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小鼠仙台病毒TaqMan-MGB探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立
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作者 孙权麟 马跃宇 +5 位作者 孙莉 费东亮 白杰英 张旭 李明 马鸣潇 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期144-152,共9页
仙台病毒(Sendai virus, SeV)能够引起啮齿类动物呼吸道疾病,引起免疫应答,严重影响SPF级动物模型实验结果,实验动物质量国家标准T/CALAS49-2017也将其作为SPF级大小鼠质量检测必检项目之一。为了开发用于快速检测及日常监测SeV的分子... 仙台病毒(Sendai virus, SeV)能够引起啮齿类动物呼吸道疾病,引起免疫应答,严重影响SPF级动物模型实验结果,实验动物质量国家标准T/CALAS49-2017也将其作为SPF级大小鼠质量检测必检项目之一。为了开发用于快速检测及日常监测SeV的分子生物学诊断方法,本研究基于TaqMan-MGB探针荧光技术,根据GenBank中SeV的L基因的保守区段(8 556-15 242)序列,设计了1对特异性引物与1条5‵端携带羧基荧光素(FAM)与3‵端为淬灭基团(Eclipse)标记的TaqMan探针,标准品进行稀释建立标准曲线,并经反应条件优化,建立了TaqMan-MGB探针荧光定量RT-PCR检测方法,并对其特异性、敏感性与重复性进行评估。结果显示,最佳优化反应条件为:反应体系,20μmol/L;引物和探针浓度,10μmol/L和15μmol/L;退火温度,54℃;在特异性试验中,除SeV检测出现特异性曲线外,其他鼠类常见病毒均未出现特异性曲线;在敏感性试验中,Sev最低检测限为5.29×10^(1)拷贝/μL。在重复性试验中,其批内变异系数为0.44%~0.77%,批间变异系数为0.44%~1.03%。对临床样本进行检测,检出率高于常规的RT-PCR方法。因此,以SeV L基因保守序列为靶基因建立的TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法具有敏感性高、特异性强、良好的重复性等优点,适用于对SPF级实验动物的SeV定期监测以及对野生鼠类的SeV日常监测和流行病学调查,为相关研究提供了良好的技术支持。 展开更多
关键词 仙台病毒(SeV) TAQMAN-mgb探针 qRT-PCR方法
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