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C2C12细胞诱导构建三维骨骼肌组织
被引量：
4
1
作者
王齐
廖华
+4 位作者
秦建强
余磊
艾鹤英
汪海仪
邱小忠
《解剖学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期606-610,共5页
目的利用修饰并铸型后的Sylgard 184凹槽与C2C12细胞复合培养、诱导分化,获取三维极性骨骼肌组织。方法 Sylgard 184双组分以10∶1的比例均匀混合并倒板,室温下静置固化并对其表面压槽铸型,Hank液冲洗凹槽,Matrigel和胶原的混合液均匀...
目的利用修饰并铸型后的Sylgard 184凹槽与C2C12细胞复合培养、诱导分化,获取三维极性骨骼肌组织。方法 Sylgard 184双组分以10∶1的比例均匀混合并倒板,室温下静置固化并对其表面压槽铸型,Hank液冲洗凹槽,Matrigel和胶原的混合液均匀铺被凹槽底部,置生物安全柜待细胞基质自然干燥、紫外线照射消毒1h以上时接种C2C12细胞悬液,细胞增殖约80%汇合时改用分化培养基进行分化诱导,倒置显微镜下观察肌管的分化状态,RT-PCR方法检测肌管内myogenin和desmin基因mRNAs的表达,免疫荧光检测生肌转录因子myogenin和desmin蛋白的表达,扫描电镜观察肌管形态和肌管间的连接。结果 C2C12细胞在Sylgard 184弹性体铸型压槽中培养分化7d后,倒置显微镜下可见肌管呈极性分化,且肌管之间融合紧密;21d后,扫描电镜检测可见肌管之间排列紧密且相互重叠,形成膜样结构,厚度可达0.15mm,具有三维性;RT-PCR、免疫荧光检测证实极性分化肌管内具有myogenin和desmin的阳性表达。结论修饰并铸型的Sylgard 184凹槽具有一定的方向引导效应,能促进C2C12细胞分化形成多核肌管,且肌管呈极性重叠排列,形成三维极性骨骼肌组织结构。
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关键词
sylgard
184
铸型
MATRIGEL
肌组织
反转录-聚合酶链式反应
免疫荧光
C2C12细胞
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职称材料
不同基质材料修饰的Sylgard184与C2C12细胞的相容性
被引量：
3
2
作者
王齐
廖华
+4 位作者
秦建强
余磊
邱小忠
于巧莲
艾鹤英
《解剖学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期235-239,共5页
目的筛选能提高硅酮橡胶弹性体（Sylgard184）与C2C12相容性的理想基质材料。方法Sylgard184双组分以10∶1的比例均匀混合,倒入6孔板的其中4孔,室温下静置固化,其余2孔做为空白对照培养组（A组）;固化后的Sylgard184表面依次经过以下处...
目的筛选能提高硅酮橡胶弹性体（Sylgard184）与C2C12相容性的理想基质材料。方法Sylgard184双组分以10∶1的比例均匀混合,倒入6孔板的其中4孔,室温下静置固化,其余2孔做为空白对照培养组（A组）;固化后的Sylgard184表面依次经过以下处理：I型胶原包被（B组）、层黏连蛋白包被（C组）、多聚赖氨酸包被（D组）;未经包被（E组）,每组共6个样本。在不同基质材料修饰的Sylgard184表面培养C2C12细胞,利用倒置显微镜观察5组C2C12细胞的增殖、分化状态,流式细胞术（FCM）检测增殖培养48h后C2C12细胞的分裂增殖情况,RT-PCR检测增殖和分化培养48h后C2C12细胞内MyoD、myogenin mRNA的表达。结果Sylgard184材料存在细胞毒性,E组接种的C2C12细胞在24h内全部漂浮死亡;D组的大多数细胞出现死亡,仅少数贴壁存活;而B、C两组材料包被后明显减少Sylagard184的毒性,增强其表面与C2C12细胞的相容性,且C组细胞处于合成期的百分比以及增殖期的MyoD和分化期Myogenin基因mRNA的表达水平均显著高于A、B两组（P〈0.05）。结论经层黏连蛋白包被后的Sylgard184表面更有利于C2C12细胞的增殖及分化活性的表达。
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关键词
细胞基质
sylgard
184
相容性
流术细胞术
C2C12细胞
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职称材料
骨骼肌成肌干细胞体外三维与平面培养的比较研究
被引量：
1
3
作者
艾鹤英
秦建强
+1 位作者
余磊
廖华
《中国临床解剖学杂志》
CSCD
北大核心
2010年第2期198-202,共5页
目的比较三维与平面培养C2C12细胞形态及功能差异。方法I型胶原和Matrigel Matrix修饰Sylgard 184铸槽和普通培养皿,分别接种C2C12细胞悬液,细胞增殖至80%融合时换含2%马血清的DMEM/F12诱导分化获取成熟的肌管;倒置显微镜观察肌管形态,R...
目的比较三维与平面培养C2C12细胞形态及功能差异。方法I型胶原和Matrigel Matrix修饰Sylgard 184铸槽和普通培养皿,分别接种C2C12细胞悬液,细胞增殖至80%融合时换含2%马血清的DMEM/F12诱导分化获取成熟的肌管;倒置显微镜观察肌管形态,RT-PCR和免疫荧光检测。结果Sylgard 184铸槽表面的C2C12细胞诱导分化5d出现多核、极性肌管,17d时肌管增粗成熟、极性平行,融合形成肌组织类似物,厚0.15mm,有自主收缩性;扫描电镜见肌管之间排列紧密、重叠,具有三维性;而平面培养肌管小而排列紊乱。RT-PCR表明三维培养的MyoD、Myogenin mRNA表达更为显著;Myogenin、Desmin、F-actin、MHC和nAChR蛋白检测显示,极性肌管内荧光蛋白的表达更密集。结论三维培养更有利于成肌细胞的体外极性分化和肌管间细胞连接的形成,分化肌管的存活时间较长,有利于成肌分化因子和收缩蛋白的表达,是骨骼肌的发生发育、应力加载和骨骼肌肌病良好的体外研究模型。
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关键词
C2C12细胞
sylgard
184
三维培养
平面培养
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职称材料
题名
C2C12细胞诱导构建三维骨骼肌组织
被引量：
4
1
作者
王齐
廖华
秦建强
余磊
艾鹤英
汪海仪
邱小忠
机构
南方医科大学解剖学教研室
出处
《解剖学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期606-610,共5页
基金
教育部科学技术研究重点项目(207082)
国家自然科学基金资助项目(30771045)
文摘
目的利用修饰并铸型后的Sylgard 184凹槽与C2C12细胞复合培养、诱导分化,获取三维极性骨骼肌组织。方法 Sylgard 184双组分以10∶1的比例均匀混合并倒板,室温下静置固化并对其表面压槽铸型,Hank液冲洗凹槽,Matrigel和胶原的混合液均匀铺被凹槽底部,置生物安全柜待细胞基质自然干燥、紫外线照射消毒1h以上时接种C2C12细胞悬液,细胞增殖约80%汇合时改用分化培养基进行分化诱导,倒置显微镜下观察肌管的分化状态,RT-PCR方法检测肌管内myogenin和desmin基因mRNAs的表达,免疫荧光检测生肌转录因子myogenin和desmin蛋白的表达,扫描电镜观察肌管形态和肌管间的连接。结果 C2C12细胞在Sylgard 184弹性体铸型压槽中培养分化7d后,倒置显微镜下可见肌管呈极性分化,且肌管之间融合紧密;21d后,扫描电镜检测可见肌管之间排列紧密且相互重叠,形成膜样结构,厚度可达0.15mm,具有三维性;RT-PCR、免疫荧光检测证实极性分化肌管内具有myogenin和desmin的阳性表达。结论修饰并铸型的Sylgard 184凹槽具有一定的方向引导效应,能促进C2C12细胞分化形成多核肌管,且肌管呈极性重叠排列,形成三维极性骨骼肌组织结构。
关键词
sylgard
184
铸型
MATRIGEL
肌组织
反转录-聚合酶链式反应
免疫荧光
C2C12细胞
Keywords
sylgard
184
Mold
Matrigel
Muscle
tissue
RT-PCR
Immunofluorescence
C2C12
cell
分类号
Q249 [生物学—细胞生物学]
下载PDF
职称材料
题名
不同基质材料修饰的Sylgard184与C2C12细胞的相容性
被引量：
3
2
作者
王齐
廖华
秦建强
余磊
邱小忠
于巧莲
艾鹤英
机构
南方医科大学解剖学教研室
出处
《解剖学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期235-239,共5页
基金
教育部科学技术研究重点资助项目(207082)
国家自然科学基金资助项目(30771045)
文摘
目的筛选能提高硅酮橡胶弹性体（Sylgard184）与C2C12相容性的理想基质材料。方法Sylgard184双组分以10∶1的比例均匀混合,倒入6孔板的其中4孔,室温下静置固化,其余2孔做为空白对照培养组（A组）;固化后的Sylgard184表面依次经过以下处理：I型胶原包被（B组）、层黏连蛋白包被（C组）、多聚赖氨酸包被（D组）;未经包被（E组）,每组共6个样本。在不同基质材料修饰的Sylgard184表面培养C2C12细胞,利用倒置显微镜观察5组C2C12细胞的增殖、分化状态,流式细胞术（FCM）检测增殖培养48h后C2C12细胞的分裂增殖情况,RT-PCR检测增殖和分化培养48h后C2C12细胞内MyoD、myogenin mRNA的表达。结果Sylgard184材料存在细胞毒性,E组接种的C2C12细胞在24h内全部漂浮死亡;D组的大多数细胞出现死亡,仅少数贴壁存活;而B、C两组材料包被后明显减少Sylagard184的毒性,增强其表面与C2C12细胞的相容性,且C组细胞处于合成期的百分比以及增殖期的MyoD和分化期Myogenin基因mRNA的表达水平均显著高于A、B两组（P〈0.05）。结论经层黏连蛋白包被后的Sylgard184表面更有利于C2C12细胞的增殖及分化活性的表达。
关键词
细胞基质
sylgard
184
相容性
流术细胞术
C2C12细胞
Keywords
Extracellular
matrix
sylgard
184
Compatibility
Flow
cytometry
C2C12
cell
分类号
Q249 [生物学—细胞生物学]
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职称材料
题名
骨骼肌成肌干细胞体外三维与平面培养的比较研究
被引量：
1
3
作者
艾鹤英
秦建强
余磊
廖华
机构
南方医科大学解剖学教研室
出处
《中国临床解剖学杂志》
CSCD
北大核心
2010年第2期198-202,共5页
基金
教育部科学技术研究重点项目(207082)
国家自然科学基金面上项目(30771045)
文摘
目的比较三维与平面培养C2C12细胞形态及功能差异。方法I型胶原和Matrigel Matrix修饰Sylgard 184铸槽和普通培养皿,分别接种C2C12细胞悬液,细胞增殖至80%融合时换含2%马血清的DMEM/F12诱导分化获取成熟的肌管;倒置显微镜观察肌管形态,RT-PCR和免疫荧光检测。结果Sylgard 184铸槽表面的C2C12细胞诱导分化5d出现多核、极性肌管,17d时肌管增粗成熟、极性平行,融合形成肌组织类似物,厚0.15mm,有自主收缩性;扫描电镜见肌管之间排列紧密、重叠,具有三维性;而平面培养肌管小而排列紊乱。RT-PCR表明三维培养的MyoD、Myogenin mRNA表达更为显著;Myogenin、Desmin、F-actin、MHC和nAChR蛋白检测显示,极性肌管内荧光蛋白的表达更密集。结论三维培养更有利于成肌细胞的体外极性分化和肌管间细胞连接的形成,分化肌管的存活时间较长,有利于成肌分化因子和收缩蛋白的表达,是骨骼肌的发生发育、应力加载和骨骼肌肌病良好的体外研究模型。
关键词
C2C12细胞
sylgard
184
三维培养
平面培养
Keywords
C2C12
sylgard
184
Three-dimensionalculture
Monolayerculture
分类号
Q813.1 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
C2C12细胞诱导构建三维骨骼肌组织
王齐
廖华
秦建强
余磊
艾鹤英
汪海仪
邱小忠
《解剖学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
4
下载PDF
职称材料
2
不同基质材料修饰的Sylgard184与C2C12细胞的相容性
王齐
廖华
秦建强
余磊
邱小忠
于巧莲
艾鹤英
《解剖学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
下载PDF
职称材料
3
骨骼肌成肌干细胞体外三维与平面培养的比较研究
艾鹤英
秦建强
余磊
廖华
《中国临床解剖学杂志》
CSCD
北大核心
2010
1
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职称材料
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