T7肽修饰共载多柔比星与miRNA脂质体的制备及其对结肠癌细胞的增殖抑制作用 被引量：2

1

作者 张战胜 徐东为 《解放军医药杂志》 CAS 2017年第1期51-53,共3页

目的制备T7肽修饰共载多柔比星(DOX)与MIFsiRNA脂质体(T7-LPs-DOX/RNA),研究其对人源结肠癌细胞(RKO)的靶向抑制作用。方法薄膜分散法制备脂质体,透射电镜观察其形态。流式细胞仪检测RKO细胞对不同脂质体的摄取效率和摄取机制。细胞克... 目的制备T7肽修饰共载多柔比星(DOX)与MIFsiRNA脂质体(T7-LPs-DOX/RNA),研究其对人源结肠癌细胞(RKO)的靶向抑制作用。方法薄膜分散法制备脂质体,透射电镜观察其形态。流式细胞仪检测RKO细胞对不同脂质体的摄取效率和摄取机制。细胞克隆形成实验检测不同脂质体对RKO细胞存活率的影响。构建RKO细胞肿瘤球模型,观察T7-LPs-DOX/RNA对实体肿瘤球的穿透能力。结果 RKO细胞对T7-LPs的摄取效率显著强于普通脂质体,T7-LPs-DOX/RNA对RKO细胞增殖抑制作用强于其他脂质体(P<0.05)。经过T7肽修饰后,脂质体对肿瘤球的穿透能力显著增强。结论 T7-LPs-DOX/RNA是一种有效的结肠癌靶向给药系统。 展开更多

关键词 T7肽 药物靶向 阿霉素 脂质体 结肠肿瘤

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融合MBP标签的重组人CD137L蛋白可溶性表达与纯化 被引量：1

2

作者 吴晓晓 王淑珍 《药物生物技术》 CAS 2022年第4期338-343,共6页

本课题组前期构建了偶联有肿瘤抑素T7肽和人CD137L胞外域的重组融合蛋白(rhTCD),兼具抑制血管生成和刺激T细胞激活活性,但其在大肠杆菌中主要以包涵体的形式存在。本研究将rhTCD与麦芽糖结合蛋白(Maltose-binding protein,MBP)的基因融... 本课题组前期构建了偶联有肿瘤抑素T7肽和人CD137L胞外域的重组融合蛋白(rhTCD),兼具抑制血管生成和刺激T细胞激活活性,但其在大肠杆菌中主要以包涵体的形式存在。本研究将rhTCD与麦芽糖结合蛋白(Maltose-binding protein,MBP)的基因融合共表达,以提高其可溶性表达并进行纯化。构建N端带有组氨酸(6×His)和MBP双标签的rhTCD重组表达载体,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)后在18℃ 0.5 mmol/L IPTG条件下诱导表达18 h,经Ni-NTA亲和层析法初步纯化后烟草蚀纹病毒蛋白酶(Tobacco etch virus,TEV)切割标签,再应用MBP亲和层析法纯化目的蛋白,通过银染和非变性凝胶电泳检测蛋白纯度、存在形式以及产量。SDS-PAGE电泳结果显示,融合His-MBP标签后目的蛋白rhTCD的可溶性表达量显著提高,以92.64%±4.24%的可溶性水平表达于上清中。Ni-NTA亲和层析纯化后,TEV蛋白酶高效切除了His-MBP标签。经MBP亲和层析纯化后,SDS-PAGE银染显示目的蛋白rhTCD纯度约为82.60%±0.63%,非变性PAGE表明目的蛋白以多聚体形式存在的,得率约(0.51±0.08)mg/L,为其后续活性研究和扩大培养奠定了基础。 展开更多

关键词 T7肽 CD137L 重组蛋白 MBP标签 融合表达 蛋白纯化

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T7肽修饰氧化还原敏感型聚酰胺-胺作为siRNA递送载体的初步评价 被引量：1

3

作者 严秀云 丁伯美 +2 位作者 胡青 程丽芳 陈大为 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期767-774,共8页

拟构建一种具有潜在肝肿瘤靶向作用的T7肽修饰氧化还原敏感聚酰胺-胺(T7-PEG-SS-PAMAM,T7-PSSP)复合物,并用于M2型丙酮酸激酶(PKM2)-siRNA的体外递送。聚合物T7-PSSP的结构特征通过~1H NMR进行确证。制备的T7-PSSP/siRNA复合物粒径为(11... 拟构建一种具有潜在肝肿瘤靶向作用的T7肽修饰氧化还原敏感聚酰胺-胺(T7-PEG-SS-PAMAM,T7-PSSP)复合物,并用于M2型丙酮酸激酶(PKM2)-siRNA的体外递送。聚合物T7-PSSP的结构特征通过~1H NMR进行确证。制备的T7-PSSP/siRNA复合物粒径为(119.8±0.76)nm,多分散系数(PDI)为0.19±0.12,ζ电位为(8.92±0.38)mV。琼脂糖凝胶电泳试验证明载体-基因复合物具有较好的稳定性,且对siRNA具有较好的保护作用。通过凝胶电泳法观察到,在谷胱甘肽还原剂的作用下,siRNA能快速从PSSP/siRNA复合物中释放出来,说明PSSP/siRNA复合物在还原环境中可有效释出携载的siRNA。体外摄取试验表明,T7肽的修饰可以显著提高siRNA在肝癌细胞HepG2中的摄取量。实时荧光定量RT-PCR结果显示,与阴性对照和其他复合物组相比,T7-PSSP/siRNA具有最高的PKM2基因转染和沉默效率。 展开更多

关键词 M2型丙酮酸激酶(PKM2) 聚酰胺-胺 T7肽 氧化还原敏感 siRNA递送 主动靶向

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脑肿瘤靶向肽T7修饰的纳米结构脂质载体的制备和表征 被引量：1

4

作者 胡洁琳 汪勒 庞良芳 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期353-359,共7页

目的:本研究旨在制备载siRNA的脑肿瘤靶向肽T7修饰的纳米结构脂质载体(siRNA/T7-NLC)并对其进行表征。方法:通过T7与DSPE-PEG2000-Mal反应生成T7-PEG2000-DSPE;采用熔融-超声法制备NLC;以合成的T7-PEG2000-DSPE对NLC进行表面修饰,制得T7... 目的:本研究旨在制备载siRNA的脑肿瘤靶向肽T7修饰的纳米结构脂质载体(siRNA/T7-NLC)并对其进行表征。方法:通过T7与DSPE-PEG2000-Mal反应生成T7-PEG2000-DSPE;采用熔融-超声法制备NLC;以合成的T7-PEG2000-DSPE对NLC进行表面修饰,制得T7-NLC,与siRNA复合,制备siRNA/T7-NLC复合物。采用bEnd. 3/C6细胞共培养模型对T7-PEG2000-DSPE的用量进行筛选,并对优化后的siRNA/T7-NLC进行表征。结果:T7-PEG2000-DSPE在NLC中的用量为4%; siRNA/T7-NLC的粒径(112. 61±1. 85) nm;多聚分散度(PDI)为(0. 277±0. 016); Zeta电位为(9. 54±0. 86) m V;包封率为(80. 56±1. 13)%。在4～8℃条件下放置30 d,粒径、PDI和Zeta电位无明显变化; T7-NLC对siRNA具有良好的保护作用,在血浆中24 h内仍能保持稳定。结论:选定和制备了具有良好体外理化性质和脑肿瘤靶向能力的T7-NLC递送siRNA。 展开更多

关键词 纳米结构脂质载体 T7肽 脑肿瘤 基因递送系统 小干扰RNA

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噬菌体7肽库中筛选细粒棘球蚴头节抗原的模拟表位的初步研究 被引量：7

5

作者 陈新华 温浩 +5 位作者 李雄 林仁勇 张琰 冯晓辉 张静萍 马旭东 《新疆医科大学学报》 CAS 2003年第1期25-27,共3页

目的:从噬菌体 7肽库中寻找细粒棘球蚴头节抗原的模拟表位。方法 :以细粒棘球蚴头节抗原的单克隆抗体作靶分子筛选噬菌体 7肽库 ,经过第 3轮筛选后进行 EL ISA检测及竞争抑制试验后 ,挑取 9株阳性克隆进行序列测定 ,序列比较后得到保守... 目的:从噬菌体 7肽库中寻找细粒棘球蚴头节抗原的模拟表位。方法 :以细粒棘球蚴头节抗原的单克隆抗体作靶分子筛选噬菌体 7肽库 ,经过第 3轮筛选后进行 EL ISA检测及竞争抑制试验后 ,挑取 9株阳性克隆进行序列测定 ,序列比较后得到保守序列。结果 :经过第 3轮亲和筛选 ,阳性克隆得到富集。EL ISA检测和竞争抑制试验证明 ,该小肽具有良好的免疫活性和特异性。结论:肽片段可能是细粒棘球蚴头节抗原的抗原表位 。 展开更多

关键词 噬菌体7肽库 模拟表位 头节抗原 单克隆抗体 细粒棘球蚴

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MUC1抗原的表位预测及模拟位的筛选 被引量：6

6

作者 杨清浩 王祥卫 +1 位作者 金燕 张立新 《重庆医学》 CAS CSCD 2005年第5期686-688,693,共4页

目的预测MUC1抗原的B细胞表位,从噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟位。方法联合运用多种方法对MUC1的二级结构和表面特性,如理化性质、亲水性、可塑性、溶剂可及性及免疫原性等方面进行分析,预测MUC1的抗原表位。利用纯化获... 目的预测MUC1抗原的B细胞表位,从噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟位。方法联合运用多种方法对MUC1的二级结构和表面特性,如理化性质、亲水性、可塑性、溶剂可及性及免疫原性等方面进行分析,预测MUC1的抗原表位。利用纯化获得的BC2抗体筛选噬菌体随机7肽库,夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列,竞争性抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆。结果MUC1存在有多个潜在的抗原表位位点,可能的蛋白质抗原表位区域:110,2454,6577,8491,108134,140156,159174,179196,199210,220233,237265,270299,316337,351362,369396,411420,445502。经3轮筛选,获得了30个阳性克隆,DNA序列分析并推导出氨基酸序列:TAPDLRP、SAPDLRP、AAPDSRP及LAPDFRP4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上。结论应用多参数预测MUC1抗原的B细胞表位,为进一步研究MUC1结构和功能、选择表达新型MUC1分子奠定了基础。所得序列TAPDLRP、SAPDLRP、AAPDSRP及LAPDFRP模拟MUC1抗原表位。 展开更多

关键词 MUC1抗原 B细胞表位 模拟表位 噬菌体随机7肽库 抗体

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噬菌体随机肽库筛选MUC1抗原模拟表位 被引量：2

7

作者 杨清浩 王祥卫 +1 位作者 金燕 张立新 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第13期1332-1334,共3页

目的噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟表位。方法利用纯化获得的BC2抗体筛选噬菌体随机7肽库,通过夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列并进行同源性及氨基酸分析,竞争性抑制实验鉴定噬菌体克隆。结果经3轮筛选,获得... 目的噬菌体随机多肽文库筛选及鉴定MUC1抗原的模拟表位。方法利用纯化获得的BC2抗体筛选噬菌体随机7肽库,通过夹心ELISA分析噬菌体克隆,测定阳性克隆DNA序列并进行同源性及氨基酸分析,竞争性抑制实验鉴定噬菌体克隆。结果经3轮筛选,获得了30个阳性克隆,DNA序列分析并推导出氨基酸序列:TAPDLRP、SAPDLRP、AAPDSRP及LAPDFRP。鉴定结果表明:4个噬菌体展示肽克隆抑制率均在50%以上。结论所得序列TAPDLRP、SAPDLRPAAPDSRP及LAPDFRP模拟MUC1抗原表位。 展开更多

关键词 MCU1抗原 模拟表位 噬菌体随机7肽库 抗体

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99mTc标记T7肽及其在裸鼠非小细胞肺癌模型体内的生物分布研究 被引量：3

8

作者 郝玉美 贺欣 +4 位作者 周晓靓 孟爱民 刘鉴峰 刘金剑 宋娜玲 《中国肺癌杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期189-196,共8页

背景与目的肺癌是一种死亡率极高的恶性肿瘤,针对肺癌的早期诊断和治疗有着重要的意义和价值,本研究旨在探讨羰基锝法标记的肿瘤抑素T7肽用作裸鼠肺癌早期显像剂的初步研究。方法采用羰基锝法标记T7肽,薄层色谱法检测99mTc-T7的放化纯... 背景与目的肺癌是一种死亡率极高的恶性肿瘤,针对肺癌的早期诊断和治疗有着重要的意义和价值,本研究旨在探讨羰基锝法标记的肿瘤抑素T7肽用作裸鼠肺癌早期显像剂的初步研究。方法采用羰基锝法标记T7肽,薄层色谱法检测99mTc-T7的放化纯度与稳定性,丙酮作展开系统。测定99mTc-T7与NCI-H157细胞的亲和力。研究99mTc-T7于0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h在荷人非小细胞肺腺癌裸鼠体内的生物分布特性,并计算肿瘤(T)与非肿瘤组织(NT)放射性比值。结果 99mTc对T7肽标记率高,放化纯度达90%以上,不需进一步纯化,体外稳定性好。99mTc-T7与NCI-H157细胞的平衡解离常数为196.1 nM。99mTc-T7在裸鼠体内主要通过内脏器官代谢,血液清除较快,在肿瘤部位有一定程度聚集,肿瘤/肌肉比值随时间延长而增加,可达到5以上,在4 h-8 h之间取值较为理想。99mTc-T7在肺内存在一过性聚集。结论 99mTc-T7制备方法简便,标记率高,稳定性好,并能在肺癌肿瘤部位聚集,有望用作肺癌SPECT/CT显像剂。 展开更多

关键词 99mTc-T7 肿瘤抑素T7肽 整合素ΑΝΒ3 肺癌显像 生物分布

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肿瘤抑素T7肽溶液的稳定性研究 被引量：2

9

作者 李瑭 熊雁 +2 位作者 蔡磊 邓意辉 宋艳志 《中国药剂学杂志（网络版）》 2018年第6期101-108,共8页

目的考察水溶性肿瘤抑素T7肽在脂质体制备及贮存条件下的稳定性。方法将T7肽溶液置于室温下,HPLC法测定6 h内峰面积减小百分比,确定溶剂。再将T7肽溶液分别置于4℃和25℃下,绘制降解曲线,确定贮存条件。最后将不同pH值、含不同缓冲盐的T... 目的考察水溶性肿瘤抑素T7肽在脂质体制备及贮存条件下的稳定性。方法将T7肽溶液置于室温下,HPLC法测定6 h内峰面积减小百分比,确定溶剂。再将T7肽溶液分别置于4℃和25℃下,绘制降解曲线,确定贮存条件。最后将不同pH值、含不同缓冲盐的T7肽溶液于65℃下保温1 h,检测保温前后溶液中T7肽含量,优化制备条件。结果以重蒸水和灭菌注射用水为溶剂的T7肽溶液在6 h内峰面积减少分别为79.66%和18.31%,于4℃或25℃贮存6 h后的降解率分别约为10%与20%,在pH值4.0～9.0的溶剂中降解率分别为39.67%、42.55%、37.71%、13.44%、7.34%和23.76%,与各种缓冲液接触后质量浓度均降至初始质量浓度的40%以下。结论 T7肽溶液应以弱碱性的灭菌注射用水为溶剂,现用现配,制剂制备过程中应避免与缓冲液接触,并于4℃下贮存。 展开更多

关键词 药剂学 肿瘤抑素T7肽 稳定性 PH 缓冲液 灭菌注射用水

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赭曲霉毒素A模拟表位的筛选及免疫学鉴定 被引量：2

10

作者 王耀 胡骁飞 +5 位作者 裴亚峰 赵东 刘运超 张改平 李志西 邓瑞广 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1271-1277,共7页

从噬菌体随机七肽库中筛选得到赭曲霉毒素A的模拟表位,并以其替代毒素标品建立赭曲霉毒素A免疫学快速检测方法。以纯化的抗赭曲霉毒素A单克隆抗体(OTA mAb)为配基,亲和筛选融合表达在丝状M13噬菌体次要衣壳蛋白(PⅢ)上的随机七肽库,以EL... 从噬菌体随机七肽库中筛选得到赭曲霉毒素A的模拟表位,并以其替代毒素标品建立赭曲霉毒素A免疫学快速检测方法。以纯化的抗赭曲霉毒素A单克隆抗体(OTA mAb)为配基,亲和筛选融合表达在丝状M13噬菌体次要衣壳蛋白(PⅢ)上的随机七肽库,以ELISA方法鉴定阳性克隆,并以筛选的模拟表位建立赭曲霉毒素A的ELISA检测方法。经过4轮亲和筛选,共得到22株与OTA mAb特异结合的阳性噬菌体克隆,且该结合都能够被OTA标品阻断,DNA测序及多肽核心序列分析后,得到赭曲霉毒素A的模拟表位的主要序列为:MPLWXDL,X为任意氨基酸,以阳性噬菌体克隆建立的竞争ELISA检测方法,线性范围为250～8000pg/ml。基于制备的OTA mAb,利用噬菌体随机七肽库可成功筛选到赭曲霉毒素A的模拟表位,并能够替代OTA标品建立直接竞争模式的免疫学快速检测方法。 展开更多

关键词 噬菌体随机七肽库 赭曲霉毒素A 模拟表位 单克隆抗体

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Tumstatin活性片段-T7肽抑制血管生成的实验研究

11

作者 王付海 徐宗珍 +3 位作者 李涛 刘锋 修鹏 李杰 《中国现代普通外科进展》 CAS 2017年第8期589-593,共5页

目的:探讨肿瘤抑素(Tumstatin)的活性片段T7肽在体外对血管生成的影响及相关机制。方法:选取人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为研究对象,在模拟肿瘤缺氧微环境的缺氧培养箱内进行相关实验。分为缺氧对照组、缺氧+T7肽(1.0μmol/L)处理组、缺... 目的:探讨肿瘤抑素(Tumstatin)的活性片段T7肽在体外对血管生成的影响及相关机制。方法:选取人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为研究对象,在模拟肿瘤缺氧微环境的缺氧培养箱内进行相关实验。分为缺氧对照组、缺氧+T7肽(1.0μmol/L)处理组、缺氧+T7肽(2.0μmol/L)处理组。体外小管形成实验观察T7肽在缺氧环境下对血管生成的影响;CCK-8法检测T7肽对HUVECs活力的影响;Annexin V-FITC法检测细胞凋亡情况;Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白的表达变化;免疫荧光及Western blot检测HUVECs中VE-钙黏蛋白表达变化。结果 :在缺氧环境下,T7肽可明显抑制体外血管生成(P<0.05),并显著降低HUVECs活力,促进其凋亡(P<0.05);T7肽可诱导促凋亡蛋白BAX表达增加(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P<0.01);T7肽可降低HUVECs内VE-钙黏蛋白的表达(P<0.05)。结论:T7肽可通过抑制内皮细胞活力、促进内皮细胞凋亡及降低VE-钙黏蛋白表达发挥其抗血管生成的作用。 展开更多

关键词 血管生成 T7肽 细胞活力 细胞凋亡 VE-钙黏蛋白

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应用噬菌体随机十二肽库筛选hFGF-7相关模拟肽 被引量：6

12

作者 宗宪磊 蔡景龙 +3 位作者 姜笃银 付小兵 盛志勇 单菲 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第11期46-49,共4页

目的应用噬菌体随机十二肽库生物淘选具有刺激表皮细胞增殖作用的人成纤维细胞生长因子-7(hFGF-7)噬菌体模拟肽。方法以hFGF-7单克隆抗体为靶,进行4轮生物淘选噬菌体随机十二肽库;随机挑取单克隆噬菌体,应用ELISA方法检测单克隆噬菌体... 目的应用噬菌体随机十二肽库生物淘选具有刺激表皮细胞增殖作用的人成纤维细胞生长因子-7(hFGF-7)噬菌体模拟肽。方法以hFGF-7单克隆抗体为靶,进行4轮生物淘选噬菌体随机十二肽库;随机挑取单克隆噬菌体,应用ELISA方法检测单克隆噬菌体的结合力,对结合力较好的单克隆噬菌体提取噬菌体DNA,进行测序,并行序列分析。结果经过4轮生物淘选,特异性噬菌体模拟肽获得了富集,ELISA检测结果显示获得的一些噬菌体模拟肽具有较好的结合力,测序获得11个与促进细胞分裂、增殖或抑制细胞增殖有关的碱基序列。结论从噬菌体随机十二肽库中可淘选到与hFGF-7相关的噬菌体模拟肽,其中部分噬菌体模拟肽可能会促进表皮细胞增殖,期望将来可应用于促进创面愈合。 展开更多

关键词 噬菌体随机十二肽库 人成纤维细胞生长因子-7噬菌体模拟肽 生物淘选 测序

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鸡β-防御素7在大肠杆菌中的表达及活性分析 被引量：3

13

作者 李民欢 祁克宗 +1 位作者 涂健 钟瑾 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1778-1786,共9页

【目的】根据鸡β-防御素7(Gal-7)的成熟肽基因序列合成基因,构建表达Gal-7的大肠杆菌工程菌,研究重组鸡防御素Gal-7成熟肽的体外生物活性。【方法】将合成的gal-7基因克隆到大肠杆菌表达载体pGEX-6p-1中,得到重组质粒pGEX-6p-gal7,转... 【目的】根据鸡β-防御素7(Gal-7)的成熟肽基因序列合成基因,构建表达Gal-7的大肠杆菌工程菌,研究重组鸡防御素Gal-7成熟肽的体外生物活性。【方法】将合成的gal-7基因克隆到大肠杆菌表达载体pGEX-6p-1中,得到重组质粒pGEX-6p-gal7,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达得到含GST标签的融合蛋白GST-Gal7;之后用Prescission蛋白酶将GST标签切除,并对成熟肽进行质谱分析;再利用琼脂打孔扩散法检测Gal-7成熟肽的体外抑菌活性,用2倍稀释法测定对指示菌的最低抑菌浓度。【结果】成功构建Gal-7大肠杆菌异源表达工程菌,表达纯化的重组Gal-7成熟肽质谱鉴定分子量为5 516 Da,其对黄色微球菌(NCIB 8166)、金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)、粪肠球菌(ATCC 29212)、大肠杆菌(CMCC 44102)均有抑菌活性,最低抑菌浓度分别为16.875、67.5、67.5、135 mg/L。【结论】获得表达鸡Gal-7成熟肽的大肠杆菌工程菌,并且切除GST标签的Gal-7成熟肽具有生物活性。 展开更多

关键词 Β-防御素 Gal-7成熟肽 异源表达 抗菌活性

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合成角质细胞生长因子活性短肽促进表皮细胞增殖的实验研究 被引量：2

14

作者 宗宪磊 陆海滨 +5 位作者 祁佐良 李国菊 宋国栋 都乐 靳小雷 姜笃银 《组织工程与重建外科杂志》 2016年第1期1-5,共5页

目的应用噬菌体随机7肽库筛选角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)的关键序列,进行KGF活性短肽的调整和合成,并研究其对表皮细胞增殖的作用。方法以KGF单克隆抗体为靶,筛选噬菌体随机7肽库,获得KGF的特异性序列,并进行序... 目的应用噬菌体随机7肽库筛选角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)的关键序列,进行KGF活性短肽的调整和合成,并研究其对表皮细胞增殖的作用。方法以KGF单克隆抗体为靶,筛选噬菌体随机7肽库,获得KGF的特异性序列,并进行序列调整。用免疫荧光法检测KGF活性短肽的表皮细胞亲和力。用CCK-8法检测KGF活性短肽对表皮细胞增殖的影响。用RT-PCR法和Western-blot法检测表皮细胞上特异性受体KGFR的表达水平。结果筛选噬菌体随机7肽库,获得2个与KGF相似的特异性序列,合成获得2个KGF活性短肽,并纯化至98%纯度,短肽的C端进行氨基化封闭,N端进行罗丹明激光染料标记。免疫荧光检测结果显示,2个KGF活性短肽均能够与表皮细胞相结合。CCK-8检测结果显示,与阴性对照组相比,2个KGF活性短肽能够促进表皮细胞增殖,并呈浓度依赖性。RT-PCR和Western-blot检测结果显示,2个KGF活性短肽组中表皮细胞表达KGFR增强。结论从噬菌体随机7肽库中筛选到2个KGF的关键序列,合成的2个KGF活性短肽能够与KGFR相结合,并增强KGFR的表达,从而促进表皮细胞增殖,有望应用于促进创面愈合。 展开更多

关键词 噬菌体随机7肽库 角质细胞生长因子 活性短肽 表皮细胞 创面愈合

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DA7R肽修饰的红细胞膜包裹纳米粒的制备与评价 被引量：1

15

作者 林雯 史琼枝 +3 位作者 李银科 曾媛 谢向阳 胡华 《西北药学杂志》 CAS 2022年第1期71-75,共5页

目的制备由^(D)A7R肽修饰的红细胞膜包裹的PLGA纳米粒,并进行体外评价。方法合成DSPE-PEG 2000-^(D)A7R,制备PLGA纳米粒,制备由^(D)A7R肽修饰的红细胞膜包裹纳米粒(^(D)A7R-NP),用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM... 目的制备由^(D)A7R肽修饰的红细胞膜包裹的PLGA纳米粒,并进行体外评价。方法合成DSPE-PEG 2000-^(D)A7R,制备PLGA纳米粒,制备由^(D)A7R肽修饰的红细胞膜包裹纳米粒(^(D)A7R-NP),用透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)、粒径分析仪等进行表征。结果制备的^(D)A7R-NP平均粒径为(102.8±11.7)nm,包封率为79.14%±2.57%,体外4~8℃可稳定保存30 d,模拟血浆中48 h稳定。细胞实验表明^(D)A7R-NP跨越血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的能力显著提高。结论制备的由^(D)A7R肽修饰的红细胞膜包裹的PLGA纳米粒理化特性良好,且具有良好的脑靶向潜力。 展开更多

关键词 ^(D)A7R肽 纳米粒 红细胞膜 脑靶向

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生长素作用方式的分子动力学模拟研究 被引量：1

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作者 贾雪冰 张鋆 +3 位作者 孙宏伟 陈兰 沈荣欣 赖城明 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第24期2500-2508,共9页

针对植物生长素、受体TIR1、辅酶InsP6和IAA7底物多肽链进行5组14个体系的分子动力学模拟研究,比较分析了4个生长素分子IAA,1-NAA,2,4-D和2-NAA与受体TIR1之间的相互作用方式以及辅酶InsP6和IAA7底物多肽链在早期生长素反应中所起的作用... 针对植物生长素、受体TIR1、辅酶InsP6和IAA7底物多肽链进行5组14个体系的分子动力学模拟研究,比较分析了4个生长素分子IAA,1-NAA,2,4-D和2-NAA与受体TIR1之间的相互作用方式以及辅酶InsP6和IAA7底物多肽链在早期生长素反应中所起的作用.计算结果表明,生长素与TIR1的结合能力与生长素活性顺序一致,生长素的分子结构对于反应活性具有重要影响;中心水分子与生长素之间的氢键作用使得生长素的位置取向有利于与TIR1形成强相互作用;辅酶InsP6与TIR1形成多个氢键使活性口袋结构稳定,保证生长素有效地与活性位点结合;在结合生长素后,IAA7运动加剧,使得生长素犹如激活IAA7多肽活性的"引发器",进而引发进一步的生长素反应. 展开更多

关键词 生长素反应 受体TIR1 IAA7底物多肽 分子动力学模拟

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运用噬菌体随机七肽库筛选与CRN特异结合的多肽 被引量：1

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作者 李淑珍 赵珩 +1 位作者 生吉萍 曲桂芹 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第24期75-79,共5页

CORYNE(CRN)对拟南芥(Arabidopsis thaliana)茎尖分生组织干细胞的分裂分化的调控具有重要作用。为了研究与CRN胞内激酶区相互作用的肽,探讨与CRN胞内激酶区相互作用的关键位点。采用了亲和淘选噬菌体随机七肽库的方法,通过4轮亲和淘选... CORYNE(CRN)对拟南芥(Arabidopsis thaliana)茎尖分生组织干细胞的分裂分化的调控具有重要作用。为了研究与CRN胞内激酶区相互作用的肽,探讨与CRN胞内激酶区相互作用的关键位点。采用了亲和淘选噬菌体随机七肽库的方法,通过4轮亲和淘选后随机挑取10个克隆进行DNA测序,经ELISA鉴定后,得到1个与CRN胞内激酶区特异结合的七肽,其序列为TLTELVR。研究结果表明,利用噬菌体展示技术成功淘选到了与CRN胞内激酶区特异结合的七肽,为进一步研究与CRN胞内激酶区相互作用的分子奠定了基础。 展开更多

关键词 CRN 结合肽 噬菌体随机七肽库

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模拟HCVHVR1免疫7肽对树突状细胞作用的初步研究 被引量：1

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作者 宋春辉 杨斌 +1 位作者 陈黎明 程云 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2009年第10期923-925,共3页

目的了解在模拟HCV HVR1免疫7肽(7P)刺激的条件下,健康志愿者树突状细胞(DC)的细胞表型及细胞因子分泌情况的变化,并探讨其作用机制。方法分离6名健康志愿者外周血单核细胞(PBMC),和7P共同孵育培养后,应用流式抗体进行DC细胞表型及细胞... 目的了解在模拟HCV HVR1免疫7肽(7P)刺激的条件下,健康志愿者树突状细胞(DC)的细胞表型及细胞因子分泌情况的变化,并探讨其作用机制。方法分离6名健康志愿者外周血单核细胞(PBMC),和7P共同孵育培养后,应用流式抗体进行DC细胞表型及细胞内因子染色,应用FACSCalibur流式细胞仪及FACSCalibur软件进行检测分析。结果与空白对照组相比,7P刺激组代表mDC(髓样树突状细胞)成熟的Lin1-HLA-DR+CD11c+CD83+细胞的频数明显下降(P=0.001),代表pDC(浆细胞样树突状细胞)成熟的Lin1-HLA-DR+CD123+CD83+细胞的频数未发生明显变化。代表mDC分泌功能的IL-12在空白对照组及刺激组均未检测出来。结论7P对DC无明显的激活作用。7P对免疫效应细胞产生作用可能不通过抗原提呈细胞而直接作用于免疫效应细胞。 展开更多

关键词 模拟HCVHVR1免疫7肽 树突状细胞 丙型肝炎病毒 流式细胞仪

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BMP-7衍生多肽/壳聚糖/纳米羟基磷灰石/胶原复合材料促进骨再生的实验研究 被引量：1

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作者 酆波 胡冬煦 张阳德 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第15期25-29,共5页

目的探索新型仿生支架材料BMP-7衍生多肽/壳聚糖/纳米羟基磷灰石/胶原促进大鼠颅骨缺损再生的效果。方法制备复合支架材料壳聚糖/纳米羟基磷灰石/胶原,扫描电镜观察其表面微观形貌。将BMP-7衍生多肽与材料复合,高效液相色谱仪检测其在... 目的探索新型仿生支架材料BMP-7衍生多肽/壳聚糖/纳米羟基磷灰石/胶原促进大鼠颅骨缺损再生的效果。方法制备复合支架材料壳聚糖/纳米羟基磷灰石/胶原,扫描电镜观察其表面微观形貌。将BMP-7衍生多肽与材料复合,高效液相色谱仪检测其在体外的释放规律。成年SD大鼠24只,在大鼠顶骨左、右两侧分别制备颅骨极限缺损,右侧设为实验组,植入BMP-7衍生多肽/壳聚糖/纳米羟基磷灰石/胶原复合材料,左侧设为对照组,植入单纯壳聚糖/纳米羟基磷灰石/胶原复合材料,于6周和12周时间点将大鼠分批处死,进行大体观察、CT三维重建和组织学观察。结果扫描电镜结果显示:支架材料呈多孔状;多肽体外释放实验结果表明BMP-7衍生多肽可以从材料中缓慢释出;大鼠颅骨缺损修复实验结果显示:在各时间点,复合BMP-7衍生多肽的壳聚糖/纳米羟基磷灰石/胶原支架材料与单纯壳聚糖/纳米羟基磷灰石/胶原支架材料相比,能够明显促进大鼠颅骨缺损修复,差异有显著性(P<0.05)。结论新型仿生支架材料BMP-7衍生多肽/壳聚糖/纳米羟基磷灰石/胶原能够有效促进骨再生,是一种具有良好应用前景的骨组织工程支架材料。 展开更多

关键词 BMP-7衍生多肽 支架材料 颅骨缺损 骨组织工程

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肝癌细胞靶向肽的筛选与鉴定 被引量：1

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作者 赵红蕾 韩文瑜 +6 位作者 刁昱文 冯新 韩东 朱僧 刘晓贺 路荣 雷连成 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期202-206,共5页

利用噬菌体环七肽库筛选与肝癌细胞特异性结合的多肽,并对其亲和力进行生物学鉴定。以HL-7702为消减细胞,HepG2为筛选靶细胞,对噬菌体随机环七肽库进行4轮全细胞消减筛选,并随机挑取60个阳性噬菌体克隆,以ELISA法鉴定其与HepG2细胞的结... 利用噬菌体环七肽库筛选与肝癌细胞特异性结合的多肽,并对其亲和力进行生物学鉴定。以HL-7702为消减细胞,HepG2为筛选靶细胞,对噬菌体随机环七肽库进行4轮全细胞消减筛选,并随机挑取60个阳性噬菌体克隆,以ELISA法鉴定其与HepG2细胞的结合活性,并取阳性克隆进行测序分析,并合成多肽进行免疫细胞化学染色鉴定。经4轮筛选,噬菌体在靶细胞HepG2上出现明显富集;利用ELISA从随机挑选的60个噬菌体克隆中得到15个与肝癌细胞具有高结合力的阳性克隆,测序并进行序列分析比对发现氨基酸序列无同源性,经免疫细胞化学染色鉴定后,发现1条多肽序列亲和力较高,为提高抗菌肽对肿瘤细胞的靶向杀伤作用奠定基础。 展开更多

关键词 噬菌体随机环七肽库 肝癌细胞 消减筛选 靶向

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