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toxR基因作为荧光定量PCR靶基因设计TaqMan探针快速检测副溶血弧菌 被引量:28
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作者 覃倚莹 吴晖 +4 位作者 肖性龙 杨晓泉 张经纬 余以刚 李惠芳 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1837-1842,共6页
以toxR基因为靶基因,通过优化反应条件建立了快速检测副溶血弧菌的TaqMan实时荧光PCR方法。特异性试验表明,该方法能选择性检测副溶血弧菌,而与金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特杆菌等多种常见的食源性病原菌没有交叉反应;灵敏度... 以toxR基因为靶基因,通过优化反应条件建立了快速检测副溶血弧菌的TaqMan实时荧光PCR方法。特异性试验表明,该方法能选择性检测副溶血弧菌,而与金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特杆菌等多种常见的食源性病原菌没有交叉反应;灵敏度试验表明,该方法最少可检测到25个拷贝的toxR基因重组质粒,对纯培养物和模拟食品样品直接检测的灵敏度分别为21 cfu/mL和210 cfu/g;重复性试验表明,同一样品于试验内及试验间的变异系数分别为0.9%和1.3%;所制作的标准曲线在2.5×101~2.5×106拷贝数之间有较好的线性关系,能对副溶血弧菌进行准确的定量分析。结果表明,本研究所建立的副溶血弧菌实时荧光PCR检测方法具有特异性好、灵敏度高、重复性好的特点,能进行定量检测,而且检测时间从核酸抽提到出实验结果仅需要3 h,是快速检测副溶血弧菌的有效手段。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 实时荧光定量PCR toxR基因 taqman探针 检测
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荧光定量RT-PCR技术快速检测SARS病毒核酸 被引量:24
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作者 冯燕 卢亦愚 +5 位作者 严菊英 史雯 李敏红 龚黎明 葛琼 周敏 《中国病毒学》 CSCD 2005年第3期228-231,共4页
建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RTPCR方法用于检测严重急性呼吸道综合症病毒(severeacuterespiratorysyndromeassociatecoronavirus,SARSCoV)核酸。筛选针对SARS病毒基因保守区域设计的引物与TaqMan探针,并对荧光定量RTPC... 建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RTPCR方法用于检测严重急性呼吸道综合症病毒(severeacuterespiratorysyndromeassociatecoronavirus,SARSCoV)核酸。筛选针对SARS病毒基因保守区域设计的引物与TaqMan探针,并对荧光定量RTPCR反应体系与反应条件进行优化,验证本方法的特异性、敏感度与重复性。实验结果表明:本方法对SARS病毒核酸的检测具有高度特异性,与甲1型、甲3型、乙型流感病毒、禽流感病毒H5N1、麻疹及其他呼吸道病毒均无交叉反应;检测灵敏度达0.1TCID50;从病毒核酸提取至检测完成仅需3h左右,且操作简便,重复性好。本研究建立的TaqMan荧光定量RTPCR方法特异、敏感、快速,适合于临床实验室进行SARS病毒的早期快速检测。 展开更多
关键词 荧光定量RT-PCR taqman探针 SARS病毒
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荧光定量RT-PCR快速检测乙型流感病毒核酸 被引量:22
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作者 卢亦愚 严菊英 +2 位作者 冯燕 史雯 茅海燕 《浙江预防医学》 2005年第3期1-3,共3页
目的 建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RT -PCR方法用于检测乙型流感病毒核酸。方法 根据GenBank登录的流感毒株序列 ,应用生物学软件进行序列比对 ,在乙型流感病毒核蛋白(NP)基因的保守区设计引物和TaqMan探针进行筛选 ,... 目的 建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RT -PCR方法用于检测乙型流感病毒核酸。方法 根据GenBank登录的流感毒株序列 ,应用生物学软件进行序列比对 ,在乙型流感病毒核蛋白(NP)基因的保守区设计引物和TaqMan探针进行筛选 ,对荧光定量RT -PCR反应条件进行优化 ,检测该方法的特异性和灵敏度。此外还对疑似乙型流感含漱液标本进行检测。结果 该方法对乙型流感病毒的检测有高度的特异性 ,对甲1 型、甲3型、禽流感病毒H5、SARS病毒及其他呼吸道病毒均无交叉反应 ,检测的灵敏度达 0 0 1TCID50 ,可从疑似流感患者含漱液中直接检测流感病毒核酸 ,从病毒核酸提取至完成检测仅需 3h左右。结论 本研究建立的TaqMan荧光定量RT -PCR是一种快速检测乙型流感病毒特异、敏感的新方法。 展开更多
关键词 荧光定量RT-PCR taqman探针 乙型流感病毒 检测
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Taq Man荧光定量RT-PCR快速检测甲3型流感病毒 被引量:20
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作者 严菊英 卢亦愚 +2 位作者 冯燕 史雯 茅海燕 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第2期169-172,共4页
目的建立一种特异、灵敏、快速的荧光定量RTPCR方法用于检测甲3型流感病毒核酸。方法根据GenBank登录的流感毒株序列,应用生物学软件进行序列比对,在甲3型流感病毒血凝素(HA)基因的保守区设计引物和TaqMan探针、并进行筛选。对荧光RT-PC... 目的建立一种特异、灵敏、快速的荧光定量RTPCR方法用于检测甲3型流感病毒核酸。方法根据GenBank登录的流感毒株序列,应用生物学软件进行序列比对,在甲3型流感病毒血凝素(HA)基因的保守区设计引物和TaqMan探针、并进行筛选。对荧光RT-PCR反应条件进行优化,检测该方法的特异性和灵敏度。并对疑似流感含漱液标本进行检测。结果该方法对甲3型流感病毒的检测有高度的特异性,对甲1型、乙型、禽流感病毒H5、SARS病毒及其他呼吸道病毒均无交叉反应,检测的灵敏度达0.01TCID50,可从疑似流感患者含漱液中直接检测流感病毒核酸,从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右。结论本研究建立的TaqMan荧光定量RTPCR是一种快速检测甲3型流感病毒特异、敏感的新方法。 展开更多
关键词 荧光定量RT-PCR taqman探针 甲3型流感病毒 临床标本 检测
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TaqMan荧光定量PCR技术快速检测霍乱弧菌方法的建立 被引量:20
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作者 黄世旺 卢亦愚 +4 位作者 徐丹戈 方叶珍 徐昌平 包芳珍 高海明 《中国卫生检验杂志》 CAS 2006年第8期923-924,984,共3页
目的:建立特异、灵敏、快速的TaqM an荧光定量PCR方法用于快速检测霍乱弧菌。方法:根据GenBank上的霍乱毒素(cholera toxin,CT)基因序列,在其保守区域设计特异性引物与TaqM an探针,并对荧光定量PCR体系与反应条件进行优化,同时验证方法... 目的:建立特异、灵敏、快速的TaqM an荧光定量PCR方法用于快速检测霍乱弧菌。方法:根据GenBank上的霍乱毒素(cholera toxin,CT)基因序列,在其保守区域设计特异性引物与TaqM an探针,并对荧光定量PCR体系与反应条件进行优化,同时验证方法的特异性、敏感性和重复性。结果:本方法对霍乱弧菌的检测具有高度特异性,与副溶血性弧菌、沙门菌、志贺菌、变形杆菌、大肠埃希菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等均无交叉反应;检测灵敏度达10 cfu/m l;反应体系具有很高的稳定性;整个操作过程仅需2 h。结论:本研究建立的TaqM an荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速,适用于霍乱弧菌的日常监测和爆发疫情的应急诊断。 展开更多
关键词 荧光定量PCR taqman探针 霍乱弧菌 CT基因
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大肠杆菌O_(157)∶H_7实时荧光PCR快速检测方法的建立 被引量:15
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作者 徐德顺 沈月华 程平庆 《上海预防医学》 CAS 2009年第4期174-177,共4页
[目的]利用特异性荧光探针为特点的TaqM an荧光定量PCR技术,建立大肠杆菌O157∶H7污染的快速敏感特异的检测方法。[方法]以大肠杆菌O157∶H7的rfbE基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以大肠杆菌O157∶H7菌株提取核酸DNA作为模板,优化... [目的]利用特异性荧光探针为特点的TaqM an荧光定量PCR技术,建立大肠杆菌O157∶H7污染的快速敏感特异的检测方法。[方法]以大肠杆菌O157∶H7的rfbE基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以大肠杆菌O157∶H7菌株提取核酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比和Mg2+浓度,以大肠杆菌O157∶H7和10种相关细菌考核检测体系的灵敏性、稳定性和特异性。[结果]建立的反应体系在引物和探针的浓度为0.6μmoL/L、0.8μmoL/L,Mg2+浓度为4mmoL/L时,具有良好的特异性和敏感性。在10株相关菌株的检测中,除大肠杆菌O157∶H7出现很好的阳性外,其余菌株均为阴性。在纯菌条件下,定量检测低限为17 cfu/mL。同一样品重复检测3次C t值的变异系数均小于5%。[结论]该方法特异性强,稳定性高,操作简便快捷,适应食品微生物检验发展需要,具有较大的推广及应用价值。 展开更多
关键词 荧光定量PCR taqman探针 大肠杆菌O157∶H7
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TaqMan实时荧光PCR快速检测斑点叉尾鮰病毒 被引量:12
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作者 李惠芳 刘荭 +5 位作者 吕建强 蔡依娜 田飞焱 李香平 岳志芹 陈昌福 《长江大学学报(自科版)(中旬)》 CAS 2008年第1期42-46,共5页
根据GenBank登录的斑点叉尾鮰病毒株ORF8基因序列,设计引物和Taqman荧光探针,建立了用于检测斑点叉尾鮰(Ictalurus Punctatus)病毒的实时荧光定量PCR方法;对实时荧光定量PCR反应条件进行了优化,评估了该方法的特异性、灵敏度和重复性... 根据GenBank登录的斑点叉尾鮰病毒株ORF8基因序列,设计引物和Taqman荧光探针,建立了用于检测斑点叉尾鮰(Ictalurus Punctatus)病毒的实时荧光定量PCR方法;对实时荧光定量PCR反应条件进行了优化,评估了该方法的特异性、灵敏度和重复性,并建立了绝对定量方法。特异性试验证实,该方法只能检测到斑点叉尾鮰病毒,与真鲷虹彩病毒、蛙虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒等多种常见的水生动物病毒没有交叉反应,具有高度的特异性。标准曲线表明,在3.3×10~3.3×107拷贝数之间有较好的线性关系(r=0.998 3),最少可检测到33个拷贝的阳性质粒,敏感度很高。同一样品于试验内及试验间的重复性试验发现,变异系数分别为0.7%和1.2%,重复性较好。该方法的检测时间从核酸抽提到出具结果仅需3h。试验结果表明,采用实时荧光PCR检测斑点叉尾鮰病毒方法具有特异性好、灵敏度高、检测耗时短的特点,并且能对病毒进行准确的定量分析,不仅适合口岸进出口检验检疫的需求,而且可以作为研究该病毒感染过程的有力工具。 展开更多
关键词 斑点叉尾鮰(Ictalurus Punctatus)病毒 实时荧光定量PCR taqman荧光探针 检测
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Taq Man荧光定量逆转录聚合酶链反应快速检测麻疹病毒核酸 被引量:12
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作者 卢亦愚 严菊英 +2 位作者 冯燕 史雯 茅海燕 《中国计划免疫》 2005年第1期1-4,共4页
目的 建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量逆转录 聚合酶链反应 (RT-PCR)方法。 方法 检测麻疹病毒的核酸 ,对设计的引物与探针进行筛选与条件优化。结果 TagMan荧光定量RT-PCR方法具有对麻疹病毒核酸检测的高度特异性与准确... 目的 建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量逆转录 聚合酶链反应 (RT-PCR)方法。 方法 检测麻疹病毒的核酸 ,对设计的引物与探针进行筛选与条件优化。结果 TagMan荧光定量RT-PCR方法具有对麻疹病毒核酸检测的高度特异性与准确性 ,检测的敏感度可达 0.1TCID50 ,从病毒核酸提取至检测完成仅需 3个多小时 ,操作简便 ,而且大大减少了常规PCR扩增产物的污染机会。结论 采用TagMan荧光定量RT-PCR方法对麻疹病毒与相关的临床样本进行了检测 ,均获得了满意的结果 ,为麻疹病毒的分子生物学检测 。 展开更多
关键词 荧光定量聚合酶链反应 TaqMrdn探针 麻疹病毒 检测
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荧光定量逆转录-聚合酶链反应方法快速检测甲_1型流行性感冒病毒核酸 被引量:8
9
作者 史雯 卢亦愚 +5 位作者 严菊英 冯燕 李敏红 周敏 龚黎明 葛琼 《中国计划免疫》 2005年第5期356-359,共4页
目的建立特异、快速、敏感的TaqMan荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,用于检测甲1型流行性感冒(流感)病毒核酸。方法在甲1型流感病毒血凝素基因的保守区设计引物和TaqMan探针,对其进行筛选,同时对荧光定量RT-PCR反应条件和反应... 目的建立特异、快速、敏感的TaqMan荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,用于检测甲1型流行性感冒(流感)病毒核酸。方法在甲1型流感病毒血凝素基因的保守区设计引物和TaqMan探针,对其进行筛选,同时对荧光定量RT-PCR反应条件和反应体系进行优化,验证该方法的特异性、敏感性、重复性,并对疑似流感患者含漱液标本进行检测。结果该方法对甲1型流感病毒的检测具有高度的特异性,对甲3型流感病毒、乙型流感病毒、禽流感病毒H5、严重急性呼吸道综合征病毒、麻疹病毒及其它呼吸道病毒均无交叉反应,检测的灵敏度达0.1TCID50。采用该方法从临床疑似患者含漱液中对甲1型流感病毒核酸的检出,比采用狗肾传代细胞进行病毒分离更为敏感。从病毒核酸提取至检测完成仅需3h左右,操作简便,重复性好,且大大减少了常规RT-PCR检测产物的污染机会。结论新建立的TaqMan荧光定量RT-PCR是一种快速检测甲1型流感病毒的特异、敏感的方法,非常适合于疑似流感爆发疫情的应急诊断和鉴别诊断。 展开更多
关键词 荧光定量逆转录-聚合酶链反应 taqman探针 甲1型流行性感冒病毒 临床标本 检测
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基于TaqMan探针双重荧光PCR检测食品中肠道沙门氏菌和肠炎沙门氏菌 被引量:9
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作者 袁慕云 许龙岩 +2 位作者 刘二龙 曹际娟 陈碧玲 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2017年第1期248-252,共5页
建立基于TaqMan探针双重重实时荧光PCR检测肠道沙门氏菌(Salmonella enterica,SP)和肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritidis,SE)的方法。根据SP的aceA基因(Gen Bank:U43344.1)、肠炎沙门氏菌特异序列SEP(GenBank:AF370707.1),分别设计引... 建立基于TaqMan探针双重重实时荧光PCR检测肠道沙门氏菌(Salmonella enterica,SP)和肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritidis,SE)的方法。根据SP的aceA基因(Gen Bank:U43344.1)、肠炎沙门氏菌特异序列SEP(GenBank:AF370707.1),分别设计引物和探针,在ace A探针的5′端标记FAM和SEP探针的5′端标记VIC,建立基于TaqMan探针双重荧光PCR检测方法。试验结果,58株29种不同血清型肠道沙门氏菌均扩增出ace A基因扩增曲线,SEP特异性地扩增出15株SE,而28种不同血清型沙门氏菌和17株变形杆菌等阴性对照株扩增结果均为阴性。ace A和SEP的双重荧光PCR扩增效率分别为100%和104%,R2分别为0.999和0.998,最低检测浓度分别达到280 cfu/m L和260 cfu/m L。建立的方法特异性好、灵敏度高,整个试验可在31 h完成,是快速检测SP和SE的有效方法,可用于食品中SP和SE的特异性检测。 展开更多
关键词 肠道沙门氏菌 肠炎沙门氏菌 taqman探针 双重荧光PCR 检测 食品
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多重荧光定量PCR同时检测霍乱弧菌、副溶血性弧菌和创伤弧菌的方法研究 被引量:8
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作者 李宏 杨大伟 +6 位作者 刘云国 孙涛 王建广 雷质文 周裔斌 贾俊涛 姜英辉 《中国卫生检验杂志》 CAS 2011年第5期1180-1182,共3页
目的:利用多重荧光定量PCR技术检测霍乱弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌。方法:以溶藻弧菌等17种相关试验菌株做特异性检测;并将标准菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测。结果:与传统的检测方法相比,该方法有很好的特异性且灵敏度高,检测时... 目的:利用多重荧光定量PCR技术检测霍乱弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌。方法:以溶藻弧菌等17种相关试验菌株做特异性检测;并将标准菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测。结果:与传统的检测方法相比,该方法有很好的特异性且灵敏度高,检测时间短并可节省人力,具有快速方便等优点。结论:适用于样品中霍乱弧菌、副溶血性弧菌和创伤弧菌的快速检测。检测限分别为:霍乱弧菌为280 cfu/ml;副溶血性弧菌为:100 cfu/ml;创伤弧菌为:450 cfu/ml。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 副溶血性弧菌 创伤弧菌 多重荧光定量PCR taqman探针
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甲肝病毒TaqMan PCR检测方法的建立 被引量:7
12
作者 徐德顺 卢亦愚 +1 位作者 严菊英 徐昌平 《中国预防医学杂志》 CAS 2007年第3期229-232,共4页
目的建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RT-PCR方法,对甲肝病毒核酸进行检测。方法根据GenBank发表的HAV全基因组序列资料分析结果,在其保守区段设计HAV特异性引物和探针,优化引物、探针浓度,与最佳退火温度,并考察检测体系的... 目的建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RT-PCR方法,对甲肝病毒核酸进行检测。方法根据GenBank发表的HAV全基因组序列资料分析结果,在其保守区段设计HAV特异性引物和探针,优化引物、探针浓度,与最佳退火温度,并考察检测体系的特异性、敏感性与重复性。结果本研究体系的引物和探针浓度为0.8μmol/L和0.6μmol/L,退火温度为52℃时,具有良好的特异性与敏感性,检测灵敏度可达0.1TCID50。同一样品重复检测3次,Ct值的变异系数均小于5%。结论本研究建立的HAV TaqMan RT-PCR方法特异、敏感、快速且有效减少交叉污染的概率,为临床及水产品中的甲肝病毒的早期快速检测提供了一种新方法。 展开更多
关键词 荧光定量PCR taqman探针 甲肝病毒
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霍乱弧菌实时荧光PCR方法的建立 被引量:5
13
作者 沈月华 徐德顺 吴晓芳 《中国卫生检验杂志》 CAS 2009年第1期28-29,55,共3页
目的:利用荧光定量PCR技术,建立霍乱弧菌快速敏感特异的检测方法。方法:以霍乱弧菌CT基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以霍乱弧菌菌株提取核酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比和Mg2+浓度,同时验证方法的特异性、敏感性和重复性... 目的:利用荧光定量PCR技术,建立霍乱弧菌快速敏感特异的检测方法。方法:以霍乱弧菌CT基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以霍乱弧菌菌株提取核酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比和Mg2+浓度,同时验证方法的特异性、敏感性和重复性。结果:本方法建立的反应体系在引物和探针的浓度为0.6μmol/L、0.6μmol/L,Mg2+浓度为3.5 mmol/L时,具有良好的特异性和敏感性,与副溶性血性弧菌等7种相关细菌均无交叉反应。在纯菌条件下,检测灵敏度21 cfu/ml。稳定性分析表明,同一样品重复检测3次Ct值的变异系数均小于5%。检测水源和海产品结果表明该方法较传统方法敏感、快速、简便。结论:建立的实时荧光PCR方法特异、灵敏、快速,适用于水源、海产品和疫情暴发的霍乱弧菌快速检测。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 taqman探针 荧光定量PCR CT基因
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TaqMan荧光定量RT-PCR检测犬瘟热病毒方法的建立与初步应用 被引量:3
14
作者 吕品 胡传伟 +2 位作者 谢之景 杨笃宝 任月 《兽类学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期293-297,共5页
To establish a TaqMan-based real-time RT-PCR method for detection of canine distemper virus,the pair of primers and the TaqMan-based probe were designed according to the M protein genes of canine distemper virus strai... To establish a TaqMan-based real-time RT-PCR method for detection of canine distemper virus,the pair of primers and the TaqMan-based probe were designed according to the M protein genes of canine distemper virus strains.The reactive conditions were optimized to improve the sensitivity and specificity of the method.The specificity and sensitivity of the method were high.Canine distemper virus in the thirty-eight samples had been tested by the TaqMan-based real-time RT-PCR,the common RT-PCR and electron microscopy.The sensitivity of the TaqMan-based real-time RT-PCR was higher than the common RT-PCR and electron microscopy.This suggests that the method may be used in clinical diagnosis,epizootic study and laboratory research. 展开更多
关键词 荧光定量RT-PCR taqman探针 犬瘟热病毒 M基因
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猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:4
15
作者 徐辉 方立 +3 位作者 陈伟杰 赵灵燕 倪柏锋 方维焕 《浙江农业学报》 CSCD 2008年第5期328-332,共5页
针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N基因保守序列设计引物与TaqMan探针,在建立常规PCR的基础上,设计并优化了TaqMan荧光定量PCR方法用于PRRSV核酸的检测。应用新建立的荧光定量PC... 针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N基因保守序列设计引物与TaqMan探针,在建立常规PCR的基础上,设计并优化了TaqMan荧光定量PCR方法用于PRRSV核酸的检测。应用新建立的荧光定量PCR方法检测其它主要猪病病原,无任何非特异性反应;针对PRRSV阳性克隆质粒的检测灵敏度可以达到1.2×101copy/ml,比常规PCR高100倍;通过对48份临床疑似样本的检测表明有29份样本为PRRSV阳性,与巢式PCR检测结果一致,而常规PCR只能检出其中19份阳性样本,灵敏度优于常规PCR方法。结果表明,试验建立的PRRSV TaqMan荧光定量PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可为PRRSV临床诊断提供一个更为有效的方法。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 荧光定量PCR taqman探针
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多重荧光逆转录PCR同时检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型 被引量:3
16
作者 徐德顺 韩建康 +1 位作者 吴晓芳 纪蕾 《中国预防医学杂志》 CAS 2010年第9期878-881,共4页
目的建立多重荧光逆转录PCR(RT-PCR)同时检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的方法。方法在肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型VP1基因的保守区序列分别设计特异性引物和Taqman探针,建立优化多重荧光RT-PCR反应体系,评价所建多重荧光RT-PCR... 目的建立多重荧光逆转录PCR(RT-PCR)同时检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的方法。方法在肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型VP1基因的保守区序列分别设计特异性引物和Taqman探针,建立优化多重荧光RT-PCR反应体系,评价所建多重荧光RT-PCR反应体系的特异性、敏感性和稳定性,并应用于临床样品检测。结果该方法对肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型检测具有高度特异性,检出限分别为0.1 TCID50和1 TCID50,具有较好的稳定性,可直接应用于临床样品的检测。结论本研究建立的多重荧光RT-PCR可以同时准确检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型,灵敏度高,稳定性好,是一种快速检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的新方法。 展开更多
关键词 肠道病毒71型 柯萨奇病毒A16型 taqman探针 多重荧光RT-PCR
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亚洲型寨卡病毒实时荧光定量PCR检测方法建立 被引量:3
17
作者 彭淑莹 覃直然 +6 位作者 陈嘉雯 余健海 陆维智 何晓恩 朱利 肖维威 赵卫 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期114-117,共4页
目的分析亚洲型寨卡病毒基因组序列特征,建立亚洲型寨卡病毒的荧光定量PCR检测技术。方法通过分析亚洲型寨卡病毒全基因组核酸序列,选取亚洲型寨卡病毒的保守区设计引物和TaqMan探针,建立标准曲线并检测其特异性与敏感性。结果荧光定量... 目的分析亚洲型寨卡病毒基因组序列特征,建立亚洲型寨卡病毒的荧光定量PCR检测技术。方法通过分析亚洲型寨卡病毒全基因组核酸序列,选取亚洲型寨卡病毒的保守区设计引物和TaqMan探针,建立标准曲线并检测其特异性与敏感性。结果荧光定量PCR测试结果表明所设计的引物和探针特异性良好,对非洲型寨卡病毒、Ⅰ~Ⅳ型登革病毒和丙型肝炎病毒核酸检测无交叉反应;同时灵敏度较高,可达3.415×10~0 copies/μL;构建了标准曲线,回归方程为Y=–3.227 3logX+38.79,相关系数R^2=1,扩增效率E=102%。结论建立了一种检测亚洲型寨卡病毒的荧光定量PCR技术,可用于临床亚洲型寨卡病毒感染患者的病原分型、早期诊断及预防。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 亚洲型寨卡病毒 taqman 探针
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双重荧光定量RT-PCR快速检测A、B型流感病毒的研究 被引量:2
18
作者 徐昌平 卢亦愚 +2 位作者 严菊英 茅海燕 史雯 《中国卫生检验杂志》 CAS 2007年第9期1583-1585,共3页
目的:建立双重荧光定量RT-PCR技术同时快速检测A、B型流感病毒,并应用于临床样本的检测。方法:在A型流感病毒M基因和B型流感病毒NP基因的保守区序列分别设计特异性引物和Taqman探针,建立优化单一和双重荧光RT-PCR反应体系,评价所建双重R... 目的:建立双重荧光定量RT-PCR技术同时快速检测A、B型流感病毒,并应用于临床样本的检测。方法:在A型流感病毒M基因和B型流感病毒NP基因的保守区序列分别设计特异性引物和Taqman探针,建立优化单一和双重荧光RT-PCR反应体系,评价所建双重RT-PCR反应体系的特异性、敏感性和稳定性,并应用于疑似流感含漱液标本检测。结果:该方法对A、B型流感病毒检测具有高度特异性,检出限分别为0.1TCID50和0.01TCID50,可从疑似流感患者含漱液中直接检测到流感病毒核酸。构建的体系定量标准曲线相关系数分别为0.998和0.999,具有较好的稳定性。结论:本研究建立的双重荧光定量RT-PCR可以同时准确分型A、B型流感病毒,灵敏度高,稳定性好,是一种快速检测流感病毒的新方法。 展开更多
关键词 流感病毒 taqman探针:双重荧光定量RT—PCR
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产气荚膜梭菌实时荧光定量PCR方法的应用 被引量:2
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作者 石玉玲 曾兰兰 +3 位作者 陈丽丹 李林海 孙朝晖 王露霞 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第13期2669-2673,共5页
目的利用荧光定量PCR技术,建立快速敏感特异的产气荚膜梭菌检测方法。方法以产气荚膜梭菌基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以产气荚膜梭菌菌株提取核酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比,同时验证方法的灵敏度、特异性、重复性。... 目的利用荧光定量PCR技术,建立快速敏感特异的产气荚膜梭菌检测方法。方法以产气荚膜梭菌基因作为靶序列,设计一对引物和探针,以产气荚膜梭菌菌株提取核酸DNA作为模板,优化引物和探针的浓度比,同时验证方法的灵敏度、特异性、重复性。结果反应体系在上、下游引物浓度均为1μmol/L,探针浓度为0.1μmol/L时,具有良好的特异性和灵敏度,与创伤弧菌等24种相关细菌均无交叉反应,对纯菌检测的灵敏度为9×102CFU/ml,重复性试验证实该体系重复性好,稳定性高;3例临床样本检测结果与细菌培养结果相符。结论建立的实时荧光PCR方法特异、灵敏、快速,能对临床气性坏疽做出快速准确的报告,实现对气性坏疽战时高发性疾病安全、快速和定量检测。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 探针 荧光定量PCR
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登革1型病毒荧光定量PCR快速检测 被引量:1
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作者 熊建英 张复春 +7 位作者 马丹娟 朱利 张玲 胡凤玉 黎诚耀 钟志成 万成松 赵卫 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期69-71,共3页
目的建立登革1型病毒的快速特异的荧光定量PCR检测方法。方法设计登革1型病毒特异的引物和TaqMan探针,制作标准曲线,并检测其特异性、重复性、再现性和敏感性,采用荧光定量PCR和常规PCR对临床标本进行检测比较。结果成功构建了标准曲线... 目的建立登革1型病毒的快速特异的荧光定量PCR检测方法。方法设计登革1型病毒特异的引物和TaqMan探针,制作标准曲线,并检测其特异性、重复性、再现性和敏感性,采用荧光定量PCR和常规PCR对临床标本进行检测比较。结果成功构建了标准曲线,回归方程为Y=-3.410logX+45.10,相关系数R2=0.999,扩增效率Eff=96.5%,灵敏度可达103 copies/mL,此荧光定量PCR方法对登革1型病毒检测高度特异,与其他3型登革病毒和乙型脑炎病毒之间并无交叉反应;采用登革病毒种特异引物探针和本研究建立的登革1型病毒型特异引物探针对166份cDNA样本进行荧光定量PCR检测,均发现126份为阳性,阳性率均为75.9%,Ct值为20.84~36.36,浓度范围为1~1.3×104copy/μL;常规PCR方法检测到其中36份为阳性,阳性率为21.7%。结论荧光定量PCR方法能够快速灵敏地检测登革1型病毒,并能实现对病毒滴度的绝对定量。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 登革病毒 taqman探针
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