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一种DNA侧翼序列分离技术——TAIL-PCR 被引量：30
1
作者 罗丽娟 施季森 《南京林业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期87-90,共4页
在分子生物学研究中,基因克隆和分子杂交的探针制备等操作常需分离与已知DNA序列邻近的未知序列,热不对称交错PCR(简称TAIL PCR)反应技术能够较好地解决上述难题。该技术通过3个嵌套的特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环,... 在分子生物学研究中,基因克隆和分子杂交的探针制备等操作常需分离与已知DNA序列邻近的未知序列,热不对称交错PCR(简称TAIL PCR)反应技术能够较好地解决上述难题。该技术通过3个嵌套的特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环,利用不同的退火温度选择性地扩增目标片段,所获得的片段可以直接用做探针标记和测序模板。TAIL PCR技术简单易行,反应高效灵敏,产物的特异性高,重复性好,能够在较短的时间内获得目标片段,已经成为分子生物学研究中的一种实用技术。笔者综述了TAIL PCR反应的原理、引物设计、反应条件设置及产物分析。 展开更多
关键词 DNA侧翼 序列分离技术 tail-pcr 分子生物学 基因克隆 分子杂交 探针制备
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启动子克隆方法研究进展 被引量：20
2
作者 李姗姗 迟彦 +4 位作者 李凌飞 马玺 平文祥 于冲 周东坡 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期9-16,共8页
启动子是基因表达调控的重要顺式元件,也是基因工程表达载体的一个重要组成部分。启动子的克隆对于构建基因工程载体,表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多,从常用的利用启动子探针型载体筛选启动子到PCR方法的应用,此后... 启动子是基因表达调控的重要顺式元件,也是基因工程表达载体的一个重要组成部分。启动子的克隆对于构建基因工程载体,表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多,从常用的利用启动子探针型载体筛选启动子到PCR方法的应用,此后相继问世的一些基于PCR法的克隆启动子技术,像I-PCR、P-PCR、SSP-PCR、YADE、TAIL-PCR等,为克隆启动子提供了更可靠,更合理的方法。对这几种方法进行了简要综述,比较了不同方法的优缺点,并展望了今后的研究前景。 展开更多
关键词 研究进展 克隆方法 启动子探针型载体 tail-pcr SSP-pcr 基因表达调控 基因工程载体 启动子克隆 pcr方法 顺式元件 组成部分 表达载体 目的蛋白 pcr法 研究前景 优缺点
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拟南芥激活标记突变体库的构建及突变体基因的克隆 被引量：22
3
作者 李志邈 张海扩 +1 位作者 曹家树 何祖华 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期499-506,共8页
激活标记(activationtagging)技术是以功能获得突变体为研究对象,在植物功能基因组学的研究中具有重要的作用。文章以双子叶模式植物拟南芥(Arabidopsisthaliana)野生生态型植株为实验材料,以含有激活标记质粒pSKI015的农杆菌直接喷雾... 激活标记(activationtagging)技术是以功能获得突变体为研究对象,在植物功能基因组学的研究中具有重要的作用。文章以双子叶模式植物拟南芥(Arabidopsisthaliana)野生生态型植株为实验材料,以含有激活标记质粒pSKI015的农杆菌直接喷雾进行转化,并以抗除草剂Basta为筛选标记,构建了拟南芥的激活标记突变体库。结果共得到约20000个独立转化株系(T1代),其中38个株系有明显的表型变化,约占转化植株总数的千分之二。基因组DNASouthern杂交结果表明,大多数转化植株为多拷贝T-DNA插入。通过质粒拯救(plasmidrescue)和TAIL-PCR(Thermalasymmetricinterlaced-PCR)可获得T-DNA插入的基因组旁邻序列,为克隆突变体的基因奠定基础。 展开更多
关键词 激活标记 功能获得 拟南芥 质粒拯救 tail—pcr
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TAIL-PCR方法快速克隆银杏查尔酮合成酶基因及序列分析(英文) 被引量：20
4
作者 许锋 程水源 +2 位作者 王燕 李琳玲 程述汉 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期237-243,共7页
热不对称交错PCR(TAIL-PCR)方法已广泛应用于从多种生物克隆已知DNA序列的侧翼序列。对传统的TAIL-PCR方法进行改良:(1)将TAIL技术应用于TAIL-PCR中第3步PCR循环。(2)以10bp的随机简并引物即RAPD引物代替基因侧翼简并引物。以银杏品种... 热不对称交错PCR(TAIL-PCR)方法已广泛应用于从多种生物克隆已知DNA序列的侧翼序列。对传统的TAIL-PCR方法进行改良:(1)将TAIL技术应用于TAIL-PCR中第3步PCR循环。(2)以10bp的随机简并引物即RAPD引物代替基因侧翼简并引物。以银杏品种家佛手的叶基因组DNA为模板,利用简并引物克隆到银杏查尔酮合成酶基因(CHS)片段序列Gbchs1,以此序列设计3条特异引物,利用改良的热不对称交错PCR方法克隆到CHS基因Gbchs2。结果表明,Gbchs2长1238bp,编码304个氨基酸并包含3’末端序列。GbCHS2蛋白质序列与其他植物的CHS蛋白质序列高度同源,包含CHS蛋白质保守的环化作用活性位点,催化活性位点、香豆素活性位点、及催化活性基序。改良后的TAIL-PCR方法为基因全长的克隆提供了一种简单快速高效的新方法。 展开更多
关键词 银杏 热不对称交错pcr 查尔酮合成酶基因 克隆 序列分析
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一种改良的克隆小麦GLP3基因启动子的TAIL-PCR技术 被引量：15
5
作者 陈军营 孙佩 +1 位作者 王德勤 陈新建 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2007年第4期754-758,共5页
以小麦基因组DNA为模板,用一种改良热不对称交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)技术克隆到全长为1748bp的小麦GLP3基因的上游侧翼序列。测序结果表明,TATA-box位于基因转录起始位点CAT-box上游-27bp处;CAAT-box位于CA... 以小麦基因组DNA为模板,用一种改良热不对称交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)技术克隆到全长为1748bp的小麦GLP3基因的上游侧翼序列。测序结果表明,TATA-box位于基因转录起始位点CAT-box上游-27bp处;CAAT-box位于CAT-box上游-163bp处;ATG位于CAT-box下游94bp处,5'UTR(非编码区)序列全长93bp,表明该序列为小麦GLP3启动子序列。 展开更多
关键词 tail-pcr GLP3基因 启动子
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转基因猪中外源基因拷贝数和整合位点的研究 被引量：18
6
作者 孔庆然 武美玲 +5 位作者 朱江 格日乐其木格 郇延军 尹智 牟彦双 刘忠华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1617-1625,共9页
主要采用了绝对定量PCR和热不均一交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR),检测了体细胞核移植技术生产的绿色荧光蛋白转基因猪中外源基因拷贝数和整合位点,并利用旁侧PCR(Junction PCR)对整合位点进行确定,同时进一步分... 主要采用了绝对定量PCR和热不均一交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR),检测了体细胞核移植技术生产的绿色荧光蛋白转基因猪中外源基因拷贝数和整合位点,并利用旁侧PCR(Junction PCR)对整合位点进行确定,同时进一步分析了整合位点的纯合性.结果表明,绝对定量PCR可以准确有效地检测外源基因拷贝数,标准曲线为:log2N(拷贝数)=-0.9354△Ct+3.4116(R2=0.9974,P<0.001),两只转基因猪中外源基因拷贝数分别为30.85±1.77和18.87±1.34;TAIL-PCR能成功地克隆转基因猪中外源基因整合位点,得到25条特异性条带,经BLAST比对,共获得TgInS1(1440bp)、TgInS2(1263bp)和TgInS3(1861bp)3个整合位点.以整合位点侧翼序列特异性引物与外源基因特异性引物的组合引发Junction PCR,得到预计大小的特异性片段,确定了整合位点上、下游侧翼序列的准确性.采用整合位点5′上游和3′下游侧翼序列特异性引物与外源基因特异性引物的组合,进行Junction PCR,在两只转基因猪中都得到与野生型猪一致的侧翼序列特异性引物扩增片段,表明我们获得的转基因猪都为整合位点杂合子.初步建立了绝对定量PCR和TAIL-PCR对外源基因拷贝数和整合位点检测的体系,为今后研究外源基因在转基因猪中遗传和表达的稳定性打下了基础. 展开更多
关键词 转基因猪 拷贝数 整合位点 绝对定量pcr tail-pcr 纯合性
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植物基因启动子的克隆方法及其应用 被引量：12
7
作者 尹辉 李丹 +1 位作者 张毅 李秋莉 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第z1期85-91,共7页
植物基因的表达调控已成为分子生物学研究热点,启动子是基因表达调控的重要顺式元件,启动子的克隆对于研究基因表达调控、构建基因工程载体、表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多,从常用的启动子陷阱技术筛选启动子到PCR... 植物基因的表达调控已成为分子生物学研究热点,启动子是基因表达调控的重要顺式元件,启动子的克隆对于研究基因表达调控、构建基因工程载体、表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多,从常用的启动子陷阱技术筛选启动子到PCR方法的应用,此后相继问世的一些基于PCR的克隆启动子技术,如载体锚定PCR、反向PCR、接头PCR、交错热不对称PCR等,为克隆启动子提供了更可靠,更合理的方法。本文着重介绍了几种植物基因启动子的克隆方法,分析了它们的优缺点,并展望了今后的研究前景。 展开更多
关键词 启动子 启动子陷阱技术 反向pcr 锚定pcr 交错热不对称pcr
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从水稻Ac/Ds插入突变体扩增Ds侧翼序列的最适TAIL-PCR引物(英文) 被引量：14
8
作者 孙丙耀 PIAO Hai-Long +1 位作者 PARK Sung-Han HAN Chang-Deok 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期821-826,共6页
温度非对称交互PCR(TAIL PCR)技术已广泛应用于从多种生物体系克隆侧翼于已知序列的DNA片段的分子操作中 ,并极大地促进了反向遗传学研究。但是 ,可能由于不同物种间基因组大小和序列存在显著差异 ,在采用该技术进行转座元件Ds水稻插入... 温度非对称交互PCR(TAIL PCR)技术已广泛应用于从多种生物体系克隆侧翼于已知序列的DNA片段的分子操作中 ,并极大地促进了反向遗传学研究。但是 ,可能由于不同物种间基因组大小和序列存在显著差异 ,在采用该技术进行转座元件Ds水稻插入突变体鉴定过程中 ,常因TAIL PCR反应的稳定性差而影响突变体筛选效率。有鉴于此 ,根据Ds核苷酸序列设计了分别对应或互补于Ds插入元件两端长度不同的 12个特异引物组成 32个组合 ,在大量预试验基础上与 6个不同简并性 (32～ 2 5 6 )的随机简并引物分别组合进行TAIL PCR反应 ,较系统地研究了引物特性对以水稻基因组DNA为模板的TAIL PCR反应效率的影响。结果发现 ,第一反应采用长序列特异引物(36～ 4 0mer)可显著提高扩增特异性 ,随机简并引物的简并度对反应的影响显著。还选择出两个适于从水稻Ds插入突变体基因组高效扩增出Ds插入侧翼片段的最优特异引物组合和最适简并引物。应用本研究结果可显著地提高TAIL 展开更多
关键词 随机简并(AD)引物 Ds-特异引物 Ds侧翼序列 水稻 温度非对称交互pcr
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克隆启动子方法的比较及应用 被引量：15
9
作者 郝迪萩 赵琳 +1 位作者 陈李淼 李文滨 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期154-160,共7页
基因的表达调控已成为分子生物学研究热点之一。启动子是基因表达调控的重要顺式元件,启动子的克隆对于研究基因表达调控、构建基因工程载体、表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多,从常用的启动子陷阱技术筛选启动子到PC... 基因的表达调控已成为分子生物学研究热点之一。启动子是基因表达调控的重要顺式元件,启动子的克隆对于研究基因表达调控、构建基因工程载体、表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多,从常用的启动子陷阱技术筛选启动子到PCR方法的应用,基于PCR克隆启动子技术有:载体锚定PCR、反向PCR、接头PCR、交错热不对称PCR等,为克隆启动子提供了更可靠,更合理的方法。文章着重介绍了几种启动子的克隆方法,分析了它们的优缺点,并展望了今后的研究前景。 展开更多
关键词 启动子 反向pcr 锚定pcr 交错热不对称pcr
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ACA基因启动子的克隆及功能初探 被引量：6
10
作者 刘召华 郭洪年 +1 位作者 郑光宇 田颖川 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期139-143,共5页
根据已知的ACA基因的 5 '端序列设计三个基因特异的反向引物 (GSP_1,GSP_2 ,GSP_3)分别与 11个简并引物 (AD1_AD11)配对 ,进行热不对称嵌套PCR(ThermalasymmetricinterlacedPCR ,TAIL_PCR)扩增 ,获得了ACA基因起始密码子上游约70 0b... 根据已知的ACA基因的 5 '端序列设计三个基因特异的反向引物 (GSP_1,GSP_2 ,GSP_3)分别与 11个简并引物 (AD1_AD11)配对 ,进行热不对称嵌套PCR(ThermalasymmetricinterlacedPCR ,TAIL_PCR)扩增 ,获得了ACA基因起始密码子上游约70 0bp的片段。为检测其表达特性 ,构建了该片段与Gus嵌合基因的表达载体pBpAG ,在真空条件下通过农杆菌介导 ,转化了植物的叶、果实、种子三种不同组织 ,Gus瞬时表达染色结果显示 ,该DNA片段具有种子特异的启动子活性。对该启动子的一些顺式元件进行了讨论。 展开更多
关键词 tail-pcr ACA启动子 GUS 种子特异表达
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TAIL-PCR技术及其在植物基因中的克隆 被引量：15
11
作者 郑岑 张立平 +2 位作者 唐忠辉 赵昌平 苑少华 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期544-548,共5页
热不对称性PCR(thermal asymmetric interlacedPCR,TAIL-PCR)是一种用来分离与已知序列邻近的未知DNA序列的分子生物学技术。该技术利用3个根据已知序列设计的嵌套特异性引物分别和简并引物组合进行PCR反应,选择恰当退火温度对目标片段... 热不对称性PCR(thermal asymmetric interlacedPCR,TAIL-PCR)是一种用来分离与已知序列邻近的未知DNA序列的分子生物学技术。该技术利用3个根据已知序列设计的嵌套特异性引物分别和简并引物组合进行PCR反应,选择恰当退火温度对目标片段进行PCR扩增。TAIL-PCR技术作为一种使用技术简单易行,反应高效灵敏,产物特异性高,重复性好,能够在较短的时间内获得目标片段,已经在分子生物学研究领域广泛应用。本文从TAIL-PCR技术原理出发,对该技术特异性引物设计、随机引物组合选择、PCR反应条件等关键性问题进行综述,并介绍TAIL-PCR技术在植物基因克隆上的应用现状及发展前景。 展开更多
关键词 tail—pcr 简并引物 基因克隆
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TAIL-PCR的改良及其在分离小麦基因启动子中的应用 被引量：9
12
作者 仇艳光 田景汉 +3 位作者 葛荣朝 赵宝存 沈银柱 黄占景 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期695-699,共5页
在经典TAIL-PCR(Thermal asymmetric interlaced PCR)的基础上,对其进行了如下四处改进:用10个碱基的RAPD引物代替16个碱基的随机兼并引物作为PCR中的随机引物;将较低特异性循环的复性温度由44℃降至29℃;增加5个高特异性反应循环,减少... 在经典TAIL-PCR(Thermal asymmetric interlaced PCR)的基础上,对其进行了如下四处改进:用10个碱基的RAPD引物代替16个碱基的随机兼并引物作为PCR中的随机引物;将较低特异性循环的复性温度由44℃降至29℃;增加5个高特异性反应循环,减少5个较低特异性反应循环;用单引物对第三轮PCR产物进行初步鉴定。利用改进的TAIL-PCR方法分离了小麦X基因的5′未知的侧翼序列,与GUS基因融合后转入拟南芥,通过组织化学检测分析表明分离到的5′侧翼序列具有启动子功能,同时说明改进的TAIL-PCR能更好地应用到较复杂基因启动子的分离。 展开更多
关键词 热不对称交错pcr 随机引物 启动子
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用改良TAIL-PCR技术分析转基因烟草cbf1基因插入区的侧翼序列 被引量：8
13
作者 宋达峰 韩凝 +1 位作者 边红武 朱睦元 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1377-1379,共3页
关键词 tail-pcr 侧翼序列 转基因烟草 基因插入 技术分析 非特异性 改良 简并引物 随机引物
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农杆菌介导的灰葡萄孢T-DNA插入突变体库构建及插入位点分析 被引量：12
14
作者 冯娟 朱廷恒 +1 位作者 崔志峰 汪琨 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期169-173,共5页
【目的】利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)进行转化,构建T-DNA插入突变体库,为从分子水平上认识灰葡萄孢的致病机制打下基础。【方法】以含有pCAMBIA 1390双元载体的农杆菌对灰葡萄孢进行转化... 【目的】利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)进行转化,构建T-DNA插入突变体库,为从分子水平上认识灰葡萄孢的致病机制打下基础。【方法】以含有pCAMBIA 1390双元载体的农杆菌对灰葡萄孢进行转化,利用潮霉素进行筛选。对抗性稳定的转化子进行生物学和形态学观察,采用离体番茄叶片进行致病性测定。利用TAIL-PCR技术对突变体中T-DNA的旁侧序列进行克隆。【结果】得到了一些突变体,表现为生长速率减缓、产孢能力下降、致病力减弱等。克隆并分析了其中一个突变体中T-DNA插入的位置和旁侧序列。【结论】本实验建立了农杆菌介导的灰葡萄孢转化体系,构建了T-DNA插入的灰葡萄孢突变体库。用TAIL-PCR进行突变体中T-DNA旁侧序列的分析是可行的。 展开更多
关键词 灰葡萄孢 农杆菌介导 T—DNA tail—pcr
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TAIL-PCR法快速分离红曲霉色素突变株T-DNA插入位点侧翼序列 被引量：8
15
作者 邵彦春 丁月娣 +1 位作者 陈福生 谢笔钧 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期323-326,共4页
采用热不对称交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)法分离红曲霉色素突变株T-DNA插入位点的侧翼序列,扩增到了长度介于500bp～1300bp之间的7个DNA片段,对这些DNA片段测序,并采用生物信息学方法对测序结果进行了分析,表... 采用热不对称交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)法分离红曲霉色素突变株T-DNA插入位点的侧翼序列,扩增到了长度介于500bp～1300bp之间的7个DNA片段,对这些DNA片段测序,并采用生物信息学方法对测序结果进行了分析,表明其中有1个片段与烟曲霉Af293发育调控子flbA的相似性较高。TAIL-PCR法成功应用于分离红曲霉突变株T-DNA插入位点的侧翼序列,为大规模获取插入位点侧翼序列建立了可行的方法,也为进一步研究红曲霉功能基因奠定了基础。 展开更多
关键词 红曲霉 T-DNA插入 突变子 tail-pcr
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改良TAIL-PCR技术在小麦PM H^＋ -ATPase基因启动子克隆中的应用 被引量：10
16
作者 陈军营 沈向磊 +1 位作者 辛玉茹 陈新建 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期1-5,共5页
以小麦基因组DNA为模板,利用改良的热不对称交织PCR(TAIL-PCR)技术成功克隆到小麦PM H+-AT-Pase基因的上游侧翼序列,测序结果表明,该序列全长363 bp.序列分析结果表明,GGGCGGG序列位于-141^-135 bp;TATA-box位于基因转录起始位点CAT-bo... 以小麦基因组DNA为模板,利用改良的热不对称交织PCR(TAIL-PCR)技术成功克隆到小麦PM H+-AT-Pase基因的上游侧翼序列,测序结果表明,该序列全长363 bp.序列分析结果表明,GGGCGGG序列位于-141^-135 bp;TATA-box位于基因转录起始位点CAT-box上游-37^-32 bp;-70^-80 bp间没有发现CCAAT-box;ATG位于CAT-box下游203~205 bp处,5’UTR(非编码区)序列全长202 bp,表明该序列为小麦H+-ATPase启动子序列. 展开更多
关键词 tail—pcr PM H^+ -ATPase基因 启动子
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转基因番木瓜“华农一号”事件特异性定性PCR检测方法的建立 被引量：11
17
作者 姜大刚 周峰 +2 位作者 姚涓 穆虹 梅曼彤 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期37-41,共5页
以我国自主研发的转基因抗环斑病毒番木瓜"华农一号"为研究对象,应用TAIL-PCR技术,用载体中靠近右边界的Nos启动子序列设计特异引物,扩增插入的旁邻序列;根据测序结果,设计了产物长度分别为753和298 bp但均跨越转化载体和番... 以我国自主研发的转基因抗环斑病毒番木瓜"华农一号"为研究对象,应用TAIL-PCR技术,用载体中靠近右边界的Nos启动子序列设计特异引物,扩增插入的旁邻序列;根据测序结果,设计了产物长度分别为753和298 bp但均跨越转化载体和番木瓜基因组序列的2套特异引物,对"华农一号"进行检测,证明其可特异地把"华农一号"从转基因番木瓜品系中检测出来;2对引物的检测灵敏度都可以达到0.05%的标准,高于欧盟0.9%的检测要求;利用2对特异引物对"华农一号"的果肉、果皮、种子进行检测,可得到特异性良好的扩增. 展开更多
关键词 转基因番木瓜 tail-pcr “华农一号” 事件特异性检测
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优化的反向PCR结合TAIL-PCR法克隆棉花线粒体atpA双拷贝基因及其侧翼序列 被引量：8
18
作者 张晓 张锐 +7 位作者 孙国清 史计 孟志刚 周焘 侯思宇 梁成真 于源华 郭三堆 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期104-115,共12页
双拷贝基因及其侧翼序列的克隆是分子生物学中的一个难点。将优化的反向PCR(Inverse PCR,iPCR)与TAIL-PCR相结合,有效地克隆双拷贝基因及其侧翼序列。先用Southern blotting方法确定一种能获得合适长度片段的限制性内切酶,然后用优化的i... 双拷贝基因及其侧翼序列的克隆是分子生物学中的一个难点。将优化的反向PCR(Inverse PCR,iPCR)与TAIL-PCR相结合,有效地克隆双拷贝基因及其侧翼序列。先用Southern blotting方法确定一种能获得合适长度片段的限制性内切酶,然后用优化的iPCR方法对该酶切产物进行自连和扩增,将2个拷贝的侧翼序列区分开。根据iPCR结果,进一步用TAIL-PCR扩增更远侧翼的序列。利用这套方法,获得了棉花可育胞质和不育胞质线粒体双拷贝atpA基因的所有EcoR I限制片段(2.2～5.1 kb)和HindⅢ限制片段(8.5～11.7 kb),克隆到2个拷贝各自的侧翼序列。研究结果说明,优化的iPCR与TAIL-PCR相结合是克隆双拷贝基因及其侧翼序列的一种高效方法。 展开更多
关键词 反向pcr tail-pcr 细胞质雄性不育 棉花 ATPA 双拷贝基因 侧翼序列
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优化TAIL-PCR方法克隆棉花抗逆相关转录因子编码基因 被引量：9
19
作者 梁成真 张锐 +4 位作者 孙国清 孟志刚 周焘 丁忠涛 郭三堆 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期195-201,共7页
ABF/AREB/ABI5/DPBF类转录因子属于碱性亮氨酸类蛋白,在依赖ABA的逆境信号传导途径中起重要的作用。本研究结合该类转录因子的结构特点,利用3′RACE技术和优化的TAIL-PCR技术成功获得棉花中三个该家族成员编码基因。进一步验证结果表明... ABF/AREB/ABI5/DPBF类转录因子属于碱性亮氨酸类蛋白,在依赖ABA的逆境信号传导途径中起重要的作用。本研究结合该类转录因子的结构特点,利用3′RACE技术和优化的TAIL-PCR技术成功获得棉花中三个该家族成员编码基因。进一步验证结果表明两步PCR成功获得基因完整的ORF、3′UTR以及部分5′UTR序列。本研究所获基因为棉花抗逆基因工程提供了候选基因源,优化后的TAIL-PCR技术为克隆棉花中目的基因提供了一种简便高效的方法。 展开更多
关键词 棉花 ABF/AREB/ABI5/DPBF 转录因子 tail-pcr 抗逆相关基因
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TAIL-PCR对红莲型水稻不育系特异片段HL-sp1侧翼序列的分析 被引量：6
20
作者 李丕顺 刘学群 +3 位作者 王春台 周杰 余光辉 刘新琼 《湖北农业科学》 北大核心 2008年第2期123-126,共4页
以红莲型水稻不育系粤泰A(YTA)线粒体DNA为模板,在具有细胞质遗传的线粒体特异性片段HL-sp1侧翼各设计3条特异性巢式引物(LSP1﹑LSP2﹑LSP3﹑RSP1﹑RSP2、和RSP3),利用特异性引物和随机引物AD1﹑AD2和AD3,通过热交错PCR(TAIL-PCR)扩增HL... 以红莲型水稻不育系粤泰A(YTA)线粒体DNA为模板,在具有细胞质遗传的线粒体特异性片段HL-sp1侧翼各设计3条特异性巢式引物(LSP1﹑LSP2﹑LSP3﹑RSP1﹑RSP2、和RSP3),利用特异性引物和随机引物AD1﹑AD2和AD3,通过热交错PCR(TAIL-PCR)扩增HL-sp1的侧翼序列。通过扩增和序列分析得到了HL-sp1 5′侧翼1 456 bp和3′侧翼2 570 bp的序列。改进后的TAIL-PCR方法为线粒体目的片段的侧翼序列分析提供了一种简单而高效的方法。 展开更多
关键词 红莲型水稻 细胞质雄性不育 线粒体 tail-pcr
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