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TAp73γ在Saos-2细胞中定量诱导体系的建立
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作者 郑湘予 庞霞 +1 位作者 张岚 陈奎生 《肿瘤基础与临床》 2006年第4期273-275,共3页
目的利用Tet-On基因表达系统建立Saos-2/Tet-On/TAp73γ细胞株,通过强力霉素(Doxycycline,Dox)定量诱导TAp73γ基因的表达。方法将质粒pRevTet-On、pRevTRE-Luc和pRevTRE-TAp73γ分别转染PT67细胞,产生相应的逆转录病毒。RevTet-On病毒... 目的利用Tet-On基因表达系统建立Saos-2/Tet-On/TAp73γ细胞株,通过强力霉素(Doxycycline,Dox)定量诱导TAp73γ基因的表达。方法将质粒pRevTet-On、pRevTRE-Luc和pRevTRE-TAp73γ分别转染PT67细胞,产生相应的逆转录病毒。RevTet-On病毒感染Saos-2细胞,经G418选择培养基进行培养并感染RevTRE-Luc,再应用荧光素酶活性检测筛选出高诱导倍数的Saos-2/Tet-On细胞克隆。最后该细胞株感染RevTRE-TAp73γ病毒,用强力霉素筛选出阳性细胞,在不同浓度Dox诱导下用Western blot分析Saos-2/RevTet-On/TAp73γ细胞中TAp73γ的表达。结果Saos-2/RevTet-On克隆5当培养基中Dox浓度达到2·5mg/L时,荧光素酶相对活性值为5·3×106RLU/s,去除Dox时荧光素酶活性最弱,背景最低。Western blot结果显示在Saos-2/Tet-On5细胞中TAp73γ蛋白表达随着Dox浓度的增加而增加。结论建立了Saos-2/Tet-On及Saos-2/Tet-On/TAp73γ细胞株,可利用四环素衍生物定时定量调整Saos-2细胞中TAp73γ基因的表达,为研究TAp73γ细胞内协同作用因子、进一步阐明细胞内p73蛋白的生物学行为提供了一个理想的研究平台。 展开更多
关键词 TET-ON 基因表达系统 tap73γ SAOS-2
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