期刊文献+
共找到20篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
卵清白蛋白特异性T细胞克隆的建立及T细胞受体使用情况分析 被引量:4
1
作者 张霄瑜 王文超 +4 位作者 吕平 朱晓辉 张岩 张玲 高晓明 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期123-126,共4页
目的 体外建立可长期培养的抗原特异性T细胞系及克隆 ,并分析其T细胞受体的使用情况。方法 用卵清白蛋白 (OVA)免疫BALB c小鼠 ,取淋巴结细胞在体外用抗原反复刺激建立抗原特异性T细胞系 ,通过有限稀释法进行克隆 ,应用锚定PCR方法分... 目的 体外建立可长期培养的抗原特异性T细胞系及克隆 ,并分析其T细胞受体的使用情况。方法 用卵清白蛋白 (OVA)免疫BALB c小鼠 ,取淋巴结细胞在体外用抗原反复刺激建立抗原特异性T细胞系 ,通过有限稀释法进行克隆 ,应用锚定PCR方法分析其特异的T细胞受体的应用。结果 建立了H 2 d 限制的OVA特异性T细胞系 ,获得了 3株特异性较高的T细胞克隆 ,T细胞系中TCRAV11S4和BV4S1应用频率最高 ,3株T细胞克隆的TCR均为AV5S2和BV2S1,这些T细胞所使用的TCRα链和 β链在CDR3区有明显的共性。结论 获得了卵清白蛋白特异的T细胞系和克隆 。 展开更多
关键词 卵清白蛋白 T细胞克隆 T细胞受体 细胞免疫学
原文传递
人脐带血LAK细胞克隆化及其对白血病细胞的杀伤效应 被引量:5
2
作者 蒋承勇 张明伟 +2 位作者 江飞子 毛宁 唐佩弦 《临床血液学杂志》 CAS 1990年第1期1-4,共4页
重组人白细胞介素Ⅱ(rhlL-2)刺激下,脐带血单个核细胞在半固体培养中可增殖形成淋巴细胞克隆.大约20%的克隆细胞具有明显的LAK活性,对NK敏感的K562、NK抵抗的H7402及HL60、KG-1、Jurket(?)等多种白血病细胞均有强烈的杀伤作用,对HL60... 重组人白细胞介素Ⅱ(rhlL-2)刺激下,脐带血单个核细胞在半固体培养中可增殖形成淋巴细胞克隆.大约20%的克隆细胞具有明显的LAK活性,对NK敏感的K562、NK抵抗的H7402及HL60、KG-1、Jurket(?)等多种白血病细胞均有强烈的杀伤作用,对HL60白血病祖细胞增殖(CFU-L)也有显著的抑制作用. 展开更多
关键词 T细胞克隆 LAK活性 白血病细胞
下载PDF
HFRS患者汉滩病毒核蛋白特异性T细胞克隆及其靶细胞的建立 被引量:2
3
作者 王平忠 白雪帆 +1 位作者 张颖 黄长形 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期600-605,共6页
目的 建立肾综合征出血热 (HFRS)患者汉滩病毒 (HTNV)核衣壳蛋白 (NP)特异性CTL克隆 ,为HTNVNPT细胞表位鉴定及HFRS患者T细胞免疫功能研究奠定基础。方法 采用Fi coll密度梯度离心法分离HFRS患者外周血单个核细胞 (PBMC) ,用灭活HTNV... 目的 建立肾综合征出血热 (HFRS)患者汉滩病毒 (HTNV)核衣壳蛋白 (NP)特异性CTL克隆 ,为HTNVNPT细胞表位鉴定及HFRS患者T细胞免疫功能研究奠定基础。方法 采用Fi coll密度梯度离心法分离HFRS患者外周血单个核细胞 (PBMC) ,用灭活HTNV和IL 2体外刺激 ,有限稀释法建立T细胞克隆 ,流式细胞术鉴定克隆表型。并用EB病毒 (EBV)转化B淋巴细胞 ,建立B淋巴母细胞样细胞系 (B LCL) ,以含HTNVS基因的重组痘苗病毒感染B LCL作靶细胞 ,以CTL克隆作效应细胞进行细胞毒杀伤试验 ,测定T细胞克隆的抗原特异性。结果 T细胞克隆能特异性识别表达NP的B LCL。在 5名患者中 ,3名有较高的杀伤率 ,并自 2名患者建立了 5株HTNV特异性CTL克隆 ,其表型为CD8+ 均大于 6 0 %。结论 成功建立了HFRS患者HTNVNP特异性CTL克隆及其靶细胞。NP是HFRS患者HTNV特异性CTL应答的主要靶抗原之一。 展开更多
关键词 HFRS 汉滩病毒核蛋白 特异性T细胞克隆 靶细胞 EBV 肾综合征出血热
原文传递
EBV转化的人乳头瘤病毒感染者B淋巴母细胞系的建立及应用 被引量:3
4
作者 王雪莲 王佐周 +1 位作者 安春丽 宋阳 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期18-21,共4页
建立EB病毒(EBV)转化的B淋巴母细胞系(LCL),应用此细胞系作为抗原递呈细胞筛选抗原特异性的T细胞克隆。收集人乳头瘤病毒(HPV)感染者外周血20份,分离外周血单个核细胞(PBMC),利用Pan T细胞试剂盒去除PBMC中的T细胞,获得non-T淋巴细胞,EB... 建立EB病毒(EBV)转化的B淋巴母细胞系(LCL),应用此细胞系作为抗原递呈细胞筛选抗原特异性的T细胞克隆。收集人乳头瘤病毒(HPV)感染者外周血20份,分离外周血单个核细胞(PBMC),利用Pan T细胞试剂盒去除PBMC中的T细胞,获得non-T淋巴细胞,EBV病毒转化non-T淋巴细胞。应用转化的LCL细胞作为抗原递呈细胞,ELISPOT筛选可能的HPV抗原特异性的T细胞克隆。成功建立18个LCLs,建株成功率为90%。转化成功的LCL细胞体积增大,聚集成团状或簇状。建株失败的两份标本,用于转化的non-T淋巴细胞数少于2×106。应用LCL细胞作为抗原递呈细胞筛选出64个HPV抗原特异性的T细胞克隆。成功建立LCLs,此细胞系细胞可作为体外研究HPV特异性免疫反应的刺激细胞。 展开更多
关键词 EB病毒转化的B淋巴母细胞系 人乳头瘤病毒 T细胞克隆
下载PDF
白血病过继免疫治疗时外周血T淋巴细胞诱导培养后的克隆性变化 被引量:1
5
作者 刘岩 顾江英 +12 位作者 欧媛 李绵洋 王赫 靳娴 陶秀艳 刘兆利 马杏凡 王秀丽 马思琨 康蕊 蔡鹏 童春容 朱平 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第3期621-626,共6页
本研究分析白血病细胞免疫时自体树突细胞(DC)和多种细胞因子诱导外周血淋巴细胞后T细胞克隆性的变化。采集21例化疗缓解后行细胞免疫治疗的白血病患者的骨髓和外周血,加入细胞因子培养,获得树突细胞(DC)和激活T细胞。用RT-PCR扩增代表... 本研究分析白血病细胞免疫时自体树突细胞(DC)和多种细胞因子诱导外周血淋巴细胞后T细胞克隆性的变化。采集21例化疗缓解后行细胞免疫治疗的白血病患者的骨髓和外周血,加入细胞因子培养,获得树突细胞(DC)和激活T细胞。用RT-PCR扩增代表T细胞克隆性的T细胞受体β链可变区(T-cell receptor β variable region,TCRBV),用TCRBV基因扫描的方法观察培养前后T细胞克隆的特征性变化;对T细胞克隆的TCRBV进行序列分析。流式细胞术(FCM)检测CD3+、CD4+、CD8+、CD56+和CD4+CD25str+FOXP3+,确定其细胞毒T细胞、辅助T细胞、调节T细胞和NK-T细胞的比例变化。结果表明:临床缓解后的白血病患者的T细胞呈寡克隆分布,分属在24个TCRBV家族中一些TCRBV基因家族的淋巴细胞克隆消失,仅少数保持多克隆分布,其中TCRBV24基因家族均为克隆性的分布(100%)。分析患者的TCRBV24基因序列特征时发现,3例在CDR3区共用motif VAG,2例共用GGG,表明这些TCRBV24有可能识别同一抗原,其中1例(例5)患者除TCRBV24在CDR3区有motif GGG外,TCRBV8也有GGG,也可能会识别同一抗原。外周血淋巴细胞经过13天的体外抗原和细胞因子培养后,培养前出现的一些寡克隆以及克隆完全缺失的状态随即出现了明显变化,培养后都出现完整多克隆分布。将培养前后T细胞进行流式细胞术分析显示,培养后淋巴细胞数目为培养前的3.38±1.20倍,CD3+数培养前为(71.1±11.8)%细胞,培养第13天后为(95.4±3.2)%,明显增加;CD4+数培养前为(26.7±11.4)%,培养第13天后为(27.0±13.1)%,无明显变化(p>0.01);CD8+数培养前为(35.7±12.9)%,培养第13天后为(55.5±13.8)%,明显增加(p<0.01);CD3+CD56+数培养前为(3.1±1.6)%,培养第13天后为(9.8±6.1)%,增加2倍多(p<0.01);CD4+CD25str+FOXP3+数培养前为(0.12±0.1)%,培养第13天后为(0.22±0.18)%(p<0.01)。结论:T淋巴细胞诱导培养方法的主要作用是促进CTL和NK细胞增殖,缓解后白血病患 展开更多
关键词 白血病 过继免疫治疗 T细胞克隆 T细胞受体亚家族(TCRBV) 基因扫描
下载PDF
卵清白蛋白特异性T细胞免疫诱导BALB/c小鼠的调节性免疫应答
6
作者 张霄瑜 韩淑红 +5 位作者 刘相国 戴振鹏 朱晓辉 吕平 王玉俊 高晓明 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期127-130,共4页
目的 研究T细胞免疫后正常小鼠的调节性免疫应答。方法 应用体外扩增的卵清白蛋白 (OVA)特异的T细胞克隆免疫BALB c小鼠 ,3 H TdR掺入法分析细胞增殖 ,3 H TdR标记靶细胞检测杀伤T细胞的杀伤效应 ,间接免疫荧光法分析血清中抗T细胞抗... 目的 研究T细胞免疫后正常小鼠的调节性免疫应答。方法 应用体外扩增的卵清白蛋白 (OVA)特异的T细胞克隆免疫BALB c小鼠 ,3 H TdR掺入法分析细胞增殖 ,3 H TdR标记靶细胞检测杀伤T细胞的杀伤效应 ,间接免疫荧光法分析血清中抗T细胞抗体水平。结果 T细胞免疫后能诱导BALB c小鼠产生调节性T细胞的增殖反应、对靶细胞的杀伤效应以及针对于活化的T细胞的体液免疫应答 ,并进一步降低机体对OVA抗原的应答。 展开更多
关键词 调节性T细胞 T细胞克隆 T细胞免疫 卵清白蛋白 细胞免疫学
原文传递
禽TCR谱系分析的研究进展 被引量:1
7
作者 任超 刘贤勇 崔丽 《天津农学院学报》 CAS 2014年第3期44-48,共5页
禽T细胞通过TCR将外部信号转化为内部信号,刺激T细胞增殖分化并发挥效应功能。对TCR谱系进行分析,可以充分展示机体的TCR克隆状况,从而对机体的免疫功能进行全面评估。TCR谱系分析技术已广泛应用于病原体感染、肿瘤、自身免疫性疾病等... 禽T细胞通过TCR将外部信号转化为内部信号,刺激T细胞增殖分化并发挥效应功能。对TCR谱系进行分析,可以充分展示机体的TCR克隆状况,从而对机体的免疫功能进行全面评估。TCR谱系分析技术已广泛应用于病原体感染、肿瘤、自身免疫性疾病等领域。利于TCR谱系分析技术研究禽类动物在病原体感染和肿瘤疾病发生中TCR克隆的变化情况,能够为病原体的生物学特性以及相关疾病的诊断与防控提供更多的研究资源。 展开更多
关键词 禽TCR 谱系分析 T细胞克隆 免疫优势性 多样性
下载PDF
真核表达质粒PcDNA3.1(+)-带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)的构建及其在体内外细胞中的表达
8
作者 刘建巨 关继奎 +4 位作者 王琳 赵秀梅 郑建秋 李丹 闫庆慧 《中国实验诊断学》 北大核心 2011年第1期11-14,共4页
目的构建真核表达质粒PcDNA3.1(+)-带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)并了解其在体内外真核细胞中的表达。方法将带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)产物克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体上,... 目的构建真核表达质粒PcDNA3.1(+)-带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)并了解其在体内外真核细胞中的表达。方法将带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)产物克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体上,经酶切鉴定及测序分析证明构建成功后,以脂质体介导法转染体外培养的真核293T细胞及注射入鼠骨骼肌细胞中,了解其在体内外真核细胞中的表达情况。结果我们获取了包含带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)成熟肽及HA抗原在内的一段cDNA片段,并成功地与真核表达载体PcDNA3.1(+)连接,经测序表明,其中含有的带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)成熟肽的序列与Genebank上报道的序列完全一致。即我们成功构建了真核表达质粒PcDNA3.1(+)-带有白蛋白信号肽的Vasostatin(120-180aa)。之后,在转染了该质粒的体外真核293T细胞的上清液中及骨骼肌注射了该质粒的鼠血液中,利用Western-blot法检测到了目的基因的蛋白质。结论带有白蛋白信号肽的真核表达质粒PcDNA3.1(+)-Vasostatin(120-180aa)增强了蛋白分泌表达能力,这为进一步应用该质粒治疗全身新生血管类病奠定了一定基础. 展开更多
关键词 Vasostatin(120-180aa) 293T细胞 基因克隆 真核表达
下载PDF
T克隆细胞与造血祖细胞的相互作用
9
作者 蒋承勇 毛宁 +2 位作者 张明伟 江飞子 唐佩弦 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 1990年第3期212-216,共5页
人外周血 T 克隆细胞在 YIL-2持续刺激下具有良好的体外扩增能力和LAK 活性。在半固体琼脂培养体系中,T 克隆细胞抑制骨髓 CFU-GM 形成,抑制效应与 T 细胞数量、T 细胞和骨髓细胞的预孵育时间呈正相关。自体及异体 T 克隆细胞对 CFU-GM... 人外周血 T 克隆细胞在 YIL-2持续刺激下具有良好的体外扩增能力和LAK 活性。在半固体琼脂培养体系中,T 克隆细胞抑制骨髓 CFU-GM 形成,抑制效应与 T 细胞数量、T 细胞和骨髓细胞的预孵育时间呈正相关。自体及异体 T 克隆细胞对 CFU-GM 的抑制作用无显著差异。经 FACS 表型分析,这种 IL-2激活的 T 克隆细胞为T_3(+)、T_4(-)、T_8(+)、DR(+)、Tac(+)。 展开更多
关键词 T克隆细胞 造血祖细胞 造血调控
原文传递
HTLV-1感染T细胞克隆扩增和转化在成人T细胞白血病表达分析
10
作者 李玉 熊伟 +2 位作者 王三斌 黎诗琪 袁忠涛 《现代生物医学进展》 CAS 2020年第22期4311-4314,4343,共5页
目的:探究人类T细胞白血病1型病毒(Human T-cell leukemia virus type,HTLV-1)感染的T细胞克隆扩增和转化在成人T细胞白血病(AdultT-cellleukemia,ATL)中的表达分析,探究HTLV-1在T淋巴细胞中发生克隆扩增和转化的机制,为ATL的临床治疗... 目的:探究人类T细胞白血病1型病毒(Human T-cell leukemia virus type,HTLV-1)感染的T细胞克隆扩增和转化在成人T细胞白血病(AdultT-cellleukemia,ATL)中的表达分析,探究HTLV-1在T淋巴细胞中发生克隆扩增和转化的机制,为ATL的临床治疗提供理论基础。方法:选择2015年2月至2018年2月于我院接受治疗的38例ATL患者为研究对象,按照其病程差异将其分为急性ATL组(20例)和慢性ALT组(18例),分别采集其血样并检测两组患者血样中HTLV-1病毒载量的差异性,对比两组患者样本中Tax蛋白和HMGB1蛋白的表达情况,并就两组患者血样中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)的水平进行对比。结果:(1)急性ATL组患者HTLV-1病毒载量明显高于慢性ATL组患者HTLV-1病毒载量(P<0.05);(2)对比显示,急性ATL组患者血样中Tax蛋白和HMGB1蛋白表达量明显高于慢性ATL组患者(P<0.05);(3)急性ATL组患者中TNF-α和CEA水平均明显高于慢性ATL组患者(P<0.05)。结论:HTLV-1感染ATL患者病程的差异会影响T淋巴细胞的克隆扩增和转化进程,分析其机制可能与HTLV-1能够调控Tax蛋白和HMGB1表达有关。 展开更多
关键词 HTLV-1 T细胞 克隆扩增和转化 ATL 表达
原文传递
人肿瘤浸润淋巴细胞的克隆化
11
作者 周生 毛宁 +3 位作者 张明伟 江飞子 李秀森 杜德林 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 1992年第3期209-213,共5页
肿瘤组织经机械剪切和酶消化分离肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。TIL在含1000U/ml重组人白细胞介素-2(rhIL-2)的培养液中培养6d后,植入含1000U/ml rhIL-2的软琼脂半固体培养基中培养,7d后将形成的克隆转移到含rhIL-2的培养液中培养。^(51)Cr释... 肿瘤组织经机械剪切和酶消化分离肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。TIL在含1000U/ml重组人白细胞介素-2(rhIL-2)的培养液中培养6d后,植入含1000U/ml rhIL-2的软琼脂半固体培养基中培养,7d后将形成的克隆转移到含rhIL-2的培养液中培养。^(51)Cr释放法测定结果表明,约30%的克隆对NK敏感的K562细胞和对NK不敏感的H7402肝癌细胞有细胞毒性,为具有杀瘤活性的TIL杀伤克隆(TIL-K)。60%以上TIL-K克隆在含IL-2的培养液中可持续地增殖2~3个月,其细胞数可扩增至10~8~10~9,并始终保持对肿瘤细胞的细胞毒性。TIL-K克隆的表型为CD3^+、CD4^-、CD8^+、CD16^-,有T细胞抗原受体β链基因的表达,说明其属T细胞系统。采用半固体-液体两步培养法可获取大量高纯度具有广谱杀瘤活性的TIL,本研究有助于TIL的深入研究和临床应用。 展开更多
关键词 肿瘤 浸润 淋巴细胞 克隆化
下载PDF
去甲基化KG1a细胞DNA对人外周血单个核细胞杀伤活性和T细胞受体VαβT细胞增殖的影响
12
作者 贾振薇 郭坤元 +2 位作者 黄迎 曲佳 佘秒容 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第18期2996-2999,共4页
目的:研究去甲基化的急性髓性白血病细胞KG1a的DNA体外诱导人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)的杀伤活性和T细胞受体Vαβ(αβ chain variable gene of T cell receptor,TCRVαβ)谱系的表达和克隆情况。方... 目的:研究去甲基化的急性髓性白血病细胞KG1a的DNA体外诱导人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)的杀伤活性和T细胞受体Vαβ(αβ chain variable gene of T cell receptor,TCRVαβ)谱系的表达和克隆情况。方法:去甲基化试剂盒对KG1a细胞去甲基化处理,并提取其DNA。应用乳酸脱氢酶释放法检测DNA诱导前后PBMC杀伤KG1a细胞的活性,应用RT-PCR方法扩增各组外周血T细胞的32个TCRVα亚家族和24个TCRVβ亚家族的CDR3,并用基因扫描分析扩增产物以确定T细胞的克隆性。结果:基因扫描显示去甲基化的KG1a细胞DNA可以诱导出呈单克隆、寡克隆或寡克隆趋势生长的亚家族T细胞,且在效靶比为20∶1时去甲基化的KG1a细胞DNA诱导前后PBMC杀伤KG1a细胞的活性差异有统计学意义(P<0.05)。结论:去甲基化的KG1a细胞DNA可提高PBMC杀伤活性,且诱导T细胞呈克隆性增殖。 展开更多
关键词 受体 抗原 T细胞 α-β KG1a细胞 去甲基化 基因扫描 T细胞克隆
下载PDF
韦格纳肉芽肿病T细胞表达及分泌细胞因子的研究—Th1型免疫反应 被引量:4
13
作者 王国春 吴东海 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 1998年第2期79-84,共6页
目的:通过分析T细胞细胞因子的表达和分泌,探讨韦格纳肉芽肿病(WG)的免疫反应类型。方法:用有限稀释法从WG患者鼻粘膜活检标本(NBS)、支气管肺泡灌洗液(BAL)及外周血中克隆出T细胞。用RTPCR及ELISA检... 目的:通过分析T细胞细胞因子的表达和分泌,探讨韦格纳肉芽肿病(WG)的免疫反应类型。方法:用有限稀释法从WG患者鼻粘膜活检标本(NBS)、支气管肺泡灌洗液(BAL)及外周血中克隆出T细胞。用RTPCR及ELISA检测其细胞因子的表达和分泌。结果:所有7株从NBS克隆的T细胞只表达和分泌Th1型细胞因子(IFNγ)。从BAL克隆的3株T细胞,2株为Th1型,另1株为Th0型(表达和分泌IFNγ及IL4)。而从外周血中克隆的27株T细胞。Th1型(9株)多于Th2型(2株),但多数(16株)为Th0型。另外,WG患者外周血中未分类的多克隆CD+4和CD+8T细胞产生IFNγ的量明显高于正常对照者,而IL4表达和分泌则与正常无差别。 展开更多
关键词 韦格纳肉芽肿 T细胞 TH1 细胞因子
原文传递
T细胞克隆谱在再生障碍性贫血免疫抑制治疗疗效预测中的研究进展 被引量:4
14
作者 董杰 靳玉凤 贾燕 《热带医学杂志》 CAS 2020年第7期993-996,共4页
研究表明,T细胞受体Vβ家族基因(TCR Vβ基因)克隆表达特征、功能及治疗后变化规律,可能决定再生障碍性贫血的临床免疫抑制疗效与预后。本综述旨在介绍T细胞克隆变化规律在抗人胸腺细胞球蛋白(ATG)和环孢素A(CsA)治疗重型再生障碍性贫... 研究表明,T细胞受体Vβ家族基因(TCR Vβ基因)克隆表达特征、功能及治疗后变化规律,可能决定再生障碍性贫血的临床免疫抑制疗效与预后。本综述旨在介绍T细胞克隆变化规律在抗人胸腺细胞球蛋白(ATG)和环孢素A(CsA)治疗重型再生障碍性贫血患者临床研究中的应用,有助于指导临床对相关治疗的个体化用药,为免疫抑制剂减量和停用时机提供客观的理论依据。 展开更多
关键词 再生障碍性贫血 致病性T细胞克隆 免疫抑制治疗
原文传递
人T细胞免疫球蛋白粘蛋白-4基因真核表达载体的构建和生物信息学分析 被引量:4
15
作者 陈治中 王琳 +4 位作者 王晓蓓 毛晓露 陈凤花 刘峰 胡丽华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期104-108,113,共6页
目的:构建人T细胞免疫球蛋白粘蛋白-4(TIM-4)基因的真核表达载体,用生物信息学分析了解TIM-4蛋白的特性。方法:采用Trizol法从人外周血单个核细胞提取总mRNA,逆转录合成cDNA,以此为模版,两步法RT-PCR扩增TIM-4,将其克隆至表达载体pcDNA3... 目的:构建人T细胞免疫球蛋白粘蛋白-4(TIM-4)基因的真核表达载体,用生物信息学分析了解TIM-4蛋白的特性。方法:采用Trizol法从人外周血单个核细胞提取总mRNA,逆转录合成cDNA,以此为模版,两步法RT-PCR扩增TIM-4,将其克隆至表达载体pcDNA3.1(+)中,构建FTIM-4质粒,通过PCR及测序进行鉴定。同时,我们构建pEGFP-N1-TIM-4真核表达载体,并测序鉴定其准确性;将pEGFP-N1-TIM-4质粒转染CHO细胞,用RT-PCR和荧光显微镜证实其表达。应用生物信息学初步分析TIM-4蛋白的物理化学性质、结构域和功能。结果:从逆转录的cDNA扩增出TIM-4;经PCR、酶切鉴定、测序分析表明扩增产物与GenBank提供的序列完全相同。真核表达载体pEGFP-N1-TIM-4在CHO细胞中稳定表达,表达蛋白主要位于细胞质和细胞膜上。生物信息学分析表明TIM-4蛋白为不稳定亲水性蛋白,有1个跨膜螺旋结构,含约10.32%的α-螺旋,29.89%的延伸链,59.79%的不规则卷曲,有1段由24个氨基酸组成的信号肽。亚细胞主要定位于细胞质、细胞核、分泌系统的小囊泡、线粒体、内质网、高尔基体上。功能分析预测该蛋白具有受体和信号转导功能。结论:成功构建TIM-4基因真核表达载体,利用生物信息学分析洞察了TIM-4蛋白的性质,为进一步研究该基因的免疫调节机制奠定了基础。 展开更多
关键词 T细胞免疫球蛋白粘蛋白-4基因 生物信息学分析 克隆
下载PDF
未经刺激的静止CD4^+ T细胞与克隆CD4^+ T细胞在抗原特异的及主要组织相容性抗原限制的无能诱导中的差异及其意义(英文) 被引量:1
16
作者 刘全胜 张瑞华 +1 位作者 储以微 熊思东 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期633-640,共8页
在体外克隆T细胞中,T细胞无能可在多种条件下诱导产生,但T细胞在体内条件下的无能诱导仍有很多疑问和争议。由于正常动物体内对单一抗原特异应答的T细胞频率太低,从体内新提取未经刺激的T细胞进行无能诱导研究一直存在技术上的困难。本... 在体外克隆T细胞中,T细胞无能可在多种条件下诱导产生,但T细胞在体内条件下的无能诱导仍有很多疑问和争议。由于正常动物体内对单一抗原特异应答的T细胞频率太低,从体内新提取未经刺激的T细胞进行无能诱导研究一直存在技术上的困难。本文利用HNT-TCR转基因小鼠高度单一的针对HA多肽抗原的CD4+T细胞群体,以T细胞增殖反应作为检测方法,比较研究了克隆CD4+T细胞和新提取未经刺激的CD4+T细胞对无能诱导的反应。结果表明,经化学交联剂1-ethyl-3-3(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide(ECDI)处理的抗原提呈细胞(APC)与流感病毒血细胞凝集素(HA)多肽诱导在克隆CD4+T细胞中产生了无能,这种无能是依赖于特异抗原和主要组织相容性抗原(MHC)的;而在同样条件下,新提取未经刺激的CD4+T细胞则不能被诱导产生无能。结果提示,体内T细胞与克隆T细胞存在功能上的不同,体内T细胞的无能诱导可能需要不同的条件。这对体内T细胞免疫耐受产生的机制研究和临床应用都有重要意义。 展开更多
关键词 T细胞无能 化学交联剂ECDI HNT—TCR转基因小鼠 CD4^+T细胞克隆 增殖反应
下载PDF
砷诱导人T淋巴细胞表达HMG2基因的克隆研究 被引量:1
17
作者 张跃新 刘妍 +3 位作者 刘开泰 成军 陈新华 王国荃 《地方病通报》 2004年第1期1-4,共4页
目的 为了解三氧化二砷诱导人T淋巴细胞的差异表达基因 ,探讨砷对淋巴细胞基因转录的影响机制。方法 在体外用三氧化二砷处理人JurkatT淋巴细胞 ( 5 μmol/L ,2 4h)后 ,应用抑制性消减杂交技术 (SSH)和克隆技术构建差异表达的cDNA文... 目的 为了解三氧化二砷诱导人T淋巴细胞的差异表达基因 ,探讨砷对淋巴细胞基因转录的影响机制。方法 在体外用三氧化二砷处理人JurkatT淋巴细胞 ( 5 μmol/L ,2 4h)后 ,应用抑制性消减杂交技术 (SSH)和克隆技术构建差异表达的cDNA文库 ,用PCR技术和测序技术鉴定阳性克隆。结果 用SSH技术构建了由三氧化二砷诱导的JurkatT淋巴细胞的差异表达基因的正向消减cDNA文库。经测序分析结果显示 ,该文库中含有高泳动类蛋白 2 (HMG2 )基因片段 ,同源性 98%。结论 我们的研究结果提示三氧化二砷 ( 5 μM ,2 4h)可诱导HMG2的转录 。 展开更多
关键词 三氧化二砷 JURKAT T淋巴细胞 铁蛋白重链 基因克隆
下载PDF
人类免疫缺陷病毒-1型负向调节因子多肽特异性CD4+T淋巴细胞克隆的建立和筛选
18
作者 宋培新 李彦磊 郑楠 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期215-219,共5页
目的 建立和筛选慢性HIV感染者体内HIV-1型负向调节因子(Nef)多肽特异性CD4+T淋巴细胞克隆.方法 采集5例无症状期HIV感染者PBMC,Bulk培养,用Nef蛋白C末端的Nef末端多肽刺激,双荧光流式细胞术分析细胞表面CD4分子和细胞内γ干扰素表达... 目的 建立和筛选慢性HIV感染者体内HIV-1型负向调节因子(Nef)多肽特异性CD4+T淋巴细胞克隆.方法 采集5例无症状期HIV感染者PBMC,Bulk培养,用Nef蛋白C末端的Nef末端多肽刺激,双荧光流式细胞术分析细胞表面CD4分子和细胞内γ干扰素表达.有限稀释法进行Nef末端多肽特异性CD4+T淋巴细胞克隆,酶联免疫斑点法(ELISPOT)筛选特异性克隆,挑选生长最好的细胞扩大培养,完成克隆.结果 1例H1V感染者的PBMC中存在特异性CD4+T淋巴细胞,成功建立T淋巴细胞克隆.经ELISPOT法确认为Nef末端多肽特异性CD4+T淋巴细胞克隆.人白细胞抗原(HLA)-DRB1分型检测,提示该多肽表位可能为HLA-DRB1* 0406限制性.结论 成功建立Nef末端多肽特异性CD4+T淋巴细胞克隆,发现并鉴定了Nef末端表位及其HLA限制性. 展开更多
关键词 HIV-1 负向调节因子多肽 CD4+T淋巴细胞克隆
原文传递
结合脂蛋白_(136-150)修饰抗原在体内外对4B.14a T细胞克隆的作用
19
作者 耿同超 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期387-389,共3页
目的 :通过研究结合脂蛋白13 6 150 (PLP13 6 150 )及其修饰抗原在体内外对T细胞克隆 4B .14a的影响 ,进一步探讨修饰抗原防治多发性硬化 (MS)的可行性。方法 :在体内 ,为模拟MS复发的临床过程 ,首先将SJL/J小鼠用X线辐射 4 5 0R ,静脉... 目的 :通过研究结合脂蛋白13 6 150 (PLP13 6 150 )及其修饰抗原在体内外对T细胞克隆 4B .14a的影响 ,进一步探讨修饰抗原防治多发性硬化 (MS)的可行性。方法 :在体内 ,为模拟MS复发的临床过程 ,首先将SJL/J小鼠用X线辐射 4 5 0R ,静脉转移无分裂增殖能力的 4B .14a细胞 (1× 10 7/鼠 ) ,再用 5 0 μg/鼠PLP13 6 150 修饰抗原免疫动物 ,以触发被动实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE )。在体外观察PLP13 6 150 及其修饰抗原刺激4B .14a细胞的增殖作用和分泌细胞因子的作用。结果 :除139A、14 3A、14 4A、14 5A和 14 8A外 ,其他修饰抗原均可在体内触发 4B .14aT细胞引起被动EAE。对PLP13 6 150 和其大多数修饰抗原 ,4B .14a细胞表现为增殖反应 ,分泌炎性细胞因子 ,对 14 3A、14 4A和 14 8A刺激的反应较弱 ;139A可抑制4B .14a细胞增殖。结论 :PLP13 6 150 的某些修饰抗原在体内外对 4B .14aT细胞克隆具有不同的作用 。 展开更多
关键词 结合脂蛋白 修饰抗原 4B.14a T细胞克隆 实验性变态反应脑脊髓炎 多发性硬化
下载PDF
受体针对供体抗原特异性T淋巴细胞克隆的建立及其形成条件的比较研究
20
作者 周军 王磊 +1 位作者 兰平 汪建平 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2001年第5期292-294,共3页
目的 探索建立受体针对供体抗原特异性T淋巴细胞克隆 ,转入自杀基因诱导移植耐受的可行性。方法 供体鼠脾细胞免疫受体鼠 ,再分离、纯化经供体鼠抗原刺激受体鼠T淋巴细胞 ,将其作有限稀释为单个T淋巴细胞 ,再分别以不同浓度饲养细胞、... 目的 探索建立受体针对供体抗原特异性T淋巴细胞克隆 ,转入自杀基因诱导移植耐受的可行性。方法 供体鼠脾细胞免疫受体鼠 ,再分离、纯化经供体鼠抗原刺激受体鼠T淋巴细胞 ,将其作有限稀释为单个T淋巴细胞 ,再分别以不同浓度饲养细胞、ConA、IL 2等条件 ,促使T淋巴细胞分裂、增殖 ,构建受体针对供体抗原特异性T淋巴细胞克隆。结果 ①受体针对供体抗原特异性T淋巴细胞克隆稳定建立 ;②不同免疫组间克隆生成率的差异有显著性意义 (t>t0 .0 5 ) ;无或单纯饲养细胞孔无克隆生长 ;ConA刺激有少数克隆生成 ;克隆生成率与IL 2刺激浓度可能相关。结论 成熟T淋巴细胞 ,在一定条件下仍可发生分裂和增殖 ,形成克隆。通过供体脾细胞抗原特异性刺激 ,提示最终筛选出的T淋巴细胞克隆具有针对供体抗原的免疫反应性。 展开更多
关键词 供体抗原特异性 T淋巴细胞 克隆 有限稀释法 饲养细胞 移植免疫耐受
下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部