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柯萨奇病毒A组4型生物化学特性及免疫原性分析
1
作者
田宇璇
魏真妮
+2 位作者
安欢欢
吴杰
申硕
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第3期581-590,共10页
对引起手足口病的肠道病毒A组4型进行生物化学特性及免疫原性的研究。利用大肠杆菌表达结构蛋白全长或部分片段的GST融合蛋白,纯化CV-A4病毒颗粒,制备兔抗CV-A4 VP1~VP4蛋白及抗CV-A4病毒颗粒抗血清。以免疫印迹法(Western blotting,WB)...
对引起手足口病的肠道病毒A组4型进行生物化学特性及免疫原性的研究。利用大肠杆菌表达结构蛋白全长或部分片段的GST融合蛋白,纯化CV-A4病毒颗粒,制备兔抗CV-A4 VP1~VP4蛋白及抗CV-A4病毒颗粒抗血清。以免疫印迹法(Western blotting,WB),结合SDS-PAGE电泳法,对CsCl密度梯度纯化的CV-A4的空心颗粒(EP)与实心颗粒(FP)的蛋白组分、纯度、多聚蛋白酶剪切进行分析。以微量中和法测定以上6种抗原免疫的兔或小鼠血清中和抗体效价,评估免疫原性。WB和间接免疫荧光法证明了抗体特异性。EP由VP0、VP1和VP3构成,而FP的VP0被剪切,故由VP1-VP4构成。EP和FP比例分别为41%和59%。CsCl密度分别为1.26 g/cm^(3)和1.34 g/cm^(3),纯度分别为70.5%和96.3%。中和试验显示,兔抗全病毒抗体具有中和作用,而兔抗CV-A4VP1~VP4结构蛋白抗体不具有中和作用。免疫原性强弱为:FP>EP>VP1-VP4。本研究建立了CV-A4纯化病毒结构蛋白的分析方法,研究了重组病毒蛋白及2种病毒颗粒的免疫原性及免疫持久性。对包括CV-A4的手足口病多价疫苗的研发策略以及质量控制具重要意义。
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关键词
柯萨奇病毒A组
4
型(CV-A
4
)
结构蛋白
vp
1
-
vp
4
空心颗粒与实心颗粒
免疫原性
原文传递
O型口蹄疫病毒VP0和VP1蛋白的可溶性表达与反应原性分析
被引量：
4
2
作者
赵宝磊
刘运超
+5 位作者
陈玉梅
姬鹏超
王聚财
刘畅
杨素珍
张改平
《河南农业科学》
CSCD
北大核心
2017年第2期105-110,共6页
为了高效可溶性表达O型口蹄疫病毒(FMDV)VP0、VP1结构蛋白,根据大肠杆菌密码子的偏爱性优化合成VP0和VP1基因片段,并将其克隆到p E-SUMO载体中,构建重组质粒SUMOVP0和SUMO-VP1,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表...
为了高效可溶性表达O型口蹄疫病毒(FMDV)VP0、VP1结构蛋白,根据大肠杆菌密码子的偏爱性优化合成VP0和VP1基因片段,并将其克隆到p E-SUMO载体中,构建重组质粒SUMOVP0和SUMO-VP1,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,并优化诱导温度、时间和IPTG浓度等表达条件。结果显示,SUMO-VP0可溶性蛋白表达的最佳条件为:20℃条件下,0.1 mmol/L IPTG诱导表达8 h;SUMO-VP1可溶性蛋白表达的最佳条件为:37℃条件下,0.1 mmol/L IPTG诱导表达12 h。SDS-PAGE电泳和Western blot结果表明,表达的SUMOVP0、SUMO-VP1可溶性蛋白能够被抗FMDV的阳性血清识别,具有很好的反应原性。
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关键词
口蹄疫病毒
vp
0、
vp
1
结构蛋白
可溶性表达
SUMO标签
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职称材料
题名
柯萨奇病毒A组4型生物化学特性及免疫原性分析
1
作者
田宇璇
魏真妮
安欢欢
吴杰
申硕
机构
武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室
出处
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第3期581-590,共10页
基金
湖北省技术创新专项(重大专项)(项目号:2017ACA078)
题目:手足口病双价灭活疫苗的研制。
文摘
对引起手足口病的肠道病毒A组4型进行生物化学特性及免疫原性的研究。利用大肠杆菌表达结构蛋白全长或部分片段的GST融合蛋白,纯化CV-A4病毒颗粒,制备兔抗CV-A4 VP1~VP4蛋白及抗CV-A4病毒颗粒抗血清。以免疫印迹法(Western blotting,WB),结合SDS-PAGE电泳法,对CsCl密度梯度纯化的CV-A4的空心颗粒(EP)与实心颗粒(FP)的蛋白组分、纯度、多聚蛋白酶剪切进行分析。以微量中和法测定以上6种抗原免疫的兔或小鼠血清中和抗体效价,评估免疫原性。WB和间接免疫荧光法证明了抗体特异性。EP由VP0、VP1和VP3构成,而FP的VP0被剪切,故由VP1-VP4构成。EP和FP比例分别为41%和59%。CsCl密度分别为1.26 g/cm^(3)和1.34 g/cm^(3),纯度分别为70.5%和96.3%。中和试验显示,兔抗全病毒抗体具有中和作用,而兔抗CV-A4VP1~VP4结构蛋白抗体不具有中和作用。免疫原性强弱为:FP>EP>VP1-VP4。本研究建立了CV-A4纯化病毒结构蛋白的分析方法,研究了重组病毒蛋白及2种病毒颗粒的免疫原性及免疫持久性。对包括CV-A4的手足口病多价疫苗的研发策略以及质量控制具重要意义。
关键词
柯萨奇病毒A组
4
型(CV-A
4
)
结构蛋白
vp
1
-
vp
4
空心颗粒与实心颗粒
免疫原性
Keywords
Coxsackievirus
A
4
(CV-A
4
)
structural
protein
vp
1-
vp
4
Hollow
particles
and
solid
particles
Immunogenicity
分类号
R373.2 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
O型口蹄疫病毒VP0和VP1蛋白的可溶性表达与反应原性分析
被引量：
4
2
作者
赵宝磊
刘运超
陈玉梅
姬鹏超
王聚财
刘畅
杨素珍
张改平
机构
河南农业大学牧医工程学院
河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室
出处
《河南农业科学》
CSCD
北大核心
2017年第2期105-110,共6页
基金
国家重点研发计划项目(2016YFD0500704)
河南省基础与前沿技术研究计划项目(152300410238)
+1 种基金
河南省科技创新基础前瞻类项目(20141644)
河南省重大科技专项(141100110100)
文摘
为了高效可溶性表达O型口蹄疫病毒(FMDV)VP0、VP1结构蛋白,根据大肠杆菌密码子的偏爱性优化合成VP0和VP1基因片段,并将其克隆到p E-SUMO载体中,构建重组质粒SUMOVP0和SUMO-VP1,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,并优化诱导温度、时间和IPTG浓度等表达条件。结果显示,SUMO-VP0可溶性蛋白表达的最佳条件为:20℃条件下,0.1 mmol/L IPTG诱导表达8 h;SUMO-VP1可溶性蛋白表达的最佳条件为:37℃条件下,0.1 mmol/L IPTG诱导表达12 h。SDS-PAGE电泳和Western blot结果表明,表达的SUMOVP0、SUMO-VP1可溶性蛋白能够被抗FMDV的阳性血清识别,具有很好的反应原性。
关键词
口蹄疫病毒
vp
0、
vp
1
结构蛋白
可溶性表达
SUMO标签
Keywords
FMDV
structural
protein
vp
0
and
vp
1
soluble
protein
expression
SUMO
tag
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
柯萨奇病毒A组4型生物化学特性及免疫原性分析
田宇璇
魏真妮
安欢欢
吴杰
申硕
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
原文传递
2
O型口蹄疫病毒VP0和VP1蛋白的可溶性表达与反应原性分析
赵宝磊
刘运超
陈玉梅
姬鹏超
王聚财
刘畅
杨素珍
张改平
《河南农业科学》
CSCD
北大核心
2017
4
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职称材料
已选择
0
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