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没食子酸对人食管癌TE-1细胞的体外抑制作用及其机制 被引量：5
1
作者 吴昊 努兰·拜都拉 +1 位作者 刘琳玉 任艳利 《中国药房》 CAS 北大核心 2022年第12期1448-1454,共7页
目的探究没食子酸(GA)对人食管癌TE-1细胞的体外抑制作用及潜在机制。方法MTT法检测GA作用24 h和48 h后对TE-1细胞增殖的影响,细胞荧光计数(CCK-F)法和倒置荧光显微镜观察GA作用后TE-1细胞的数量变化和形态变化,划痕实验检测细胞迁移能... 目的探究没食子酸(GA)对人食管癌TE-1细胞的体外抑制作用及潜在机制。方法MTT法检测GA作用24 h和48 h后对TE-1细胞增殖的影响,细胞荧光计数(CCK-F)法和倒置荧光显微镜观察GA作用后TE-1细胞的数量变化和形态变化,划痕实验检测细胞迁移能力的变化,平板集落形成实验检测GA对TE-1细胞集落形成能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光探针(DCFH-DA)法观察活性氧(ROS)产生情况;Western blot法检测胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin D3的表达水平。结果GA能够明显降低TE-1细胞的增殖能力,且有时间和浓度依赖趋势,其对细胞的半数抑制浓度分别为(281.22±26.81)μmol/L(24 h)和(220.90±31.15)μmol/L(48 h)。与对照组比较,给药组细胞出现皱缩、排列稀疏、细胞核固缩等现象,且细胞数量明显减少。与对照组比较,给药组细胞的细胞迁移能力和集落形成能力均显著降低(P<0.01或P<0.05)。经100、300、500μmol/L的GA作用24 h后,细胞凋亡率分别为(6.21±0.32)%、(12.59±0.58)%和(15.41±0.41)%,均显著高于对照组的(5.29±0.28)%(P<0.01或P<0.05);除100μmol/L GA组外,其余给药组细胞ROS的产生水平均显著提高(P<0.01或P<0.05);与对照组比较,各给药组细胞中Bcl-2(仅GA 200μmol/L组)、Bax(GA 100μmol/L组除外)、caspase-3、caspase-9(GA 100μmol/L组除外)的表达水平均显著升高(P<0.01或P<0.05),Bcl-2(GA 100、200μmol/L组除外)、cyclin D1、cyclin D3蛋白的表达水平均显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论GA能够抑制人食管癌TE-1细胞的增殖,限制其迁移能力及集落形成能力,促进其凋亡;上述作用可能与该成分可提高ROS水平并上调促凋亡蛋白caspase-3、caspase-9、Bax的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2和细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin D3的表达有关。 展开更多
关键词 没食子酸 食管癌 凋亡 活性氧 te-1细胞
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黄芪皂苷Ⅳ对食管癌细胞凋亡、干细胞样特性和PI3K/AKT通路的影响 被引量：1
2
作者 胡建丽 章春芝 +3 位作者 李倩 王晓芳 杜丽佳 王大伟 《消化肿瘤杂志（电子版）》 2022年第2期135-140,共6页
目的探讨黄芪皂苷Ⅳ(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)对食管癌TE-1细胞凋亡、干细胞样特性和PI3K/AKT通路的影响。方法将TE-1细胞分为四组:空白对照组、黄芪皂苷Ⅳ20μg/ml组、黄芪皂苷Ⅳ40μg/ml组和黄芪皂苷Ⅳ80μg/ml组。给予各组细胞不同的... 目的探讨黄芪皂苷Ⅳ(astragalosideⅣ,AS-Ⅳ)对食管癌TE-1细胞凋亡、干细胞样特性和PI3K/AKT通路的影响。方法将TE-1细胞分为四组:空白对照组、黄芪皂苷Ⅳ20μg/ml组、黄芪皂苷Ⅳ40μg/ml组和黄芪皂苷Ⅳ80μg/ml组。给予各组细胞不同的黄芪皂苷Ⅳ药物浓度处理48 h后采用CCK-8法检测细胞存活率,成球实验检测干细胞成球情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹法检测凋亡相关蛋白、干细胞标志蛋白和PI3K/AKT通路蛋白,以及免疫荧光检测AKT膜定位情况。结果与空白对照组比较,黄芪皂苷Ⅳ40、80μg/ml组显著增加细胞凋亡率,显著上调caspase-3和caspase-9蛋白表达(P<0.05);黄芪皂苷Ⅳ40、80μg/ml组显著减小干细胞成球球体直径及球体数量(P<0.05);黄芪皂苷Ⅳ40、80μg/ml组显著下调干细胞标志蛋白SOX2、OCT4和CD44的表达(P<0.05);黄芪皂苷Ⅳ40、80μg/ml组显著下调通路蛋白PI3K和AKT磷酸化水平,显著抑制AKT膜定位(P<0.05)。结论黄芪皂苷Ⅳ可诱导TE-1细胞凋亡,抑制干细胞样特性,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT通路活化有关。 展开更多
关键词 黄芪皂苷Ⅳ te-1细胞 细胞凋亡 干细胞特性 AKT通路
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稳定过表达幼虫巨大致死基因2(LLGL2)的食管鳞癌细胞系的建立
3
作者 胡琼 谢富安 +1 位作者 洪笑迁 刘宽灿 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期342-346,共5页
目的构建人幼虫巨大致死基因2(LLGL2)慢病毒表达载体,并建立稳定表达的人食管鳞癌KYSE450细胞系和TE-1细胞系。方法 PCR扩增人LLGL2全长基因序列,连接插入至pCDH-CMV-IRES-GFP-EF1-Puro慢病毒载体中,并对重组质粒进行双酶切及测序验证... 目的构建人幼虫巨大致死基因2(LLGL2)慢病毒表达载体,并建立稳定表达的人食管鳞癌KYSE450细胞系和TE-1细胞系。方法 PCR扩增人LLGL2全长基因序列,连接插入至pCDH-CMV-IRES-GFP-EF1-Puro慢病毒载体中,并对重组质粒进行双酶切及测序验证。将重组质粒pCDH-CMV-LLGL2-IRES-GFP-EF1-Puro和PHR、水疱性口炎病毒G蛋白(VSVG)共转染HEK293T细胞进行病毒包装,利用该病毒液感染KYSE450细胞和TE-1细胞。经嘌呤霉素筛选建立LLGL2稳定过表达的KYSE450细胞系和TE-1细胞系,用Western blot法检测LLGL2的表达情况。结果双酶切和测序分析,成功构建pCDH-CMVLLGL2-IRES-GFP-EF1-Puro慢病毒表达载体质粒。Western blot法检测结果显示,与对照组相比,感染病毒液的细胞LLGL2蛋白水平明显增高。结论成功建立了稳定过表达LLGL2基因的KYSE450细胞系和TE-1细胞系。 展开更多
关键词 LLGL2 慢病毒载体 KYSE450细胞系 te-1细胞系
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沉默线粒体核糖体蛋白L35基因对人食管癌TE-1细胞生长的影响 被引量：3
4
作者 王爱馥 张奇 +3 位作者 张道明 修雨婷 丁雅明 刘林林 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期28-32,217,共6页
目的:探讨慢病毒介导沉默线粒体核糖体蛋白L35 (MRPL35)基因对人食管癌TE-1细胞生长的影响,并阐明其机制。方法:选择3种人食管癌TE-1、ECA109和KYSE150细胞,采用实时定量PCR法检测3种细胞中MRPL35mRNA相对表达水平。食管癌TE-1细胞分为s... 目的:探讨慢病毒介导沉默线粒体核糖体蛋白L35 (MRPL35)基因对人食管癌TE-1细胞生长的影响,并阐明其机制。方法:选择3种人食管癌TE-1、ECA109和KYSE150细胞,采用实时定量PCR法检测3种细胞中MRPL35mRNA相对表达水平。食管癌TE-1细胞分为shMRPL35组和shCtrl组,分别加入沉默靶基因带有嘌呤霉素抗性的si-RNA慢病毒和带有嘌呤霉素抗性的阴性对照si-RNA慢病毒进行感染,建立稳定沉默MRPL35基因的食管癌细胞系,实时定量PCR及Western blotting法检测各组细胞中MRPL35基因沉默效率,采用CCK-8法检测各组细胞生长曲线,AnnexinⅤ-PE/7AAD双染色后流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:3种食管癌细胞均表达MRPL35基因,3种细胞中MRPL35mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。实时定量PCR法和Western blotting法检测,shMRPL35组TE-1细胞中MRPL35mRNA和蛋白表达水平明显低于shCtrl组(P<0.05)。与shCtrl组比较,shMRPL35组TE-1细胞生长速度明显降低(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.01)。结论:沉默MRPL35基因可抑制食管癌细胞TE-1增殖,并通过凋亡途径发挥作用。 展开更多
关键词 线粒体核糖体蛋白L35 食管癌te-1细胞 细胞凋亡
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食管癌TE-1细胞生物学性状的相关性研究 被引量：1
5
作者 李步强 许健 +3 位作者 李奇志 李晓义 谷锋泽 慕晓玲 《中国现代医药杂志》 2011年第10期33-36,共4页
目的研究食管癌TE-1细胞生物学性状。方法①将购自上海生命科学院的食管癌TE-1细胞株进行HE染色;②用MTT法绘制细胞生长曲线;③免疫组织化学检测细胞特异性免疫标志;④流式细胞仪分析细胞周期。结果①用DMEM高糖培养基培养,生长良好。H... 目的研究食管癌TE-1细胞生物学性状。方法①将购自上海生命科学院的食管癌TE-1细胞株进行HE染色;②用MTT法绘制细胞生长曲线;③免疫组织化学检测细胞特异性免疫标志;④流式细胞仪分析细胞周期。结果①用DMEM高糖培养基培养,生长良好。HE染色下,细胞大致分为3种:一种细胞呈椭圆形,核大,胞浆少,一种细胞呈三角形或多角形,大小,形态不等,一种细胞有双核或者多核,核大深染,染色质丰富,核分裂相多见;②细胞接种培养后其生长曲线呈近似S形。免疫组织化学检测3种抗体均表达阳性,其中CK7阳性表达定位于胞浆,Ki-67和p53定位于胞核;③TE-1细胞周期:半数细胞处于增生期,半数处于静止期。结论食管癌TE-1细胞符合食管鳞癌的特征。 展开更多
关键词 食管癌 te-1细胞株 生物学特性
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连翘根醇提物体外诱导TE-13细胞凋亡的机制研究 被引量：2
6
作者 颜晰 赵连梅 +2 位作者 刘月彩 王玲 单保恩 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期239-244,共6页
目的:从基因及蛋白水平探讨连翘根醇提物(ethanol extract of Forsythia suspensa root,FSEER)诱导人食管癌TE-13细胞凋亡的作用机制。方法:不同质量浓度的FSEER(0.4、0.5和0.6mg/mL)作用于TE-13细胞24h后,采用FCM检测线粒体膜电位的变... 目的:从基因及蛋白水平探讨连翘根醇提物(ethanol extract of Forsythia suspensa root,FSEER)诱导人食管癌TE-13细胞凋亡的作用机制。方法:不同质量浓度的FSEER(0.4、0.5和0.6mg/mL)作用于TE-13细胞24h后,采用FCM检测线粒体膜电位的变化;蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白[caspase-3、caspase-8、caspase-9和细胞质中细胞色素C(cytochrome-C,Cyt-C)]经FSEER处理后在TE-13细胞中的表达情况;同时通过RT-PCR检测细胞凋亡相关基因Bax、Bad、Noxa、Bcl-2、Bcl-xl和Mcl-1mRNA的表达情况。结果:TE-13细胞经FSEER(0.4、0.5和0.6mg/mL)作用24h后,随FSEER作用浓度的升高,发生线粒体膜电位损伤的细胞数目逐渐增多,且明显多于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,经FSEER处理后,TE-13细胞中cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的表达水平及细胞质中Cyt-C的表达水平均逐渐增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);而caspase-8的表达水平则无明显变化,与对照组相比,差异无统计学意义。RT-PCR检测结果显示,FSEER可以上调TE-13细胞中Bax、Bad和NoxamRNA的表达水平,下调Bcl-2、Bcl-xl和Mcl-1mRNA的表达水平。结论:FSEER可能是通过依赖于线粒体的细胞凋亡内源途径而诱导人食管癌TE-13细胞发生凋亡的。 展开更多
关键词 食管肿瘤 连翘属 植物提取物 细胞凋亡 te-13细胞
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