博落回内生放线菌的分离及活性菌株的鉴定 被引量：9

1

作者 汪学军 闵长莉 +1 位作者 殷智超 杨艳 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1947-1950,共4页

目的:从博落回Macleaya cordata(Willd.)R.Br根部筛选具有抑菌活性的放线菌,并对其进行种属鉴定。方法:采用平板涂布法分离皖西大别山野生植物博落回根部的内生放线菌;采用琼脂块法初步研究博落回内生放线菌的抑菌活性;通过形态特征、... 目的:从博落回Macleaya cordata(Willd.)R.Br根部筛选具有抑菌活性的放线菌,并对其进行种属鉴定。方法:采用平板涂布法分离皖西大别山野生植物博落回根部的内生放线菌;采用琼脂块法初步研究博落回内生放线菌的抑菌活性;通过形态特征、生理生化特性及分子生物手段鉴定菌种。结果:从博落回根部共分离筛选得到内生放线菌15株,有6株放线菌对供试菌株表现出抑菌活性,占总分离菌株的40%,其中菌株BL7对金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌的拮抗作用明显,其抑菌圈直径分别为29、20 mm。根据菌株BL7的形态学特征、生理生化特征并结合16S r DNA系统发育分析将其初步鉴定为茂原链霉菌Streptomyces mobaraensis。结论:链霉菌属放线菌在医药上具有广阔的应用前景。而茂原链霉菌Streptomyces mobaraensis首次从博落回植株中筛选得到,具有进一步研究开发的价值。 展开更多

关键词 博落回 内生放线菌 抑菌活性 分离 茂原链霉菌

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复合诱变法选育谷氨酰胺转胺酶高产菌株 被引量：8

2

作者 张莹 郭琛琛 +3 位作者 黑东燕 张伟 鲁伟 金明飞 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第11期139-142,共4页

为筛选谷氨酰胺转胺酶高产菌株,利用紫外-硫酸二乙酯复合诱变、一次筛选的方法诱变生产菌株茂源链霉菌(Streptoymyces mobaraensis),结合高通量筛选技术筛选高产菌株。结果表明:复合诱变的方式较单独诱变的方式效率高。经过诱变的高产... 为筛选谷氨酰胺转胺酶高产菌株,利用紫外-硫酸二乙酯复合诱变、一次筛选的方法诱变生产菌株茂源链霉菌(Streptoymyces mobaraensis),结合高通量筛选技术筛选高产菌株。结果表明:复合诱变的方式较单独诱变的方式效率高。经过诱变的高产菌株由于酶的成熟加快或者蛋白表达量增加而提高了酶活力,最高可达7.02 U/mL,比野生菌株提高了54%。进一步研究高产菌株发现,高产菌株谷氨酰胺转胺酶的成熟加快,可提前24 h结束发酵;发酵液中酶原含量高,会降低发酵液中酶活性。 展开更多

关键词 谷氨酰胺转胺酶 茂源链霉菌 硫酸二乙酯 紫外 复合诱变

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茂原链霉菌DSM 40847全基因组测序及序列分析 被引量：7

3

作者 肖前程 彭思露 +2 位作者 李尔汉 朱笃 杨慧林 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期729-736,共8页

茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)是一种高GC含量的革兰氏阳性放线菌,它广泛用于生产转谷氨酰胺酶、博来霉素、莫能霉素等。目前,还没有相关研究报道茂原链霉菌的全基因组序列,这限制了基于功能基因挖掘和利用的定向育种以及分子... 茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)是一种高GC含量的革兰氏阳性放线菌,它广泛用于生产转谷氨酰胺酶、博来霉素、莫能霉素等。目前,还没有相关研究报道茂原链霉菌的全基因组序列,这限制了基于功能基因挖掘和利用的定向育种以及分子遗传研究。本研究首次通过高通量测序技术对茂原链霉菌DSM40847进行全基因组测序,使用Velvet软件进行拼接得到266 contigs,整个基因组大小约7.5 Mb,GC含量为73.2%,序列已提交至美国国立生物技术信息中心(NCBI)的GenBank数据库。通过对基因组序列进行分析,成功鉴定转谷氨酰胺酶酶原激活相关蛋白基因,同时对该菌株的次级代谢产物合成基因簇进行了预测,相关研究结果将为茂原链霉菌的功能基因组学研究提供基础数据。 展开更多

关键词 茂原链霉菌 全基因组测序 转谷氨酰胺酶 基因簇

原文传递

过量表达气囊蛋白强化茂原链霉菌合成胰蛋白酶

4

作者 苏莹莹 刘松 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第14期1-8,共8页

气囊蛋白(gas vesicle protein, Gvp)组成的气体囊泡存在于蓝藻、嗜盐古菌等微生物中,为细胞提供浮力或抗胁迫能力。尽管gvp基因簇广泛存在于链霉菌,但其功能尚不明确。在该研究中,分别在茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)DSM40587... 气囊蛋白(gas vesicle protein, Gvp)组成的气体囊泡存在于蓝藻、嗜盐古菌等微生物中,为细胞提供浮力或抗胁迫能力。尽管gvp基因簇广泛存在于链霉菌,但其功能尚不明确。在该研究中,分别在茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)DSM40587谷氨酰胺转氨酶基因缺失菌株(smY2019Δtg)中表达了内源的gvpA、gvpO以及完整基因簇gvpOAFGJLSK(gvp40587),考察其对胰蛋白酶合成和宿主生理状态的影响。酶活力分析显示,过量表达gvp40587和gvpA使胞外最高胰蛋白酶活力分别提高64.3%和17.0%;过量表达gvpO未明显影响胰蛋白酶活力。SDS-PAGE分析发现,gvp40587和gvpA过表达菌株胞外上清液中的胰蛋白酶条带(26 kDa)较对照菌株明显增粗。同时,过量表达完整基因簇的菌株中8个gvp基因的转录水平均较smY2019Δtg有不同程度的提高。与对照菌相比,gvp40587过表达菌株的胞内ATP含量和NADPH/NADP^(+)分别提高1.4倍和0.4倍。上述结果表明,过量表达内源gvp基因簇能促进S.mobaraensis合成胰蛋白酶,能量代谢和蛋白质前体合成的增强可能是其产量提高的主要原因。研究结果首次报道了S.mobaraensis中gvp基因簇对酶蛋白合成的重要影响,为链霉菌蛋白表达调控提供了新思路。 展开更多

关键词 气囊蛋白 基因簇 streptomyces mobaraensis 过量表达 胰蛋白酶 ATP NADPH/NADP^(+)

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原生质体融合提高产谷氨酰胺转氨酶菌株产量 被引量：5

5

作者 侯孝仑 刘雅清 +6 位作者 郭玮婷 高红亮 常忠义 步国建 鲁伟 解秀娟 金明飞 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第3期145-150,共6页

目的:研究并建立产谷氨酰胺转氨酶茂原链霉菌原生质体制备技术,通过原生质体融合技术筛选高产菌株。方法:以溶菌酶处理茂原链霉菌获得原生质体,采用原生质体融合技术,通过96孔板高通量初筛、试管复筛、摇瓶验证选育高产菌株。结果:茂原... 目的:研究并建立产谷氨酰胺转氨酶茂原链霉菌原生质体制备技术,通过原生质体融合技术筛选高产菌株。方法:以溶菌酶处理茂原链霉菌获得原生质体,采用原生质体融合技术,通过96孔板高通量初筛、试管复筛、摇瓶验证选育高产菌株。结果:茂原链霉菌形成的原生质体再生出的菌落直径比较小,而菌丝生成的菌落直径比较大,两种形态的菌落96孔板发酵后酶活力有显著性差异。不同的茂原链霉菌株制备原生质体,酶解程度、原生质体纯度、再生率有很大的差异,再生率最高可达1 804.25%,最低仅为12.76%。原生质融合后的高产菌株,选取96孔板初筛酶活力前3%的菌株进行试管发酵,得到高产菌株比例为32.2%,酶活力比亲本高22.4%,经摇瓶验证产酶比对照提高16.28%。结论:利用基因组重排技术,可以初步对茂原链霉菌进行高产菌株选育。 展开更多

关键词 茂原链霉菌 原生质体 再生 融合 基因组重排

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茂源链霉菌L-谷氨酸氧化酶的异源表达以及诱导条件优化

6

作者 林怡颖 刘凯文 +5 位作者 马小倩 连惠勇 李莹 王芳 张泽生 刘清岱 《中国食品添加剂》 CAS 北大核心 2023年第4期52-59,共8页

L-谷氨酸氧化酶(L-glutamate oxidase,LGOX)能够专一性氧化L-谷氨酸生成α-酮戊二酸(α-ketoglutaric acid,α-KG),在食品领域以及临床生化检验中具有重要的价值。为了提高LGOX的活性,本文结合生物信息学方法和显色法,筛选得到一种新型... L-谷氨酸氧化酶(L-glutamate oxidase,LGOX)能够专一性氧化L-谷氨酸生成α-酮戊二酸(α-ketoglutaric acid,α-KG),在食品领域以及临床生化检验中具有重要的价值。为了提高LGOX的活性,本文结合生物信息学方法和显色法,筛选得到一种新型的含有LGOX基因的茂源链霉菌株(Streptomyces mobaraensis CGMCC 4.1719),以其基因组序列为模板,通过PCR技术扩增LGOX基因,与pET21b质粒连接,构建表达载体pET21b-SmLGOX,化转至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达,并对诱导条件加以优选。通过电泳分析结果可知,SmLGOX基因在大肠杆菌中成功表达。确定了最佳诱导条件为:IPTG终浓度0.4 mmol/L,30℃下诱导6 h。纯化后在不同pH条件下测定酶活,该重组菌最适pH为6.0,且在pH=4.0~6.0时相对酶活保持在80%以上,稳定性好,适于LGOX的工业化应用。 展开更多

关键词 茂源链霉菌 L-谷氨酸氧化酶 诱导表达 条件优化 酶活性

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影响茂原链霉菌TGase产量关键蛋白酶的确定 被引量：3

7

作者 张莉丽 韩雪 张兰威 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期6-9,共4页

茂原链霉菌谷氨酰胺转氨酶(TGase)是一种能够改变蛋白质功能特性的交联酶。茂原链霉菌发酵过程中,TGase以酶原(Pro-TGase)的形式分泌到细胞外,再由胞外的金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶激活,形成有活力的TGase。为了确定Pro-TGase激活的最关... 茂原链霉菌谷氨酰胺转氨酶(TGase)是一种能够改变蛋白质功能特性的交联酶。茂原链霉菌发酵过程中,TGase以酶原(Pro-TGase)的形式分泌到细胞外,再由胞外的金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶激活,形成有活力的TGase。为了确定Pro-TGase激活的最关键蛋白酶,采用在培养过程中,分别向对照培养基和MgCl2培养基中添加这2种蛋白酶抑制剂(EDTA和PMSF)的方式,抑制2种酶的活力,测定TGase在发酵过程中的活力变化。结果发现加入EDTA后,发酵上清液中的TGase活力不再升高;而加入PMSF后,发酵上清液中的TGase活力变化不明显。这些结果表明,金属蛋白酶是影响TGase合成的最关键蛋白酶。 展开更多

关键词 茂原链霉菌 谷氨酰胺转氨酶 金属蛋白酶 丝氨酸蛋白酶 产量

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片段化全基因组体外诱变选育转谷氨酰胺酶高产菌株的研究 被引量：3

8

作者 杨慧林 包莹玲 潘力 《现代食品科技》 EI CAS 2009年第1期34-37,共4页

茂原链霉菌产生的转谷氨酰胺酶由于具有使蛋白质交联的特性而备受关注,但是其较低的产量阻碍了工业化的发展。本文采用一株分离到的茂原链霉菌作为出发菌株,通过片段化全基因组体外诱变育种的方法,最终得到一株转谷氨酰胺酶酶活为0.223U... 茂原链霉菌产生的转谷氨酰胺酶由于具有使蛋白质交联的特性而备受关注,但是其较低的产量阻碍了工业化的发展。本文采用一株分离到的茂原链霉菌作为出发菌株,通过片段化全基因组体外诱变育种的方法,最终得到一株转谷氨酰胺酶酶活为0.223U/mL的优良菌株,比出发菌株(0.0685U/mL)酶活提高近2.23倍。 展开更多

关键词 片段化全基因组 育种 茂原链霉菌 转谷氨酰胺酶

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基因组重排筛选高产谷氨酰胺转胺酶菌株 被引量：3

9

作者 宋佳雯 田苏 +5 位作者 张玉如 王志珍 常忠义 高红亮 步国建 金明飞 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期105-111,共7页

谷氨酰胺转胺酶(TGase)的产量不足的问题一直限制其工业化生产规模,故采用基因组重排的方法,筛选高产谷氨酰胺转胺酶菌株。通过对不同制备条件下原生质体纯度和形成率的考量,获得制备原生质体的最优条件为以6mg/ml的溶菌酶浓度进行酶解... 谷氨酰胺转胺酶(TGase)的产量不足的问题一直限制其工业化生产规模,故采用基因组重排的方法,筛选高产谷氨酰胺转胺酶菌株。通过对不同制备条件下原生质体纯度和形成率的考量,获得制备原生质体的最优条件为以6mg/ml的溶菌酶浓度进行酶解,酶解时间2h。再优化融合条件,以2min紫外灭活和40min热灭活结合的方法挑选出融合子。通过两轮基因组重排,经过96孔板发酵高通量筛选和摇瓶发酵复筛验证,获得了一株产酶达7.12U/ml的茂源链霉菌,相比最初选用菌株的平均酶活提高65.5%。发酵结果显示,酶活提高的原因可能是在重组后原酶成熟更快、更彻底,且得到的菌株遗传稳定性良好。证明基因组重排能够有效提高菌株的产酶水平,同时为谷氨酰胺转胺酶产量提高提供理论依据。 展开更多

关键词 微生物谷氨酰胺转胺酶(TGase) 基因组重排 茂源链霉菌 高通量筛选

原文传递

茂原链霉菌谷氨酰胺转胺酶序列分析及三维结构建模 被引量：2

10

作者 张智俊 田兴军 +1 位作者 李亚玲 罗淑萍 《生物信息学》 2005年第3期97-100,120,共5页

利用DNASTAR、VectorNTI9、SignalP等生物信息学平台对茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)谷氨酰胺转胺酶(TGase)进行了序列分析和三维结构建模。结果表明:茂原链霉菌TGase同已报道其他微生物来源的TGase有较高的同源性,无信号肽,存... 利用DNASTAR、VectorNTI9、SignalP等生物信息学平台对茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)谷氨酰胺转胺酶(TGase)进行了序列分析和三维结构建模。结果表明:茂原链霉菌TGase同已报道其他微生物来源的TGase有较高的同源性,无信号肽,存在一个跨膜结构区,二级结构是由多个α螺旋、转角和少量β折叠构成。同时在一二级结构分析的基础上,利用同源建模的方法完成了三维结构的建模。 展开更多

关键词 序列分析 谷氨酰胺转胺酶 三维结构同源建模 茂原链霉菌

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响应面法优化茂源链霉菌产谷氨酰胺转氨酶发酵条件 被引量：2

11

作者 汪燕 罗水忠 +4 位作者 蔡静 赵妍嫣 钟昔阳 姜绍通 郑志 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第16期203-207,共5页

以茂源链霉菌为出发菌株,在单因素实验基础上,选择初始p H、转速、装液量和培养温度为主要影响因子,应用响应面Box-Behnken设计进行4因素3水平实验,以TG酶活为响应值,优化该菌株产TG酶的摇瓶发酵条件。结果表明,茂源链霉菌产TG的最适发... 以茂源链霉菌为出发菌株,在单因素实验基础上,选择初始p H、转速、装液量和培养温度为主要影响因子,应用响应面Box-Behnken设计进行4因素3水平实验,以TG酶活为响应值,优化该菌株产TG酶的摇瓶发酵条件。结果表明,茂源链霉菌产TG的最适发酵条件为:初始p H为7.0,装液量为78 m L/250 m L,转速为150 r/min,培养温度为30℃,培养时间为96 h。在该条件下进行发酵,谷氨酰胺转氨酶活力可达(1.41±0.02)U/m L。 展开更多

关键词 茂源链霉菌 谷氨酰胺转氨酶 响应面法 发酵条件

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基因组信息指导下茂源链霉菌代谢产物研究 被引量：2

12

作者 王珊珊 郭文强 +2 位作者 何宁 齐欣 解云英 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 2018年第1期28-34,共7页

目的在基因组信息指导下,研究茂源链霉菌Streptomyces mobaraensis US-43的代谢产物。方法采用16S r RNA基因序列分析对菌株US-43进行初步分类鉴定,应用anti SMASH分析菌株US-43的基因组序列并预测其可能含有的代谢产物;采用正向硅胶柱... 目的在基因组信息指导下,研究茂源链霉菌Streptomyces mobaraensis US-43的代谢产物。方法采用16S r RNA基因序列分析对菌株US-43进行初步分类鉴定,应用anti SMASH分析菌株US-43的基因组序列并预测其可能含有的代谢产物;采用正向硅胶柱色谱、凝胶柱色谱以及高效液相色谱等分离技术对该菌株的代谢产物进行分离纯化,利用核磁共振和质谱鉴定化合物结构;通过改变培养条件对其发酵稳定性进行考察,通过HPLC-UV方法建立标准曲线,研究代谢产物的产量。结果在基因组信息指导下从茂源链霉菌Streptomyces mobaraensis US-43中分离鉴定了一个α-吡啶酮类化合物杀粉蝶菌素A1,且该菌株的发酵稳定性良好,最高产量为144mg/L。结论茂源链霉菌Streptomyces mobaraensis US-43能够稳定产生杀粉蝶菌素A1。 展开更多

关键词 茂源链霉菌 基因组挖掘 杀粉蝶菌素A1 分离鉴定

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转谷氨酰胺酶高产菌株的选育及发酵条件优化 被引量：1

13

作者 金宏佳 刘晓兰 +3 位作者 田英华 高鹏 宋春丽 郑喜群 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2013年第5期51-55,共5页

以茂原链霉菌作为出发菌株,对其进行紫外线诱变育种,诱变时间为50s,通过摇瓶液体发酵进行筛选,获得一株产转谷氨酰胺酶能力高的变异菌株MY78,与出发菌株(转谷氨酰胺酶酶活力为0.25U/mL)相比,其转谷氨酰胺酶的酶活力提高了2.28倍,突变株... 以茂原链霉菌作为出发菌株,对其进行紫外线诱变育种,诱变时间为50s,通过摇瓶液体发酵进行筛选,获得一株产转谷氨酰胺酶能力高的变异菌株MY78,与出发菌株(转谷氨酰胺酶酶活力为0.25U/mL)相比,其转谷氨酰胺酶的酶活力提高了2.28倍,突变株遗传性能稳定。以转谷氨酰胺酶活力和菌体细胞生长量作为指标,对其发酵条件进行研究。结果表明,最适发酵条件:培养基初始pH值为7.0,培养时间为54h,培养温度为30℃,接种量为10%(V/V),摇床转速为200r/min。在该条件下进行发酵,微生物产转谷氨酰胺酶活力达到(1.15±0.09)U/mL,菌体生物量可达(6.32±0.01)g/L。 展开更多

关键词 茂原链霉菌 转谷氨酰胺酶 紫外诱变育种 摇瓶发 酵条件优化

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茂原链霉菌产谷氨酰胺转氨酶发酵培养基优化 被引量：1

14

作者 汪燕 罗水忠 +3 位作者 蔡静 钟昔阳 姜绍通 郑志 《合肥工业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期270-274,共5页

文章考察了不同培养基成分对茂原链霉菌产谷氨酰胺转氨酶的影响,以酶活和生物量为测定指标,采用单因素试验和正交试验确定发酵培养基最适成分及其质量浓度,以期为未来菌株扩大培养和发酵中试化提供参考。试验结果表明,优化后的培养基为... 文章考察了不同培养基成分对茂原链霉菌产谷氨酰胺转氨酶的影响,以酶活和生物量为测定指标,采用单因素试验和正交试验确定发酵培养基最适成分及其质量浓度,以期为未来菌株扩大培养和发酵中试化提供参考。试验结果表明,优化后的培养基为:葡萄糖40g/L,蛋白胨40g/L,硝酸铵1g/L,酵母膏2g/L,硫酸镁2g/L,磷酸氢二钾2g/L。该条件下酶活可达(1.30±0.07)U/mL,生物量为(9.69±0.23)g/L。 展开更多

关键词 茂原链霉菌 谷氨酰胺转氨酶 发酵培养基 正交试验

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茂原链霉菌谷氨酰胺转氨酶合成与菌体形态分化的关系 被引量：1

15

作者 薛慧 付玲 +3 位作者 李洪波 王淑梅 刘宁 张莉丽 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第20期130-135,共6页

目的:研究茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)合成谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TGase)与菌体分化之间的关系,以及TGase的生理功能.方法:以S.mobaraensis为出发菌株,通过向培养基中添加乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic ... 目的:研究茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)合成谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TGase)与菌体分化之间的关系,以及TGase的生理功能.方法:以S.mobaraensis为出发菌株,通过向培养基中添加乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)抑制TGase激活关键蛋白酶的活性从而调控成熟TGase的合成,同时利用激光共聚焦显微镜和扫描电镜观察发酵过程中菌体的活力和形态变化.结果:对照组随着TGase产量的升高,菌体生存活力呈先上升后下降的趋势,并且菌体表现出复杂的形态变化;实验组自加入EDTA后TGase产量不再升高,菌体生存活力也逐渐减弱,菌体形态分化滞后.结论:TGase的合成会影响茂原链霉菌生存活力及其形态分化. 展开更多

关键词 谷氨酰胺转氨酶 茂原链霉菌 菌体活力 形态分化 生理功能

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响应面法优化茂原链霉菌产转谷氨酰胺酶条件

16

作者 薛慧 张莉丽 刘宁 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期7-10,26,共5页

为了提高茂原链霉菌转谷氨酰胺酶(TGase)量,对其在氯化镁培养基中的发酵条件进行研究。单因素实验结果表明当种龄为42 h,接种量为14%,初始pH值为7.0,培养温度30℃,转速为220 r/min时有利酶的合成;进一步对影响酶产量的3个主要因素(接种... 为了提高茂原链霉菌转谷氨酰胺酶(TGase)量,对其在氯化镁培养基中的发酵条件进行研究。单因素实验结果表明当种龄为42 h,接种量为14%,初始pH值为7.0,培养温度30℃,转速为220 r/min时有利酶的合成;进一步对影响酶产量的3个主要因素(接种量、转速和温度)采用响应面法进行优化,得到TGase最佳发酵工艺条件为:接种量15.6%,转速213 r/min,培养温度32℃。在该条件下进行发酵,TGase活力可达4.617±0.125 U/mL,比未优化前提高了近21.4%。 展开更多

关键词 茂原链霉菌 TGASE 发酵条件 响应面法

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茂原链霉菌luxR基因对TGase生物合成的作用

17

作者 张莉丽 薛慧 +3 位作者 邸维 张功圣 刘宁 韩雪 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第2期173-177,共5页

前期研究表明,MgCl_2胁迫不但可以提高TGase的产量,还会影响微生物次级代谢产物合成的一个重要调节因子LuxR家族蛋白的表达.为了研究LuxR家族蛋白对茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)TGase生物合成以及菌体生长的调控作用,利用pKC1... 前期研究表明,MgCl_2胁迫不但可以提高TGase的产量,还会影响微生物次级代谢产物合成的一个重要调节因子LuxR家族蛋白的表达.为了研究LuxR家族蛋白对茂原链霉菌(Streptomyces mobaraensis)TGase生物合成以及菌体生长的调控作用,利用pKC1139为载体,构建luxR基因阻断质粒,通过PEG介导的质粒转化将其转入S.mobaraensis原生质体中,利用单交换同源重组法将整个重组质粒插入到茂原链霉菌基因组中构建S.mobaraensis luxR家族蛋白基因阻断突变菌.利用菌体干重法对比突变菌和野生菌菌体生长变化,利用比色法研究两株菌TGase生物合成的变化,找到LuxR家族蛋白基因表达与TGase生物合成之间的关系.结果发现,本研究采用单交换同源重组的方法可以成功地构建出S.mobaraensis luxR基因阻断突变菌株.通过对比野生菌与阻断菌株生长和TGase活力的变化发现阻断luxR基因会导致菌体生长受阻,TGase合成延迟,并且表达量显著下降.这些研究结果表明本文研究的luxR基因可能是S.mobaraensis合成TGase必不可少的正向调控因子. 展开更多

关键词 茂原链霉菌 谷氨酰胺转氨酶 luxR基因 生物合成

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产耐高温谷氨酰胺转胺酶菌株的快速筛选方法 被引量：4

18

作者 郭玮婷 张慧 +6 位作者 查东风 黄汉峰 黄静 高红亮 常忠义 金明飞 鲁伟 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期83-89,共7页

目的：采用亚硝基胍（NTG）诱变结合96孔板高通量筛选方法筛选产耐高温谷氨酰胺转胺酶（MTG）的茂原链霉菌（Streptomyces mobaraensis）。方法：通过优化96孔板高通量测定MTG活性的方法、确定筛选温度和时间,建立了产耐高温MTG菌株的... 目的：采用亚硝基胍（NTG）诱变结合96孔板高通量筛选方法筛选产耐高温谷氨酰胺转胺酶（MTG）的茂原链霉菌（Streptomyces mobaraensis）。方法：通过优化96孔板高通量测定MTG活性的方法、确定筛选温度和时间,建立了产耐高温MTG菌株的快速筛选方法;通过优化NTG诱变条件建立了筛选突变库;通过96孔板高通量初筛、摇瓶复筛获得了产耐高温MTG的突变株12-82,并通过摇瓶发酵对12-82所产MTG进行热稳定性分析。结果：采用2mg/ml NTG、p H8.0、60min的诱变条件获得突变株,将突变株的发酵上清液于70℃水浴7.5min,再在37℃空气浴、反应10min的条件下测定MTG活性,从5 200株突变株中筛选出5株产耐高温MTG的突变株,其中突变株12-82在50℃水浴60min以及70℃水浴1.5min的酶活残留率均比出发株高出近20%,且80℃保温2min仍有11.9%的酶活残留率。结论：利用NTG诱变结合96孔板高通量筛选的方法筛选到5株所产MTG热稳定性相对较高的突变株,其中突变株12-82在50℃、70℃和80℃的酶活残留率均有10%~20%的提高。这为高温食品加工领域所需耐高温MTG生产菌株的高效筛选提供了可行性方案。 展开更多

关键词 茂原链霉菌 谷氨酰胺转胺酶 热稳定性 NTG诱变 96孔板高通量筛选

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