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鸭坦布苏病毒E基因环介导等温扩增检测方法的建立与应用 被引量：10
1
作者 欧全宾 刁有祥 +2 位作者 唐熠 高绪慧 于春梅 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1329-1332,共4页
根据GenBank发布的坦布苏病毒Bagaza毒株E基因的保守序列设计1套引物,建立了环介导等温扩增快速检测鸭坦布苏病毒的方法。该检测方法的敏感性可达10拷贝/μL;对鸭坦布苏病毒山东分离株的检测呈阳性,而对鸭瘟病毒、禽流感病毒(H9亚型)、... 根据GenBank发布的坦布苏病毒Bagaza毒株E基因的保守序列设计1套引物,建立了环介导等温扩增快速检测鸭坦布苏病毒的方法。该检测方法的敏感性可达10拷贝/μL;对鸭坦布苏病毒山东分离株的检测呈阳性,而对鸭瘟病毒、禽流感病毒(H9亚型)、鸭新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、减蛋综合征病毒扩增结果均为阴性;应用该方法对山东省各地采集的82份疑似病料进行检测,可检出72份阳性。表明本试验所建立的环介导等温扩增检测方法灵敏性高、特异性强、操作简便快速,可用于鸭坦布苏病毒病的临床诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 坦布苏病毒 E基因 环介导等温扩增 荧光染料
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坦布苏病毒Du/CH/LSD/110128株原代毒及其鸡胚传代致弱毒在不同物种细胞中毒性和增殖能力的检测 被引量：2
2
作者 梁雨萌 马勇 +3 位作者 陈志杰 吴寒光 刘胜旺 李海 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第5期15-19,25,148,共7页
为了寻找坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)致病机制的研究模型,试验利用实时荧光定量PCR技术检测坦布苏病毒Du/CH/LSD/110128株原代毒CF1及其鸡胚传代致弱毒CF100在不同物种细胞中的增殖情况,并将CF1与CF100分别在鸭胚中传代以检测病毒... 为了寻找坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)致病机制的研究模型,试验利用实时荧光定量PCR技术检测坦布苏病毒Du/CH/LSD/110128株原代毒CF1及其鸡胚传代致弱毒CF100在不同物种细胞中的增殖情况,并将CF1与CF100分别在鸭胚中传代以检测病毒对鸭胚的损伤情况。结果表明:CF1可在禽类细胞、哺乳类细胞中增殖,但不引起细胞损伤,CF100在禽类细胞、哺乳类细胞中不能增殖,只能在Vero细胞中增殖,且不引起细胞损伤;CF1和CF100在鸭胚中传代发现,传代CF1的鸭胚全身出现明显的出血,但传代CF100的鸭胚未见出血。说明相对于原代毒CF1,鸡胚传代毒CF100对细胞、鸭胚的损伤均降低,具有一定的安全性,可作为坦布苏病毒致病机制的研究模型。 展开更多
关键词 坦布苏病毒(Tembusu virus tmuv) 病毒感染 实时荧光定量PCR 病毒增殖 致细胞病变效应 研究模型
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一株肉种鸡坦布苏病毒的分离鉴定及致病特点研究
3
作者 王友 李培勇 段宝敏 《家禽科学》 2024年第6期17-26,I0008,I0009,共12页
2010年坦布苏病毒传入我国,对我国养鸭业造成损失。随后发现,此病毒也能够感染鸡群,对养鸡场生物安全形成威胁。本研究从发生不明原因产蛋率下降的肉种鸡中分离到一株坦布苏病毒HB20210株,发病鸡群主要剖检病变为卵泡膜出血和卵泡液化... 2010年坦布苏病毒传入我国,对我国养鸭业造成损失。随后发现,此病毒也能够感染鸡群,对养鸡场生物安全形成威胁。本研究从发生不明原因产蛋率下降的肉种鸡中分离到一株坦布苏病毒HB20210株,发病鸡群主要剖检病变为卵泡膜出血和卵泡液化等生殖系统病变。将分离株接种到DF-1细胞和SPF鸡胚中,48 h后即可出现明显病变。动物试验结果表明,胸肌注射、颈部皮下注射和灌服的攻毒方式造成的病毒血症持续时间均为5 d。将分离株进行肉种鸡回归试验,卵泡会出现显著病变。E蛋白氨基酸同源性和进化树分析表明,分离株HB202010与活疫苗FX2010-180P株、灭活疫苗DF2株、HB株属于同一分支,均为中国分离株II分支,并且与灭活疫苗DF2株和HB株同源性最高,可达99.0%。HB20210株的分离鉴定为进一步探讨该病毒对种鸡产蛋性能的影响和完善种鸡场防控方法奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 tmuv 肉种鸡 分离鉴定
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鸭坦布苏病毒自然感染病例的诊断与病理学观察 被引量：3
4
作者 罗晓宇 嵇辛勤 +6 位作者 阮涌 段志强 龙丹丹 王晗晗 安而立 胡焱 田宇杰 《中国兽药杂志》 2023年第6期1-9,共9页
为探究鸭坦布苏病毒(DTMUV)在贵州省鸭群的流行,对疑似DTMUV感染肉种鸭进行剖检,观察发病鸭内脏器官病变。取病鸭内脏组织进行RT-PCR检测确诊为DTMUV感染,将病料处理后接种BHK-21细胞,进行RT-PCR鉴定和透射电镜观察,确定分离到DTMUV,并... 为探究鸭坦布苏病毒(DTMUV)在贵州省鸭群的流行,对疑似DTMUV感染肉种鸭进行剖检,观察发病鸭内脏器官病变。取病鸭内脏组织进行RT-PCR检测确诊为DTMUV感染,将病料处理后接种BHK-21细胞,进行RT-PCR鉴定和透射电镜观察,确定分离到DTMUV,并将病料组织制作病理切片。结果显示,接种BHK-21出现明显CPE,电镜观察见病毒颗粒。将分离毒株的E基因经PCR扩增后测序,分析E基因氨基酸序列的同源性,发现所分离毒株与中国北京鸭源参考株同源性最高达99.39%,而与我国早期分离参考株(FX2010)同源性较低,将病料制作切片并进行HE染色,可见脑组织非化脓性脑炎,脾脏淋巴细胞减少,肝细胞变性坏死。本研究成功在贵州省分离到一株DTMUV,对其遗传进化进行分析,为探究贵州省养鸭地区DTMUV的感染和致病提供参考。 展开更多
关键词 鸭 坦布苏病毒 自然感染 病理组织
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应用二重实时荧光定量RT-PCR鉴别坦布苏病毒与产蛋下降综合征病毒 被引量：9
5
作者 曾婷婷 谢芝勋 +6 位作者 谢丽基 邓显文 谢志勤 罗思思 刘加波 黄莉 黄娇玲 《中国家禽》 北大核心 2015年第1期17-21,共5页
为更加快速敏感地对两种导致产蛋下降的禽类病毒：坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒进行鉴别,试验建立了一套二重实时荧光定量RT-PCR方法。通过针对两种病毒的特异保守序列,设计两套引物和探针,分别标记不同的荧光基团和淬灭基团,并优化... 为更加快速敏感地对两种导致产蛋下降的禽类病毒：坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒进行鉴别,试验建立了一套二重实时荧光定量RT-PCR方法。通过针对两种病毒的特异保守序列,设计两套引物和探针,分别标记不同的荧光基团和淬灭基团,并优化反应体系。结果显示：建立的二重实时荧光定量RT-PCR方法只扩增这两种病毒的目的片段,无交叉扩增反应,与其他常见禽类病原体也无扩增反应;该检测体系最低可同时检测100个拷贝的坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒,比常规PCR和RT-PCR敏感10~100倍;检测30份样品,共检出7份EDSV阳性,6份TMUV阳性,与病毒分离结果符合。表明建立的二重实时荧光定量RT-PCR方法可以快速、敏感、特异地鉴别诊断坦布苏病毒和产蛋下降综合征病毒。 展开更多
关键词 坦布苏病毒 产蛋下降综合征病毒 荧光探针 鉴别
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种公鸡精液在坦布苏病毒感染传播中的作用 被引量：2
6
作者 陈珍 施少华 +6 位作者 刘荣昌 蔡国漳 傅光华 陈翠腾 朱春华 刘斌琼 黄瑜 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1275-1279,共5页
利用建立的(RT-)PCR方法对35份表现产蛋下降、受精率低下的种母鸡卵巢组织和140份用于人工授精种公鸡的精液进行病毒感染检测。结果仅检出坦布苏病毒阳性,其阳性率分别为100.0%和57.8%;以建立的间接ELISA方法对该种鸡群的320份种母鸡血... 利用建立的(RT-)PCR方法对35份表现产蛋下降、受精率低下的种母鸡卵巢组织和140份用于人工授精种公鸡的精液进行病毒感染检测。结果仅检出坦布苏病毒阳性,其阳性率分别为100.0%和57.8%;以建立的间接ELISA方法对该种鸡群的320份种母鸡血清和140份种公鸡血清检测坦布苏病毒抗体,其阳性率分别为100.0%和69.3%。以上结果表明,该种鸡群的种母鸡和种公鸡均感染坦布苏病毒。以自精液中分离的坦布苏病毒人工感染成年公鸡,5d后在其精液中检测到坦布苏病毒,第14天在其血清中检测到坦布苏病毒抗体;以检测为坦布苏病毒阳性的精液通过人工授精给开产蛋鸡后出现产蛋率下降,并在其卵巢和血清中分别检测到坦布苏病毒及其特异性抗体。可见,种公鸡也可感染坦布苏病毒,且可通过精液以人工授精方式水平传播给开产蛋鸡并造成产蛋下降。因此,应加强种公鸡坦布苏病毒感染的监测,并将其纳入种鸡场垂直传播疫病控制与净化计划中。 展开更多
关键词 公鸡精液 坦布苏病毒 传播作用
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鸭坦布苏病毒JS2010株全基因组的克隆及序列分析 被引量：2
7
作者 靳宇田 张小飞 +1 位作者 黄显明 尹秀凤 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1249-1253,共5页
为进一步认识鸭坦布苏病毒(DTMUV)的分子特征,了解该病毒的遗传进化关系,根据GenBank上登录的DTMUV基因组序列设计并合成了11对引物,通过RT-PCR方法对DTMUV JS2010株的基因组序列进行分段扩增并测序。结果显示,该病毒全基因序列长10 990... 为进一步认识鸭坦布苏病毒(DTMUV)的分子特征,了解该病毒的遗传进化关系,根据GenBank上登录的DTMUV基因组序列设计并合成了11对引物,通过RT-PCR方法对DTMUV JS2010株的基因组序列进行分段扩增并测序。结果显示,该病毒全基因序列长10 990nt(GenBank登录号:JX273153),具有一个10 278nt的蛋白编码序列。全基因组序列分析表明,JS2010株与DTMUV参考毒株的核苷酸序列同源性为99.2%～99.6%,氨基酸序列同源性为99.2%～99.8%。E基因序列比对和系统进化树分析发现JS2010株与黄病毒属Ntaya病毒群的Tembusu病毒的同源性为87.7%～99.5%,与同属的Bagaza病毒、Ntaya病毒的同源性分别为70.5%和75.6%,表明JS2010株与Ntaya病毒群,特别是与Tembusu病毒有很高的亲缘关系。 展开更多
关键词 鸭 坦布苏病毒 基因组 序列分析
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禽坦布苏病毒截短E蛋白单克隆抗体的制备及其抗原性分析 被引量：1
8
作者 王丹丹 张曦 +4 位作者 郎咸勇 黄孝志 莫开昆 周继勇 廖敏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期805-813,共9页
为制备禽坦布苏病毒囊膜E蛋白截短蛋白的单克隆抗体并分析其抗原性,以坦布苏病毒YY1分离株的cDNA为模板,通过RT-PCR扩增编码截短E蛋白的基因,并将其成功克隆到原核表达载体pET-28a(+)中。重组载体pET-28a(+)-YY1E转化的大肠杆菌BL21(pLy... 为制备禽坦布苏病毒囊膜E蛋白截短蛋白的单克隆抗体并分析其抗原性,以坦布苏病毒YY1分离株的cDNA为模板,通过RT-PCR扩增编码截短E蛋白的基因,并将其成功克隆到原核表达载体pET-28a(+)中。重组载体pET-28a(+)-YY1E转化的大肠杆菌BL21(pLysS)在IPTG诱导下高效表达重组蛋白His-YY1E,该蛋白可与坦布苏病毒感染鸭的血清反应。用纯化的His-YY1E免疫小鼠制备单克隆抗体,采用有限稀释法经过3轮筛选和鉴定最终获得了2株分泌抗E蛋白的单克隆抗体细胞株1C5和3B11。制备的单克隆抗体与原核表达和病毒感染细胞中的E蛋白均能反应。进一步通过转染截短蛋白E不同区域截短体与pEGFP-C3构建的重组载体,并经IFA检测,发现单克隆抗体1C5和3B11识别的截短E抗原区域位于C端35个氨基酸(105个碱基)之间。本研究为进一步研究坦布苏病毒E蛋白的功能,研制坦布苏病毒病亚单位疫苗以及建立快速特异的坦布苏病毒检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 坦布苏病毒 截短囊膜E蛋白 单克隆抗体 抗原性
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