入窦房结损毁模型的大鼠左室心尖部,探索治疗缓慢型心律失常疾病的新方法。方法取24只成年的Sprague Dawley雄性大鼠,随机分为实验组(n=12)和对照组(n=12),实验组注入Tbx18起搏基因,对照组植入等量绿色萤光蛋白(GFP),观察其心率变化及对儿茶酚胺的反应性。对移植部位的心肌行Western blot及免疫荧光检测。结果实验组的自主心律明显高于对照组(P<0.05)。且移植组的自主心律起源于基因注入部位。注射异丙肾上腺素后,移植组心律明显高于对照组(P<0.05),移植部位心肌组织行Western blot及免疫荧光检测提示:实验组Tbx18蛋白的表达明显高于对照组。结论将Tbx18基因植入窦房结损毁模型的大鼠左室心尖部,可以显著提高大鼠的心率,且对异丙肾上腺素具有良好的反应性。 展开更多
关键词 tbx18基因 生物起搏器 基因治疗 心动过缓
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转染人TBX18基因的大鼠心脏成纤维细胞中HCN4蛋白表达、If及对心肌细胞搏动频率的影响观察
5
作者 权大君 曹政 +1 位作者 杨媚 李莎 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第47期21-24,共4页
目的：观察转染人TBX18基因的大鼠心脏成纤维细胞HCN4蛋白表达、超极化激活内向离子电流（If）及对心肌细胞搏动频率的影响。方法取新生SD大鼠，断头处死后取心脏，分离培养成纤维细胞及心肌细胞。构建人TBX18基因的腺病毒载体Ad-GFP-TB... 目的：观察转染人TBX18基因的大鼠心脏成纤维细胞HCN4蛋白表达、超极化激活内向离子电流（If）及对心肌细胞搏动频率的影响。方法取新生SD大鼠，断头处死后取心脏，分离培养成纤维细胞及心肌细胞。构建人TBX18基因的腺病毒载体Ad-GFP-TBX18，包装并纯化病毒滴度至1＆#215;1010 TU／mL。取传代2～5代时对数生长期新生大鼠成纤维细胞分为A、B、C组，培养24 h后A、B组分别转染Ad-GFP-TBX18、腺病毒载体pHBAd-MCMV-GFP（阴性对照），C组不做任何处理。采用RT-PCR法检测各组细胞TBX18 mRNA。采用Western blotting法检测各组超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4（HCN4）蛋白。采用电压钳记录各组细胞超极化激活内向离子电流（If）。将各组细胞与新生大鼠心肌细胞共培养，观察新生大鼠心肌细胞搏动频率。结果 A、B、C组TBX18 mRNA相对表达量分别为98．32±6．21、1．03±0．05、1．02±0．02。A组TBX18 mRNA相对表达量高于B、C组（P均＜0．05）；B、C 组TBX18 mRNA相对表达量差异无统计学意义。A、B、C组HCN4蛋白相对表达量分别为0．49±1．21、0．12±0．02、0．09±0．01。A组HCN4蛋白相对表达量高于B、C组（P均＜0．05）；B、C组HCN4蛋白相对表达量差异无统计学意义。A组约有30％的细胞可以检测到If，而B、C组中没有细胞检测到If。同一时点A组新生大鼠心肌细胞搏动频率高于B、C组（P均＜0．05）；B、C组新生大鼠心肌细胞搏动频率差异无统计学意义。结论转染人TBX18基因的大鼠心脏成纤维细胞高表达HCN4蛋白，存在If电流，并能促进共培养新生大鼠心肌细胞的搏动。 展开更多
关键词 tbx18基因 基因转染 成纤维细胞 心肌细胞 超级化激活环核苷酸门控阳离子通道4 超极化激活内 向离子电流 心脏起博 动物实验
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成年小鼠实验性心肌梗死后胚胎基因Tbx18的表达情况
6
作者 汪浩 李晓群 +3 位作者 翁敏杰 高凌志 杜建霖 佘强 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1429-1433,共5页
目的:检测实验性心肌梗死后成年小鼠胚胎基因Tbx18的表达情况,了解成年小鼠心肌损伤后胚胎基因Tbx18的时空表达特点。方法:90只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(sham组)及心梗组,用右侧卧位结扎冠状动脉左前降支的方法建立成年小鼠心肌梗... 目的:检测实验性心肌梗死后成年小鼠胚胎基因Tbx18的表达情况,了解成年小鼠心肌损伤后胚胎基因Tbx18的时空表达特点。方法:90只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(sham组)及心梗组,用右侧卧位结扎冠状动脉左前降支的方法建立成年小鼠心肌梗死模型,分别用荧光定量PCR和Western blot检测小鼠心肌梗死后1、3、5、7 d心脏梗死和周边区Tbx18 mRNA及蛋白表达情况,并与假手术组相比较。结果:手术组梗死及周边区心肌组织Tbx18 mRNA在心梗后3 d及5 d较假手术组有明显升高(F值分别为2 778.88、462.36,P值均=0.000);心梗后小鼠心肌组织Tbx18蛋白表达水平在心梗后3 d及5 d明显升高(与心梗后1 d相比,t值分别为7.982、9.307,P值均=0.000),同PCR结果相符;心梗后3 d及5 d免疫荧光结果提示表达部位主要位于梗死区及其周边区域。结论:成年小鼠心肌梗死后胚胎基因Tbx18有一过性激活,心梗后3 d及5 d表达明显,其表达部位主要在梗死及周边区域。 展开更多
关键词 心肌梗死 tbx18 胚胎基因
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心外膜细胞标记基因介导的Cre重组酶在双转基因小鼠心脏的表达 被引量：1
7
作者 曾彬 武智晓 +2 位作者 张静 易欣 马乐乐 《微循环学杂志》 2011年第3期12-13,F0003,I0001,共4页
目的:检测心外膜细胞标记基因Tbx18介导的Cre重组酶在双转基因小鼠心脏的表达及分布。方法:将Tbx18-Cre小鼠与ROSA26报告小鼠交配,收获不同怀孕天数(12.5天、13.5天、14.5天)的胚胎,用PCR技术筛选双转基因阳性胚胎,取阳性胚胎心脏进行... 目的:检测心外膜细胞标记基因Tbx18介导的Cre重组酶在双转基因小鼠心脏的表达及分布。方法:将Tbx18-Cre小鼠与ROSA26报告小鼠交配,收获不同怀孕天数(12.5天、13.5天、14.5天)的胚胎,用PCR技术筛选双转基因阳性胚胎,取阳性胚胎心脏进行冰冻切片、X-Gal染色。结果:PCR检测每只小鼠胚胎中约一半胚胎为双转基因阳性,这些胚胎心脏的心外膜、左心室壁及室间隔均可检测到X-Gal阳性的蓝色细胞;且随着胚胎心脏的发育,蓝色细胞显著增多。结论:心外膜细胞标记基因Tbx18介导的Cre重组酶能有效地在双转基因胚胎小鼠心脏表达,表明Tbx18在心脏发育过程中扮演重要角色。 展开更多
关键词 心外膜细胞 标记基因tbx18 CRE重组酶 双转基因小鼠
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Tbx18-Cre基因敲入小鼠的繁殖、鉴定及其应用 被引量：1
8
作者 张进 刘亚杰 +1 位作者 翁敏杰 佘强 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期28-34,共7页
为了探讨Tbx18-Cre基因敲入小鼠(Tbx18:Cre knock-in Mus musculus)的繁殖、鉴定及Tbx18基因敲除小鼠和遗传示踪小鼠模型的应用,将Tbx18-Cre基因敲入杂合子小鼠进行繁殖,应用PCR法鉴定其子代基因型。将子代雌雄杂合子小鼠互交,应用H.E... 为了探讨Tbx18-Cre基因敲入小鼠(Tbx18:Cre knock-in Mus musculus)的繁殖、鉴定及Tbx18基因敲除小鼠和遗传示踪小鼠模型的应用,将Tbx18-Cre基因敲入杂合子小鼠进行繁殖,应用PCR法鉴定其子代基因型。将子代雌雄杂合子小鼠互交,应用H.E染色观察Tbx18基因敲除胚鼠心的形态学变化。将杂合子小鼠与RosaEYFP报告小鼠交配,应用心冰冻切片技术观察Tbx18:Cre/Rosa26REYFP双转基因遗传示踪胚鼠心内Tbx18阳性心外膜祖细胞发育命运。结果表明,用于繁殖、基因敲除研究及基因遗传示踪的子代基因型均符合孟德尔遗传规律。同时心H.E染色和心冰冻切片发现,Tbx18敲除小鼠心窦房结发育存在缺陷,而Tbx18阳性心外膜祖细胞是心发育重要的祖细胞来源。研究结果揭示,Tbx18-Cre基因敲除小鼠是研究先天性心脏病发病机制的理想模式动物,Tbx18阳性心外膜祖细胞可能是心脏病患者心脏修复和再生潜在的种子细胞。 展开更多
关键词 转录因子tbx18 基因敲入 Cre重组酶基因 聚合酶链式反应(PCR) 心发育
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