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原始生殖细胞的人类胚胎干细胞克隆 被引量:40
1
作者 常万存 窦忠英 +4 位作者 马鸿飞 杨春荣 高志敏 雷安民 樊敬庄 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 1998年第6期105-108,共4页
取材于妊娠终止胚胎生殖腺或生殖嵴及其周围组织,用DMEM+NCS培养液体外培养,分离由人PGCs转化成的类ES细胞,并将其与同源胚胎成纤维细胞一起用胰蛋白酶+EDTA的无钙镁PBS液消化传代。在原代培养12h观察到胞... 取材于妊娠终止胚胎生殖腺或生殖嵴及其周围组织,用DMEM+NCS培养液体外培养,分离由人PGCs转化成的类ES细胞,并将其与同源胚胎成纤维细胞一起用胰蛋白酶+EDTA的无钙镁PBS液消化传代。在原代培养12h观察到胞体较大、边缘不整、贴壁分裂增殖的PGCs样细胞,48h后观察到26处紧密排列呈鸟巢状的类ES细胞集落及集落团。第6d传代成功,第16d传至第4代。结果表明,体外培养附植后胚胎能够建成人的类ES细胞系。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 胚胎干细胞 克隆 体外培养
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成年大鼠纹状体区神经干细胞的分离培养 被引量:27
2
作者 刘仕勇 张可成 +2 位作者 杨辉 蔡文琴 何家全 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期17-20,I003,共5页
目的 从成年大鼠纹状体区分离并鉴定神经干细胞。 方法 利用无血清培养和单细胞克隆技术在成年大鼠纹状体区分离具有单细胞克隆能力的细胞群 ,选取单个克隆进行连续传代培养获得大量亚克隆 ,采用免疫荧光细胞化学技术检测神经上皮干... 目的 从成年大鼠纹状体区分离并鉴定神经干细胞。 方法 利用无血清培养和单细胞克隆技术在成年大鼠纹状体区分离具有单细胞克隆能力的细胞群 ,选取单个克隆进行连续传代培养获得大量亚克隆 ,采用免疫荧光细胞化学技术检测神经上皮干细胞蛋白 (Nestin)和分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达。 结果 从纹状体区分离的细胞群具有连续克隆能力 ,表达神经上皮干细胞蛋白 ,分化后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原。 结论 分离的细胞具有自我更新能力和多分化潜能 ,表达神经上皮干细胞蛋白 ,有很强的增殖能力。是中枢神经系统的干细胞。 展开更多
关键词 神经干细胞 克隆 细胞培养 分离 纹状体 大鼠
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神经干细胞的分离培养及其鉴定 被引量:29
3
作者 刘仕勇 张可成 +2 位作者 杨辉 何家全 石军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期26-28,共3页
目的 :从成年大鼠纹状体区和胎鼠皮层分离并鉴定神经干细胞。方法 :利用无血清培养和单细胞克隆技术在成年大鼠纹状体区和胎鼠皮层分离具有单细胞克隆能力的细胞群 ,选取单个克隆进行连续传代培养获得大量亚克隆 ,采用免疫荧光细胞化学... 目的 :从成年大鼠纹状体区和胎鼠皮层分离并鉴定神经干细胞。方法 :利用无血清培养和单细胞克隆技术在成年大鼠纹状体区和胎鼠皮层分离具有单细胞克隆能力的细胞群 ,选取单个克隆进行连续传代培养获得大量亚克隆 ,采用免疫荧光细胞化学技术检测克隆细胞Nestin抗原和分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达。结果 :从纹状体区和皮层分离的细胞群具有连续克隆能力 ,胚胎早期细胞抗原 Nestin抗原阳性 ,分化后的细胞表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原。结论 :我们分离的细胞具有自我更新能力和多分化潜能 ,属于胚胎早期细胞 ,有很强的增殖能力 ,是中枢神经系统的干细胞。 展开更多
关键词 神经干细胞 克隆 细胞培养 分离 大鼠
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大鼠骨髓间充质干细胞的分离纯化与初步鉴定 被引量:17
4
作者 张本斯 王凡 +2 位作者 邓力 羊惠君 李瑞祥 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期161-165,共5页
目的 探讨体外分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSCs)的方法 ,分析其部分表型特点。方法 用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,传代扩增 ,测定生长曲线 ,形态学观察 ,免疫细胞化学及图像分析测... 目的 探讨体外分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSCs)的方法 ,分析其部分表型特点。方法 用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,传代扩增 ,测定生长曲线 ,形态学观察 ,免疫细胞化学及图像分析测定细胞表面抗原和细胞外基质蛋白表达情况。结果 MSCs属骨髓中单个核细胞 ,密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓MSCs,MSCs在含 10 %小牛血清的L DMEM中生长性状相对稳定 ,1、 3、 5代细胞生长曲线基本一致 ,增殖速度快。细胞呈均一的成纤维细胞样 ,均一表达CD4 4、CD5 4、纤维粘连蛋白 (Fibronectin ,FN)、Ⅰ型胶原 (CollagenⅠ )。结论 本实验建立了一种体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓MSCs的方法 ,MSCs稳定表达CD4 4、CD5 4、FN、CollaganⅠ。 展开更多
关键词 大鼠 骨髓 间充质干细胞 分离纯化 表型
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Current applications of adipose-derived stem cells and their future perspectives 被引量:22
5
作者 Eun-Hee Kim Chan Yeong Heo 《World Journal of Stem Cells》 SCIE CAS 2014年第1期65-68,共4页
Adult stem cells have a great potential to treat various diseases. For these cell-based therapies, adipose-derived stem cells(ADSCs) are one of the most promising stem cell types, including embryonic stem cells(ESCs) ... Adult stem cells have a great potential to treat various diseases. For these cell-based therapies, adipose-derived stem cells(ADSCs) are one of the most promising stem cell types, including embryonic stem cells(ESCs) and induced pluripotent stem cells(iPSCs). ESCs and iPSCs have taken center stage due to their pluripotency. However, ESCs and iPSCs have limitations in ethical issues and in identification of characteristics, respectively. Unlike ESCs and iPSCs, ADSCs do not have such limitations and are not only easily obtained but also uniquely expandable. ADSCs can differentiate into adipocytes, osteoblasts, chondrocytes, myocytes and neurons under specific differentiation conditions, and these kinds of differentiation potential of ADSCs could be applied in regenerative medicine e.g., skin reconstruction, bone and cartilage formation, etc. In this review, the current status of ADSC isolation, differentiation and their therapeutic applications are discussed. 展开更多
关键词 Adipose-derived stem cells isolation DIFFERENTIATION TRANSPLANTATION cell-based THERAPY
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新生牛睾丸细胞的分离纯化与冷冻保存 被引量:20
6
作者 郑鹏 李冬旭 +2 位作者 田亚光 黄贺 张贵学 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期96-100,共5页
以新生牛作为实验动物,取睾丸进行制样组织学观察,并将睾丸消化成单细胞悬液,对生精上皮细胞进行分离纯化、细胞鉴定及冷冻保存,研究不同分离纯化及冷冻保存方法对睾丸细胞的影响。结果表明,新生牛曲细精管中含有精原干细胞和支持细胞,... 以新生牛作为实验动物,取睾丸进行制样组织学观察,并将睾丸消化成单细胞悬液,对生精上皮细胞进行分离纯化、细胞鉴定及冷冻保存,研究不同分离纯化及冷冻保存方法对睾丸细胞的影响。结果表明,新生牛曲细精管中含有精原干细胞和支持细胞,差速贴壁法能有效分离两种细胞;精原干细胞鉴定,AKP、C-kit、OCT-4均呈阳性;支持细胞鉴定,油红O、波形蛋白均呈阳性。精原干细胞冷冻保存以10%的二甲基亚砜为冷冻剂的效果最好,支持细胞冷冻保存以10%乙二醇和0.1 mmol.L-1海藻糖组合效果最好。 展开更多
关键词 精原干细胞 支持细胞 分离纯化 冷冻保存
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人骨髓间充质干细胞分离鉴定方法的改进 被引量:11
7
作者 吴洁莹 廖灿 +2 位作者 许遵鹏 陈劲松 辜少玲 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期557-560,共4页
本研究的目的是建立一种基于临床移植需要的分离、培养、鉴定人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)的方法,为配合造血干细胞移植的临床应用提供实验基础。采用Percoll分离液(1.073g/ml)从新鲜成人骨髓穿刺液中分离MSC,应用贴... 本研究的目的是建立一种基于临床移植需要的分离、培养、鉴定人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)的方法,为配合造血干细胞移植的临床应用提供实验基础。采用Percoll分离液(1.073g/ml)从新鲜成人骨髓穿刺液中分离MSC,应用贴壁筛选法传代培养,流式细胞仪检测细胞表面抗原,成骨诱导体系(地塞米松0.1μmol/L、β-甘油磷酸钠10mmol/L、抗坏血酸磷酸盐50μmol/L)及脂肪诱导体系(地塞米松1μmol/L、牛胰岛素5mg/L、1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤0.5mmol/L、消炎痛60μmol/L)分别诱导MSC定向分化,通过细胞形态观察及免疫化学染色进行鉴定。结果表明:从成人骨髓液中分离培养出MSC,稳定表达CD73、CD105、CD166,不表达CD34、CD45。定向诱导的成骨细胞表达碱性磷酸酶活性,脂肪细胞内出现明显的脂滴。结论:采用密度梯度离心联合贴壁筛选法并通过流式细胞术检测及定向诱导分化,能够从成人骨髓液中分离出MSC,并完成细胞表型及多向分化潜能的初步鉴定。本操作方案具有一定的临床应用价值。 展开更多
关键词 间充质干细胞 分离方法 鉴定方法 细胞培养 定向分化
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某些因素对牛和小鼠类胚胎干细胞分离与培养的影响 被引量:7
8
作者 安立龙 杨奇 +4 位作者 窦忠英 高志敏 雷安民 杨春荣 邱怀 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期187-190,共4页
以荷斯坦牛胚胎和小鼠胚胎为材料 ,研究了犊牛血清、饲养层、培养液、添加物和消化液对牛胚胎干细胞和小鼠胚胎干细胞克隆效率的影响。结果表明 ,在 2 4h内使小鼠胚胎贴壁率达 86 %以上的犊牛血清可用于小鼠和牛胚胎干细胞的分离 ;在 E... 以荷斯坦牛胚胎和小鼠胚胎为材料 ,研究了犊牛血清、饲养层、培养液、添加物和消化液对牛胚胎干细胞和小鼠胚胎干细胞克隆效率的影响。结果表明 ,在 2 4h内使小鼠胚胎贴壁率达 86 %以上的犊牛血清可用于小鼠和牛胚胎干细胞的分离 ;在 ES细胞分离与克隆中 ,以 15 %~ 2 0 %犊牛血清为宜 ,在 DMEM(L)培养基中添加 0 .1μmol/LNa2 Se O3 +0 .1mmol/Lβ-巯基乙醇 +10 μg/L IGF+10 0 0 IU/m L L IF,能显著提高牛 ES细胞分离与克隆效率 ;在TCM199、DMEM(高糖 )和 DMEM(低糖 ) 3种培养基中 ,低糖 DMEM更适宜于牛 ES细胞的分离 ;优秀胚胎形成的团状 ICM更适宜于分离与克隆 ES细胞 ,在 37℃用低浓度消化液处理 ICM或 ES细胞集落 ,再以机械将其离散为细胞小块 ,ES细胞克隆效率最高。 展开更多
关键词 小鼠 胚胎干细胞 内细胞团 分离 克隆
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大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养方法优化 被引量:15
9
作者 祝旭龙 颜谭 +6 位作者 姚维杰 王永恒 程冲 向俊西 吕毅 高庆东 李建辉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1621-1626,1631,共7页
目的建立一个分离、培养、纯化大鼠的骨髓间充质干细胞的方法。方法使用贴壁法分离大鼠的骨髓间充质干细胞,通过培养初期的频繁换液和传代过程中减少胰蛋白酶的暴露时间,达到骨髓间充质干细胞的纯化。流式细胞仪检测细胞表面标志物,MTT... 目的建立一个分离、培养、纯化大鼠的骨髓间充质干细胞的方法。方法使用贴壁法分离大鼠的骨髓间充质干细胞,通过培养初期的频繁换液和传代过程中减少胰蛋白酶的暴露时间,达到骨髓间充质干细胞的纯化。流式细胞仪检测细胞表面标志物,MTT法检测细胞生长状况,暴露于不同的诱导培养基使细胞成骨、成脂,并向肝胆系分化。结果分离所得的细胞阳性表达CD29、CD44、CD90,而对于造血细胞标志物CD45呈阴性。在成骨、成脂培养基的诱导下,细胞ALP、茜素红、油红O染色均呈阳性,并发现传至10代的细胞仍保持分化功能。将骨髓间充质干细胞贯续暴露于不同的细胞因子和激素,得到了表达肝细胞、胆管上皮细胞特异标志的子代细胞。结论通过改良后的方法可以高效、简洁地分离出形态均一的大鼠骨髓间充质干细胞,并能够向多胚层的细胞分化。 展开更多
关键词 骨髓 间充质干细胞 分离与培养 肝细胞 胆管上皮细胞 大鼠
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Culture and Identification of Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells 被引量:12
10
作者 Shuang-zhi Huo Ping Shi Xi-ning Pang 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2010年第4期211-214,共4页
Objective To establish the method of isolation, purification, and identification of human amniotic mesenchymal stem cells (hAMSCs). Methods hAMSCs were isolated from human amniotic membrane by trypsin-collagenase dige... Objective To establish the method of isolation, purification, and identification of human amniotic mesenchymal stem cells (hAMSCs). Methods hAMSCs were isolated from human amniotic membrane by trypsin-collagenase digestion, and cultured in Dulbecco's modified Eagle's medinm/F12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Phenotypic characteristics of these cells were analyzed by means of immunocytochemistry and flow cytometry. Results The cells successfully isolated from human amniotic membrane expressed representative mesenchymal cell surface markers CD44, CD90, and vimentin, but not CD45. Conclusions This study establishes a potential method for isolation of hAMSCs from human amnion, in vitro culture, and identification. The isolated cells show phenotypic characteristics of mesenchymal stem cells. 展开更多
关键词 amniotic mesenchymal stem cell cell isolation cell culture cell identification
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新生大鼠海马神经干细胞的分离、培养、分化和鉴定 被引量:13
11
作者 谭新杰 胡长林 蔡文琴 《国际脑血管病杂志》 2006年第2期107-109,共3页
目的:探讨从新生大鼠海马分离神经干细胞并进一步培养、诱导分化和鉴定的可行性。方法:分离出生1d大鼠海马,吸管吹打机械分离制成单细胞悬液,采用无血清培养和胎牛血清诱导分化,应用免疫荧光技术鉴定神经干细胞及其分化的子代细胞。结果... 目的:探讨从新生大鼠海马分离神经干细胞并进一步培养、诱导分化和鉴定的可行性。方法:分离出生1d大鼠海马,吸管吹打机械分离制成单细胞悬液,采用无血清培养和胎牛血清诱导分化,应用免疫荧光技术鉴定神经干细胞及其分化的子代细胞。结果:从新生大鼠海马分离的细胞呈巢蛋白免疫阳性并能在体外传代培养和连续形成克隆;血清诱导分化后的细胞可分别表达神经元和星形胶质细胞的特异性抗原β-微管蛋白Ⅲ和神经胶质原纤维酸性蛋白。结论:分离和培养的细胞能表达神经干细胞的特异性标志物巢蛋白,并且具有很强的增殖能力和多向分化潜能,说明新生大鼠海马存在神经干细胞,并可用于进一步的实验研究。 展开更多
关键词 神经干细胞 分离 培养 分化 鉴定 大鼠
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人脐带血间充质干细胞体外分离培养及生物学特性研究 被引量:4
12
作者 程文广 罗高兴 +4 位作者 黄正根 贺伟峰 袁顺宗 陈希炜 吴军 《现代生物医学进展》 CAS 2008年第3期424-426,共3页
目的:探讨并建立稳定可靠的人脐带血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCBMSCs)体外分离和培养方法。方法:采用密度梯度离心法分离脐带血单个核细胞,利用MSC易黏附塑料贴壁生长的特性,分离MSC并进行体... 目的:探讨并建立稳定可靠的人脐带血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCBMSCs)体外分离和培养方法。方法:采用密度梯度离心法分离脐带血单个核细胞,利用MSC易黏附塑料贴壁生长的特性,分离MSC并进行体外扩增培养,观测其形态学特征,绘制不同代数hUCBMSc生长曲线,流式细胞技术检测细胞表面标志物CD29、CD34、CD105、HLA-DR等表达情况。结果:本法可成功、可靠地在体外自hUCB中分离培养出粘附细胞,该细胞在体外培养呈梭形或成纤维样,其指数生长倍增时间约为36h,其细胞表面表达β1整联蛋白CD29、CD105(endoglin),不表达造血细胞标志物CD34以及HLA-DR。结论:人脐带血中存在间充质干细胞,采用优化的实验方法可以提高培养成功率,稳定获得MSC并体外扩增培养。人脐带血可以作为获得间充质干细胞稳定充足的来源。 展开更多
关键词 人脐带血 间充质干细胞 分离培养 生物学特性
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乳腺癌新辅助化疗后的癌干细胞分离培养 被引量:11
13
作者 董华英 吴诚义 陈元文 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第20期2172-2176,共5页
目的从不同周期新辅助化疗后的乳腺癌组织中分离培养乳腺癌干细胞(breast cancer stem cells,BCSCs),观察其体外增殖和分化特性,研究新辅助化疗对BCSCs分离培养的影响。方法在添加生长因子的无血清培养基(serumfree media,SFM)中悬浮培... 目的从不同周期新辅助化疗后的乳腺癌组织中分离培养乳腺癌干细胞(breast cancer stem cells,BCSCs),观察其体外增殖和分化特性,研究新辅助化疗对BCSCs分离培养的影响。方法在添加生长因子的无血清培养基(serumfree media,SFM)中悬浮培养细胞获得富含BCSCs的微球体(mammospheres,MSs),通过克隆形成实验研究微球体细胞(mammospheres-derived cells,MSDCs)的自我更新能力;在添加5%胎牛血清的培养基中培养MSDCs诱导其分化,研究其分化能力;免疫细胞化学检测ESA和Nestin在MSDCs中的表达;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测MSDCs中的AL-DH1+细胞含量。结果化疗1个周期的5例乳腺癌标本经培养均无MSs形成,化疗2个周期的6例标本经培养其中3例有MSs形成,化疗3个周期以上的9例标本中的5例可以直接分离出MSs,其余4例仅得到少量坏死的细胞和组织碎片;MSDCs在含血清的培养基中贴壁分化;MSDCs均含有ALDH1+细胞。结论从新辅助化疗后的乳腺癌组织中分离BCSCs宜选取化疗2个周期后的标本;新辅助化疗可以富集BCSCs;ALDH1+表型的BCSCs比CD44+CD24-表型的BCSCs在乳腺癌中分布更加广泛。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 化疗 肿瘤干细胞 细胞分离 细胞培养
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应用长春新碱分离与鉴定U87细胞系中的胶质瘤干细胞 被引量:7
14
作者 余时沧 易良 +3 位作者 周志华 姚小红 平轶芳 卞修武 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1388-1391,共4页
背景与目的:研究表明,肿瘤干细胞具有化疗抵抗性。本研究拟利用肿瘤干细胞对化疗药物耐受的特性,在培养基中添加长春新碱的方法从人胶质瘤细胞系U87中分离鉴定肿瘤干细胞。方法:U87细胞于含血清培养基中贴壁后,换用含有5ng/ml长春新碱... 背景与目的:研究表明,肿瘤干细胞具有化疗抵抗性。本研究拟利用肿瘤干细胞对化疗药物耐受的特性,在培养基中添加长春新碱的方法从人胶质瘤细胞系U87中分离鉴定肿瘤干细胞。方法:U87细胞于含血清培养基中贴壁后,换用含有5ng/ml长春新碱的神经干细胞培养基培养,获得第一代肿瘤细胞球后,将单细胞接种于神经干细胞培养基中,获得第二代肿瘤细胞球。免疫荧光检测巢蛋白(nestin)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulin Ⅲ)、髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)在第二代肿瘤细胞球及其分化细胞中的表达。结果:成功地获得了第一代肿瘤细胞球以及来源于单细胞的第二代肿瘤细胞球;细胞间紧密相贴,表面较光滑;神经干细胞标志物nestin在第二代肿瘤细胞球中呈阳性表达;第二代肿瘤细胞球分化细胞中可检测到nestin、GFAP、β-tubulin Ⅲ、MBP的表达。结论:U87细胞系中存在具有自我更新及多向分化能力的胶质瘤干细胞,采用神经干细胞培养基中添加长春新碱的方法能简单有效地从胶质瘤细胞系中分离培养出胶质瘤干细胞。 展开更多
关键词 胶质瘤 U87细胞系 肿瘤干细胞 长春新碱 细胞分离 细胞鉴定
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不同培养基培养人脐血间充质干细胞的差异 被引量:8
15
作者 赵霞 路希敬 +4 位作者 刘国强 徐敏 邢健 王椋 丁慧芳 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第19期3449-3454,共6页
背景:脐血间充质干细胞为干细胞领域的研究热点,但目前传代及扩增此类细胞尚无简单、有效、完美培养方法。目的:采用不同的培养基分离培养融合状态的间充质干细胞,以筛选一种较好的体外培养人脐血间充质干细胞的方法。方法:无菌条件下... 背景:脐血间充质干细胞为干细胞领域的研究热点,但目前传代及扩增此类细胞尚无简单、有效、完美培养方法。目的:采用不同的培养基分离培养融合状态的间充质干细胞,以筛选一种较好的体外培养人脐血间充质干细胞的方法。方法:无菌条件下取正常足月剖宫产新生儿的脐血,随机分为5组:低糖DMEM(Dulbecco改良的Eagle培养基)组、高糖DMEM组、α-DMEM组、低糖DMEM+干细胞因子组、低糖DMEM+骨髓间充质干细胞培养上清组。用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞。将脐血单个核细胞接种于含体积分数为10%胎牛血清的上述培养基中,放置于37℃、体积分数为5%的CO2培养箱内培养,倒置显微镜观察细胞数量和形态的变化并用流式细胞技术分析细胞的表面抗原。结果与结论:①各组间充质干细胞培养48h后贴壁细胞数和细胞存活率的比较:低糖DMEM+干细胞因子组、低糖DMEM+骨髓间充质干细胞培养上清组的贴壁细胞数明显多于低糖DMEM组、高糖DMEM组、α-DMEM组(P<0.05),细胞存活率亦明显高于低糖DMEM组、高糖DMEM组、α-DMEM组(P<0.05)。②各组间充质干细胞在不同培养时间下生长状态的比较:培养第3,6,9,12,15,18,21天低糖DMEM+干细胞因子组、低糖DMEM+骨髓间充质干细胞培养上清组细胞增殖的速度均快于低糖DMEM组、高糖DMEM组、α-DMEM组(P<0.05)。低糖DMEM+干细胞因子组与低糖DMEM+骨髓间充质干细胞培养上清组比较差异无显著性意义。结果可见人脐血间充质干细胞与骨髓间充质干细胞培养上清或干细胞因子共孵育,对脐血间充质干细胞体外分离培养及扩增有支持作用。 展开更多
关键词 干细胞 脐带脐血干细胞 脐血间充质干细胞 低糖DMEM 体外培养 干细胞因子 骨髓间充质干细胞 培养上清 分离培养 扩增 干细胞图片文章
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大鼠肝卵圆细胞的诱导、分离及鉴定 被引量:8
16
作者 张金卷 杜智 +4 位作者 李涛 朱争艳 王毅军 聂福华 宋继昌 《生物医学工程与临床》 CAS 2004年第4期196-199,F002,共5页
目的建立大鼠肝卵圆细胞的增殖模型,并探索其分离及鉴定方法。方法雄性Wistar大鼠每天1次连续灌胃给予不同剂量二乙酰氨基芴(2-AAF熏5、10、15、20、25mg/kgBW),第5天行标准的2/3肝切除术,术后按各自剂量继续给予11天,不同时间取肝脏组... 目的建立大鼠肝卵圆细胞的增殖模型,并探索其分离及鉴定方法。方法雄性Wistar大鼠每天1次连续灌胃给予不同剂量二乙酰氨基芴(2-AAF熏5、10、15、20、25mg/kgBW),第5天行标准的2/3肝切除术,术后按各自剂量继续给予11天,不同时间取肝脏组织,行甲胎蛋白、细胞角蛋白18及19染色并观察。以确定的2-AAF最佳剂量制备大鼠肝干细胞增殖模型,Seglen胶原酶原位灌注结合Percoll密度梯度离心分离纯化大鼠肝卵圆细胞,光镜、电镜下观察细胞特点,并进行上述细胞表型标志免疫组化染色。结果2-AAF15mg/kgBW能建立较理想的肝卵圆细胞增殖模型。HE染色可见汇管区及中央静脉周围大量增殖的嗜碱性小细胞,电镜下观察此种细胞具有卵圆形细胞核、细胞质少而淡、核/浆比例较大等特点,免疫组化染色证实甲胎蛋白、细胞角蛋白18和19染色阳性,白蛋白及白细胞共同抗原(LCA)染色阴性。分离所得底层细胞,光镜下表现大小不等、不规则圆形细胞,体积较小,细胞核/浆比例较大,电镜下细胞表面可见少量短而小的微绒毛状突起,余同增殖细胞特点,免疫组化染色与增殖细胞表现相同细胞表型特点。结论本方法可成功诱导、分离、纯化大鼠肝卵圆细胞,符合肝卵圆细胞的形态特点、超微结构及细胞表型标志特点。 展开更多
关键词 肝卵圆细胞 鼠肝 大鼠 免疫组化染色 增殖 电镜 细胞表型 细胞核 密度梯度离心 雄性
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免疫磁珠法分离和纯化人胚胎神经干细胞 被引量:8
17
作者 杜英 阮丽荣 +5 位作者 李倩如 杨波 赵新利 李红伟 宋来君 张清勇 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2003年第1期13-15,共3页
目的:建立有效的人类神经干细胞分离纯化系统和方法。方法:无菌取孕24周流产胎儿的室下区脑组织,制备细胞悬液,用磁性微珠标记的CD133单克隆抗体与细胞孵育,通过磁分选器分离出CD133(+)和CD133(-)细胞,通过体外培养并诱导分化,观察CD13... 目的:建立有效的人类神经干细胞分离纯化系统和方法。方法:无菌取孕24周流产胎儿的室下区脑组织,制备细胞悬液,用磁性微珠标记的CD133单克隆抗体与细胞孵育,通过磁分选器分离出CD133(+)和CD133(-)细胞,通过体外培养并诱导分化,观察CD133阳性细胞和阴性细胞的增殖情况及分化能力。结果:经免疫磁珠分选的室下区脑组织中,CD133(+)细胞占胚胎脑组织细胞的2%左右,该细胞体外扩增能力强,细胞呈球形生长,并易聚集成团,培养5 d、10 d、15 d、20 d进行活细胞计数,细胞增长率分别为1.79%、4.82%、7.21%、14.66%,诱导分化后的细胞经染色鉴定可分化为神经元、神经胶质等多种神经细胞;阴性细胞扩增能力弱,活细胞计数以死细胞数量居多,大约70%,另外一些细胞贴壁分化。结论:免疫磁珠法简便、有效,经免疫磁珠分离的神经干细胞在体外能进一步培养扩增并分化。 展开更多
关键词 神经干细胞 免疫磁珠 细胞分离 细胞纯化
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脊髓神经管神经上皮干细胞的分离培养和诱导分化 被引量:6
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作者 杨振纲 杨琳 +2 位作者 高英茂 孙晋浩 李振华 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期57-62,共6页
目的 从胚胎大鼠脊髓神经管中分离神经上皮干细胞并诱导其向多巴胺能神经元方向分化。 方法 利用无血清悬浮培养、单细胞克隆技术分离神经上皮干细胞 ;采用 5 溴 2 脱氧尿苷 (BrdU)标记新生细胞 ,免疫细胞化学单标或双标染色技术 ... 目的 从胚胎大鼠脊髓神经管中分离神经上皮干细胞并诱导其向多巴胺能神经元方向分化。 方法 利用无血清悬浮培养、单细胞克隆技术分离神经上皮干细胞 ;采用 5 溴 2 脱氧尿苷 (BrdU)标记新生细胞 ,免疫细胞化学单标或双标染色技术 ,检测神经上皮干细胞蛋白 (nestin)和分化后特异性神经细胞抗原的表达 ;用纹状体组织提取液 ,诱导神经上皮干细胞向多巴胺能神经元方向分化。 结果 从胚胎大鼠脊髓神经管中分离的细胞可以连续传代 ,表达nestin ,它们分化后可以表达神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原 ;与对照组 3%相比 ,纹状体组织提取液可以诱导这些细胞中的 12 %分化成为多巴胺能神经元。 结论 分离自脊髓神经管的细胞具有自我更新能力和多分化潜能 (multipotent) ,是增殖能力很强的神经干细胞 ;这些干细胞在一定的体外环境中能被诱导成为特定的神经元 。 展开更多
关键词 神经上皮 干细胞 神经管 多巴胺能神经元 分离 分化 大鼠
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老年人皮肤多能干细胞的分离及有效扩增 被引量:9
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作者 柯昌能 利天增 +3 位作者 徐盈斌 祁少海 黄冰 谢举临 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1436-1437,i0020,共3页
目的探讨老年人皮肤多能干细胞分离、扩增方法。方法 6例老人皮肤标本,在限制性培养基和血清作用下筛选克隆和扩增传代;免疫细胞化学技术、克隆分析等方法评价其生理特性。结果 1 cm2老年人皮肤原代获得400~600个克隆;扩增后每代获(2~... 目的探讨老年人皮肤多能干细胞分离、扩增方法。方法 6例老人皮肤标本,在限制性培养基和血清作用下筛选克隆和扩增传代;免疫细胞化学技术、克隆分析等方法评价其生理特性。结果 1 cm2老年人皮肤原代获得400~600个克隆;扩增后每代获(2~3)×105个克隆。克隆向神经元、神经胶质、平滑肌和脂肪样细胞分化;单克隆增殖细胞也能向上述细胞分化。克隆表达 Nestine、fibronectin、c-Myc、信号转导和转录激活因子3、端粒体逆转录酶蛋白。结论老年人皮肤多能干细胞在限制性培养基和血清交替作用下能有效分离和扩增,使老年人干细胞自体移植成为可能。 展开更多
关键词 干细胞 皮肤 老年人 细胞分离 有效扩增
原文传递
大鼠海马神经干细胞的分离培养与免疫荧光鉴定 被引量:9
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作者 陈凯 康现江 +2 位作者 张平 穆淑梅 郭明申 《医学研究与教育》 CAS 2010年第2期1-3,16,共4页
目的分离培养新生SD大鼠神经干细胞,并对其生物学特性进行鉴定。方法采用无血清培养联合应用碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对大鼠海马神经干细胞分离培养,采用免疫荧光的方法检测神经干细胞的nestin抗原。结果从新生大鼠海马齿... 目的分离培养新生SD大鼠神经干细胞,并对其生物学特性进行鉴定。方法采用无血清培养联合应用碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对大鼠海马神经干细胞分离培养,采用免疫荧光的方法检测神经干细胞的nestin抗原。结果从新生大鼠海马齿状回分离的细胞群可不断增殖形成细胞克隆球,并且呈nestin阳性表达,具有多向分化能力。结论分离培养的细胞是中枢神经系统的干细胞。 展开更多
关键词 神经干细胞 分离培养 免疫荧光鉴定
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