西瓜细菌性果斑病菌Taq Man探针实时荧光PCR检测鉴定方法的建立 被引量：12

1

作者 伍永明 张祥林 罗明 《新疆农业大学学报》 CAS 2006年第3期68-72,共5页

根据西瓜细菌性果斑病菌(Acidovorax avenaesubsp.citrulli)与相关细菌16S rDNA序列差异,设计出对西瓜细菌性果斑病菌具有稳定点突变特异性探针Aac-probe,利用该探针对23种供试菌株进行了实时荧光PCR检测实验。结果表明,只有西瓜细菌性... 根据西瓜细菌性果斑病菌(Acidovorax avenaesubsp.citrulli)与相关细菌16S rDNA序列差异,设计出对西瓜细菌性果斑病菌具有稳定点突变特异性探针Aac-probe,利用该探针对23种供试菌株进行了实时荧光PCR检测实验。结果表明,只有西瓜细菌性果斑病菌能检测到荧光增强信号,其它细菌无荧光增强信号。该方法特异性强,灵敏度高,重复性好,可有效地应用于西瓜细菌性果斑病菌的检测。 展开更多

关键词 taq man探针 实时荧光PCR 西瓜细菌性果斑病菌 16S RDNA

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鸡贫血病毒Taq Man探针荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：17

2

作者 宋修庆 高宏雷 +4 位作者 王晓艳 林欢 宇文延青 王永强 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期56-59,共4页

根据鸡贫血病毒(CAV)的基因序列,选取一段高度保守的基因序列作为目的片段设计引物与探针,将该目的片段克隆到pMD18-T载体中,作为阳性标准品。通过优化荧光定量PCR反应条件,建立了CAV的荧光定量PCR检测方法。结果表明,该检测方法的敏感... 根据鸡贫血病毒(CAV)的基因序列,选取一段高度保守的基因序列作为目的片段设计引物与探针,将该目的片段克隆到pMD18-T载体中,作为阳性标准品。通过优化荧光定量PCR反应条件,建立了CAV的荧光定量PCR检测方法。结果表明,该检测方法的敏感性达到10个病毒拷贝/μL,与其他禽病病毒无交叉反应,批间与批内重复试验相关系数都小于5%。实验数据证明该检测方法敏感性高,特异性好,重复性佳。 展开更多

关键词 鸡贫血病毒 taq man探针 荧光定量PCR

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多重荧光定量PCR法检测海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌 被引量：13

3

作者 胡兴娟 沈飚 +3 位作者 余辉 周秀锦 张静 邵宏宏 《中国食品卫生杂志》 2016年第4期440-444,共5页

目的建立检测海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的多重荧光定量PCR体系。方法针对副溶血性弧菌tlh基因,沙门菌Ompc基因和单增李斯特菌hly基因设计引物和Taq Man探针,建立多重荧光定量PCR体系,进行特异性与敏感性研究;利用该... 目的建立检测海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的多重荧光定量PCR体系。方法针对副溶血性弧菌tlh基因,沙门菌Ompc基因和单增李斯特菌hly基因设计引物和Taq Man探针,建立多重荧光定量PCR体系,进行特异性与敏感性研究;利用该体系检测海产品中的副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌。结果副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌可得到特异性扩增,而共存于海产品中的其他细菌均未见扩增曲线。敏感性试验显示,该体系对副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的最低检测限分别为72、40、80 cfu/ml。对舟山采集的150份样品进行检测,检出32份副溶血性弧菌、11份沙门菌、5份单增李斯特菌,与国标法检测结果一致。结论本研究建立的基于Taq Man探针的多重荧光定量PCR检测方法可以特异、灵敏、简单快速地实现对海产品中副溶血性弧菌、沙门菌和单增李斯特菌的检测。 展开更多

关键词 海产品 副溶血性弧菌 沙门菌 单增李斯特菌 taq man探针 多重荧光PCR 食源性致病菌

原文传递

鳞球茎茎线虫实时荧光PCR检测技术的研究 被引量：9

4

作者 王翀 葛建军 陈长发 《植物检疫》 2005年第1期11-14,共4页

传统的线虫形态学鉴定存在经验性强和幼虫难以鉴定等不足。本文根据线虫ITS基因序列多态性 ,设计鳞球茎茎线虫 (Ditylenchusdipsaci)特异的TaqMan探针 ,建立了实时荧光PCR检测方法。对茎线虫属的鉴定实验表明 :只有鳞球茎茎线虫产生特... 传统的线虫形态学鉴定存在经验性强和幼虫难以鉴定等不足。本文根据线虫ITS基因序列多态性 ,设计鳞球茎茎线虫 (Ditylenchusdipsaci)特异的TaqMan探针 ,建立了实时荧光PCR检测方法。对茎线虫属的鉴定实验表明 :只有鳞球茎茎线虫产生特异性荧光信号 ,同属的其他线虫均检测到荧光信号。整个检测过程只需 30min到 2h ,能够满足口岸检验检疫快速通关的要求。 展开更多

关键词 线虫 球茎 形态学鉴定 幼虫 taqman探针 实时荧光PCR检测方法 检验检疫 特异性 多态性 基因序列

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苹果茎痘病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：10

5

作者 秦子禹 孙建设 +1 位作者 王娜 邵建柱 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1400-1408,共9页

为建立一种检测苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)的Taq Man探针实时荧光定量RT-PCR方法,根据ASPV外壳蛋白基因(coat protein,cp)保守序列设计了特异性引物和Taq Man探针,以体外转录的RNA为标准品构建标准曲线,并对该方法的... 为建立一种检测苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)的Taq Man探针实时荧光定量RT-PCR方法,根据ASPV外壳蛋白基因(coat protein,cp)保守序列设计了特异性引物和Taq Man探针,以体外转录的RNA为标准品构建标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行检验。建立的标准曲线决定系数达0.996,扩增效率为99%;该方法特异性好,与苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果锈果类病毒(ASSVd)均无交叉反应;其最低检测限为1.31×102 copies·μL-1,灵敏度比常规RT-PCR高100倍;批内和批间变异系数均小于1.85%。该方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点,适用于田间样品中ASPV的快速定量检测。 展开更多

关键词 苹果茎痘病毒 taqman探针 实时荧光定量RT-PCR

原文传递

猪德尔塔冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：7

6

作者 江珊 李富强 +5 位作者 李秀丽 王利丽 郑丽 张莉 路超 鄢明华 《动物医学进展》 北大核心 2019年第10期10-17,共8页

为建立一种快速、灵敏、准确的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)分子检测方法,根据PDCoV M基因的保守序列设计并合成引物和探针,建立了PDCoV M基因Taq Man荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法标准曲线具有良好的线性关系,相关系数为0.998;敏... 为建立一种快速、灵敏、准确的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)分子检测方法,根据PDCoV M基因的保守序列设计并合成引物和探针,建立了PDCoV M基因Taq Man荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法标准曲线具有良好的线性关系,相关系数为0.998;敏感性好,最低可检测到10 copies/μL的PDCoV M基因标准品;特异性试验结果显示,该方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)及大肠埃希菌K88菌株均无交叉反应;重复性试验变异系数低于2%,表明重复性良好。对121份临床样本进行检测,阳性检出率为53.7%(65/121),随机选择10份阳性样品的扩增产物进行测序分析,进一步证实扩增产物中含有PDCoV。该方法具有敏感性高、特异性强、用时短和高通量等特点,适用于PDCoV的定量检测与分子流行病学调查,为PDCoV的准确定量及进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪德尔塔冠状病毒 M基因 taq man探针 荧光定量PCR

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猫冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：1

7

作者 陈秋阳 梁瑞英 +3 位作者 梁琳 汤新明 秦彤 丁家波 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期16-21,共6页

猫冠状病毒(FCoV)在全球猫种群中广泛流行,隐形感染的猫导致病毒在猫群中持续传播。提高样本检测率、早预防、早治疗可减少种群中病毒流行率。为建立可以灵敏、准确检测FCoV的Taq Man荧光定量PCR检测方法,根据GenBank公布的FCoV基因片段... 猫冠状病毒(FCoV)在全球猫种群中广泛流行,隐形感染的猫导致病毒在猫群中持续传播。提高样本检测率、早预防、早治疗可减少种群中病毒流行率。为建立可以灵敏、准确检测FCoV的Taq Man荧光定量PCR检测方法,根据GenBank公布的FCoV基因片段N保守区域设计了1对特异性引物和1条探针,通过优化反应体系,建立了FCoV Taq Man荧光定量PCR检测方法,对75份临床样品进行检测。结果表明,该方法在1.49×10^(11)~1.49×10^(2) copies/μL之间具有良好的线性关系,特异性强,敏感性高,对FCoV质粒标准品最低检测下限为1.49×10^(0) copies/μL,而普通PCR对FCoV质粒标准品最低检测下限为1.49×10^(5) copies/μL;重复性好,组内变异系数和组间变异系数均小于3%;75份临床样品,阳性率为37.33%。研究建立的FCoV检测方法扩增效率高、特异性强、敏感性好、稳定性高,且实用性好,可以用于FCoV的快速检测,可为流行病学调查提供有效的技术手段。 展开更多

关键词 猫冠状病毒 荧光定量PCR taq man探针

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猪肺炎支原体实时荧光定量PCR检测方法建立及应用 被引量：1

8

作者 刘莹 李峰 +3 位作者 殷宗俊 王敬茹 李书光 郑先瑞 《动物医学进展》 北大核心 2024年第6期34-38,共5页

猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)是一种严重危害养猪业的重要传染性病原,以猪肺炎支原体编码乳酸脱氢酶的P 36基因保守序列为基础,设计一套特异性引物和探针,并通过优化筛选反应条件,建立了一种Mhp的实时荧光定量RT-PCR检测方... 猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)是一种严重危害养猪业的重要传染性病原,以猪肺炎支原体编码乳酸脱氢酶的P 36基因保守序列为基础,设计一套特异性引物和探针,并通过优化筛选反应条件,建立了一种Mhp的实时荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明,最适引物浓度为10μmol/L,探针浓度为5μmol/L,以浓度为1×10^(2)~1×10^(6)copies/μL的标准品构建标准曲线相关系数为0.998,扩增效率可达96%。该方法能特异地检测猪肺炎支原体,与其他动物支原体及猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、伪狂犬病病毒等病原无交叉反应;灵敏度是常规PCR的10倍,可达到10拷贝;该方法重复性较好,组内和组间变异系数均小于2%。在对30份临床样本的检测中,建立的实时荧光定量PCR检出率为63%(19/30),而常规PCR的检出率仅有30%(9/30)。结果表明,成功建立了猪肺炎支原体实时荧光定量PCR检测方法,可用于猪肺炎支原体的病原学检测和流行病学调查。 展开更多

关键词 猪肺炎支原体 taq man探针 实时荧光定量PCR

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H3亚型猪流感病毒荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：6

9

作者 王云龙 陈小科 +4 位作者 韩洁 李玉林 李恒思 王真 邓黎黎 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第6期30-35,共6页

通过RT-PCR方法克隆了H3亚型猪流感病毒HA基因一段靶序列，构建重组质粒作为标准阳性模板。根据GenBank中的H3亚型猪流感病毒HA基因保守序列设计了用于FQ-PCR的1对引物和1条TaqMan探针。通过条件优化，以10倍系列稀释的质粒为标准品进... 通过RT-PCR方法克隆了H3亚型猪流感病毒HA基因一段靶序列，构建重组质粒作为标准阳性模板。根据GenBank中的H3亚型猪流感病毒HA基因保守序列设计了用于FQ-PCR的1对引物和1条TaqMan探针。通过条件优化，以10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增，并制作标准曲线，建立了检测H3亚型猪流感的荧光定量PCR方法。结果表明，该方法检测灵敏度可达1．0×10^0拷贝／μL，线性范围为10^9-10^0，达10个数量级；对起始浓度为1．0×10^9、1．0×10^8、1．0×10^7拷贝／μL的标准品的最终实际测得值（Ct）分别为13．68，18．21和20．57；变异系数分别为0．31％、0．17％和0．12％，均小于5％，说明此方法具有良好的准确性和重现性。对阳性组织病料的检测表明，该方法的检测灵敏度高出常规PCR，与套式PCR具有相近的灵敏度。 展开更多

关键词 猪流感病毒 H3亚型 荧光定量PCR taqman探针

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microRNA-155在寻常型银屑病中的表达及意义 被引量：6

10

作者 贺琪 皮先明 +3 位作者 石全 李家文 杨迎香 陈宏翔 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第6期900-903,共4页

目的:探讨micro RNA-155(mi R-155)在寻常型银屑病中的表达及意义。方法:采用Taq Man探针实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测35例寻常型银屑病患者皮损区(皮损组)和非皮损区(非皮损组)中的mi R-155表达水平,并与30例正常对照(对... 目的:探讨micro RNA-155(mi R-155)在寻常型银屑病中的表达及意义。方法:采用Taq Man探针实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测35例寻常型银屑病患者皮损区(皮损组)和非皮损区(非皮损组)中的mi R-155表达水平,并与30例正常对照(对照组)进行比较,研究mi R-155含量与患者银屑病面积和严重程度指数(PASI)评分和白细胞介素-17A(IL-17A)含量之间的关系。结果:mi R-155和IL-17A在皮损组和非皮损组中的表达高于对照组,在皮损组中的表达高于非皮损组,差异均有统计学意义(均P<0.01);皮损组中,mi R-155和IL-17A含量分别与PASI评分呈显著正相关(均P<0.05),mi R-155和IL-17A含量之间亦存在显著正相关(P<0.01)。结论:mi R-155的过表达与银屑病的发病有关,银屑病中mi R-155的过表达与Th17细胞的功能亢进有关。 展开更多

关键词 MIR-155 寻常型银屑病 taqman探针 白细胞介素-17

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鸡毒支原体 Taq Man实时荧光定量PCR检测方法的建立

11

作者 孙宇 苗立中 +6 位作者 程立坤 赵家磊 赵修报 沈志强 王敬茹 李书光 余燕 《动物医学进展》 北大核心 2024年第4期64-68,共5页

为快速检测鸡毒支原体,根据鸡毒支原体的保守基因设计特异性引物和Taq Man探针,建立鸡毒支原体Taq Man实时荧光定量PCR方法并分析鸡毒支原体培养过程中颜色单位改变法(color change unit,CCU)和荧光定量PCR检测的相关性。结果显示,标准... 为快速检测鸡毒支原体,根据鸡毒支原体的保守基因设计特异性引物和Taq Man探针,建立鸡毒支原体Taq Man实时荧光定量PCR方法并分析鸡毒支原体培养过程中颜色单位改变法(color change unit,CCU)和荧光定量PCR检测的相关性。结果显示,标准曲线y=-3.646x+44.208,相关系数R^(2)=0.998,最低检测限度为1 copy/μL;与其他菌株等均无交叉反应;组内和组间变异系数均小于3%,表明该方法具有良好的稳定性和可重复性。用建立的实时荧光定量PCR检测方法对26份临床样品进行检测,该方法较普通PCR方法检出率更高。建立的荧光定量PCR与CCU显示鸡毒支原体在对数生长期时,两者具有一定的对应关系。表明建立了鸡毒支原体Taq Man探针实时荧光定量PCR检测方法,可实现对鸡毒支原体的快速检测,为鸡毒支原体感染的防控提供技术基础。 展开更多

关键词 鸡毒支原体 taq man探针 荧光定量PCR

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鸡传染性法氏囊病病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：4

12

作者 王永强 祁小乐 +6 位作者 高宏雷 高玉龙 宇文延青 林欢 秦立廷 宋修庆 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期65-68,共4页

本试验根据GenBank中鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组设计一对针对病毒vp5基因的引物和一条特异性Taq Man探针,建立了一种快速检测IBDV核酸载量的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。通过对反应条件和反应体系的优化,使得该方法在108拷贝/μL... 本试验根据GenBank中鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组设计一对针对病毒vp5基因的引物和一条特异性Taq Man探针,建立了一种快速检测IBDV核酸载量的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。通过对反应条件和反应体系的优化,使得该方法在108拷贝/μL～101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系。能够灵敏地检测初始模板中30个拷贝的病毒核酸,其灵敏度是常规RT-PCR检测方法的100倍。该方法不与其它的禽源病毒发生非特异性反应,并且具有良好的重复性,为IBDV的定性定量检测提供了有效的工具。 展开更多

关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 荧光定量RT-PCR taq man水解探针

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传染性法氏囊病毒新型变异株荧光定量RT-PCR检测方法的建立

13

作者 曹雪珍 周庆丰 +4 位作者 王连想 严专强 林丽苗 李薇 李群辉 《广东畜牧兽医科技》 2024年第3期54-59,82,共7页

传染性法氏囊病病毒新型变异株(Novel variant Infectious bursal disease virus,nVarIBDV)给我国养禽业防控法氏囊带来更大的挑战。目前缺乏快速、灵敏的针对nVarIBDV的检测方法。为解决这一问题,该试验根据已发表的nVarIBD的VP2基因序... 传染性法氏囊病病毒新型变异株(Novel variant Infectious bursal disease virus,nVarIBDV)给我国养禽业防控法氏囊带来更大的挑战。目前缺乏快速、灵敏的针对nVarIBDV的检测方法。为解决这一问题,该试验根据已发表的nVarIBD的VP2基因序列,设计了一对引物和一条特异性Taq Man探针,建立了一种nVarIBD的Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法,该方法可通过特异性扩增nVarIBD VP2基因来确定样品是否为IBDV新型变异株。通过构建重组质粒pMD18-T-VP2对引物和探针进行灵敏性和重复性试验,以及特异性检测,最后使用该检测方法对临床样品进行验证。荧光定量RT-PCR结果显示灵敏性可达1.32×10^(1)copies/μL,高于常规RT-PCR的100倍。批内和批间重复试验变异系数(CV)均小于0.5%,结果表明该检测方法有良好的重复性与稳定性。该方法与常见禽病毒核酸无交叉反应,说明检测方法具有较好的特异性。综合本研究结果表明,该研究建立的nVarIBD荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、灵敏性高、重复性好,可用于临床样品中IBDV新型变异株的监测。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒新型变异株 荧光定量RT-PCR taq man探针

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猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：5

14

作者 万娟 梁海英 +6 位作者 曾智勇 汤德元 王彬 张婧旭 柳佳佳 边孟婷 黄书 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1367-1372,共6页

为建立一种快速、特异、灵敏检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的荧光定量RT-PCR方法,参比NCBI中登录的S基因高度保守核苷酸序列,设计1对针对PEDV S基因的特异性引物和探针,建立TaqMan荧光定量RT-PCR方法。结果显示,建立的方法与猪圆环病毒2... 为建立一种快速、特异、灵敏检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的荧光定量RT-PCR方法,参比NCBI中登录的S基因高度保守核苷酸序列,设计1对针对PEDV S基因的特异性引物和探针,建立TaqMan荧光定量RT-PCR方法。结果显示,建立的方法与猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪德尔塔冠状病毒不存在交叉反应,具有较强的特异性;最低检测限度为1.0 copies/μL,比普通RT-PCR方法灵敏100倍;批内、批间重复性试验的变异系数分别在1.0%、2.8%以下,具有较好的重复性;对临床疑似样品进行检测,荧光定量RT-PCR方法与普通RT-PCR方法总符合率为80%,阳性符合率为100%。结果表明,建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、灵敏性高、重复性好。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 taqman探针 荧光定量RT-PCR方法

原文传递

肺炎衣原体Taqman探针实时荧光定量PCR检测法 被引量：5

15

作者 程永婷 贾晓晖 +1 位作者 马良 贾天军 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2016年第5期343-346,共4页

目的针对Cpn0308基因建立检测肺炎衣原体的Taqman探针实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法。方法根据肺炎衣原体包涵体膜蛋白Cpn0308基因序列设计引物和Taqman探针,建立Taqman FQ-PCR检测体系,对反应体系进行优化,进行灵敏度、特异性、重复性评... 目的针对Cpn0308基因建立检测肺炎衣原体的Taqman探针实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法。方法根据肺炎衣原体包涵体膜蛋白Cpn0308基因序列设计引物和Taqman探针,建立Taqman FQ-PCR检测体系,对反应体系进行优化,进行灵敏度、特异性、重复性评价;并与商品化肺炎衣原体核酸检测试剂盒检测临床标本进行对比分析。结果肺炎衣原体Taqman FQ-PCR方法的引物浓度300 nmol/L,探针浓度200 nmol/L,Mg^(2+)4.0 mmol/L为最优反应条件;灵敏度为8.36×102copies/μL;该法对常见几种呼吸道病原菌及沙眼衣原体无交叉反应;重复性试验中4个浓度变异系数均小于3%。自建方法与商品化试剂盒对呼吸道感染组、心血管疾病组及正常对照组标本检出率分别为10%vs 10%(χ~2=0.167,P>0.05),44.44%vs 40.74%(χ~2=0,P>0.05),6.67%vs 3.33%(χ~2=0,P>0.05),各组阳性率间差异无统计学意义;2种方法的总阳性率(16.54%vs 14.96%)比较差异无统计学意义(χ~2=0.071,P>0.05)。结论本研究建立的Taqman探针实时荧光定量PCR检测肺炎衣原体的方法灵敏度好,特异性高,重复性好,可应用于临床肺炎衣原体核酸检测。 展开更多

关键词 肺炎衣原体 taqman探针 实时荧光定量PCR Cpn0308

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胆汁螺杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：3

16

作者 伍妙梨 袁文 +5 位作者 饶丹 王静 朱余军 尹雪琴 黄韧 郭鹏举 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第10期59-63,共5页

目的建立快速、敏感、特异的胆汁螺杆菌（Helicobacter bilis,H.bilis）Taq Man探针实时荧光定量PCR检测方法,对胆汁螺杆菌进行定量检测。方法 PCR扩增H.bilis保守基因P17序列全长ORF435 bp,进行TA克隆,构建质粒标准品p MD-HBP17。通过... 目的建立快速、敏感、特异的胆汁螺杆菌（Helicobacter bilis,H.bilis）Taq Man探针实时荧光定量PCR检测方法,对胆汁螺杆菌进行定量检测。方法 PCR扩增H.bilis保守基因P17序列全长ORF435 bp,进行TA克隆,构建质粒标准品p MD-HBP17。通过对p MD-HBP17标准品的定量分析,优化反应体系,检测Taq Man探针实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性及重复性;用所建立的q PCR方法检测77份临床样品,并与普通PCR的检测结果作比对。结果所建立的q PCR检测方法,质粒DNA浓度在10^8-10^1拷贝之间表现出较好的线性和相关性,所得标准曲线的斜率为-3.46,相关系数为0.999,检测灵敏度达到20个拷贝,对77份临床样品的检出率为14.3%,较普通PCR（7.8%）的检出率高。结论建立的H.bilis q PCR检测方法特异性好、敏感性高、稳定性强,可用于胆汁螺杆菌的定量及定性检测。 展开更多

关键词 胆汁螺杆菌(H.bilis) 荧光定量PCR(q PCR) taq man探针

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猪细小病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

17

作者 杨奕 吴发兴 +4 位作者 康京丽 孙洪涛 王志亮 许信刚 张琪 《动物医学进展》 北大核心 2024年第2期75-79,共5页

旨在建立一种猪细小病毒(PPV)快速准确PCR检测方法,根据PPV VP2基因的保守序列设计并合成1对特异性引物和1条特异性探针,建立了可检测PPV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。建立的检测方法敏感性高,最低可检测8.76×10^(1)copies/μL的P... 旨在建立一种猪细小病毒(PPV)快速准确PCR检测方法,根据PPV VP2基因的保守序列设计并合成1对特异性引物和1条特异性探针,建立了可检测PPV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。建立的检测方法敏感性高,最低可检测8.76×10^(1)copies/μL的PPV VP2基因标准品;特异性试验结果显示,该方法检测猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒均无交叉反应;重复性试验组内与组间变异系数均低于2%,重复性良好。用该方法检测102份临床样本,检出阳性样本16份,阳性检出率为15.69%,将检测出的阳性样本进行PCR扩增并测序,证实检测样品中确实存在PPV。该方法敏感性高、特异性强,适用于PPV的定量检测及猪细小病毒病的流行病学调查。 展开更多

关键词 猪细小病毒 VP2 taqman探针 荧光定量PCR

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TaqMan探针双重实时荧光定量PCR法同步检测兰花中的建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒

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作者 孙爱青 王丽花 +3 位作者 张艺萍 杨秀梅 许凤 苏艳 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期219-227,239,共10页

为建立一种同步定量检测建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)的高效检测方法,本研究根据CymMV和ORSV CP基因高度保守区分别设计引物和探针并筛选,获得156 bp和148 bp的靶标... 为建立一种同步定量检测建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)的高效检测方法,本研究根据CymMV和ORSV CP基因高度保守区分别设计引物和探针并筛选,获得156 bp和148 bp的靶标序列及对应的最优特异性引物探针组合,建立了基于TaqMan探针的双重实时荧光定量PCR方法。该方法最低检出限为1拷贝或6.2×10^(-3)fg,最低稳定检出限为10拷贝或6.2×10^(-2)fg,是RT-PCR的10~100倍;构建的标准曲线线性关系良好,扩增效率分别为97.7%和100.2%,相关系数R2分别为1.000和0.999;对其他5种常见病毒均无扩增曲线,检测特异性强;批组内与批组间重复性试验Ct值变异系数≤0.60%,重复性和稳定性好。利用该方法和基因芯片法分别对4个种属的66个兰花样品进行方法验证,该方法相较于基因芯片法检出率提高了53.85%(CymMV)和162.5%(ORSV)。综上所述,本方法可同时高通量检测CymMV和ORSV 2种病毒靶基因,结果可靠,应用前景广阔,可为开展病毒精准鉴定、科学防控以及从源头遏制病毒传播提供技术支撑。 展开更多

关键词 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 taqman探针 RT-QPCR 兰花

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猪瘟病毒实时定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：2

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作者 程敏 郭抗抗 +6 位作者 张彦明 何雷 董玲娟 李维维 刘伟 曹伟伟 张渭东 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期29-33,共5页

为建立一种快速检测猪瘟病毒的基因检测方法,根据GenBank中猪瘟病毒(CSFV)基因组NS2基因序列设计并合成引物和Taq Man探针,通过各项条件优化并以10倍稀释度的质粒为标准品进行实时定量PCR扩增制作标准曲线,建立检测CSFV的实时定量PCR方... 为建立一种快速检测猪瘟病毒的基因检测方法,根据GenBank中猪瘟病毒(CSFV)基因组NS2基因序列设计并合成引物和Taq Man探针,通过各项条件优化并以10倍稀释度的质粒为标准品进行实时定量PCR扩增制作标准曲线,建立检测CSFV的实时定量PCR方法。该方法的检测灵敏度可达每微升10个拷贝,比常规PCR方法的灵敏度高出1个数量级;对标准品质粒检测的线性范围是1.0×109～1.0×101μL-1。对1.0×107、1.0×105、1.0×103μL-13种稀释度的标准品质粒进行重复试验,批内变异系数分别是0.30%、0.85%、0.43%,批间变异系数分别是0.81%、1.36%、0.63%,具有良好的重复性。应用该方法对45份临床样品进行检测,检出26份阳性样品,而常规PCR只检测出19份阳性样品,说明该实时定量PCR方法的敏感性高于常规PCR。可见,该方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,可用于检测病料中的猪瘟病毒。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 实时定量PCR taq man探针

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猴逆转录病毒RT-PCR和Real-time RT-PCR检测方法的建立 被引量：2

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作者 熊炜 蒋静 +5 位作者 张强 盘宝进 李健 魏晓锋 黄忠荣 胡建华 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第12期51-54,共4页

猴逆转录病毒(Simian type D retrovirus,SRV)是引起猴获得性免疫缺陷综合征(Simian acquired immunodeficiency syndrome,SAIDS)的病原之一,其严重危害猴的健康,并威胁与猴接触人员的健康,是无特定病原体(SPF)猴必须排除的病毒之一。... 猴逆转录病毒(Simian type D retrovirus,SRV)是引起猴获得性免疫缺陷综合征(Simian acquired immunodeficiency syndrome,SAIDS)的病原之一,其严重危害猴的健康,并威胁与猴接触人员的健康,是无特定病原体(SPF)猴必须排除的病毒之一。为了应对口岸对进出境野生及实验用灵长类动物SRV感染情况的监测和流行病学调查的需要,建立了RT-PCR和real-time RT-PCR检测SRV的方法,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行了验证。 展开更多

关键词 猴 猴逆转录病毒 RT-PCR REAL-TIME RT-PCR taq man探针

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