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苯并[a]芘恶性转化细胞THBEc1致裸小鼠原位肺癌模型的构建及血清人源神经纤维网蛋白2对该模型的诊断价值
1
作者 邢云昆 马雪 +3 位作者 姚碧云 付娟玲 赵鹏 祁妍敏 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第11期853-860,共8页
目的建立苯并[a]芘(BaP)恶性转化人支气管上皮细胞T-16HBE-C1(THBEc1)的裸小鼠原位肺癌模型,评估血清人源神经纤维网蛋白2(NRP2)对该模型的诊断价值。方法12只雄性ICR小鼠随机分为3组,右肺分别一次性注射无菌生理盐水20,30和40μL,观察1... 目的建立苯并[a]芘(BaP)恶性转化人支气管上皮细胞T-16HBE-C1(THBEc1)的裸小鼠原位肺癌模型,评估血清人源神经纤维网蛋白2(NRP2)对该模型的诊断价值。方法12只雄性ICR小鼠随机分为3组,右肺分别一次性注射无菌生理盐水20,30和40μL,观察14 d内小鼠死亡数,以确定小鼠肺内注射安全体积。16只雄性BALB/c-nu裸小鼠随机分为4组:对照组[皮下和肺内同时一次性接种人支气管上皮16HBE(HBE)细胞,皮下1×10^(6),肺内2×10^(5)]、皮下荷瘤模型组(皮下一次性接种THBEc1细胞1×10^(6))、原位肺癌模型组(肺内一次性接种THBEc1细胞2×10^(5)或5×10^(5))。接种后每7 d监测小鼠体重和皮下肿瘤体积;HE染色检测肺肿瘤和皮下肿瘤组织病理特征,计算成瘤率;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测裸小鼠血清和胸水中人源NRP2水平;采用受试者工作特征(ROC)曲线确定血清人源NRP2对THBEc1细胞导致的裸小鼠原位肺癌模型的诊断价值。结果肺内注射40μL无菌生理盐水可致2/4小鼠死亡,20和30μL组未见小鼠死亡,但整体表现欠佳,故后续实验注射体积选择20μL。对照组裸小鼠均未在接种部位检出肿瘤,小鼠体重持续增长;皮下荷瘤模型组祼小鼠全部成瘤,体重显著低于对照组(P<0.05)。接种细胞后第10天,原位肺癌模型5×10^(5)细胞组裸小鼠全部成瘤(4/4);第14天,原位肺癌模型2×10^(5)细胞组裸小鼠3/4成瘤,且2个剂量组小鼠体重均低于对照组(P<0.01,P<0.05),肿瘤组织均呈鳞状细胞癌特征。ELISA结果显示,对照组裸小鼠血清人源NRP2水平均显著低于皮下荷瘤模型(4只)和原位肺癌模型(7只)裸小鼠(P<0.05)。原位肺癌模型组(4只)裸小鼠胸水中均可检出高水平的人源NRP2。ROC曲线显示,血清人源NRP2水平能有效区分THBEc1细胞在裸小鼠肺内是否成瘤,最佳截断值为123.00 ng·L^(-1)。结论通过肺内注射接种THBEc1细胞建立了裸小鼠原位肺癌模型,血清人源NRP2可用于� 展开更多
关键词 原位肺癌模型 BALB/c-nu裸小鼠 神经纤维网蛋白2 thbec1细胞
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叉头框蛋白A1基因敲除对苯并[a]芘恶性转化细胞THBEc1转录组的影响 被引量：1
2
作者 马雪 李璐迪 +4 位作者 王裕 邢云昆 付娟玲 姚碧云 赵鹏 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2022年第3期185-196,共12页
目的 研究叉头框蛋白A1(FOXA1)基因敲除对苯并[a]芘(BaP)恶性转化细胞THBEc1转录组的影响,探讨FOXA1在BaP致癌作用中的可能机制。方法 以FOXA1敲除细胞THBEc1-ΔFOXA1-c34和对照细胞THBEc1-ctrl为研究模型,采用Western印迹法测定FOXA1... 目的 研究叉头框蛋白A1(FOXA1)基因敲除对苯并[a]芘(BaP)恶性转化细胞THBEc1转录组的影响,探讨FOXA1在BaP致癌作用中的可能机制。方法 以FOXA1敲除细胞THBEc1-ΔFOXA1-c34和对照细胞THBEc1-ctrl为研究模型,采用Western印迹法测定FOXA1蛋白表达水平,分别采用克隆形成实验和Transwell实验测定细胞增殖和迁移能力。采用二代测序技术检测THBEc1-ΔFOXA1-c34与THBEc1-ctrl细胞间差异表达基因,并通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)对转录组测序结果进行验证。采用DAVID数据库对差异表达基因进行基因本体论(GO)和京都基因与基因百科全书(KEGG)通路富集分析。采用STRING 11.5数据库和Cytoscape 3.8.2对差异基因编码蛋白进行网络分析。结果 THBEc1-ΔFOXA1-c34细胞未检出FOXA1表达,且增殖和迁移能力均低于THBEc1-ctrl(P<0.01)。转录组差异分析共检出1332个基因在THBEc1-ΔFOXA1-c34与THBEc1-ctrl细胞间的表达差异倍数>2或<0.5(错误发现率<0.05),其中691个基因在THBEc1-ΔFOXA1-c34中表达高于THBEc1-ctrl,641个基因在THBEc1-ΔFOXA1-c34中表达低于THBEc1-ctrl。RT-qPCR验证的47个基因的表达差异和统计学P值与转录组测序结果一致。差异表达基因涉及多种生物学过程,主要包括血管生成、细胞增殖、迁移、黏附、炎症反应、免疫应答、信号转导[包括肿瘤坏死因子(TNF)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B和转化生长因子β(TGF-β)等通路]和代谢等。在349个差异表达基因所编码的蛋白质形成的相互作用网络中,共发现分别以C-C趋化因子配体3(CCL3)、O-聚糖合酶葡糖胺基(N-乙酰基)转移酶3(GCNT3)、基质金属蛋白酶3(MMP3)和卷曲蛋白8(FZD8)为种子节点的4个核心功能模块。核心功能模块主要参与免疫应答和炎症反应、O-聚糖加工、胶原分解代谢过程以及典型WNT通路等。结论 敲除FOXA1后BaP恶性转化细胞THBEc1转录组明显改变,增殖和迁移能� 展开更多
关键词 苯并[A]芘 叉头框蛋白A1 thbec1细胞
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ALCAM基因敲除对苯并[a]芘恶性转化细胞THBEc1转录组的影响
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作者 李璐迪 陈洁 +4 位作者 周川 马雪 付娟玲 姚碧云 赵鹏 《毒理学杂志》 CAS CSCD 2021年第1期5-9,共5页
目的检测活化白细胞黏附分子(ALCAM)基因敲除后苯并[a]芘(BaP)恶性转化细胞THBEc1转录组的改变,探究ALCAM在BaP致癌中的作用,为进一步阐明BaP致癌机制提供线索。方法选择两株ALCAM基因纯合敲除THBEc1细胞THBEc1-ΔALCAM-c5和THBEc1-ΔAL... 目的检测活化白细胞黏附分子(ALCAM)基因敲除后苯并[a]芘(BaP)恶性转化细胞THBEc1转录组的改变,探究ALCAM在BaP致癌中的作用,为进一步阐明BaP致癌机制提供线索。方法选择两株ALCAM基因纯合敲除THBEc1细胞THBEc1-ΔALCAM-c5和THBEc1-ΔALCAM-c7及一株敲除对照细胞THBEc1-ctrl作为模型,利用转录组测序技术筛选细胞间差异表达基因,使用DAVID数据库对差异表达基因进行GO分析和KEGG通路富集分析。利用克隆形成实验检测ALCAM敲除对THBEc1细胞增殖的影响。结果转录组测序共发现336个基因在两株ALCAM敲除THBEc1细胞和THBEc1-ctrl细胞中表达差异在2倍以上(FDR<0.05),其中62个基因在两株ALCAM敲除THBEc1细胞中的表达低于THBEc1-ctrl细胞,274个基因在两株ALCAM敲除THBEc1细胞中的表达高于THBEc1-ctrl细胞。差异表达基因涉及多种生物学功能,主要包括细胞增殖、迁移、黏附、信号转导、凋亡、血管生成、炎症反应和免疫应答等。克隆形成实验证实ALCAM敲除可降低THBEc1细胞增殖能力。结论敲除ALCAM后BaP恶性转化细胞THBEc1转录组明显改变,增殖能力明显降低。ALCAM可能在BaP致癌中发挥重要作用,并可能作为BaP致癌的潜在生物标志物。 展开更多
关键词 苯并[A]芘 ALCAM 转录组 thbec1细胞
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