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苜蓿花叶病毒RT-PCR和RT-qPCR检测技术体系的建立与应用 被引量：7
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作者 高艳玲 范国权 +6 位作者 程胜群 张威 邱彩玲 申宇 聂先舟 白艳菊 吕文河 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期515-527,共13页
为准确检测侵染马铃薯核心种苗和种薯的苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus,AMV),以AMV马铃薯分离株为阳性材料,建立AMV RNA 1、RNA 2和RNA 3的反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和基于Ev... 为准确检测侵染马铃薯核心种苗和种薯的苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus,AMV),以AMV马铃薯分离株为阳性材料,建立AMV RNA 1、RNA 2和RNA 3的反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和基于EvaGreen及TaqMan探针的反转录实时荧光定量PCR(reverse transcription real-time fluorescent quantitative PCR,RT-qPCR)检测技术,比较3种方法的检测灵敏度,并测定不同马铃薯品种6种组织和桃蚜Myzus persicae、蓟马体内AMV RNA 1、RNA 2和RNA 3的含量。结果表明:建立的TaqMan探针RT-qPCR法对RNA 1和RNA 2的检测灵敏度分别为1.45×10^(1) copies/μL和1.46×10^(1) copies/μL,分别是EvaGreen RT-qPCR法和RT-PCR法的10倍;建立的TaqMan探针RT-qPCR法对RNA 3的检测灵敏度与EvaGreen RT-qPCR法相同,为1.15×10^(2) copies/μL,是RT-PCR法的10倍。丽薯15号6种组织中AMV RNA 1、RNA 2和RNA 3的含量为3.04×10^(6)~1.67×10^(8) copies/μL,以叶片中病毒平均含量最高;中薯21号6种组织中AMV RNA 1、RNA 2和RNA 3的含量为2.94×10^(2)~4.78×10^(8) copies/μL,未发现明显分布规律。蓟马体内AMV RNA 1、RNA 2和RNA 3的含量分别为8.64×10^(4)~4.76×10^(7)、2.13×10^(3)~1.50×10^(5)和8.08×10^(3)~4.96×10^(5) copies/μL,RNA 1的含量高于RNA 2和RNA 3。桃蚜体内AMV RNA 1、RNA 2和RNA 3的含量分别为4.71×10^(3)~3.44×10^(4)、2.22×10^(2)~1.32×10^(5)和5.41×10^(1)~8.08×10^(2) copies/μL,RNA 3的含量最低。表明RT-PCR法、TaqMan探针RT-qPCR法和EvaGreen RT-qPCR法均可有效扩增马铃薯6种组织和2种昆虫中的AMV。 展开更多
关键词 苜蓿花叶病毒 taqman探针rt-qpcr EvaGreen rt-qpcr rt-PCR 马铃薯
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