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牛传染性鼻气管炎病毒TK基因缺失株与野毒株PCR鉴别诊断方法的研究 被引量：19
1
作者 张桂红 童光志 +5 位作者 王柳 仇华吉 赵晓岩 张绍杰 于力 刘宝全 《中国兽医科技》 CSCD 1999年第5期3-5,共3页
根据已发表的牛传染性鼻气管炎病毒（ＩＢＲＶ）ＴＫ基因和ｇＢ基因序列，应用Ｏｌｉｇｏ４．１程序设计两对引物ＰＴＫ１和ＰＴＫ２及ＰＢ１和ＰＢ２，分别对已构建的ＴＫ基因缺失（ＴＫ－）ＩＢＲＶ以及ＩＢＲＶＬＡ株、洛精、美精、... 根据已发表的牛传染性鼻气管炎病毒（ＩＢＲＶ）ＴＫ基因和ｇＢ基因序列，应用Ｏｌｉｇｏ４．１程序设计两对引物ＰＴＫ１和ＰＴＫ２及ＰＢ１和ＰＢ２，分别对已构建的ＴＫ基因缺失（ＴＫ－）ＩＢＲＶ以及ＩＢＲＶＬＡ株、洛精、美精、ＢａｒｔｈａＮｕ／６７株、Ｂ７株、云南１和云南２分离株进行了ＰＣＲ扩增。结果显示７株ＩＢＲＶＤＮＡ用引物ＰＴＫ１和ＰＴＫ２扩增均产生４５７ｂｐ的特异性片段，而ＴＫ－ＩＢＲＶ只出现１１０ｂｐ片段；用引物ＰＢ１和ＰＢ２对７株ＩＢＲＶＤＮＡ及ＴＫ－ＩＢＲＶＤＮＡ进行扩增均产生３３９ｂｐ的特异性片段；用此引物对其同属的伪狂犬病毒（ＰＲＶ）、马立克氏病毒（ＭＤＶ）、鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）进行扩增，均未见特异性条带，从而证明该引物是特异的；ＰＣＲ的敏感性检测表明，该法可检测出３ｐｇ的病毒ＤＮＡ。所建立的方法可以鉴别野毒与ＴＫ－ＩＢＲＶ疫苗毒的感染。 展开更多
关键词 牛 传染性鼻气管炎 病毒 PCR 鉴别诊断 tk基因
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TK基因联合mIL-2基因治疗胃癌的实验研究 被引量：18
2
作者 郭善禹 顾琴龙 +3 位作者 刘炳亚 朱正纲 尹浩然 林言箴 《世界华人消化杂志》 CAS 2000年第9期974-978,共5页
目的通过转基因方法观察自杀基因 TK 对小鼠胃癌的杀伤作用,并联合 mIL-2基因,观察免疫反应在增强 TK 杀伤性中的作用.方法应用逆转录病毒方法转导自杀基因 TK,应用脂质体方法转导细胞因子基因 mIL-2.通过体外实验观察 TK 基因对小鼠胃... 目的通过转基因方法观察自杀基因 TK 对小鼠胃癌的杀伤作用,并联合 mIL-2基因,观察免疫反应在增强 TK 杀伤性中的作用.方法应用逆转录病毒方法转导自杀基因 TK,应用脂质体方法转导细胞因子基因 mIL-2.通过体外实验观察 TK 基因对小鼠胃癌 MFC 细胞的杀伤性和旁观者效应;体内实验中首先在615小鼠建立胃癌模型,然后分组将病毒上清注入瘤体内,并结合应用前药和 mIL-2基因,分别观察它们对肿瘤的杀伤作用.通过病理切片观察组织病理变化;应用免疫组化方法观察 T 淋巴细胞亚群在局部的聚集情况.结果 TK 基因在体外即显出明显的杀伤作用,20%的转基因细胞可以杀伤70%～80%以上的肿瘤细胞.体内实验表明 TK基因结合前药 GCV 可显著杀伤肿瘤,而 TK 基因本身并无杀伤作用(P=0.046).联合 mIL-2后抗肿瘤作用进一步加强,部分肿瘤完全消退(P=0.005).免疫组化显示 CD_4^+,CD_8^+细胞在局部聚集.结论自杀基因 TK 联合前药 GCV 对小鼠胃癌产生显著杀伤作用,不仅转基因细胞被杀死,而且通过旁观者效应杀伤大量周围细胞.细胞因子基因 mIL-2可增强 TK 的抗肿瘤作用. 展开更多
关键词 胃肿瘤 治疗 tk基因 mIL-2基因 基因治疗
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牛传染性鼻气管炎病毒 TK 基因缺失株的构建 被引量：11
3
作者 张桂红 童光志 +5 位作者 王柳 仇华吉 赵晓岩 张绍杰 于力 刘宝全 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第4期275-277,共3页
将含有牛传染性鼻气管炎病毒（ Ｉ Ｂ Ｒ Ｖ） Ｔ Ｋ 基因的片段克隆于ｐ Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｓ Ｋ 中， 再用 Ｂｇ１ Ⅱ和 Ｓａｃ Ｉ切去 Ｔ Ｋ 基因中３４７ｂｐ 的片段， 获得了含缺失 Ｔ Ｋ 基因的重组质粒， 然后插入 Ｌａｃ ... 将含有牛传染性鼻气管炎病毒（ Ｉ Ｂ Ｒ Ｖ） Ｔ Ｋ 基因的片段克隆于ｐ Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｓ Ｋ 中， 再用 Ｂｇ１ Ⅱ和 Ｓａｃ Ｉ切去 Ｔ Ｋ 基因中３４７ｂｐ 的片段， 获得了含缺失 Ｔ Ｋ 基因的重组质粒， 然后插入 Ｌａｃ Ｚ 报告基因， 构建成转移载体。以脂质体转染法将此转移载体与 Ｉ Ｂ Ｒ Ｖ Ｂａｒｔｈａ 株在牛肾细胞（ Ｍ Ｄ Ｂ Ｋ） 上共转染， 经过蓝色蚀斑筛选和蚀斑克隆纯化， 获得了能稳定遗传的重组 Ｉ Ｂ Ｒ Ｖ。经 Ｐ Ｃ Ｒ 和 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 印迹杂交鉴定， 证实该重组病毒为 Ｔ Ｋ 基因缺失突变株。 展开更多
关键词 IRRV 牛 鼻气管炎病毒 tk基因 基因缺失株
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传染性喉气管炎病毒中国王岗株tk基因的克隆及鉴定 被引量：9
4
作者 张绍杰 于力 +2 位作者 王玫 王柳 童光志 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1994年第3期236-241,共6页
以质粒pBluescript SK^+为载体克隆传染性喉气管炎病毒(ILTV）中国王岗株的DNA,构建了THind Ⅲ DNA文库。参考ILTV美国632株胸苷激酶（tk）基因的DNA序列,设计并合成了一对20bp长的引物;以ILTV中国王岗株DNA为模板,用PCR方法特异性地扩... 以质粒pBluescript SK^+为载体克隆传染性喉气管炎病毒(ILTV）中国王岗株的DNA,构建了THind Ⅲ DNA文库。参考ILTV美国632株胸苷激酶（tk）基因的DNA序列,设计并合成了一对20bp长的引物;以ILTV中国王岗株DNA为模板,用PCR方法特异性地扩增出ILTV-713bp的tk DNA片段。用光敏生物素标记该713bp片段作为探针,通过斑点杂交从ILTV中国王岗株Hind Ⅲ DNA文库中筛选出4个含2.4kb外源片段的tk基因阳性重组质粒。经酶切分析、Southern杂交、PCR检测和部分限制酶酶谱分析表明:ILTV中国王岗株DNA 2.4 kb Hind Ⅲ 片段无论是片段大小还是酶切图谱均与美国632株完全相同,而且Southern杂交和PCR检测均为tk阳性,证明其中包含有完整的tk基因。本研究的目标是用克隆的tk基因进行体外缺失和重组,以构建毒力进一步降低的tk缺失减毒株,这些工作正在进行中。 展开更多
关键词 喉气管炎病毒 tk基因 PCR 重组
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应用聚合酶链反应扩增鸡传染性喉气管炎病毒TK基因的研究 被引量：13
5
作者 刘加波 谢芝勋 +2 位作者 谢志勤 庞耀珊 邓显文 《中国兽医科技》 CSCD 2000年第4期10-12,共3页
根据鸡传染性喉气管炎病毒 (ILTV)TK基因的核苷酸序列设计并合成 1对引物 ,用该引物对 4株不同的ILTV进行PCR扩增。结果全部ILTV毒株均获得与试验设计相符的 64 7bp的扩增片段 ,而对其它 6种禽病原体的扩增结果均为阴性 ;敏感试验表明 ... 根据鸡传染性喉气管炎病毒 (ILTV)TK基因的核苷酸序列设计并合成 1对引物 ,用该引物对 4株不同的ILTV进行PCR扩增。结果全部ILTV毒株均获得与试验设计相符的 64 7bp的扩增片段 ,而对其它 6种禽病原体的扩增结果均为阴性 ;敏感试验表明 ,该引物能检出 10pg的ILTVDNA。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒 tk基因 PCR 检测 鉴别
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伪狂犬病病毒BJ/YT株毒力相关基因gE和TK序列分析 被引量：15
6
作者 钟承 刘蕾 +5 位作者 张乐天 王巨实 王安琦 陆宝生 杨万莲 吕艳丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期73-79,共7页
本试验对2012年从北京地区约克夏犬体内分离得到的伪狂犬病病毒（PRV）BJ/YT株主要毒力基因gE和TK的分子特征和进化关系进行了分析。结果显示,BJ/YT株gE基因与参考序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.9%～100.0%和98.3%～100.0%;TK基... 本试验对2012年从北京地区约克夏犬体内分离得到的伪狂犬病病毒（PRV）BJ/YT株主要毒力基因gE和TK的分子特征和进化关系进行了分析。结果显示,BJ/YT株gE基因与参考序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.9%～100.0%和98.3%～100.0%;TK基因核苷酸和氨基酸同源性分别为99.2%～99.9%和99.0%～100.0%。BJ/YT株与同期河北猪源分离株进化关系较近,各毒株之间同源性高,并且存在一致的核苷酸突变位点;与其他参考序列比对分析结果显示,BJ/YT株主要毒力基因存在变异位点,但这些位点均不在已知的主要功能区和抗原表位区内。因此,从分子流行病学角度来看,BJ/YT毒株是近年北京及其周边地区PRV流行毒株,但gE和TK基因的变异对流行毒株的毒力无明显影响。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 BJ/YT株 GE基因 tk基因 序列分析
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2013-2018年广西地区猪伪狂犬病病毒gB、gE与TK基因遗传变异分析 被引量：14
7
作者 赵硕 王若木 +7 位作者 党佳佳 许力士 秦树英 薛辉 韦祖樟 陈樱 欧阳康 黄伟坚 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期810-819,共10页
为了解广西近年猪伪狂犬病(PR)流行情况及猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株gB、gE、TK基因的遗传变异特点,于2013-2018年采集广西各地区疑似PR发病猪靶组织714份,进行PRV的PCR检测及病毒分离鉴定,并运用DNAStar、MEGA 6.0等生物学软件对分离毒... 为了解广西近年猪伪狂犬病(PR)流行情况及猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株gB、gE、TK基因的遗传变异特点,于2013-2018年采集广西各地区疑似PR发病猪靶组织714份,进行PRV的PCR检测及病毒分离鉴定,并运用DNAStar、MEGA 6.0等生物学软件对分离毒株gB、gE、TK基因进行遗传变异分析。结果显示:样品检测阳性率为24.5%(175/714),共分离获得PRV流行株38株。受检猪群普遍存在PRV感染,经典毒株及变异毒株并存,而且以变异毒株为主。广西流行株不同亚群PRV在gB、gE、TK基因上均存在相同的氨基酸变异特点,与国内变异株亲缘关系较近。推测广西流行株存在两种不同重组变异形式产生的PRV重组毒株,分别为疫苗株gB基因和变异株gE基因重组产生的重组毒株,以及经典株的TK基因被疫苗株(HB98)的TK基因替换而产生的重组毒株。近年广西受检猪场较普遍存在PRV感染,而且PRV流行株以变异毒株为主,可能存在两种不同重组变异形式产生的重组毒株,猪场需重视及实施针对性PR免疫防控计划。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒(PRV) GB基因 GE基因 tk基因 序列分析 遗传变异
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表达H5N1亚型禽流感病毒HA和NA基因的重组鸭瘟病毒的构建 被引量：11
8
作者 胡潇 高轩 +2 位作者 王明杰 赵冬凤 李明义 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第5期22-25,共4页
利用PCR技术扩增出鸭瘟病毒(DPV)生长非必需的TK基因(约1.1kb),将其克隆入pGEM-Teasy载体获得载体pGTK。根据已知的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1的序列设计了一对引物,PCR扩增出pEGFP-C1上含CMV启动子、EGFP及其多克隆位点的完整的基因表... 利用PCR技术扩增出鸭瘟病毒(DPV)生长非必需的TK基因(约1.1kb),将其克隆入pGEM-Teasy载体获得载体pGTK。根据已知的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1的序列设计了一对引物,PCR扩增出pEGFP-C1上含CMV启动子、EGFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入pGTK的TK上,获得质粒pGTK-EGFP。根据Genbank已发表的H5N1亚型禽流感病毒的血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因序列,设计了两对引物,分别从pT-HA和pT-NA两个质粒上扩增出HA和NA基因,克隆到pGTK-EGFP的表达盒的多克隆位点Kpn2I与SmaI之间,构建含EGFP及HA和NA基因的转移质粒载体pGTK-EGFP-HA-NA。将这质粒载体与DPV34F2疫苗毒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过荧光方法筛选,获得了表达HA和NA基因的重组DPV(rDPV-HA-NA)。 展开更多
关键词 禽流感病毒 鸭瘟病毒 tk基因 HA和NA基因 重组病毒
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2012-2014年河南省猪伪狂犬病病毒gE基因和TK基因的遗传变异分析 被引量：13
9
作者 李宁 吴志明 +6 位作者 闫若潜 赵雪丽 王淑娟 马震原 周兵强 刘毅 张珂 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1653-1657,共5页
为了解河南地区猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株的遗传变异情况,本研究对2012-2014年14株河南PRV分离株的2个主要毒力基因gE和TK进行扩增、克隆测序和遗传进化分析。结果显示:14株河南分离株的gE基因氨基酸同源性为95.7%~99.8%,与2012年之前... 为了解河南地区猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株的遗传变异情况,本研究对2012-2014年14株河南PRV分离株的2个主要毒力基因gE和TK进行扩增、克隆测序和遗传进化分析。结果显示:14株河南分离株的gE基因氨基酸同源性为95.7%~99.8%,与2012年之前国内分离的毒株同源性较低(96.6%~98.9%),并在多个部位存在碱基的插入与替换,与2012年之后中国流行的毒株的同源性较高(除XX1外同源性为98.7%~99.5%);14株TK基因的氨基酸同源性为98.1%~100.0%,与疫苗株Bartha株同源性为98.1%~99.4%,与2012年之后流行株的氨基酸同源性为98.4%~99.7%。进化树分析显示:PRV流行毒株gE基因和TK基因均可分为3个群,与国内分离的大多数毒株同处于基因1群。分析结果表明:14个分离株与ZJ-01株、TJ株亲缘关系较近,与Ea株、Min-A株、LA株次之,与Becker株、Kaplan株和P-Prv株亲缘关系较远。TK基因较为保守,gE基因存在很多点突变,提示可能是当前流行毒株毒力增强从而导致当前疫苗免疫保护力下降的主要原因。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 GE基因 tk基因 遗传变异分析
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锦鲤疱疹病毒GZ1301株的分离与鉴定 被引量：13
10
作者 李莹莹 王庆 +6 位作者 曾伟伟 潘厚军 王英英 刘春 梁红茹 石存斌 吴淑勤 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1159-1166,共8页
2013年4月,广东省一锦鲤养殖场暴发不明病因疾病,濒死锦鲤在塘边游动缓慢直至死亡,死亡率高达100%。现场采样发现,发病锦鲤体长25 cm,眼球凹陷,胸鳍及腹鳍出现出血斑点,解剖发现内脏器官包括肝、脾、肾肿大。细菌分离结果显示,内脏器官... 2013年4月,广东省一锦鲤养殖场暴发不明病因疾病,濒死锦鲤在塘边游动缓慢直至死亡,死亡率高达100%。现场采样发现,发病锦鲤体长25 cm,眼球凹陷,胸鳍及腹鳍出现出血斑点,解剖发现内脏器官包括肝、脾、肾肿大。细菌分离结果显示,内脏器官肝脏和肾脏中未分离到细菌。提取自然发病鱼的肝、脾、肾、鳃组织DNA作为模板,采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的锦鲤疱疹病毒(KHV)检测引物进行PCR扩增,均能扩增出预期大小的特异性产物。NCBI的Blast搜索结果显示,扩增序列与KHV胸苷激酶(thymidine kinase,TK)基因核苷酸序列同源性为99%。病鱼内脏组织研磨过滤除菌后,腹腔注射20尾锦鲤,可复制出与自然发病相似的症状,并于7 d内全部死亡。取病鱼的鳃和肾脏研磨过滤除菌后进行细胞感染实验,结果显示,组织滤液感染CCB细胞后,盲传5代可以观察到典型的细胞病变效应(CPE)。将出现典型CPE的CCB细胞进行超薄切片制备和电镜观察,电镜下病毒呈对称20面体,直径约100 nm。将出现典型CPE的细胞进行间接免疫荧光实验,可以观察到特异性荧光。根据TK基因全长序列建立系统进化树,证实该毒株为KHV亚洲型毒株,暂命名为KHV-GZ1301株。研究结果可为KHV起源进化、分类以及疾病防控提供重要材料。 展开更多
关键词 锦鲤 锦鲤疱疹病毒 tk基因 病毒鉴定
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含绿色荧光蛋白基因和猪瘟E_2基因的伪狂犬病毒Bartha-K_(61)株TK基因缺失转移载体的构建 被引量：11
11
作者 范伟兴 张雪莲 +2 位作者 魏荣 赵宏坤 陈溥言 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第3期3-8,共6页
提取伪狂犬病毒 ( PRV) Bartha- K6 1 株基因组 DNA为 PCR扩增模板 ,并根据 Genbank已发表的 PRV Kaplan株 UL区 UL2 5、U L2 4、U L2 3、U L2 2基因序列 ,选择保守序列设计了两对引物 ,这两对引物分别扩增出位于 UL2 3( TK)两侧 (含部... 提取伪狂犬病毒 ( PRV) Bartha- K6 1 株基因组 DNA为 PCR扩增模板 ,并根据 Genbank已发表的 PRV Kaplan株 UL区 UL2 5、U L2 4、U L2 3、U L2 2基因序列 ,选择保守序列设计了两对引物 ,这两对引物分别扩增出位于 UL2 3( TK)两侧 (含部分TK基因 )的可用于同源重组的左臂片段 ( L )和右臂片段 ( R) ,L包括部分 UL 2 5、全部 UL 2 4、部分 TK,R包括部分 TK及部分U L2 2 ,L 和 R的拼接片段中 TK基因内部缺失 2 70个核苷酸。将 L 片段和 R片段克隆于 p Bluescript M13-载体上 ,获得p SKL R;再将绿色荧光蛋白载体 p EGFP- C1上含 GFP及其多克隆位点的完整的基因表达盒插入 p SKL R的 L 片段和 R片段之间构成转移载体 p SKL KG;又将猪瘟病毒 1.2 3 kb的 E2 ( CSFV- E2 )基因片段插入 p SKL RG的多克隆位点的 Bg1 与 Pst 之间获得转移载体 p SKL 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白基因 伪狂犬病 伪狂犬病毒Bartha-K61株 tk基因 EGFP基因 猪瘟病毒E2基因 基因缺失 转移载体 疫苗
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wt-p53基因联合HSV-TK/GCV对C6鼠胶质瘤杀伤作用的实验研究 被引量：9
12
作者 黄强 浦佩玉 +5 位作者 夏之柏 蒋元文 尤永平 张云亭 王春燕 王广秀 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2005年第5期269-273,共5页
目的研究wtp53基因联合自杀基因治疗恶性胶质瘤的可行性。方法体外试验以腺病毒为载体转导wtp53和HSVTK入C6鼠胶质瘤细胞,给以不同浓度的GCV,以MTT法检测细胞生存率。体内实验以C6鼠胶质瘤细胞和SD大鼠建立动物模型,原位注射腺病毒为载... 目的研究wtp53基因联合自杀基因治疗恶性胶质瘤的可行性。方法体外试验以腺病毒为载体转导wtp53和HSVTK入C6鼠胶质瘤细胞,给以不同浓度的GCV,以MTT法检测细胞生存率。体内实验以C6鼠胶质瘤细胞和SD大鼠建立动物模型,原位注射腺病毒为载体的wtp53和HSVTK基因,腹腔给以GCV(15mg.kg-1day-1×14)。观察荷瘤鼠生存期;强化MRI动态监测荷瘤鼠肿瘤大小;TUNEL法检测凋亡。结果wtp53基因明显提高鼠胶质瘤细胞对HSVTK/GCV的敏感性,p53联合HSVTK基因转染C6的GCVID100=0.01μg.ml-1,而单独HSVTK转染C6的GCVID100=1μg.ml-1,约提高100倍;p53基因还可使C6细胞凋亡增加。体内p53基因联合HSVTK/GCV治疗使荷瘤鼠生存期明显延长,凋亡明显增加(P<0.001);强化MRI示4周肿瘤消失。结论p53基因和HSVTK基因的联合基因治疗可作为临床上优化自杀基因治疗方案的一种可能选择。 展开更多
关键词 tk/GCV p53基因 HSV 实验研究 杀伤作用 胶质瘤细胞 自杀基因治疗 MTT法检测 TUNEL法 联合基因治疗 tk基因 恶性胶质瘤 细胞生存率 荷瘤鼠 体外试验 不同浓度 动物模型 SD大鼠 体内实验 肿瘤大小 动态监测 基因转染 细胞凋亡
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鸭瘟病毒的分离鉴定及其UL2、TK基因序列分析 被引量：12
13
作者 刘荣昌 黄瑜 +7 位作者 卢荣辉 傅秋玲 江斌 万春和 傅光华 程龙飞 施少华 陈红梅 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2016年第12期1257-1261,共5页
2015年,福建省福州地区2个鸭场(M18肉鸭场及蛋鸭场)发生大量鸭死亡,初诊疑似鸭瘟。为明确其病原,分别采集病死鸭肝脏、食道样品进行鸭瘟病毒特异性PCR检测和病毒分离,对获得的2株病毒分离株分别进行鸭已知病原的检测,确定均为鸭瘟病毒... 2015年,福建省福州地区2个鸭场(M18肉鸭场及蛋鸭场)发生大量鸭死亡,初诊疑似鸭瘟。为明确其病原,分别采集病死鸭肝脏、食道样品进行鸭瘟病毒特异性PCR检测和病毒分离,对获得的2株病毒分离株分别进行鸭已知病原的检测,确定均为鸭瘟病毒。对新分离鉴定的2株鸭瘟病毒株的UL2基因进行序列测定及分析发现,均具有强毒株的分子特征;经TK基因序列测定及分析表明,2株新分离的鸭瘟病毒株与强毒代表株、弱毒疫苗株的TK基因核苷酸同源性均高达98.7%。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 分离鉴定 UL2基因 tk基因 序列分析
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应用Cre-loxP系统构建伪狂犬病病毒gE/TK双缺失株 被引量：12
14
作者 梁苑燕 胡艳芬 +3 位作者 张小荣 陈素娟 彭大新 刘秀梵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1802-1809,共8页
为了构建无报告基因的猪伪狂犬病病毒(PRV)gE/TK双缺失株,以PRV-JSZ株为亲本毒株,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,先构建出带有loxP位点的rPRV-gE-/GFP,通过Cre重组酶处理后,获得剔除EG-FP的gE单缺失株rPRV-gE-;再以rPRV-gE-为母本... 为了构建无报告基因的猪伪狂犬病病毒(PRV)gE/TK双缺失株,以PRV-JSZ株为亲本毒株,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,先构建出带有loxP位点的rPRV-gE-/GFP,通过Cre重组酶处理后,获得剔除EG-FP的gE单缺失株rPRV-gE-;再以rPRV-gE-为母本,以相同方法构建gE/TK双缺失株rPRV-gE-/TK-。荧光检测和PCR结果显示成功构建了gE单缺失株和gE/TK双缺失株;病毒生长曲线测定可见rPRV-gE-在PK15细胞上的增殖速度与野生株相似,而rPRV-gE-/TK-较为缓慢;rPRV-gE-/TK-对小鼠的半数致死量大于1×105 TCID50,显著高于rPRV-gE-和野生株;缺失株免疫小鼠强毒攻击后能提供80%的保护。这些结果表明以Cre/loxP系统可重复使用构建伪狂犬病病毒多基因缺失株,为研制伪狂犬病病毒基因缺失苗和载体疫苗提供了快速筛选的技术平台。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 GE基因 tk基因 重组病毒
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伪狂犬病病毒鄂A株TK基因的克隆及其鉴定 被引量：11
15
作者 周复春 陈焕春 +1 位作者 方六荣 吴斌 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期417-420,共4页
合成了 １ 对能对伪狂犬病病毒（ Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ ｖｉｒｕｓ， Ｐ Ｒ Ｖ） Ｔ Ｋ（ｔｈｙｍ ｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ）基因＋ １１９～＋ １ ０７１区进行特异扩增的引物，用猪 Ｐ Ｒ Ｖ 鄂 Ａ 株细胞培养物提取的基因组... 合成了 １ 对能对伪狂犬病病毒（ Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ ｖｉｒｕｓ， Ｐ Ｒ Ｖ） Ｔ Ｋ（ｔｈｙｍ ｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ）基因＋ １１９～＋ １ ０７１区进行特异扩增的引物，用猪 Ｐ Ｒ Ｖ 鄂 Ａ 株细胞培养物提取的基因组作模板，扩增出 ９５３ ｂｐ 长的片段，用地高辛标记该片段作探针，通过 Ｓｏｕｔｈ ｅｒｎ 杂交，从克隆有 Ｐ Ｒ Ｖ 鄂 Ａ 株的 Ｂａｍ Ｈ Ｉ片段的重组质粒中钓出含 Ｔ Ｋ 基因的重组质粒 ｐ Ｓ Ｔ Ｋ。对 ｐ Ｓ Ｔ Ｋ 进行酶切分析，绘制了含 Ｔ Ｋ 基因的 Ｂａｍ Ｈ Ｉ片段的图谱，通过测序得出了 Ｔ Ｋ 基因的全序列。将该序列与 Ｐ Ｒ Ｖ Ｎ Ｉ Ａ３ 株 Ｔ Ｋ 基因进行比较，发现鄂 Ａ 株的 Ｔ Ｋ 基因存在变异。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 鄂A株 tk基因 克隆
全文增补中
大黄酸对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞TK基因的致突变作用 被引量：12
16
作者 笪红远 曾文 +3 位作者 江振洲 程安春 张陆勇 刘国卿 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1858-1860,共3页
目的评价大黄酸对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞TK基因的致突变作用。方法小鼠淋巴瘤细胞在代谢活化或非代谢活化条件下暴露于50、200、350、500μg/mL大黄酸3 h,处理后第2天将细胞接种于含有突变选择剂三氟胸苷的96孔板中,计数各剂量组的突变... 目的评价大黄酸对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞TK基因的致突变作用。方法小鼠淋巴瘤细胞在代谢活化或非代谢活化条件下暴露于50、200、350、500μg/mL大黄酸3 h,处理后第2天将细胞接种于含有突变选择剂三氟胸苷的96孔板中,计数各剂量组的突变细胞集落数。通过计算第0天的相对存活率(relative survival,RS)、相对悬浮增长率(relative suspension growth,RSG)和相对总增长率(relative total growth,RTG)确定细胞毒性。用MUTANT软件包计算各种细胞毒性参数和突变率,并对突变率数据进行统计分析。结果在非代谢活化条件下,50、200、350、500μg/mL的大黄酸均未见诱导L5178Y细胞的突变率增加,阳性对照组诱导的突变率显著增加;在代谢活化条件下,大黄酸350μg/mL剂量组诱导L5178Y细胞的突变率增加,阳性对照组诱导的突变率显著增加。结论在非代谢活化条件下大黄酸各剂量组对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞TK基因无致突变作用;在肝微粒体酶系S9代谢活化条件下,出现了弱致突变性。 展开更多
关键词 大黄酸 L5178Y细胞 tk基因
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猪伪狂犬病病毒山西株胸苷激酶基因序列分析 被引量：11
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作者 樊振华 孟帆 +6 位作者 吴忻 刘文俊 姚敬明 王娟萍 韩一超 米瑞娟 雷宇平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期12-17,共6页
采用PCR方法对2011—2013年山西省分离的2株猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的胸苷激酶(TK)基因进行了克隆和测序,并将其基因序列和推导的氨基酸序列与国内外主要流行毒株Bartha株、Becker株、Ea株、Kaplan株、LA株、Min-A株、N... 采用PCR方法对2011—2013年山西省分离的2株猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的胸苷激酶(TK)基因进行了克隆和测序,并将其基因序列和推导的氨基酸序列与国内外主要流行毒株Bartha株、Becker株、Ea株、Kaplan株、LA株、Min-A株、NIA-3株、SH株、SL株和Yangsan株进行了同源性分析。序列分析结果表明,核苷酸同源性分别为99.7%、99.6%、99.8%、99.7%、99.7%、94.4%、99.1%、57.2%、99.5%、99.7%;氨基酸同源性分别为99.1%、99.1%、99.7%、99.4%、99.4%、90.3%、98.1%、49.7%、98.8%、99.1%。另外在核苷酸序列中起始密码子上游有3段GC box的序列,终止密码子下游有多聚腺苷加尾信号AATAAA;TK基因均由320个氨基酸组成,氨基酸序列中有疱疹病毒TK基因共同的保守序列-R*Y*DG**G*GK*T-和-FDRHP*A***C*P*AR-。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 tk基因 变异分析
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鸡传染性喉气管炎病毒可视化LAMP快速诊断方法的建立和应用 被引量：11
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作者 谢晶 于吉锋 +7 位作者 周泷 曹冶 林毅 李兴玉 肖璐 叶勇刚 潘梦 康润敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第2期565-572,共8页
试验旨在建立简易、快速、高效的鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)检测和诊断方法。根据GenBank上公布的ILTV TK基因序列,设计检测ILTV的特异性环介导的等温扩增(loop media-ted isothermal amplificatio... 试验旨在建立简易、快速、高效的鸡传染性喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus,ILTV)检测和诊断方法。根据GenBank上公布的ILTV TK基因序列,设计检测ILTV的特异性环介导的等温扩增(loop media-ted isothermal amplification,LAMP)技术反应引物,通过对LAMP反应体系和反应条件的优化,以及特异性、敏感性和临床样品的检测,建立了ILTV LAMP检测方法。结果显示,以内引物ILT9-FIP和ILT9-BIP、外引物ILT9-F3和ILT9-B3、环引物ILT9-LB和ILT9-LF为LAMP反应引物,反应温度为66℃时,所建立的LAMP检测方法反应效率最高;所建立的LAMP检测方法能够特异性地检测ILTV(匈牙利株和王岗株),不与新城疫病毒(NDV,B株)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV,H52株和H120株)、大肠杆菌、鸡副嗜血杆菌、巴氏杆菌等发生交叉反应,且能够检测到的病毒最低浓度达到0.06pg/μL,其灵敏度是普通PCR方法的100倍;采用建立LAMP方法对50个临床样本进行检测,阳性率为14%,且与PCR检测结果的符合率达96%。本研究建立了特异性强、灵敏度高、操作简单的LAMP检测方法,适用于临床上ILTV的快速检测和诊断。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV) 环介导的等温扩增技术(LAMP) tk基因
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传染性喉气管炎病毒烟台株TK基因序列测定及TK蛋白功能初步分析 被引量：10
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作者 刘文波 周斌 +3 位作者 黄兵 张秀美 张素芳 陈溥言 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2005年第10期75-79,共5页
根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)美国632株TK基因序列设计并合成1对引物,以ILTV烟台株DNA为模板扩增了TK基因,并对其进行了序列测定.将ILTV烟台株的TK基因和TK蛋白分别与ILTV美国632株,英国Thorne株,Beijing E2株,BHV-1,EHV-1,EHV-2,FHV-1... 根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)美国632株TK基因序列设计并合成1对引物,以ILTV烟台株DNA为模板扩增了TK基因,并对其进行了序列测定.将ILTV烟台株的TK基因和TK蛋白分别与ILTV美国632株,英国Thorne株,Beijing E2株,BHV-1,EHV-1,EHV-2,FHV-1,HHV-1,HHV-2,HHV-3,HHV-4,HVT,MDV-1,MDV-2,PRV和SHV-2的TK基因和TK蛋白比较后发现,其TK基因的核苷酸和TK蛋白的氨基酸同源性分别为24.6%～99.5%和15.1%～98.9%,表明不同ILTV毒株之间TK基因和TK蛋白相对保守,但与其他α-疱疹病毒的TK基因和TK蛋白同源性则较低. 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 烟台株 tk基因 同源性分析
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江西省猪伪狂犬病原流行病学调查及其gB、gE及TK基因遗传变异分析 被引量：9
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作者 李海琴 康昭风 +2 位作者 谭美芳 曾艳兵 季华员 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期332-339,共8页
为了解江西省猪伪狂犬病原流行情况及遗传变异情况,对2017—2018年收集的疑似伪狂犬样品,以1对针对猪伪狂犬病毒gE基因的检测引物进行病原检测,并随机挑选15株PRV阳性样品,对PRV病毒复制必需的糖蛋白gB基因和主要毒力基因gE与TK基因克... 为了解江西省猪伪狂犬病原流行情况及遗传变异情况,对2017—2018年收集的疑似伪狂犬样品,以1对针对猪伪狂犬病毒gE基因的检测引物进行病原检测,并随机挑选15株PRV阳性样品,对PRV病毒复制必需的糖蛋白gB基因和主要毒力基因gE与TK基因克隆测序及遗传进化分析,用以探究其遗传变异关系。临床结果显示:猪伪狂犬病毒检出率由2017年的4.76%PRV gB/gE/TK全基因序列遗传进化分析结果表明:调查的15株伪狂犬病毒毒株与中国株处于同一分支,与美国株Bartha差异较大。核苷酸同源性分析结果表明:15株PRV gB基因相互间同源性为98.9%～100%;与参考毒株的gB基因的同源性96.7%～100%;gE基因相互间同源性为99.1%～100%;与参考毒株的gE基因的同源性98.1%～100%;TK基因变异相对较小,相互间同源性为100%,与参考PRV毒株的gE基因的同源性99.1%～100%。研究结果表明,gB基因和gE基因存在较多的变异,可能是当前流行毒株抗原变异及毒力增强从而使现有疫苗免疫保护力不佳的主要原因。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 GB基因 GE基因 tk基因 遗传进化
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