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瞬时感受器电位M2通道抗原位点的兔单抗特异性检测
1
作者
骆雨欢
李乐
杨巍
《中国应用生理学杂志》
CAS
CSCD
2016年第2期168-170,共3页
目的:筛选特异性较高的抗体以推动对瞬时感受器电位M2(TRPM2)通道结构和功能的研究。方法:以野生型昆明种小鼠大脑皮层、人胚肾293细胞、未诱导的TRPM2细胞及四环素诱导的TRPM2细胞为标本,采用免疫印迹和免疫荧光方法,以被检测抗体为一...
目的:筛选特异性较高的抗体以推动对瞬时感受器电位M2(TRPM2)通道结构和功能的研究。方法:以野生型昆明种小鼠大脑皮层、人胚肾293细胞、未诱导的TRPM2细胞及四环素诱导的TRPM2细胞为标本,采用免疫印迹和免疫荧光方法,以被检测抗体为一抗,荧光分子结合的抗体为二抗,根据170kD(TRPM2通道蛋白分子量)位置上是否有特异性条带,检测兔单抗的特异性。结果:抗体98927对鼠源TRPM2通道有特异性,抗体40622,抗体98721,抗体98921对人源TRPM2通道有特异性,另外抗体98721对鼠源TRPM2通道的突变型有特异性。结论:作为分子探针,抗体98927、40622、98721、98921可用于TRPM2通道结构和功能研究。
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关键词
trpm
2
通道
兔单抗
特异性
免疫印迹
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职称材料
TRPM2离子通道在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞线粒体损伤中的作用
被引量：
3
2
作者
李军
高晶萍
+7 位作者
张雅琪
罗强
梁亭
李珮瑶
王少华
张瑞华
徐明举
徐彤
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第10期2053-2060,共8页
旨在探讨瞬时电位受体M2离子通道(TRPM2)在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)导致线粒体损伤过程中的作用。在已建立TRPM2 shRNA PMVEC的基础上,采用5MOI H9N2猪流感病毒感染细胞,在病毒作用后24和48 h提取各组细胞的线粒体...
旨在探讨瞬时电位受体M2离子通道(TRPM2)在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)导致线粒体损伤过程中的作用。在已建立TRPM2 shRNA PMVEC的基础上,采用5MOI H9N2猪流感病毒感染细胞,在病毒作用后24和48 h提取各组细胞的线粒体进行蛋白定量,检测各组细胞线粒体超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮合成酶(NOS)、线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性和ATP酶水平;利用激光共聚焦显微镜观察线粒体膜电位变化(JC-1染色)及细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI双染色法)情况。结果表明:H9N2-SIV感染后TRPM2 shRNA PMVEC内SOD活性、GSH水平和Na^+-K^+-ATP、线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性显著高于对照shRNA PMVEC(P<0.05或P<0.01);mtNOS活性则极显著低于shRNA PMVEC(P<0.01)。JC-1染色显示TRPM2-siRNA PMVEC线粒体膜电位水平高于对照shRNA PMVEC,但是AnnexinV-FITC/PI染色显示细胞凋亡则低于H9N2感染对照shRNA PMVEC。结果提示:TRPM2基因沉默有效减缓H9N2感染导致NOS产生,显著降低SOD、GSH、线粒体呼吸链复合物Ⅳ、Na^+-K^+-ATP的消耗以及线粒体膜电位的下降程度,进而有效缓解PMVEC线粒体损伤及细胞凋亡。
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关键词
trpm
2
离子
通道
H9N
2
流感病毒
短发卡RNA
PMEVC
线粒体损伤
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职称材料
针对TRPM2通道开发脑缺血损伤治疗药物
被引量：
1
3
作者
余沛霖
张宜
+4 位作者
余夏飞
叶培武
刘振明
张亮仁
杨巍
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第9期683-683,共1页
目的 TRPM2通道自从1998年被克隆以来,已经被认为是一种氧化应激损伤激活的效应器。近年来研究表明,在神经元、胶质细胞和中性粒细胞中的TRPM2通道均参与脑缺血损伤,提示TRPM2是脑缺血治疗的一个潜在重要靶点。为此,本研究拟开发针对TR...
目的 TRPM2通道自从1998年被克隆以来,已经被认为是一种氧化应激损伤激活的效应器。近年来研究表明,在神经元、胶质细胞和中性粒细胞中的TRPM2通道均参与脑缺血损伤,提示TRPM2是脑缺血治疗的一个潜在重要靶点。为此,本研究拟开发针对TRPM2特异性抑制剂,为临床治疗脑中风患者提供新的候选药物。方法组合运用计算机筛选、化合物结构修饰、分子突变、电生理和高通量筛选等技术,并运用tMCAO模型和TTC染色等进行药效学评价。结果针对TRPM2的配体结合口袋开发系列TRPM2特异抑制剂,电生理结果显示,部分抑制剂具有很好的选择性。药效学评价结果显示,在脑缺血再灌3 h后给药处理能够显著减轻脑缺血损伤。结论开发了系列TRPM2特异性抑制剂,并发现部分化合物能够延长脑缺血损伤治疗时间窗,提示本研究开发的TRPM2特异抑制剂有望成为治疗脑中风的潜在候选药物。
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关键词
trpm
2
通道
脑缺血
抑制剂
TTC染色
氧化应激
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职称材料
题名
瞬时感受器电位M2通道抗原位点的兔单抗特异性检测
1
作者
骆雨欢
李乐
杨巍
机构
浙江工业大学药学院
浙江大学药学院
出处
《中国应用生理学杂志》
CAS
CSCD
2016年第2期168-170,共3页
文摘
目的:筛选特异性较高的抗体以推动对瞬时感受器电位M2(TRPM2)通道结构和功能的研究。方法:以野生型昆明种小鼠大脑皮层、人胚肾293细胞、未诱导的TRPM2细胞及四环素诱导的TRPM2细胞为标本,采用免疫印迹和免疫荧光方法,以被检测抗体为一抗,荧光分子结合的抗体为二抗,根据170kD(TRPM2通道蛋白分子量)位置上是否有特异性条带,检测兔单抗的特异性。结果:抗体98927对鼠源TRPM2通道有特异性,抗体40622,抗体98721,抗体98921对人源TRPM2通道有特异性,另外抗体98721对鼠源TRPM2通道的突变型有特异性。结论:作为分子探针,抗体98927、40622、98721、98921可用于TRPM2通道结构和功能研究。
关键词
trpm
2
通道
兔单抗
特异性
免疫印迹
Keywords
trpm
2
channel
rabbit monoclonal antibody
specificity
Western blot
分类号
R446 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
TRPM2离子通道在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞线粒体损伤中的作用
被引量：
3
2
作者
李军
高晶萍
张雅琪
罗强
梁亭
李珮瑶
王少华
张瑞华
徐明举
徐彤
机构
河北北方学院预防兽医学重点实验室
河北北方学院生命科学研究中心
河北北方学院基础医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第10期2053-2060,共8页
基金
国家自然科学基金(31672522
31602030)
+2 种基金
河北省教育厅自然科学研究重点课题(ZD2019078)
河北省第二期农业现代化产业体系蛋肉鸡创新团队专项经费(HBCT2018150207)
河北自然科学基金(C2019405060)
文摘
旨在探讨瞬时电位受体M2离子通道(TRPM2)在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)导致线粒体损伤过程中的作用。在已建立TRPM2 shRNA PMVEC的基础上,采用5MOI H9N2猪流感病毒感染细胞,在病毒作用后24和48 h提取各组细胞的线粒体进行蛋白定量,检测各组细胞线粒体超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮合成酶(NOS)、线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性和ATP酶水平;利用激光共聚焦显微镜观察线粒体膜电位变化(JC-1染色)及细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI双染色法)情况。结果表明:H9N2-SIV感染后TRPM2 shRNA PMVEC内SOD活性、GSH水平和Na^+-K^+-ATP、线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性显著高于对照shRNA PMVEC(P<0.05或P<0.01);mtNOS活性则极显著低于shRNA PMVEC(P<0.01)。JC-1染色显示TRPM2-siRNA PMVEC线粒体膜电位水平高于对照shRNA PMVEC,但是AnnexinV-FITC/PI染色显示细胞凋亡则低于H9N2感染对照shRNA PMVEC。结果提示:TRPM2基因沉默有效减缓H9N2感染导致NOS产生,显著降低SOD、GSH、线粒体呼吸链复合物Ⅳ、Na^+-K^+-ATP的消耗以及线粒体膜电位的下降程度,进而有效缓解PMVEC线粒体损伤及细胞凋亡。
关键词
trpm
2
离子
通道
H9N
2
流感病毒
短发卡RNA
PMEVC
线粒体损伤
Keywords
transient receptor potential melastatin
2
H9N
2
influenza virus
short hairpin RNA
PMVEC
mitochondrial damage
分类号
S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]
S852.33 [农业科学—兽医学]
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职称材料
题名
针对TRPM2通道开发脑缺血损伤治疗药物
被引量：
1
3
作者
余沛霖
张宜
余夏飞
叶培武
刘振明
张亮仁
杨巍
机构
浙江大学医学院毒理学系
浙江大学神经科学研究所
浙江大学
北京大学药学院
出处
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第9期683-683,共1页
基金
国家蛋白质重大研发计划(2013CB0904)
国家自然科学基金(81371302
+1 种基金
81571127)
浙江省杰出青年基金(LR16H090001).
文摘
目的 TRPM2通道自从1998年被克隆以来,已经被认为是一种氧化应激损伤激活的效应器。近年来研究表明,在神经元、胶质细胞和中性粒细胞中的TRPM2通道均参与脑缺血损伤,提示TRPM2是脑缺血治疗的一个潜在重要靶点。为此,本研究拟开发针对TRPM2特异性抑制剂,为临床治疗脑中风患者提供新的候选药物。方法组合运用计算机筛选、化合物结构修饰、分子突变、电生理和高通量筛选等技术,并运用tMCAO模型和TTC染色等进行药效学评价。结果针对TRPM2的配体结合口袋开发系列TRPM2特异抑制剂,电生理结果显示,部分抑制剂具有很好的选择性。药效学评价结果显示,在脑缺血再灌3 h后给药处理能够显著减轻脑缺血损伤。结论开发了系列TRPM2特异性抑制剂,并发现部分化合物能够延长脑缺血损伤治疗时间窗,提示本研究开发的TRPM2特异抑制剂有望成为治疗脑中风的潜在候选药物。
关键词
trpm
2
通道
脑缺血
抑制剂
TTC染色
氧化应激
分类号
R741 [医药卫生—神经病学与精神病学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
瞬时感受器电位M2通道抗原位点的兔单抗特异性检测
骆雨欢
李乐
杨巍
《中国应用生理学杂志》
CAS
CSCD
2016
0
下载PDF
职称材料
2
TRPM2离子通道在H9N2流感病毒感染小鼠肺微血管内皮细胞线粒体损伤中的作用
李军
高晶萍
张雅琪
罗强
梁亭
李珮瑶
王少华
张瑞华
徐明举
徐彤
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
3
下载PDF
职称材料
3
针对TRPM2通道开发脑缺血损伤治疗药物
余沛霖
张宜
余夏飞
叶培武
刘振明
张亮仁
杨巍
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018
1
下载PDF
职称材料
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