黄芩素脂质聚合物纳米粒对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用机制研究 被引量：1

1

作者 吴萌 李祥平 项艳 《实用药物与临床》 2024年第1期1-5,共5页

目的 观察TAT肽修饰的载黄芩素(Bai)脂质聚合物纳米粒(Bai-TAT-LPNs)对心肌缺血再灌注损伤大鼠的作用及潜在机制。方法 纳米沉淀法构建Bai-TAT-LPNs;建立心肌缺血再灌注损伤模型大鼠,以Bai作为阳性对照药,在缺血前4 h腹腔注射Bai-TAT-LP... 目的 观察TAT肽修饰的载黄芩素(Bai)脂质聚合物纳米粒(Bai-TAT-LPNs)对心肌缺血再灌注损伤大鼠的作用及潜在机制。方法 纳米沉淀法构建Bai-TAT-LPNs;建立心肌缺血再灌注损伤模型大鼠,以Bai作为阳性对照药,在缺血前4 h腹腔注射Bai-TAT-LPNs;生理记录仪和血生化仪检测大鼠血流动力学和血清指标变化;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡;蛋白印记实验检测心肌cleaved-caspase 3、Bcl-2、p-Akt蛋白表达变化。结果 Bai-TAT-LPNs外观呈均一的球形,平均粒径为(127.0±2.6)nm。Bai-TAT-LPNs(含Bai 100 mg/kg)可显著升高模型大鼠LVDP、+dp/dt_(max)和-dp/dt_(max)(P<0.01);降低血清LDH、CK、MDA水平,并升高SOD水平(P<0.01);还可抑制心肌细胞凋亡(P<0.01)。同时,Bai-TAT-LPNs下调模型大鼠心肌cleaved-caspase 3蛋白表达,并上调Bcl-2和p-Akt蛋白表达(P<0.01)。Bai-TAT-LPNs的上述作用均优于Bai。结论 Bai-TAT-LPNs可改善大鼠心肌缺血再灌注损伤,且效果优于Bai;该作用可能与增强药物穿膜作用、减轻氧化损伤和激活Akt信号有关。 展开更多

关键词 黄芩素 tat肽 脂质聚合物纳米粒 心肌缺血再灌注损伤

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pH敏感型热休克笼形蛋白纳米载体的构建及其理化性质评价 被引量：3

2

作者 王喻 饶跃峰 +2 位作者 杨惠卿 骆红飞 赵子明 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第17期2113-2118,共6页

目的设计并制备具有靶向肿瘤且pH敏感的热休克蛋白(heat shock proteins,HSP)笼形蛋白纳米递药系统,并对其理化性质进行表征。方法采用基因全合成与蛋白质重组表达技术纯化HSP为母版,通过表面官能团功能化制备得到修饰穿膜肽Tat、聚乙... 目的设计并制备具有靶向肿瘤且pH敏感的热休克蛋白(heat shock proteins,HSP)笼形蛋白纳米递药系统,并对其理化性质进行表征。方法采用基因全合成与蛋白质重组表达技术纯化HSP为母版,通过表面官能团功能化制备得到修饰穿膜肽Tat、聚乙二醇包衣的热休克笼形蛋白纳米载体(PT-HSP)。通过透射电镜、纳米粒度与Zeta电位测定仪对其形态、粒径及Zeta电位进行表征,并建立HPLC测定其载药量与包封率。考察载紫杉醇(paclitaxel,PTX)的PT-HSP在生理pH条件(pH 7.4)与肿瘤pH条件(pH 6.5)下的体外释药行为。结果形态学结果表明,PT-HSP是呈现典型双层结构的均一球体,平均粒径为(154.4±23.6)nm,Zeta电位为(-2.6±0.7)mV。HPLC测得载PTX的PT-HSP的包封率为(75.3±3.6)%,载药量为(7.0±0.2)%。体外释药试验结果表明PT-HSP在pH 7.4条件下的释放速率显著慢于pH 6.5条件下的释放速率(P<0.01)。结论本研究制备得到的pH敏感的HSP笼形蛋白智能纳米递药系统具有载药量高、稳定性强及智能靶向等优点,有望成为一种安全、有效、智能的抗肿瘤药物载体。 展开更多

关键词 热休克蛋白 聚乙二醇 tat肽 PH敏感 纳米载体

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狂犬病病毒糖蛋白在酿酒酵母中的表达 被引量：1

3

作者 赵慧 郑文岭 +4 位作者 高洋 张进芳 彭翼飞 张宝 马文丽 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1705-1709,共5页

利用酿酒酵母表达系统表达狂犬病病毒糖蛋白G,可获得大量无致病的抗原,为研究新型狂犬病疫苗提供条件。构建Tat-G融合基因,通过EcoR I和Xba I酶切位点克隆至pYes2表达载体中,醋酸锂法转化酿酒酵母,URA3筛选鉴定阳性克隆,阳性重组子经半... 利用酿酒酵母表达系统表达狂犬病病毒糖蛋白G,可获得大量无致病的抗原,为研究新型狂犬病疫苗提供条件。构建Tat-G融合基因,通过EcoR I和Xba I酶切位点克隆至pYes2表达载体中,醋酸锂法转化酿酒酵母,URA3筛选鉴定阳性克隆,阳性重组子经半乳糖诱导20 h后,提取蛋白,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定融合蛋白。SDS-PAGE结果显示糖蛋白基因在酿酒酵母中可能表达为2种形式的蛋白,yGI和yGII,分子大小分别为66 kD和56 kD,Western blot显示在56 kD处有特异性条带。结合前人的研究成果,初步判断狂犬病病毒糖蛋白基因的跨膜TD区和膜内编码区对RV-G蛋白分子的正确折叠和免疫活性等有至关重要的影响,从而为进一步提高yGII蛋白的表达奠定基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒糖蛋白 tat肽 酿酒酵母

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可剪切聚乙二醇及TAT肽共修饰多柔比星脂质体的制备及表征

4

作者 朱亚勤 李玲 +4 位作者 胡青 黄发珍 程亮 程丽芳 陈大为 《中国药房》 CAS CSCD 2013年第29期2738-2741,共4页

目的:制备可剪切聚乙二醇(PEG)及TAT肽共修饰多柔比星脂质体(C-TAT-DOX-LP)并对其进行表征。方法:合成膜材二硬脂酸磷脂酰乙醇胺-二硫键-聚乙二醇5000(DSPE-S-S-PEG5000)、二硬脂酸磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-TAT(DSPE-PEG2000-TAT),采... 目的:制备可剪切聚乙二醇(PEG)及TAT肽共修饰多柔比星脂质体(C-TAT-DOX-LP)并对其进行表征。方法:合成膜材二硬脂酸磷脂酰乙醇胺-二硫键-聚乙二醇5000(DSPE-S-S-PEG5000)、二硬脂酸磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-TAT(DSPE-PEG2000-TAT),采用薄层色谱(TLC)、红外光谱(IR)、核磁氢谱(1H-NMR)等分别对合成产物进行表征,高效液相色谱法测定TAT肽连接率。采用pH梯度法制备DOX脂质体(DOX-LP),后插入法制备C-TAT-DOX-LP,考察其粒径、Zeta电位、形态、包封率,进行体外可剪切试验考察粒径及Zeta电位的变化,并考察48h的体外释放情况。结果:成功合成并表征了DSPE-S-S-PEG5000及DSPE-PEG2000-TAT,TAT肽连接率为96.3%。所制备的C-TAT-DOX-LP平均粒径为152.1nm,Zeta电位为-5.4mV,包封率为91.8%。所得脂质体分布均匀且呈球形。经二硫苏糖醇(DTT)作用,C-TAT-DOX-LP的粒径从155.1nm降低至140.5nm,电位由-5.9mV上升至7.8mV,二硫键被还原断裂。48h的体外累积释放度约为40%,PEG剪切后有利于DOX的释放。结论:成功制备了C-TAT-DOX-LP,且其具有一定的缓释性。 展开更多

关键词 可剪切聚乙二醇 tat肽 多柔比星 脂质体 制备 表征

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TRPV1:一种同时参与慢性痛外周敏化和疼痛中枢调制的重要分子 被引量：20

5

作者 张瑛 王韵 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期677-684,共8页

慢性痛是困扰临床的一大顽疾,关于慢性痛机制的研究和新型镇痛药物的研发具有重要意义。十多年来,本研究组围绕慢性痛外周敏化形成的关键分子——瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid type 1,TRPV1),对其... 慢性痛是困扰临床的一大顽疾,关于慢性痛机制的研究和新型镇痛药物的研发具有重要意义。十多年来,本研究组围绕慢性痛外周敏化形成的关键分子——瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid type 1,TRPV1),对其敏化和膜定位机制进行了系列研究,揭示了蛋白激酶PKD1(protein kinase D1)、Cdk5(cyclin-dependent kinase 5)和LIMK(LIM-motif containing kinase)在炎症诱发热痛敏中的作用及其对TRPV1的功能调控,并据此开发出了一系列具有镇痛作用的Tat穿膜肽。本综述还围绕研究组近期工作所揭示的参与痛感觉和痛情绪相互作用的关键脑区——前额叶皮质的前边缘皮质亚区,对TRPV1在其中的可能作用进行了探讨。此外本综述也对研究组在改进TRPV1靶向药物,提高其镇痛疗效,降低副作用方面的工作进行了简要总结和回顾。 展开更多

关键词 疼痛 TRPV1 磷酸化 tat穿膜肽 镇痛

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TAT蛋白转导肽介导的秀丽线虫体内外源蛋白的跨膜转导研究 被引量：3

6

作者 吴永红 石锦平 +3 位作者 何国维 任长虹 高艳 张成岗 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期39-45,共7页

TAT蛋白转导肽是HIV-1病毒编码的一段富含碱性氨基酸序列的多肽,能够高效介导多种外源生物大分子通过多种膜性结构,如细胞质膜和血脑屏障等。为探索TAT蛋白转导肽介导的秀丽线虫体内外源蛋白跨膜转导作用,以EGFP为报告基因结合常规分子... TAT蛋白转导肽是HIV-1病毒编码的一段富含碱性氨基酸序列的多肽,能够高效介导多种外源生物大分子通过多种膜性结构,如细胞质膜和血脑屏障等。为探索TAT蛋白转导肽介导的秀丽线虫体内外源蛋白跨膜转导作用,以EGFP为报告基因结合常规分子克隆技术构建了原核表达载体pET28b-EGFP和pET28-TAT-EGFP,继而利用诱导剂IPTG(终浓度1mmol/L)诱导表达了靶蛋白并结合荧光显微观察、SDS-PAGE和Western blot等鉴定技术获得表达靶蛋白的大肠杆菌BL21(DE3)细胞,最后将其涂布到含有Kana+的LB固体培养基上直接饲喂野生型N2株系线虫,利用荧光显微镜观察绿色荧光信号在线虫体内的分布。结果证明,TAT-EGFP融合蛋白较之于EGFP可高效、可溶性表达,而且通过直接饲喂秀丽线虫表达靶蛋白的大肠杆菌48小时后,TAT-EGFP荧光信号明显分布于线虫肠壁细胞,而EGFP荧光信号则分布在秀丽线虫肠腔,空载体对照组未见任何荧光信号,说明TAT蛋白转导肽能够高效介导外源蛋白在秀丽线虫体内跨膜转导。同时,通过比较空载体对照组与实验组线虫微分干涉图像,未见线虫出现明显的细胞形态变化,说明TAT蛋白转导肽介导的外源蛋白跨膜转导作用是安全的,为在秀丽线虫体内直接研究外源蛋白的功能以及进行蛋白药物的研发提供了重要参考。 展开更多

关键词 tat蛋白转导肽 原核表达 线虫 跨膜转导

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TAT穿膜肽的研究进展 被引量：3

7

作者 周莉 高其双 +7 位作者 陈志华 彭霞 卢顺 占才耀 陶弼菲 王莲芳 华娟 童伟文 《当代畜牧》 2016年第1期34-37,共4页

TAT穿膜肽是近年来发现的一类富含碱性氨基酸的短链多肽,具有较强的穿透细胞膜的能力,与核酸分子、药物蛋白分子甚至病毒体表面分子链接后,能将这些物质顺利带入细胞内发挥作用,被称为"生物导弹"。笔者从4个方面对TAT穿膜肽... TAT穿膜肽是近年来发现的一类富含碱性氨基酸的短链多肽,具有较强的穿透细胞膜的能力,与核酸分子、药物蛋白分子甚至病毒体表面分子链接后,能将这些物质顺利带入细胞内发挥作用,被称为"生物导弹"。笔者从4个方面对TAT穿膜肽进行介绍,不仅为深入阐述TAT蛋白转导肽跨膜转导作用的功能意义提供了依据,而且为TAT蛋白转导肽在微生物工程、蛋白质工程及药物靶向治疗等领域的潜在应用价值提供了重要参考。 展开更多

关键词 tat穿膜肽 蛋白转导域 穿膜机制

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核衣壳蛋白VP39融合TAT转导肽对杆状病毒转导哺乳动物细胞的影响 被引量：1

8

作者 李俪 王鑫 +1 位作者 尹隽 钟江 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1558-1563,共6页

为了提高昆虫杆状病毒在哺乳动物细胞中转导基因的效率,构建了重组杆状病毒AcRed-tat和AcRed。两者都能在哺乳动物细胞内表达红色荧光蛋白作为报告基因。同时,AcRed-tat带有HIV-1Tat转导肽、病毒主要衣壳蛋白基因vp39及增强型绿色荧光蛋... 为了提高昆虫杆状病毒在哺乳动物细胞中转导基因的效率,构建了重组杆状病毒AcRed-tat和AcRed。两者都能在哺乳动物细胞内表达红色荧光蛋白作为报告基因。同时,AcRed-tat带有HIV-1Tat转导肽、病毒主要衣壳蛋白基因vp39及增强型绿色荧光蛋白(egfp)三者的融合基因,并由杆状病毒多角体启动子表达,能够在昆虫细胞中表达该Tat融合蛋白,并掺入子代病毒粒子。而AcRed作为相应的对照病毒,带有多角体启动子表达vp39和egfp的融合基因。2株病毒分别转导哺乳动物细胞后,利用流式细胞仪检测报告基因的表达水平,发现在CHO和Vero细胞中AcRed-Tat介导的报告基因表达水平明显高于AcRed,而在HEK293细胞中2株病毒介导的报告基因表达水平差异不显著。结果表明Tat转导肽可以提高杆状病毒对一部分哺乳动物细胞的转导效率,为改进杆状病毒-哺乳动物细胞转导载体提供了新的思路。 展开更多

关键词 杆状病毒 哺乳动物细胞 转导 tat转导肽

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TAT透膜肽介导VP3蛋白诱导HepG_2细胞凋亡效应的研究 被引量：1

9

作者 王小波 孙军 +5 位作者 彭冬君 闫莹 邹珺 陈娟 宗义强 屈伸 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期181-185,共5页

目的探讨TAT透膜肽介导VP3融合蛋白穿透生物膜及诱导HepG2细胞凋亡的效应,为临床应用生物大分子药物治疗肿瘤提供实验基础。方法常规构建TAT-VP3、TAT-GFP及TAT-GFP-VP3的3种融合蛋白的pET28 a原核表达载体,IPTG诱导融合蛋白表达,经镍... 目的探讨TAT透膜肽介导VP3融合蛋白穿透生物膜及诱导HepG2细胞凋亡的效应,为临床应用生物大分子药物治疗肿瘤提供实验基础。方法常规构建TAT-VP3、TAT-GFP及TAT-GFP-VP3的3种融合蛋白的pET28 a原核表达载体,IPTG诱导融合蛋白表达,经镍金属鳌合层析柱纯化获得融合蛋白。通过蛋白转导实验观察其穿透生物膜的效应,利用DAPI染色及TUNEL法观察其诱导HepG2细胞凋亡的效应。结果融合蛋白TAT-GFP及TAT-GFP-VP3可进入体外培养的HepG2细胞,在荧光下可见绿色荧光,融合蛋白TAT-VP3及TAT-GFP-VP3可诱导体外培养的细胞凋亡。结论在VP3的N端加上TAT透膜肽形成的融合蛋白可有效穿透细胞膜,TAT-VP3融合蛋白能诱导HepG2细胞凋亡。 展开更多

关键词 tat透膜肽 VP3融合蛋白 细胞凋亡

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TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白的原核表达及其在舞毒蛾幼虫体内的跨膜转导 被引量：1

10

作者 周洲 李永丽 +1 位作者 源春彦 曲良建 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1361-1367,共7页

【目的】为了探究滞育激素经昆虫取食的生物效应,需设计一种能够加速跨膜运输的融合蛋白,克服经昆虫消化道的降解作用。【方法】本研究以分月扇舟蛾Clostera anastomosis滞育激素基因Cloan-DH和TAT穿膜肽编码序列为基础,构建TAT-Cloan-D... 【目的】为了探究滞育激素经昆虫取食的生物效应,需设计一种能够加速跨膜运输的融合蛋白,克服经昆虫消化道的降解作用。【方法】本研究以分月扇舟蛾Clostera anastomosis滞育激素基因Cloan-DH和TAT穿膜肽编码序列为基础,构建TAT-Cloan-DH融合基因;然后以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)为标签,构建在p ET-22b载体中。在0.2 mmol/L IPTG诱导下,在大肠杆菌Escherichia coli BL21 Rosetta(DE3)中表达出TAT-CloanDH-EGFP融合蛋白。再分别将表达有TAT-Cloan-DH-EGFP和EGFP融合蛋白的大肠杆菌BL21菌体拌入人工饲料,经舞毒蛾Lymantria dispar幼虫持续取食0,8,24,48,72和90 h后,随机挑选试虫进行组织固定并制作石蜡切片,选取中肠所在体段切片进行组织荧光分析。【结果】37℃0.2 mmol/L IPTG诱导条件下,表达的TAT-Cloan-DH-EGFP融合蛋白的分子量为61 k D,主要以包涵体形式表达,融合蛋白约占细胞总蛋白含量的18.1%;随着试虫取食含TAT-Cloan-DHEGFP融合蛋白饲料的增加,虫体组织的绿色荧光强度逐渐增加,取食72 h后,组织荧光强度达到最高。【结论】实验结果说明融合蛋白TAT-Cloan-DH-EGFP可以通过消化道横向跨膜运输,到达虫体其他组织,且该过程与蛋白的摄入量成比例。 展开更多

关键词 舞毒蛾 滞育激素 tat穿膜肽 蛋白转导域 融合蛋白 跨膜运输

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TAT介导多肽药物过表达纯化和穿膜活性检测 被引量：1

11

作者 王中山 张梦 +5 位作者 张美娴 陈淑漫 朱焘 方佳炜 杨静 戴毅 《生物技术通讯》 CAS 2018年第3期340-344,共5页

目的:获得NR2B羧基端多肽(NR2Pep),探讨TAT-NR2Pep在细胞中的跨膜特性。方法:利用酶切连接方法构建p Waldo-TAT-pep质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,检测不同浓度诱导剂和不同温度对蛋白质表达的影响;利用镍柱亲和层析及分子筛方... 目的:获得NR2B羧基端多肽(NR2Pep),探讨TAT-NR2Pep在细胞中的跨膜特性。方法:利用酶切连接方法构建p Waldo-TAT-pep质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,检测不同浓度诱导剂和不同温度对蛋白质表达的影响;利用镍柱亲和层析及分子筛方法纯化TAT-NR2Pep-GFP融合蛋白,利用GFP发荧光的特性采用In-gel检测蛋白质的表达情况;以融合蛋白C端His标签特异性抗体,通过Western印迹确定融合蛋白的表达;荧光显微镜下观察TAT-NR2Pep-GFP融合蛋白在CHO和C2C12等细胞中的跨膜活性。结果:构建了TAT-NR2Pep-GFP表达载体,重组菌经0.1 mmol/L IPTG于22℃诱导20 h能够表达较多高质量的目标蛋白;In-gel荧光检测证实融合蛋白TATNR2Pep-GFP拥有正确构象,GFP能够发出绿色荧光;Western印迹分析表明融合蛋白相对分子质量符合预期;细胞穿膜实验证实TAT能够介导多肽穿过细胞膜。结论:原核表达并纯化得到TAT-NR2Pep-GFP融合蛋白,该蛋白散发绿色荧光,能够穿过细胞膜。 展开更多

关键词 NR2B羧基端多肽(NR2Pep) tat穿膜肽 原核表达

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CMC-TAT蛋白转导肽纳米载体体外转染效果评估 被引量：1

12

作者 唐朝颖 韩维举 +4 位作者 邓雄威 王方园 袁硕龙 杨仕明 吴南 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第6期793-797,共5页

目的构建羧甲基壳聚糖-TAT蛋白转导肽纳米载体(CTNs),探究CTNs介导miR96转染293细胞和耳蜗基底膜的效率及安全性,为mi R96在内耳的功能研究奠定基础。方法应用羧甲基化的壳聚糖(CMC)与TAT蛋白转导肽合成CTNs,携带标记花青染料荧光(cy3)... 目的构建羧甲基壳聚糖-TAT蛋白转导肽纳米载体(CTNs),探究CTNs介导miR96转染293细胞和耳蜗基底膜的效率及安全性,为mi R96在内耳的功能研究奠定基础。方法应用羧甲基化的壳聚糖(CMC)与TAT蛋白转导肽合成CTNs,携带标记花青染料荧光(cy3)的mi R96模拟物(mi R96 mimics),转染293细胞和耳蜗基底膜,利用激光共聚焦荧光显微镜对293细胞和耳蜗基底膜铺片进行荧光阳性细胞计数,以阳离子脂质体作为对照,评价转染效率,采用MTT试验评价CTNs的安全性。结果成功制备了CTNs,纳米颗粒平均直径约186.6nm,粒径分布集中,无明显聚集现象;CTNs-mi R96-cy3转染293细胞的平均阳性细胞率为32.6%,转染耳蜗基底膜毛细胞的平均阳性细胞率为24.4%,均低于阳离子脂质体-mi R96-cy3;MTT试验示CTNs细胞毒性低于阳离子脂质体。结论 CTNs作为一种新型的纳米载体,可携带miR96成功转染耳蜗基底膜,提示了纳米载体作为miRNA载体的可行性,并且安全性较高,但转染效率不足。 展开更多

关键词 羧甲基壳聚糖-tat蛋白转导肽纳米载体 MIRNA miR96 内耳转染

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TAT细胞穿透肽融合小鼠SurvivinT34A重组蛋白的原核表达纯化及其细胞转导效能研究

13

作者 于海涛 陈科达 +1 位作者 倪崖 阎辉 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2011年第7期738-745,共8页

为研究细胞穿透肽TAT融合小鼠存活素T34A(survivinT34A)重组蛋白(TAT-msvT34A)转导细胞的效能,该实验将表达TAT-msvT34A的原核表达载体pTAT-msvT34A转化大肠杆菌表达株E.coli BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,表达的融合蛋白主... 为研究细胞穿透肽TAT融合小鼠存活素T34A(survivinT34A)重组蛋白(TAT-msvT34A)转导细胞的效能,该实验将表达TAT-msvT34A的原核表达载体pTAT-msvT34A转化大肠杆菌表达株E.coli BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在。通过亲和层析、离子交换柱层析、分子筛等步骤纯化,得到TAT-msvT34A融合蛋白的纯度可达98%。纯化的融合蛋白用异硫氰酸荧光素(FITC)标记(FITC-TAT-msvT34A)后,分别转导HepG2、TC-1、B16及HEK293细胞株,流式细胞仪检测显示,较低浓度的重组蛋白即对HepG2、TC-1、B16及HEK293等细胞株具有较高的转导效能,在100 nmol/L时的转导效率均可达到60%以上,作为对照,FITC标记的牛血清白蛋白(FITC-BSA)在100 nmol/L时对上述细胞株的转导效率极低,结果具有显著性差异(P<0.01)。荧光显微镜观察可见,50 nmol/L和100 nmol/L的TAT-msvT34A融合蛋白对HepG2细胞的转导效率均可达50%,而对照FITC-BSA对HepG2细胞几乎无转导。表达纯化的TAT-msvT34A融合蛋白对HepG2、TC-1、B16及HEK293等细胞株均有较高的转导效能,可以用于后续抗肿瘤研究。 展开更多

关键词 抑存活素 tat细胞穿透肽 原核表达 凋亡 肿瘤

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TAT穿膜肽介导的融合蛋白增强猪瘟病毒对细胞感染效率的研究

14

作者 周莉 高其双 +6 位作者 陈志华 彭霞 卢顺 占才耀 陶弼菲 王莲芳 华娟 《当代畜牧》 2015年第12期42-44,共3页

笔者使用人工合成TAT-CD46基因,通过T4连接酶将TAT-CD46基因与原核表达载体PET-23a进行连接,经PCR鉴定、限制性内切酶酶切分析和克隆片段序列测定,得到重组质粒PET-23a-TAT-CD46。转化大肠杆菌,诱导TAT-CD46融合蛋白表达,Ni-NTA Superf... 笔者使用人工合成TAT-CD46基因,通过T4连接酶将TAT-CD46基因与原核表达载体PET-23a进行连接,经PCR鉴定、限制性内切酶酶切分析和克隆片段序列测定,得到重组质粒PET-23a-TAT-CD46。转化大肠杆菌,诱导TAT-CD46融合蛋白表达,Ni-NTA Superflow柱纯化后,将融合蛋白与猪瘟病毒液一起加入培养的ST细胞中,观察荧光进入细胞的情况。经免疫荧光证实,TAT-CD46融合蛋白能够提高猪瘟病毒对ST细胞的感染能力,可以有效促进CSFV在ST细胞中的增殖速率,这为进一步提高猪瘟病毒效价奠定了基础。 展开更多

关键词 tat穿膜肽 猪瘟病毒 ST细胞 融合蛋白

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