实时荧光定量PCR技术在转基因检测中的应用 被引量：29

1

作者 敖金霞 高学军 +1 位作者 仇有文 郭士成 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期141-144,共4页

实时荧光定量PCR技术是一种新型的核酸定性、定量检测、分析技术。随着转基因产品大规模商业化,转基因生物的环境安全和食用安全性问题引起了全球范围内广泛的争论和关注。实时监测、定量准确、灵敏度高、反应速度快、重复性好及PCR反... 实时荧光定量PCR技术是一种新型的核酸定性、定量检测、分析技术。随着转基因产品大规模商业化,转基因生物的环境安全和食用安全性问题引起了全球范围内广泛的争论和关注。实时监测、定量准确、灵敏度高、反应速度快、重复性好及PCR反应后不需电泳检测等优点,使RQ-PCR逐步成为转基因检测的重要工具。 展开更多

关键词 实时荧光定量PCR taqman探针法 SYBR Green I染料法 转基因检测

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绵羊多羔主效基因FecB高通量检测方法的建立及应用 被引量：25

2

作者 刘秋月 胡文萍 +10 位作者 贺小云 潘章源 郭晓飞 冯涛 曹贵玲 黄冬维 贺建宁 狄冉 曹晓涵 王翔宇 储明星 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期39-51,共13页

基于前期分型基础,为了更进一步提高分型的效率和准确性,本试验建立了Taqman探针和SNaPshot两种高通量FecB突变分型方法。结果显示,与传统的PCR-RFLP和PCR-SSCP分型方法相比,这两种高通量分型方法在节省检测成本的同时,大大缩短了检测周... 基于前期分型基础,为了更进一步提高分型的效率和准确性,本试验建立了Taqman探针和SNaPshot两种高通量FecB突变分型方法。结果显示,与传统的PCR-RFLP和PCR-SSCP分型方法相比,这两种高通量分型方法在节省检测成本的同时,大大缩短了检测周期,并在检测效率上也有了大幅度的提高,对利用FecB进行分子育种具有潜在的应用价值。自2003年至今,本实验室应用这两种方法对10个中国本地绵羊品种、3个培育品种以及一些杂交群体的23 264只绵羊的FecB频率进行了检测,结果显示,湖羊和小尾寒羊携带FecB基因的频率最高,小尾寒羊FecB基因的B等位基因频率为0.432~0.833。跟踪以小尾寒羊作为母本和杜泊羊级进杂交后代群体发现,随着杂交的进行FecB基因在培育的鲁西黑头肉羊中的B等位基因频率提升到了0.432,但在横交固定阶段有所下降。本研究所得结果可为今后在肉用绵羊品种多羔改良和多羔肉用新品种培育过程中通过引入FecB基因提高繁殖性能提供参考数据。 展开更多

关键词 FECB基因 产羔数 taqman探针法 SNaPshot分型 等位基因频率 绵羊

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实时荧光PCR对奶粉中坂崎肠杆菌的检测 被引量：16

3

作者 张霞 高旗利 +2 位作者 罗茂凰 张海滨 张海英 《中国卫生检验杂志》 CAS 2006年第2期214-215,241,共3页

目的:研究奶粉中坂崎肠杆菌实时荧光PCR检验方法。方法:针对坂崎肠杆菌16 s^23 s rDNA间区序列(ITS)设计一对SYBR G reenⅠ染料法引物、一对TaqM an探针法引物及探针,建立奶粉中坂崎肠杆菌实时荧光PCR检验方法,并对实时荧光PCR法、传统... 目的:研究奶粉中坂崎肠杆菌实时荧光PCR检验方法。方法:针对坂崎肠杆菌16 s^23 s rDNA间区序列(ITS)设计一对SYBR G reenⅠ染料法引物、一对TaqM an探针法引物及探针,建立奶粉中坂崎肠杆菌实时荧光PCR检验方法,并对实时荧光PCR法、传统方法及PCR方法进行比较。结果:用10株坂崎肠杆菌,18株近源菌验证试验表明,本文所建立的两种实时荧光PCR方法特异性强;加菌试验表明,奶粉中坂崎肠杆菌有1.1 cfu/100 g时就可检出,灵敏度高;检验时间仅需2 d。结论:本文提出的奶粉中坂崎肠杆菌实时荧光PCR检验方法可在实际工作推广。 展开更多

关键词 奶粉 坂崎肠杆菌 taqman探针法 SYBR GreenⅠ染料法

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TaqMan探针法实时荧光定量PCR检测西瓜潜隐病毒 被引量：9

4

作者 赵立群 邱艳红 +6 位作者 张晓飞 刘慧 杨静静 张建 张海军 徐秀兰 温常龙 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第20期4337-4347,共11页

【目的】西瓜潜隐病毒(Citrullus lanatus cryptic virus,CiLCV)是近年来新发生的一种重要种传病害,研究旨在建立基于TaqMan探针法的实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR with TaqMan probes,TaqMan-qPCR)检测技术... 【目的】西瓜潜隐病毒(Citrullus lanatus cryptic virus,CiLCV)是近年来新发生的一种重要种传病害,研究旨在建立基于TaqMan探针法的实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR with TaqMan probes,TaqMan-qPCR)检测技术,为开展种子、种苗带毒鉴定和病害防控提供技术支撑。【方法】通过基于小RNA高通量测序技术在北京西瓜产地发现了CiLCV,并克隆CiLCV的dsRNA1和dsRNA2全长序列,设计特异性引物建立RT-PCR和TaqMan-qPCR检测方法。以黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottled mosaic virus)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus)、甜瓜内源病毒(Cucumis melo endornavirus)、瓜类褪绿病毒(cucurbit chlorotic yellows virus)、南瓜花叶病毒(squash mosaic virus)、番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus)、西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus)、小西葫芦黄花叶病毒(zucchini yellow mosaic virus)8种常见病毒为对照进行检测方法特异性分析;利用建立的实时荧光定量标准曲线对方法灵敏度进行评价;进一步利用TaqMan-qPCR和RT-PCR技术监测我国葫芦科作物主产区的西瓜、黄瓜、甜瓜和南瓜(砧木)种苗带毒情况。【结果】通过分析获得的高质量小RNA数据,发现17条组装的contig与CiLCV基因组有较好同源性。进一步克隆获得CiLCV的dsRNA1和dsRNA2序列全长(分别为1603和1466 nt),发现其与河南省鉴定出的CiLCV同源性高达99.4%和99.8%(GenBank number KY081285、KY081284)。建立的RT-PCR检测技术对CiLCV有单一扩增条带;建立的TaqMan-qPCR检测技术具有较好特异性和灵敏度,且能够检测到最低拷贝数为2×10^(3)的病毒,灵敏度是RT-PCR的100倍。同时,发现有1份来自北京的西瓜种苗检出了CiLCV,而其余地区的西瓜、黄瓜、甜瓜和南瓜(砧木)种苗均未检出该病毒,表明我国葫芦科作物主产区种苗带毒情况总体不高。【结论】建立的TaqMan-qPCR检测CiLCV技术特异性强、灵敏度高,适用于口岸和实 展开更多

关键词 西瓜潜隐病毒 实时荧光定量PCR taqman探针法 葫芦科作物 种传病害

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绵羊主效基因FecB的检测与肉用多羔核心群的建立 被引量：9

5

作者 张壮彪 刘秋月 +5 位作者 狄冉 胡文萍 王翔宇 贺小云 马琳 储明星 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2020年第2期53-58,共6页

基于前期本实验室建立的绵羊多羔性状主效基因FecB高通量检测技术(TaqMan探针法),对10个绵羊群体的16460只绵羊进行了多羔性状主效基因FecB的检测,结果发现小尾寒羊、湖羊以及滩羊的B等位基因频率与前人实验结果一致,有些群体经过长期... 基于前期本实验室建立的绵羊多羔性状主效基因FecB高通量检测技术(TaqMan探针法),对10个绵羊群体的16460只绵羊进行了多羔性状主效基因FecB的检测,结果发现小尾寒羊、湖羊以及滩羊的B等位基因频率与前人实验结果一致,有些群体经过长期选择已处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P<0.05);本课题组与多个企业经过长期努力已建立了多个肉用多羔绵羊核心群,通过比较发现BB型绵羊产羔数极显著高于B+型,B+型极显著高于++型,且高繁殖力核心群3种FecB基因型小尾寒羊产羔数高于普通小尾寒羊群体。绵羊多羔性状主效基因FecB的检测和肉用多羔绵羊核心群的建立为绵羊群体改良提供了支撑。 展开更多

关键词 绵羊 FECB基因 taqman探针法 等位基因频率 高繁殖力核心群

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TaqMan探针法与尿素呼气试验法检测胃镜活检标本 幽门螺旋杆菌的比较 被引量：7

6

作者 沈和德 褚明亮 +1 位作者 易韦 杨文秀 《临床与病理杂志》 2017年第3期473-477,共5页

目的:通过比较幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染的两种检测方法,探讨TaqMan探针法在诊断幽门螺旋杆菌感染中的价值。方法:抽取70例有完整病例资料的胃镜活检标本,进行Hp分型、鉴定检测,并将实验结果与临床的碳14尿素呼气试验... 目的:通过比较幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染的两种检测方法,探讨TaqMan探针法在诊断幽门螺旋杆菌感染中的价值。方法:抽取70例有完整病例资料的胃镜活检标本,进行Hp分型、鉴定检测,并将实验结果与临床的碳14尿素呼气试验和病理结果进行相关性分析。结果:Hp感染的两种检测方法 (TaqMan探针法和呼气实验法)一致性程度尚可(Kappa=0.550),两种方法检测的阳性率都随病理炎症程度的加重而增加,而呼气实验法检测Hp的阳性率更高(P<0.05)。但TaqMan探针法可以将Hp进行不同毒力类型的鉴定,且TaqMan探针法可区分Hp的阳性强度(1+,2+,3+),其与病理的炎症程度有较好的相关性(γ=0.564,P<0.05)。结论:TaqMan探针法可以定性地鉴定Hp,与呼气实验法有较好的一致性。TaqMan探针法可进一步定量Hp的阳性强度,更好地反映临床的病理炎症程度。 展开更多

关键词 幽门螺旋杆菌 taqman探针法 尿素呼气试验法

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MicroRNA-122表达与大鼠慢性肝损伤的相关性 被引量：6

7

作者 朱华丽 汪保灿 +3 位作者 潘勤 吴文朝 虢灿杰 李定国 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期381-384,共4页

目的观察microRNA-122(miR-122)在大鼠慢性肝损伤早期和晚期的表达及其与大鼠肝损伤的关系。方法用40%CCl4经皮下注射2周和6周后分别建立大鼠早期慢性肝损伤模型(早期病变组,n=10)和晚期慢性肝损伤模型(晚期病变组,n=10),另设正常组(n=... 目的观察microRNA-122(miR-122)在大鼠慢性肝损伤早期和晚期的表达及其与大鼠肝损伤的关系。方法用40%CCl4经皮下注射2周和6周后分别建立大鼠早期慢性肝损伤模型(早期病变组,n=10)和晚期慢性肝损伤模型(晚期病变组,n=10),另设正常组(n=10)作为对照。提取肝组织总RNA,将总RNA逆转录为cDNA,采用TaqMan探针法进行Real-time PCR检测,观察miR-122的表达变化。结果成功建立大鼠慢性肝损伤早期和晚期病变模型;早期病变组和晚期病变组miR-122表达分别下降至正常组的27.0%和5.6%。结论miR-122在慢性肝损伤早、晚期呈进行性下降,与肝损伤存在密切关系。 展开更多

关键词 microRNA-122 肝损伤 taqman探针法 脂质过氧化

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鸭呼肠孤病毒TaqMan与SYBR Green荧光定量检测方法的建立及比较 被引量：5

8

作者 陆婧 李敏 +7 位作者 王艳 朱盈名 赵自亮 邓欣竹 刘霞 张立武 程方俊 赵光伟 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期237-243,共7页

本研究旨在针对新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)建立两种快速、敏感、特异的荧光定量PCR诊断方法并对其临床实用性进行比较。试验根据呼肠孤病毒S1基因序列设计合成1对特异性引物和1条MGB探针,分别建立TaqMan和SYBR GreenⅠ两种荧光定量PCR检测... 本研究旨在针对新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)建立两种快速、敏感、特异的荧光定量PCR诊断方法并对其临床实用性进行比较。试验根据呼肠孤病毒S1基因序列设计合成1对特异性引物和1条MGB探针,分别建立TaqMan和SYBR GreenⅠ两种荧光定量PCR检测方法,并对两种方法的特异性、灵敏性、重复性进行比较。结果显示,两种检测方法标准曲线的相关系数均为0.999,对鸭细小病毒(DPV)、A型鸭甲肝病毒(DHV-1)、C型鸭甲肝病毒(DHV-3)、鸭传染性支气管炎(IBV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鹅星状病毒(JSHV)的检测结果均为阴性,特异性良好。SYBR GreenⅠ法的最低检测限度为10;拷贝/μL,TaqMan法的最低检测限度为10;拷贝/μL,前者的灵敏度比后者高10倍。SYBR GreenⅠ法和TaqMan法重复性试验的组内和组间变异系数均分别小于2.1%和1.8%。利用这两种方法对临床30份疑似病料进行检测,其中TaqMan法检出29份,SYBR GreenⅠ法检出30份,符合率为97%。综上,两种荧光定量方法均可用于临床NDRV的检测,尤以SYBR GreenⅠ法灵敏度更高。 展开更多

关键词 新型鸭呼肠孤病毒 荧光定量PCR taqman探针法 SYBR Green法

原文传递

产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR特异性引物设计和方法验证

9

作者 马嘉琦 孙波 +4 位作者 马红梅 王东 赵志军 李勇 曾瑾 《中国食品卫生杂志》 CSCD 北大核心 2024年第2期147-155,共9页

目的建立针对水样中产气荚膜梭菌检测的TaqMan实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法,并测试该方法在自来水样中的检测效果。方法选择位于该菌拟核中高度保守的plc基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化后建立了针对该菌的TaqMan实时... 目的建立针对水样中产气荚膜梭菌检测的TaqMan实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法,并测试该方法在自来水样中的检测效果。方法选择位于该菌拟核中高度保守的plc基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化后建立了针对该菌的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,结合滤膜法处理含有plc基因的标准菌株的模拟污染水样,并对所建立的方法进行测试。结果所建立的产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有高度的特异性,13株食源性致病菌、3株艰难梭菌及1株腐败梭菌的Ct值大于40;该方法的最低检出限为1×10 copies/μL,具有较高的灵敏性;对模拟污染水样的最低检测限为1.0×10^(2)CFU/mL。应用该方法对4份人工模拟污染阳性水样与90份自来水样进行检测发现,2份1.0×10^(2)CFU/mL的模拟污染水样可检出产气荚膜梭菌,2份1.0×10 CFU/mL的模拟污染水样与90份自来水样均未检出产气荚膜梭菌。结论所建立的产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有特异性好、灵敏性高的优点,对水体中产气荚膜梭菌的检测具有较高的应用价值。 展开更多

关键词 产气荚膜梭菌 实时荧光定量PCR taqman探针法 水样检测 食源性致病菌

原文传递

CT联合TaqMan探针法对不同临床特征支原体肺炎患儿心肺损害的诊断价值

10

作者 白瑞珍 杜杰静 +2 位作者 于姗 李洁 史军然 《中国医学装备》 2024年第5期47-53,共7页

目的:探讨计算机断层成像(CT)联合Taq Man探针法对不同临床特征支原体肺炎患儿心肺损害的诊断价值。方法:收集2020年3月至2023年3月石家庄市妇幼保健院收治的80例支原体肺炎患儿的病历资料,依据患儿年龄分为<1岁组(29例)、1~3岁组(23... 目的:探讨计算机断层成像(CT)联合Taq Man探针法对不同临床特征支原体肺炎患儿心肺损害的诊断价值。方法:收集2020年3月至2023年3月石家庄市妇幼保健院收治的80例支原体肺炎患儿的病历资料,依据患儿年龄分为<1岁组(29例)、1~3岁组(23例)和>3岁组(28例);根据入院病程不同分为长病程组(43例,病程>7 d)和短病程组(37例,病程≤7 d)。对所有支原体肺炎患儿均进行CT联合TaqMan探针法检测心肺损伤情况,分析不同年龄组和病程组患儿的心肺损害发生率。采用CT和Taq Man探针检测胸腔积液、心肌厚度、心胸比、支原体核酸表达水平相关指标,采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分析CT和探针检测支原体肺炎患者心肺损害的诊断价值。结果:CT成像显示,80例患儿中诊断准确率为93.75%(75/80),其中62.5%(50/80)的患儿存在典型的肺部异常。主要为肺部磨玻璃结节(GGO)、合并细菌性肺炎和网状。在小部分患儿中发现了支气管扩张。肺部异常患儿发现双侧肺部受累,其中下叶受累最明显。在临床上怀疑偶发性肺栓塞(PE)的38名患儿,进行了额外的造影剂CT,检测到24例患儿偶发性PE,诊断准确率为63.15%(24/38);采用TaqMan探针法检测支原体感染,建立了高灵敏度和宽动态范围的检测系统,在0.2~0.2×10^(-5)之间进行6次10倍稀释。在1 ng/μl微生物群落(MMC)-DNA标准品中制备,6次log10稀释度的高线性动态范围,回归系数为R^(2)=1。发现DNA检测下限为2×10-15g/μl;不同年龄支原体肺炎患儿随着年龄的增加,心肺损害发生率逐渐降低;<1岁组、1~3岁组和>3岁组支原体肺炎患儿心肺损害发生率分别为93.10%、73.91%和21.43%,3组比较差异有统计学意义(x^(2)=7.660、33.019,P<0.05)。长病程组心肺损害发生率(93.02%)明显高于短病程组(27.03%),差异有统计学意义(x^(2)=12.070、36.960,P<0.05)。心肺损害组患儿的胸腔积液量明显高于非心肺损害� 展开更多

关键词 计算机断层成像(CT) taqman探针法 支原体肺炎 心肺损害

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柯萨奇病毒B组5型TaqMan一步法RT-qPCR检测方法的建立

11

作者 刘煜菡 张名 +4 位作者 郭伟 许丹菡 冯昌增 徐丽兰 马绍辉 《医学研究杂志》 2024年第7期84-88,共5页

目的建立柯萨奇病毒B组5型(coxsackievirusB5,CV-B5)特异的TaqMan一步法实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测方法。方法根据CV-B5的VP1序列,设计特异性引物和TaqMan探针。将目的... 目的建立柯萨奇病毒B组5型(coxsackievirusB5,CV-B5)特异的TaqMan一步法实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测方法。方法根据CV-B5的VP1序列,设计特异性引物和TaqMan探针。将目的基因插入pMD18^(TM)载体,在DH5α感受态细胞中扩增,大肠杆菌体外转录后获得RNA标准品并建立标准曲线,最后对检测方法的重复性、敏感度和特异性进行评价。结果该方法在10^(3)~10^(11)拷贝/微升的模板范围内具有良好的线性关系(r^(2)>0.99),扩增效率E=100.9%,敏感度达1×10^(3)拷贝/微升,只对CV-B5有特异性扩增曲线,且重复性较好。结论本实验建立的TaqMan一步法RT-qPCR检测方法有较高的敏感度、特异性和重复性,有良好的抗干扰性,可用于CV-B5的临床样本检测和绝对定量分析。 展开更多

关键词 柯萨奇病毒B组5型 实时荧光定量聚合酶链反应 taqman探针法

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烟草花叶病毒实时荧光定量PCR检测体系的构建

12

作者 吴彦辉 蒲团卫 +4 位作者 张生杰 牛龙龙 白静科 李成军 李建华 《安徽农业科学》 CAS 2023年第12期171-175,共5页

[目的]防止隐症携带烟草花叶病毒(TMV)的烟苗移栽到大田造成产量损失。[方法]根据TMV的外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守序列设计引物及探针,通过绘制标准曲线、重复性、特异性及灵敏性分析,建立了一种TMV的TaqMan-qPCR检测方法。[结... [目的]防止隐症携带烟草花叶病毒(TMV)的烟苗移栽到大田造成产量损失。[方法]根据TMV的外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守序列设计引物及探针,通过绘制标准曲线、重复性、特异性及灵敏性分析,建立了一种TMV的TaqMan-qPCR检测方法。[结果]该方法特异性好,与其他常见的烟草病毒无交叉反应;灵敏度高,检测下限可达到4.53×10^(1) copies/μL,比常规RT-PCR检测灵敏度提高了10倍;建立的标准曲线斜率为-3.299,决定系数(R^(2))为0.9933,扩增效率为100.97%,且循环阈值(Ct)与质粒标准品浓度之间线性关系良好,重复性试验结果可靠。[结论]利用建立的TaqMan-qPCR检测方法与常规RT-PCR检测方法同时检测烟苗样品,检测结果一致,进一步验证了荧光定量PCR方法的可靠性。 展开更多

关键词 烟草花叶病毒 实时荧光定量PCR taqman探针法

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小鹅瘟病毒荧光PCR检测方法的建立 被引量：3

13

作者 龙朕 林颖 +3 位作者 张桐源 盛明巍 耿庆华 赵玉军 《现代畜牧兽医》 2010年第5期51-54,共4页

依据GenBank小鹅瘟病毒(GPV)的NS基因保守区设计一对特异性引物,利用PCR扩增NS区片段,克隆、测序,采取Taqman探针法,构建小鹅瘟病毒的荧光PCR检测方法。结果表明,该方法检测GPV具有很高的特异性和敏感性,可以用于小鹅瘟病毒的检测。

关键词 小鹅瘟病毒 taqman探针法 荧光PCR

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趋化因子CCL2、CCL7和CCR2在淡水溺死后大鼠肺组织及血清中的表达 被引量：3

14

作者 王莉晓 刘志杰 +2 位作者 王男 路健 梁新华 《中国法医学杂志》 CSCD 2018年第3期253-257,共5页

目的应用Taqman探针法检测淡水溺死后大鼠肺组织和血清中CCL2、CCL7以及CCR2 mRNA的表达水平,从而探讨其在法医学实践中,是否能为溺死的诊断提供辅助的科学依据。方法 24只健康雄性SD大鼠随机分为实验组(淡水溺死组)、对照组(空白对照... 目的应用Taqman探针法检测淡水溺死后大鼠肺组织和血清中CCL2、CCL7以及CCR2 mRNA的表达水平,从而探讨其在法医学实践中,是否能为溺死的诊断提供辅助的科学依据。方法 24只健康雄性SD大鼠随机分为实验组(淡水溺死组)、对照组(空白对照组、淡水应激组及疾病对照组)。对各组大鼠尸表及内部脏器进行肉眼观察并取部分左心室心肌和右下叶肺组织行HE染色;提取大鼠右心室血清及右下叶肺组织,采用Taqman探针法检测CCL2、CCL7和CCR2 mRNA的表达水平。结果 (1)淡水溺死组大鼠解剖征象及肺组织HE染色结果符合溺死的特征,疾病对照组大鼠心肌组织HE染色结果符合心肌梗死的病理改变;(2)各组大鼠肺组织中CCL2、CCL7和CCR2mRNA的表达水平:淡水溺死组CCL2和CCL7 mRNA的表达水平显著高于空白对照组及淡水应激组(P<0.05),且淡水溺死组CCR2 mRNA表达水平高于淡水应激组(P<0.05);与疾病对照组比较,无统计学差异(P>0.05)。(3)各组大鼠血清中CCL2、CCL7和CCR2 mRNA表达水平:淡水溺死组血清中CCL2、CCL7和CCR2 mRNA的表达水平均高于对照组水平(P<0.05)。结论采用Taqman探针法检测肺组织及血清中CCL2、CCL7和CCR2 mRNA的表达水平,对溺死的诊断有一定的辅助作用。 展开更多

关键词 法医病理学 溺死 taqman探针法 CCL2 CCL7 CCR2

原文传递

羊乳中动物源性成分的实时荧光PCR检测 被引量：2

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作者 张艳茹 《食品安全导刊》 2020年第6期91-92,共2页

建立Taqman探针实时荧光PCR检测方法。选择牛、羊线粒体16SrRNA靶序列,设计合成引物和探针,鉴别羊乳制品中的羊乳成分。结果表明,该方法最低可检测掺入2.0%牛源性成分的羊奶制品,具有灵敏、快速、高效以及高通量等优势,可作为羊奶制品... 建立Taqman探针实时荧光PCR检测方法。选择牛、羊线粒体16SrRNA靶序列,设计合成引物和探针,鉴别羊乳制品中的羊乳成分。结果表明,该方法最低可检测掺入2.0%牛源性成分的羊奶制品,具有灵敏、快速、高效以及高通量等优势,可作为羊奶制品羊乳成分掺假鉴别手段之一。 展开更多

关键词 羊乳制品掺假 牛乳 实时荧光PCR taqman探针法

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大鼠溺死后肺组织与血清IL-1β、IL-13mRNA表达变化 被引量：1

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作者 姜美玲 郭文平 +4 位作者 赵晋芳 芦俊峰 梅泽 刘佳佳 梁新华 《中国法医学杂志》 CSCD 2017年第2期137-140,共4页

目的检测大鼠肺组织和血清中IL-1β、1L-13mRNA表达变化,探讨IL-1β、IL-13mRNA的变化情况与溺死的关系。方法 12只SD大鼠随机分为对照组、溺死组(实验组)。分别提取各组大鼠右侧肺下叶及右心室血清,应用TaqMan探针法检测肺组织及右心... 目的检测大鼠肺组织和血清中IL-1β、1L-13mRNA表达变化,探讨IL-1β、IL-13mRNA的变化情况与溺死的关系。方法 12只SD大鼠随机分为对照组、溺死组(实验组)。分别提取各组大鼠右侧肺下叶及右心室血清,应用TaqMan探针法检测肺组织及右心室血清IL-1β、IL-13mRNA的表达情况。结果 (1)溺死组大鼠肉眼观察:体表征象及解剖所见符合生前溺死特征。(2)肺组织中IL-1β、IL-13mRNA表达检测:与对照组比较,实验组IL-1β、IL-13表达呈下降趋势,差异无统计学意义(p>0.05)。(3)血清中IL-1β、IL-13mRNA表达检测:与对照组比较,实验组IL-1β表达显著升高(p<0.01)、IL-13表达显著升高(p<0.01)。结论 (1)IL-1β、IL-13 mRNA在溺死组肺组织中表达呈下降趋势,可能是大鼠溺死出现代偿性抗炎反应综合症导致免疫无能的表现。(2)IL-1β、IL-13 mRNA在血清中表达明显升高,可能与溺水应激及溺死后急性肺损伤创伤应激有关。 展开更多

关键词 法医病理学 溺死 taqman探针法 细胞因子IL-1Β IL-13

原文传递

脊尾白虾不同发育期mtDNA拷贝数变化特征分析

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作者 张培 徐莞媛 +5 位作者 李志辉 高焕 张庆起 赖晓芳 陈建华 阎斌伦 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2018年第6期173-179,共7页

为了解脊尾白虾(Exopalaemoncarinicauda)在不同发育期线粒体基因组(mtDNA)拷贝数的变化特征,本研究共采集其8个时期(受精卵期、溞状幼体Ⅰ期、溞状幼体Ⅱ期、溞状幼体Ⅲ期、溞状幼体Ⅳ期、溞状幼体Ⅴ期、仔虾期和成虾期)的DNA样品,利用... 为了解脊尾白虾(Exopalaemoncarinicauda)在不同发育期线粒体基因组(mtDNA)拷贝数的变化特征,本研究共采集其8个时期(受精卵期、溞状幼体Ⅰ期、溞状幼体Ⅱ期、溞状幼体Ⅲ期、溞状幼体Ⅳ期、溞状幼体Ⅴ期、仔虾期和成虾期)的DNA样品,利用TaqMan实时荧光定量PCR技术,对上述各发育期单个细胞中的mtDNA拷贝数进行了测定。检测结果显示,脊尾白虾受精卵期、溞状幼体Ⅰ期、溞状幼体Ⅱ期、溞状幼体Ⅲ期、溞状幼体Ⅳ期、溞状幼体Ⅴ期、仔虾期和成虾期的mtDNA拷贝数的均值分别为2366、2648、2644、2873、3559、9948、6452和8872。进一步统计分析结果显示,mtDNA拷贝数与发育时间存在正相关性,相关系数为0.83。研究表明,随着脊尾白虾不断生长,其单个细胞中mtDNA拷贝数总体呈上升趋势。 展开更多

关键词 脊尾白虾 taqman探针法 线粒体基因组 不同发育期 拷贝数

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Q热贝纳柯克斯体TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

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作者 贾广乐 王晓楠 +1 位作者 廖娟红 林祥梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第6期69-72,共4页

根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入IS1111序列设计引物和探针,建立快速检测Q热的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,该方法能够检测出10个拷贝数的阳性... 根据Q热贝纳柯克斯体(Coxiella burnetii)插入IS1111序列设计引物和探针,建立快速检测Q热的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释含有目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示,该方法能够检测出10个拷贝数的阳性质粒;标准曲线相关系数为0.995,扩增效率为103%;结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、衣原体(C.psittaci)、布鲁氏菌(Brucella.spp)及牛血液的核酸样本特异性检测结果均为阴性。本研究建立的TaqMan荧光定量PCR法灵敏度高、特异性好,对Q热的检测与鉴定中具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 Q热 贝纳柯克斯体 荧光定量PCR taqman探针法

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鹅副粘病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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作者 张桐源 林颖 +3 位作者 耿庆华 龙朕 林书铭 赵玉军 《现代畜牧兽医》 2011年第5期63-65,共3页

根据GenBank所载鹅副粘病毒(GPMV)的F基因保守区序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增F基因片段,克隆、测序后,采取Taqman探针法建立了检测鹅副粘病毒的荧光RT-PCR方法。结果表明,该方法特异性强,敏感性高,可以用于鹅副粘病毒的... 根据GenBank所载鹅副粘病毒(GPMV)的F基因保守区序列设计一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增F基因片段,克隆、测序后,采取Taqman探针法建立了检测鹅副粘病毒的荧光RT-PCR方法。结果表明,该方法特异性强,敏感性高,可以用于鹅副粘病毒的检测。 展开更多

关键词 鹅副粘病毒 taqman探针法 荧光RT—PCR

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中国大陆汉族人群强直性脊柱炎患者骨保护素基因多态性研究

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作者 王鑫强 钱邦平 +4 位作者 邱勇 蒋青 江华 蒋军 季明亮 《解剖与临床》 2013年第1期35-38,共4页

目的：通过骨保护素（OPG）基因单核苷酸多态性（SNPs）位点的筛查，分析中国大陆汉族人群中OPG基因多态性与强直性脊柱炎（AS）易感性的相关性。方法：采集2008年1月至2012年1月在我院就诊的AS患者195例（AS组）及203例性别、年龄与之... 目的：通过骨保护素（OPG）基因单核苷酸多态性（SNPs）位点的筛查，分析中国大陆汉族人群中OPG基因多态性与强直性脊柱炎（AS）易感性的相关性。方法：采集2008年1月至2012年1月在我院就诊的AS患者195例（AS组）及203例性别、年龄与之匹配的健康体检者（对照组）的外周血样本，并提取基因组DNA。所有样本采用TaqMan探针法对OPG基因SNP rs2073618、rs4355801位点进行基因型鉴定。比较AS组与对照组之间不同等位基因及基因型的分布差异，并分析其与AS易感性的相关性。结果：OPG基因SNP rs2073618、rs4355801位点的等位基因及基因型分布均符合Hardy—Weinberg平衡。AS组与对照组等位基因频率分别如下。rs2073618（G）：71．0％、71．9％，（C）：29．0％、28．1％；rs4355801（G）：27．7％、26．4％，（A）：72．3％、73．6％。两组在基因型频率的分布上显示，m2073618（CC）：9．2％、8．9％，（GC）：39．5％、38．4％，（GG）：51．3％、52．7％；rs4355801（AA）：52．3％、52．7％，（AG）：40．0％、41．9％，（GG）：7．7％、5．4％。以上数据组间比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。经关联性分析，未发现AS发病的风险等位基因或基因型。结论：中国大陆汉族人群中OPG基因SNP rs2073618、rs4355801单核苷酸多态性与AS的易感性之间没有相关性。 展开更多

关键词 强直性脊柱炎 骨保护素 基因多态性 易感性 taqman探针法

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