猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)毒力因子众多,致病性强弱与其毒力因子有关,但单个或多个毒力因子缺失对某些菌株的毒力影响并不明显,新的毒力因子仍有待发现。为挖掘新的毒力相关因子,用携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pM...猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)毒力因子众多,致病性强弱与其毒力因子有关,但单个或多个毒力因子缺失对某些菌株的毒力影响并不明显,新的毒力因子仍有待发现。为挖掘新的毒力相关因子,用携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMar4S转化SS2 SC-19菌株,通过高温诱变构建SC-19菌株的突变体文库,筛选了450个转座子插入突变的单克隆。对随机挑选的18个突变体采用PCR验证,并通过大腊螟攻毒试验筛选毒力变化基因,利用反向PCR鉴定相关基因,通过同源重组方法构建SUT2基因敲除株、回补株,测定生长曲线,并进行小鼠毒力试验。结果表明,转座子TnYLB-1以单拷贝、随机方式插入到SC-19菌株的基因组;经过大腊螟攻毒试验筛选和反向PCR鉴定发现包含SUT2基因在内的8个毒力致弱基因。生长曲线测定表明,SUT2基因敲除株的生长速率比野生型菌株慢。小鼠致病性试验进一步表明,野生SC-19菌株小鼠组的死亡率为100%,SUT2基因敲除株小鼠组的存活率为100%。综上,本研究发现并鉴定了一个新的毒力相关因子SUT2,为进一步阐明SS2的致病机制奠定了基础。展开更多
文摘猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)毒力因子众多,致病性强弱与其毒力因子有关,但单个或多个毒力因子缺失对某些菌株的毒力影响并不明显,新的毒力因子仍有待发现。为挖掘新的毒力相关因子,用携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMar4S转化SS2 SC-19菌株,通过高温诱变构建SC-19菌株的突变体文库,筛选了450个转座子插入突变的单克隆。对随机挑选的18个突变体采用PCR验证,并通过大腊螟攻毒试验筛选毒力变化基因,利用反向PCR鉴定相关基因,通过同源重组方法构建SUT2基因敲除株、回补株,测定生长曲线,并进行小鼠毒力试验。结果表明,转座子TnYLB-1以单拷贝、随机方式插入到SC-19菌株的基因组;经过大腊螟攻毒试验筛选和反向PCR鉴定发现包含SUT2基因在内的8个毒力致弱基因。生长曲线测定表明,SUT2基因敲除株的生长速率比野生型菌株慢。小鼠致病性试验进一步表明,野生SC-19菌株小鼠组的死亡率为100%,SUT2基因敲除株小鼠组的存活率为100%。综上,本研究发现并鉴定了一个新的毒力相关因子SUT2,为进一步阐明SS2的致病机制奠定了基础。
