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葡萄球菌蛋白A抗体结合区基因的克隆、表达和纯化 被引量：7
1
作者 金慧英 唐治华 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期38-40,共3页
目的构建表达金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)抗体结合区基因SPA-ZZ的pET-32a-ZZ表达载体,在大肠杆菌BL21中进行高效表达并初步纯化。方法用PCR从pEZZ18中克隆SPA抗体结合区基因ZZ,构建重组表达质粒pET32-ZZ,经酶切和测序确认,将阳性重组质粒... 目的构建表达金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)抗体结合区基因SPA-ZZ的pET-32a-ZZ表达载体,在大肠杆菌BL21中进行高效表达并初步纯化。方法用PCR从pEZZ18中克隆SPA抗体结合区基因ZZ,构建重组表达质粒pET32-ZZ,经酶切和测序确认,将阳性重组质粒转化BL21感受态细菌,IPTG诱导表达,表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测(SDS-PAGE),并用Q-Sephrose Fast Flow柱进行初步纯化。结果得到了高效表达SPA-ZZ的pET32-ZZ表达载体,表达产物经SDS-PAGE检测相对分子质量为41 000,初步纯化后可得到较纯的表达蛋白。结论SPA抗体结合区蛋白ZZ能在大肠杆菌中高效表达,为SPA-ZZ的应用奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 葡萄球菌蛋白A 抗体结合区 克隆 表达
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猪血清中抗猪丹毒丝菌特异性IgG的纯化 被引量：6
2
作者 胡云霏 钱幸 +3 位作者 王淑琴 余兴龙 刘晓波 罗璋 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期183-187,共5页
为了获得纯度高、特异性好的抗猪丹毒丝菌特异性IgG,采用抗原反向吸附结合重组葡萄球菌蛋白A(SPA)亲和层析法对猪丹毒丝菌阳性血清进行纯化。结果表明,血清用量对IgG的纯化结果影响不大,而细菌的用量则与IgG的获得量成正比;用猪丹毒丝... 为了获得纯度高、特异性好的抗猪丹毒丝菌特异性IgG,采用抗原反向吸附结合重组葡萄球菌蛋白A(SPA)亲和层析法对猪丹毒丝菌阳性血清进行纯化。结果表明,血清用量对IgG的纯化结果影响不大,而细菌的用量则与IgG的获得量成正比;用猪丹毒丝菌与阳性血清吸附,初步纯化出的猪丹毒丝菌特异性IgG,再用SPA亲和层析法特异性的浓缩和纯化IgG,获得的抗体含量为240μg/mL,即从8 mL阳性血清中获得360μg猪丹毒丝菌特异性IgG,其纯度接近100%,可用于噬菌体展示的靶分子。 展开更多
关键词 猪丹毒丝毒 特异性免疫球蛋白G(IgG) 猪血清 IgG纯化 纯度 重组葡萄球菌蛋白A凝胶(spa) SDS–聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)
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用于小鼠及兔源IgG的通用型二抗PA/G-HRP融合蛋白的真核表达及活性检测
3
作者 王鹏举 王依依 +5 位作者 张仪婷 杨甜 宋源 赵晶 阎博 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期590-595,共6页
目的制备可与小鼠及兔来源IgG结合的通用型二抗,并用于多种免疫检测实验。方法全基因合成金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)、链球菌蛋白G(SPG)与辣根过氧化物酶(HRP)融合基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNATM3.1骨架中,瞬时转染入人胚肾HEK2... 目的制备可与小鼠及兔来源IgG结合的通用型二抗,并用于多种免疫检测实验。方法全基因合成金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)、链球菌蛋白G(SPG)与辣根过氧化物酶(HRP)融合基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNATM3.1骨架中,瞬时转染入人胚肾HEK293F细胞进行表达。通过SDS-PAGE、Western blot法鉴定融合蛋白表达情况,通过Western blot法、ELISA、免疫组织化学实验验证其应用。结果酶切鉴定和基因测序显示pPA-HRP、pPG-HRP和pPA/G-HRP表达质粒构建成功。考马斯亮蓝染色和Western blot法结果表明,融合蛋白PA-HRP、PG-HRP和PA/G-HRP在HEK293F细胞中成功表达。Western blot法、ELISA和免疫组织化学结果显示,三种融合蛋白均能识别结合小鼠及兔来源的IgG,其中PA/G-HRP表现出更为灵敏的结合活性。结论成功制备了具有高亲和力、通用型二抗功能的融合蛋白,PA/G-HRP能够替代传统抗小鼠IgG及抗兔IgG,可用于多种免疫检测实验。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌蛋白A(spa) 链球菌蛋白G(SPG) 辣根过氧化物酶(HRP) 融合蛋白 真核表达
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应用OKT单克隆抗体对慢性萎缩性胃炎及胃癌患者免疫状态测定研究
4
作者 兰中芬 屈安 +1 位作者 张荫芝 郭峻东 《兰州医学院学报》 1993年第2期65-67,共3页
本文用OKT单抗,采用间接SPA菌花环法对36例慢性萎缩性胃炎(CAG)患者、16例术前胃癌患者、10例术后胃癌患者进行T亚群检测。实验结果:CAG患者的OKT_3花环形成率未见明显改变;OKT_4花环形成率降低;OKT_3花环形成率升高;T_4/T_8比值下降,T... 本文用OKT单抗,采用间接SPA菌花环法对36例慢性萎缩性胃炎(CAG)患者、16例术前胃癌患者、10例术后胃癌患者进行T亚群检测。实验结果:CAG患者的OKT_3花环形成率未见明显改变;OKT_4花环形成率降低;OKT_3花环形成率升高;T_4/T_8比值下降,T亚群处于失调状态。术前胃癌患者的OKT_3花环形成率及T_4/T_8比值既低于正常人,也低于CAG患者,表明胃癌患者的T亚群失调甚于CAG患者。但胃癌术后2～3周,上述指标全部恢复正常。 展开更多
关键词 T细胞亚群 单克隆抗体 萎缩性胃炎
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胶体金免疫渗滤法快速检测幽门螺杆菌血清抗体的研究和应用 被引量：3
5
作者 朱瑞淑 周蕊 +2 位作者 鲁波 邹天然 邱东川 《中国实用内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期85-86,共2页
目的　建立一种简便、快速、准确的检测胃幽门螺杆菌 (H .pylori)抗体的新型血清学诊断方法。方法　用胶体金标记技术与渗滤法相结合 ,建立了快速胶体金免疫渗滤法 (DIGFA) ,与ELISA对比检测 145份H .py lori感染血清 ,并与病理学检查... 目的　建立一种简便、快速、准确的检测胃幽门螺杆菌 (H .pylori)抗体的新型血清学诊断方法。方法　用胶体金标记技术与渗滤法相结合 ,建立了快速胶体金免疫渗滤法 (DIGFA) ,与ELISA对比检测 145份H .py lori感染血清 ,并与病理学检查对比检测 10 8份H .pylori血清。做阻断试验和IgG标准品最小蛋白含量的检出观察 ,对其敏感性、特异性做了分析并调查了 2 16例不同年龄组的人群感染率。结果　本法与ELISA相比 ,两者符合率为 95 1% ;与病理组织染色检查比较 ,两者符合率为 88 8%。DIGFA可检出IgG标准品的最小蛋白量为10 μg·mL-1,阻断试验证明该法检出的确为H .pylori特异抗体。流行病学调查人群感染率为 42 5 %。结论　DIGFA可作为临床辅助诊断和对消化不良病人的初筛检查 ,并适用于大规模流行病学调查 ,具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 葡萄球菌A蛋白 胶体金免疫渗滤法 血清抗体
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免疫传感器载体上SPA法固定抗体的条件探讨 被引量：1
6
作者 王丹 廖伟娇 杜晶春 《广州医药》 2007年第2期19-22,共4页
目的以乙肝病毒表面抗体为研究对象,摸索在免疫传感器载体上用葡萄球菌A蛋白(staphy lococcal protein,SPA)固定抗体的最佳条件。方法用SPA法在载体上固定系列浓度酶标记抗体,绘制抗体浓度-吸光度曲线,寻找SPA与抗体的最佳结合条件。结... 目的以乙肝病毒表面抗体为研究对象,摸索在免疫传感器载体上用葡萄球菌A蛋白(staphy lococcal protein,SPA)固定抗体的最佳条件。方法用SPA法在载体上固定系列浓度酶标记抗体,绘制抗体浓度-吸光度曲线,寻找SPA与抗体的最佳结合条件。结果实验表明5μl浓度为1mg/ml的SPA与10μl浓度为300mIU/ml的抗体固定效果最佳。结论用SPA法在免疫传感器载体上固定乙肝病毒表面抗体,能使检测达到较好的重现性、稳定性、线性和较宽的检测范围,为生物传感器用于临床免疫检测打下基础,具有实际的应用价值。 展开更多
关键词 免疫传感器 葡萄球菌A蛋白 抗体固定
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基于蛋白A法的禽流感压电免疫芯片的研究
7
作者 林向华 刘仲明 刘忠民 《中国医学物理学杂志》 CSCD 2009年第4期1321-1323,1338,共4页
目的:研制基于蛋白A法的禽流感压电免疫芯片。方法:以AT切型、基频10MHz的石英晶体为材料,设计压电免疫芯片。采用蛋白A法将禽流感H5亚型单克隆抗体和抗原的反应液固定在石英晶体的金膜电极表面,构建可用于禽流感检测的压电免疫芯片。结... 目的:研制基于蛋白A法的禽流感压电免疫芯片。方法:以AT切型、基频10MHz的石英晶体为材料,设计压电免疫芯片。采用蛋白A法将禽流感H5亚型单克隆抗体和抗原的反应液固定在石英晶体的金膜电极表面,构建可用于禽流感检测的压电免疫芯片。结果:蛋白A法若先固定抗体,将无法检测到抗原;但可先进行抗原抗体反应再与蛋白A结合以达到定性检测的效果。结论:蛋白A法可作为禽流感压电免疫芯片抗体固定的方法,但在应用方面存在一定的局限性。 展开更多
关键词 禽流感 葡萄球菌A蛋白 抗体固定
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压电免疫芯片检测禽流感病毒H9亚型抗原的方法研究
8
作者 林向华 刘仲明 《现代检验医学杂志》 CAS 2009年第6期15-18,共4页
目的为用压电免疫芯片检测禽流感病毒抗原寻找一种可行的抗体固定方法。方法以AT切型、基频10mHz的石英晶体为材料，分别采用聚乙烯亚胺～戊二醛交联法、葡萄球菌A蛋白法将禽流感病毒H9亚型单克隆抗体固定在石英晶体的金膜电极表面构建... 目的为用压电免疫芯片检测禽流感病毒抗原寻找一种可行的抗体固定方法。方法以AT切型、基频10mHz的石英晶体为材料，分别采用聚乙烯亚胺～戊二醛交联法、葡萄球菌A蛋白法将禽流感病毒H9亚型单克隆抗体固定在石英晶体的金膜电极表面构建禽流感压电免疫芯片，用于检测禽流感病毒H9抗原。结果①聚乙烯亚胺-戊二醛交联法构建的压电免疫芯片检测禽流感病毒H9抗原的线性范围为稀释度1：10～1：160，Y=-8．868X＋73．514，r^2=0．9666，与H5抗原不存在交叉反应，与鸡胚分离法的符合率达到91．7％。②葡萄球菌A蛋白法若先固定抗体，则无法检测到抗原；如先进行抗原抗体反应再与葡萄球菌A蛋白结合，可以达到定性检测的效果。结论聚乙烯亚胺-戊二醛交联法适合于构建禽流感病毒H9亚型抗原压电免疫芯片，其检测特异度、重复性和线性均满足检测要求；葡萄球菌A蛋白法在检测抗原时存在局限性，尚不能直接检测抗原。 展开更多
关键词 禽流感病毒 抗体固定 压电免疫芯片 戊二醛 葡萄球菌A蛋白
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