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靶向siRNA抑制TLR9表达对放射抗拒肺癌A549细胞辐射敏感性的影响 被引量：1
1
作者 高彩霞 乔田奎 +1 位作者 张彬 袁素娟 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期806-810,831,共6页
目的 旨在研究抑制放射抗拒肺癌A549的TLR9表达对其辐射敏感性的影响。方法 以放射抗拒肺癌A549（R-A549）细胞为研究对象，利用脂质体转染技术将靶向siRNA转染至R-A549细胞，Western blot验证；给予0、2、4、6和8 Gy X射线照射后，进... 目的 旨在研究抑制放射抗拒肺癌A549的TLR9表达对其辐射敏感性的影响。方法 以放射抗拒肺癌A549（R-A549）细胞为研究对象，利用脂质体转染技术将靶向siRNA转染至R-A549细胞，Western blot验证；给予0、2、4、6和8 Gy X射线照射后，进行细胞克隆集落计数并绘制细胞存活曲线，经过单击多靶模型拟合，得到A549细胞、R-A549细胞、阴性siRNA转染细胞和TLR9 siRNA转染细胞照射的D0、Dq、N值；对4组细胞增殖能力进行测定。对R-A549细胞、阴性siRNA转染细胞和TLR9 siRNA转染细胞X射线10 Gy照射前后流式细胞周期分析，进一步说明抑制TLR9表达对R-A549细胞辐射敏感性的影响。结果 TLR9 siRNA成功抑制R-A549细胞TLR9表达，照射后其细胞克隆形成率降低，与R-A549细胞的放射增敏比（SERD0）达到1.37，而A549细胞与R-A549 细胞的SERD0为1.09；照射后TLR9 siRNA转染细胞较R-A549细胞G2/M期分布增加（t=4.323，P〈0.05），而TLR9 siRNA转染细胞G1/G0期分布少于R-A549细胞，差异有统计学意义（t=7.616，P〈0.05）。结论 siRNA可以抑制TLR9表达，降低照射后R-A549细胞的克隆形成，提高放射增敏比；照射后更多细胞发生G2/M期阻滞，同时G1/G0期细胞减少也有效抑制了照射后细胞潜在致死性损伤的修复，因此，具有辐射增敏的作用。 展开更多
关键词 tlr9表达 放射抗拒肺癌A549细胞 靶向SIRNA 辐射敏感性
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传染性单核细胞增多症儿童外周血中TLR9 mRNA及γδ-TCR型DNT细胞的表达 被引量：1
2
作者 吴振奎 钟丽花 +1 位作者 刘延霞 刘玉玲 《贵州医科大学学报》 CAS 2020年第9期1077-1081,共5页
目的:探讨传染性单核细胞增多症(IM)儿童中外周血中Toll受体9(TLR9)、γδ-TCR型双阴性T细胞(DNT)的表达。方法:90例IM患儿作为研究对象,其中急性期50例作为急性期组、恢复期40例作为稳定期组,30例同期健康体检儿童作为对照组;IM患儿于... 目的:探讨传染性单核细胞增多症(IM)儿童中外周血中Toll受体9(TLR9)、γδ-TCR型双阴性T细胞(DNT)的表达。方法:90例IM患儿作为研究对象,其中急性期50例作为急性期组、恢复期40例作为稳定期组,30例同期健康体检儿童作为对照组;IM患儿于入院时、对照组儿童于体检当日抽取外周血,采用流式细胞检测淋巴细胞表型[CD3^+、CD3^+CD8^+、CD3^+CD4^+、CD4/CD8、CD3^-CD(16+56)^+、CD3^-CD19^+]及γδ-TCR型DNT细胞表达,采用实时荧光定量PCR检测TLR 9 mRNA表达水平。结果:外周血CD3^+、CD3^+CD8^+及TLR 9 mRNA水平比较,急性期组间>稳定期组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05),外周血CD3^+CD4^+、CD4/CD8、CD3^-CD(16+56)^+及CD3^-CD19^+水平比较,急性期组<稳定期组<对照组,差异有统计学意义(P<0.05);对照组、稳定期组及急性期组儿童的外周血中均有DNT细胞表达,为(γ+δ)+TCR型,且急性期组>稳定期组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:IM患儿机体免疫机制失衡,这种免疫失衡在IM急性期更为显著,主要表现为TLR9表达上调及特异性(γ+δ)+TCR型DNT细胞表达升高。 展开更多
关键词 儿童 传染性单核细胞增多症 tlr9 基因相对表达量 γδ-TCR型DNT细胞 临床意义研究
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稳定表达外源TLR9基因的山羊胎儿成纤维细胞系的建立
3
作者 刘太安 房永祥 +7 位作者 贾怀杰 马保华 何小兵 管齐赛 陈国华 曾爽 姚文娟 景志忠 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期605-611,共7页
为提供制备抗病转基因山羊核供体细胞,研究Toll样受体9(Toll like receptor 9,TLR9)对山羊抗病性能的影响,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从山羊外周血单核细胞中克隆了TLR9基因,并对其遗传进化关系及分子结构特征进行了分析,... 为提供制备抗病转基因山羊核供体细胞,研究Toll样受体9(Toll like receptor 9,TLR9)对山羊抗病性能的影响,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从山羊外周血单核细胞中克隆了TLR9基因,并对其遗传进化关系及分子结构特征进行了分析,发现克隆的基因具有Toll样受体家族的典型结构特征,其遗传进化关系与物种亲缘关系密切相关。将克隆的山羊TLR9基因亚克隆至pIRES2-EGFP真核表达载体,转染山羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选以及阳性细胞基因组PCR鉴定和荧光观察证实,外源TLR9基因确已稳定整合入转染阳性细胞克隆基因组中并获得表达。成功建立了稳定表达外源TLR9的山羊胎儿成纤维细胞系,为培育抗病转基因山羊奠定了基础。 展开更多
关键词 tlr9基因 转基因山羊 山羊胎儿成纤维细胞 稳定表达
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鲫TLR9基因克隆及生殖因素对其在肠道表达的影响 被引量：2
4
作者 王俊丽 郝光 +4 位作者 雒燕婷 刘臻 孔祥会 李学军 聂国兴 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期432-441,共10页
为揭示Toll样受体家族基因TLR9在鲫(Carassius auratus L.,缩写为Ca)免疫过程中的作用,本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆获得了鲫TLR9(CaTLR9)基因cDNA,并就注射外源性人绒毛膜促性激素(hCG)和不同性腺周期对该基因在鲫肠道表达的影响进... 为揭示Toll样受体家族基因TLR9在鲫(Carassius auratus L.,缩写为Ca)免疫过程中的作用,本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆获得了鲫TLR9(CaTLR9)基因cDNA,并就注射外源性人绒毛膜促性激素(hCG)和不同性腺周期对该基因在鲫肠道表达的影响进行了分析。结果表明,CaTLR9 cDNA全长3 509 bp,包含3 195 bp的开放阅读框(ORF)、72 bp的5′非编码区和242 bp的3′非编码区。ORF编码1 064个氨基酸组成的蛋白质。该蛋白包含19个氨基酸组成的信号肽,15个富含亮氨酸的重复结构域(LRR),1个跨膜区和1个TIR结构域。系统进化分析表明,CaTLR9与其他鲤科鱼类同源性较高,与鲤(Cyprinus carpio)相似度为92%,其次是草鱼(Ctenopharyngodon idella)和斑马鱼(Danio rerio),分别为83%和79%。实时荧光定量PCR结果表明,CaTLR9在鲫脾中表达量最高,其次为肾和鳃,其他组织的表达量均较低。鲫肠道TLR9在非繁殖期的表达水平明显低于繁殖期,注射适当剂量的外源hCG可显著上调鲫肠道TLR9的表达。本研究对揭示鲫非特异性免疫能力调节机制,提高鲫健康养殖水平具有一定参考价值。 展开更多
关键词 鲫 tlr9 克隆 性腺周期 生殖 基因表达 肠道
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牦牛Toll样受体8和9基因克隆及组织表达分析 被引量：2
5
作者 黄勇 兰道亮 +3 位作者 陈亚冰 林宝山 黄偲 李键 《动物医学进展》 北大核心 2015年第6期34-38,共5页
为了解牦牛Toll样受体8(TLR8)和9(TLR9)蛋白的结构特征及其基因的组织表达规律,丰富牦牛TLRs基因研究的理论数据,应用RT-PCR方法克隆牦牛TLR8、TLR9基因,并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR技术构建组织表达谱。结果显示,两个基... 为了解牦牛Toll样受体8(TLR8)和9(TLR9)蛋白的结构特征及其基因的组织表达规律,丰富牦牛TLRs基因研究的理论数据,应用RT-PCR方法克隆牦牛TLR8、TLR9基因,并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR技术构建组织表达谱。结果显示,两个基因cDNA全长分别为3 102bp和3 090bp。牦牛TLR8和TLR9基因与野牦牛、黄牛和绵羊之间的同源性都很高,均在95%以上。牦牛TLR8和TLR9蛋白都具有胞外LRRs功能域、胞内区TIR结构域、低复杂度区;另外,TLR8还具有1个C端富集亮氨酸重复序列(LRRCT)和跨膜结构域。两个基因在10个组织中均有不同程度的表达,在肾脏中表达量最高,而在大肠中表达量最低。本研究成功克隆了牦牛TLR8和TLR9基因的完整编码区,并揭示了它们在各组织器官的表达规律,为进一步研究TLRs在牦牛体内的免疫机制奠定了基础。 展开更多
关键词 牦牛 Toll样受体8 TOLL样受体9 克隆 表达
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Toll-like Receptor9在大鼠胰腺表达及与大鼠急性胰腺炎相关性的研究 被引量：1
6
作者 曾玉剑 罗华友 +1 位作者 郭姝婧 施承民 《昆明医科大学学报》 CAS 2014年第8期20-25,共6页
目的 (1)建立急性胰腺炎大鼠模型,定性检测Toll-like Receptor 9(TLR 9)在大鼠胰腺的表达、分布情况;(2)定量测定TLR 9在大鼠急性胰腺炎不同时间点的表达变化情况;(3)结合TLR 9在大鼠胰腺的组织分布、表达情况及在雨蛙素诱导性胰腺炎(ce... 目的 (1)建立急性胰腺炎大鼠模型,定性检测Toll-like Receptor 9(TLR 9)在大鼠胰腺的表达、分布情况;(2)定量测定TLR 9在大鼠急性胰腺炎不同时间点的表达变化情况;(3)结合TLR 9在大鼠胰腺的组织分布、表达情况及在雨蛙素诱导性胰腺炎(cerulein-induced pancreatitis,CIP)早期24 h的表达改变,探讨TLR9与CIP发生发展的相关性.方法(1)采用Wistar大鼠,并随机分配进入实验组或对照组;通过皮下注射雨蛙素建立急性胰腺炎模型;(2)采用免疫组化方法检测TLR 9在正常大鼠胰腺及CIP时大鼠胰腺的表达TLR 9在大鼠胰腺的组织分布情况;(3)提取总RNA,采用实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应(Quantitative-Real-Time;QRT-PCR)法测定TLR9基因的表达.(4)分析TLR9的分布特征及可能的意义(5)统计分析TLR 9 mRNA的表达情况与CIP发生、发展的关系.结果 (1)TLR 9主要分布于胰管上皮、血管内皮和胰岛;(2)外分泌腺泡细胞没有明显的表达;(3)QRT-PCR结果显示TLR9 mRNA在正常大鼠胰腺组织呈现低水平表达;(4)CIP早期TLR9 mRNA表达出现快速上调并在1 h时达到最高值;TLR 9 mRNA表达在CIP前4 h内维持于高水平;其后下降缓慢,至到CIP的第24小时也未降至正常,保持相对较高的表达水平.结论 (1)TLR 9在大鼠胰腺有表达,且表达具有一定的组织特异性;(2)TLR9在CIP胰腺组织中的表达明显升高,提示TLR 9在胰腺炎早期炎症反应的发生、发展中具有重要作用,与之存在相关性. 展开更多
关键词 TOLL-LIKE Receptor9 胰腺炎 大鼠 表达 意义
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