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不同环境因素下原型和修饰型脱氧雪腐镰刀菌烯醇的产量与TRI基因表达量的关系
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作者 朱雪婷 郭文博 +5 位作者 张志岐 孟佳佳 黄晴雯 聂冬霞 韩铮 范楷 《上海农业学报》 2024年第6期103-110,共8页
将禾谷镰刀菌接种小麦,研究不同温度(10、20、30℃)、水活度(0.95、0.98 aw)和培养时间(7、14、21、28、35 d)条件下原型和修饰型脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)的产量以及TRI3、TRI5、TRI6和TRI8等关键TRI基因的表达情况,进... 将禾谷镰刀菌接种小麦,研究不同温度(10、20、30℃)、水活度(0.95、0.98 aw)和培养时间(7、14、21、28、35 d)条件下原型和修饰型脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)的产量以及TRI3、TRI5、TRI6和TRI8等关键TRI基因的表达情况,进而分析两者的关系以及受环境因素单一因素和交互作用的影响。结果表明:原型和修饰型DON产生的最适温度和水活度均为20℃和0.98 aw,大部分基因也在该条件下表达量最高。TRI5基因的表达量与DON和15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-acetyl-deoxynivalenol,15-ADON)的产量显著相关,TRI6和TRI8基因的表达量与DON、3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-acetyl-deoxynivalenol,3-ADON)和15-ADON的产量显著相关,而TRI3的表达量与4种毒素的产量均无显著相关性,脱氧雪腐镰刀菌烯醇-3-葡萄糖苷(Deoxynivalenol-3-glucoside,D3G)的产量与TRI基因的表达量均无显著相关性。温度、水活度和培养时间单一因素及其交互作用均可显著影响DON的产生和TRI基因的表达,而修饰型DON受大多数环境因素的影响比较显著。本研究结果可为农产品中原型及修饰型DON真菌毒素的监管、防控等提供理论和科学依据。 展开更多
关键词 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 修饰型脱氧雪腐镰刀菌烯醇 禾谷镰刀菌 tri基因 环境因素
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脐孢木霉菌中tri基因簇的克隆及tri基因在不同产素水平下的表达分析
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作者 袁小枫 申屠旭萍 俞晓平 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期93-100,共8页
木霉素(trichodermin)是单端孢霉烯类化合物的一种,其对多种植物病原真菌具有较强的抑制作用。为分析脐孢木霉菌Trichoderma brevicompactum tri基因簇中各基因与木霉素合成的关系,本研究首先克隆得到了脐孢木霉菌0248的tri基因簇,其全... 木霉素(trichodermin)是单端孢霉烯类化合物的一种,其对多种植物病原真菌具有较强的抑制作用。为分析脐孢木霉菌Trichoderma brevicompactum tri基因簇中各基因与木霉素合成的关系,本研究首先克隆得到了脐孢木霉菌0248的tri基因簇,其全长24793 bp且含有7个开放阅读框。利用实时荧光定量PCR分析基因簇中各基因在产木霉素能力不同的培养基中表达,结果表明,高产素培养基中tri基因表达量在培养40 h时较高,随后的时间里表达量大幅降低。在低产或不产素培养基中,tri基因在培养40 h时表达量远低于其在高产素的培养基中基因表达量,在52 h时表达量有所提高,但在随后的时间里呈下降趋势,即tri基因簇表达量与木霉素的产量呈正相关。该研究为进一步阐明木霉素合成途径中相关基因的功能和提高脐孢木霉菌0248的生物防治效果奠定了基础。 展开更多
关键词 脐孢木霉菌 木霉素 tri基因 碳源 实时荧光定量PCR
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利用Tri8基因区分中国小麦赤霉病菌的毒素化学型 被引量:3
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作者 刘杨杨 孙海燕 +3 位作者 李伟 邓渊钰 张爱香 陈怀谷 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期1-7,共7页
由镰孢菌(Fusarium spp.)引起的小麦赤霉病在全世界均有发生,我国小麦赤霉病主要由禾谷镰孢菌复合种(Fusarium graminearum species complex,FGSC)所引起,根据产生单族毒素种类分为三种化学型,分别为3-乙酰脱氧雪腐镰孢菌烯醇(3-AcDON)... 由镰孢菌(Fusarium spp.)引起的小麦赤霉病在全世界均有发生,我国小麦赤霉病主要由禾谷镰孢菌复合种(Fusarium graminearum species complex,FGSC)所引起,根据产生单族毒素种类分为三种化学型,分别为3-乙酰脱氧雪腐镰孢菌烯醇(3-AcDON)、15-乙酰脱氧雪腐镰孢菌烯醇(15-AcDON)和雪腐镰孢菌烯醇(NIV)化学型。为了更方便地对禾谷镰孢菌复合种进行化学型的区分,本研究利用三对引物分别扩增了三种化学型菌株的Tri8基因并进行了序列测定,根据不同化学型菌株的基因序列差异,进行了特异性引物设计和筛选。利用设计的引物同时扩增三种化学型的Tri8基因并用AvaI内切酶进行酶切,根据酶切片段的大小区分三种化学型。研究表明该方法可准确有效地区分我国小麦赤霉病菌的化学型。 展开更多
关键词 小麦赤霉病 禾谷镰孢菌 tri8基因 化学型
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哈茨木霉菌Tri101基因的克隆与序列分析 被引量:2
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作者 尹国良 王为民 +2 位作者 沙莎 周琴 俞晓平 《中国计量学院学报》 2010年第2期133-139,共7页
根据拟枝孢镰刀菌等真菌中Tri101的保守序列设计简并引物,利用简并PCR和基因组步行法克隆了哈茨木霉菌Tri101基因.结果表明:Tri101基因的开放阅读框为1 314 bp,无内含子存在,与预计的Tri101序列特征一致.该基因编码蛋白质由437个氨基酸... 根据拟枝孢镰刀菌等真菌中Tri101的保守序列设计简并引物,利用简并PCR和基因组步行法克隆了哈茨木霉菌Tri101基因.结果表明:Tri101基因的开放阅读框为1 314 bp,无内含子存在,与预计的Tri101序列特征一致.该基因编码蛋白质由437个氨基酸组成,预测相对分子质量约为4.75 kD,系统进化树显示其与棒曲霉(Aspergillus clavatus)NRRL 1亲缘关系最近,与NRRL 1中3-O-乙酰转移酶的的蛋白质同源性达到55%.Blast数据库分析表明其属于转移酶总科,单端孢酶烯乙酰转移化酶.以禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)TRI101蛋白(Parent PDB:3b2s Chain:A)的晶体为模板进行了同源建模,为进一步研究该基因的功能奠定基础. 展开更多
关键词 哈茨木霉 tri101基因 基因组步行
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鸡舍环境中tri5基因阳性镰孢菌的分离及其产毒特性 被引量:1
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作者 欧阳毅 孙晓东 +3 位作者 王雅玲 李军 卫峰 吕国忠 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期805-810,共6页
【目的】探讨利用tri5-PCR鉴定产毒镰孢菌的可行性以及tri5阳性菌株的产毒特性和产毒条件。评估鸡舍空气和固体基质中镰孢菌分离株中产单端孢霉烯族毒素潜力的发生率。【方法】利用编码单端孢霉烯族毒素合成酶的起始基因(tri5基因)对13... 【目的】探讨利用tri5-PCR鉴定产毒镰孢菌的可行性以及tri5阳性菌株的产毒特性和产毒条件。评估鸡舍空气和固体基质中镰孢菌分离株中产单端孢霉烯族毒素潜力的发生率。【方法】利用编码单端孢霉烯族毒素合成酶的起始基因(tri5基因)对139株镰孢菌分离株进行PCR检测,并对tri5阳性菌株进行产毒培养,通过免疫亲和柱-高效液相色谱方法来检测培养产物中的T-2毒素和HT-2毒素含量。【结果】共筛选到42株tri5阳性菌株,其中分离自鸡舍空气中的10株tri5阳性菌株经产毒培养后7株菌株产生T-2毒素(1.36-5 ng/mL)或HT-2毒素(6.1-17.1 ng/mL)。在5℃-20℃间隔24 h变温、光照与黑暗间隔24 h交替、前期振荡后期静止的培养条件下培养9 d镰孢菌的产毒量最高;镰孢菌的产毒量与温度和时间显著相关,而与菌丝体干重无显著相关性。【结论】与传统鉴定产毒镰孢菌的方法比较,tri5-PCR更适用于快速、准确地检测大量鸡舍环境样本中的产毒镰孢菌。本研究为养殖环境的产毒镰孢菌的危害预警和控制提供技术支撑和理论依据。 展开更多
关键词 饲养环境 毒素检测 tri5基因 单族毒素
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降解赤霉病菌毒素Tri101基因的原核表达及抗体制备 被引量:1
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作者 闫海霞 杨丽荣 +3 位作者 薛保国 段立清 孙虎 全鑫 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期469-474,共6页
采用RT-PCR方法克隆了编码禾谷镰刀菌单端孢酶烯3-O-乙酰转移酶Tri101基因的cDNA序列,并连接到原核表达载体pGEX-4T2上,将获得的重组载体pGEX-4T2/Tri101转化大肠杆菌BL21后用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明,经IPTG... 采用RT-PCR方法克隆了编码禾谷镰刀菌单端孢酶烯3-O-乙酰转移酶Tri101基因的cDNA序列,并连接到原核表达载体pGEX-4T2上,将获得的重组载体pGEX-4T2/Tri101转化大肠杆菌BL21后用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明,经IPTG诱导后,Tri101基因在大肠杆菌BL21中获得了高效表达,融合蛋白GST-Tri101分子量为75.45 kDa。将该融合蛋白切胶纯化后免疫家兔,制备兔抗GST-Tri101多克隆抗体。经ELISA法测定抗体效价大于1∶256 000。Western blot分析表明制备的抗体与原核细胞体外表达的Tri101蛋白可以特异性结合,表明该抗体的特异性良好。应用该抗体验证了感赤霉病小麦中Tri101基因的表达。兔抗GST-Tri101抗体的成功制备,为进一步研究Tri101的生物学功能、细胞定位以及在其它植物中的表达等奠定了基础。 展开更多
关键词 tri101基因 原核表达 多克隆抗体 WESTERN BLOT
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禾谷镰刀菌降解毒素基因Tri101的克隆和序列分析 被引量:1
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作者 闫海霞 杨丽荣 +3 位作者 薛保国 段立清 孙虎 全鑫 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期128-135,共8页
禾谷镰刀菌Tri101基因编码的单端孢酶烯3-O-乙酰转移酶可通过加乙酰基的形式使禾谷镰刀菌产生的单族毒素(如DON)转变为较低的毒性。本研究利用RT-PCR技术从禾谷镰刀菌0623中扩增并克隆了Tri101基因的cDNA片段,测序结果表明,Tri101基因... 禾谷镰刀菌Tri101基因编码的单端孢酶烯3-O-乙酰转移酶可通过加乙酰基的形式使禾谷镰刀菌产生的单族毒素(如DON)转变为较低的毒性。本研究利用RT-PCR技术从禾谷镰刀菌0623中扩增并克隆了Tri101基因的cDNA片段,测序结果表明,Tri101基因核苷酸序列阅读框架全长1356bp(GenBank序列号:GQ907236),编码451个氨基酸的多肽,推测分子量为49.45kD,等电点为5.14。氨基酸序列同源性比对结果表明,它与Kimura报道的禾谷镰刀菌Tri101氨基酸序列同源性最高,为99.56%,与其它13种镰刀菌的Tri101氨基酸序列的同源性分别为97.91%-75.68%。系统进化树分析结果表明,Fusarium graminearium0623与Fusarium sporotrichioides属于同一进化枝且与Fusarium asiaticum有较近的亲缘关系,而与F.oxysporum、F.moniliforme、F.nygamai、F.nisikadoi和F.decemcellulare的亲缘关系较远。 展开更多
关键词 禾谷镰刀菌 tri101基因 基因克隆 序列分析
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鸡舍环境中镰孢菌的种类分布及潜在产单端孢霉烯族毒素菌株的检测
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作者 欧阳毅 吕国忠 +1 位作者 孙晓东 王雅玲 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期668-675,共8页
采用AGI-30生物采样器收集鸡舍空气样本,同时采集鸡舍中饲料、积尘、土壤和饮用水在内的环境基质样品。采用形态学方法对分离获得的镰孢菌菌株进行鉴定,利用tri5-PCR技术对镰孢菌菌株中产单端孢霉烯族毒素的菌株进行检测,目的是探明鸡... 采用AGI-30生物采样器收集鸡舍空气样本,同时采集鸡舍中饲料、积尘、土壤和饮用水在内的环境基质样品。采用形态学方法对分离获得的镰孢菌菌株进行鉴定,利用tri5-PCR技术对镰孢菌菌株中产单端孢霉烯族毒素的菌株进行检测,目的是探明鸡舍环境中镰孢菌种类的分布特征和产毒菌株。结果表明,从采集的50份样品中分离获得139个镰孢菌菌株,鸡舍空气和基质中的优势菌株均为Fusarium verticillioides;在各基质中,土壤中镰孢菌总浓度最高,为4×102-1.35×104CFU/g,其次为饲料和饮用水;采用tri5-PCR技术筛选到42株tri5阳性镰孢菌菌株,其中以F.graminearum所占比例最高。研究明确鸡舍中镰孢菌种类及其分布特征对鸡只疾病控制及保障人类和动物的健康具有重要意义。 展开更多
关键词 鸡舍基质 tri5基因 镰孢菌 单端孢霉烯族毒素
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降解赤霉病菌毒素的Tri101基因研究进展
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作者 闫海霞 杨丽荣 +2 位作者 薛保国 段立清 全鑫 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第6期11-14,共4页
概述了降解赤霉病菌毒素的Tri101基因的结构和功能,并对其近几年在转基因方面的研究进展做一综述,探讨食物和饲料中真菌毒素经济、高效和安全的净化方法,进而提高作物产量和食品安全性,避免真菌毒素在健康方面给人类造成的不良影响。
关键词 赤霉病菌毒素 单端孢酶烯 tri101基因 结构 表达
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