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基因转录剪接体:潜在的病变位点 被引量：3
1
作者 党万太 周京国 谢文光 《中华临床医师杂志（电子版）》 CAS 2013年第23期234-236,共3页
真核生物新生mRNA前体(pre-mRNA)经过5'戴帽、剪接和3'加尾等过程加工为成熟的mRNA。一个pre-mRNA通过选择不同的剪接位点组合产生不同的mRNA剪接变异体(Splice variant),从而可由一个基因产生若干具有独特结构和功能的蛋白异构... 真核生物新生mRNA前体(pre-mRNA)经过5'戴帽、剪接和3'加尾等过程加工为成熟的mRNA。一个pre-mRNA通过选择不同的剪接位点组合产生不同的mRNA剪接变异体(Splice variant),从而可由一个基因产生若干具有独特结构和功能的蛋白异构体(isoforms)。研究显示pre-mRNA的选择性剪接是控制基因表达和产生蛋白质多样性的重要机制,与许多疾病的发生密切相关。我们将对基因转录剪接体在疾病的发生与诊断治疗中的作用及最新进展进行探讨。 展开更多
关键词 基因 剪接体 病变 位点 MRNA前体
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SF3B1基因突变在骨髓增生异常综合征伴环形铁粒幼细胞增多中的研究进展 被引量：2
2
作者 毕润红 孙爱红 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2019年第5期446-449,共4页
剪接体突变在骨髓增生异常综合征(MDS)的发生、发展中发挥重要作用,包括SF3B1、U2AF1(U2AF35)、SRSF2、ZRSR2、SF1、SF3A1及U2AF2相关基因突变等。进一步了解mRNA剪接对MDS的靶向治疗及改善患者预后具有指导作用。70%~85%低危骨髓增生... 剪接体突变在骨髓增生异常综合征(MDS)的发生、发展中发挥重要作用,包括SF3B1、U2AF1(U2AF35)、SRSF2、ZRSR2、SF1、SF3A1及U2AF2相关基因突变等。进一步了解mRNA剪接对MDS的靶向治疗及改善患者预后具有指导作用。70%~85%低危骨髓增生异常综合征伴环形铁粒幼细胞增多(MDS-RS)患者存在SF3B1基因突变。多项研究结果表明,MDS-RS患者预后与SF3B1基因突变具有显著相关性关系。笔者拟就SF3B1突变基因与MDS-RS的关系,以及伴SF3B1突变基因的MDS-RS患者的治疗及预后的最新研究进展进行综述。 展开更多
关键词 骨髓增生异常综合征 剪接体 RNA剪接因子 基因突变 SF3B1基因 环形铁粒幼细胞
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干扰素调节因子剪切的剪接异构体IRF-3c的结构及功能 被引量：2
3
作者 周国平 陈吉庆 +2 位作者 吴升华 陈晓禹 陈辉 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期233-237,共5页
目的干扰素调节因子(IRF)3是病毒感染后调节干扰素基因转录重要的转录因子,寻找IRF-3新的剪接异构体,研究其结构及功能.方法抽提人类细胞RNA,用IRF-3已发表序列设计引物,作cDNA末端快速放大(RACE)及逆转录聚合酶链反应,生物信息学方法... 目的干扰素调节因子(IRF)3是病毒感染后调节干扰素基因转录重要的转录因子,寻找IRF-3新的剪接异构体,研究其结构及功能.方法抽提人类细胞RNA,用IRF-3已发表序列设计引物,作cDNA末端快速放大(RACE)及逆转录聚合酶链反应,生物信息学方法比较新序列,亚克隆IRF-3c至pcDNA3.1-flag,转染人胚胎肾上皮293细胞,用抗flag抗体作Western blot分析,用萤虫素酶功能分析的方法观测IRF-3c对病毒诱导的干扰素β启动子萤虫素酶活性的影响.结果发现了一种新的IRF3剪接异构体IRF-3c,IRF-3c用了紧接第六外显子后的180个第六内含子的碱基,新引入的最初第2、3、4个新碱基为一终止密码子,导致IRF-3c蛋白多肽终止于第327位.Western blot出现预期的相对分子质量为44 000的IRF-3c的蛋白强阳性条带.新的引用外显子序列可在小鼠的ETS表达库中找到同源序列,提示这种新的剪接体在生物演进中有其保守功能,IRF-3c萤虫素酶功能分析显示,该剪接体能抑制病毒诱导的干扰素β启动子活性至对照组的40%～50%.结论新的剪接体的发现为IRF-3这一重要分子的功能调节提供了新的线索,它是病毒感染通路中干扰素的显负性抑制剂,提示其功能为干扰素产生的精细调节成分,可防止干扰素的过度产生,其特异性序列可用于分析它们在人类疾病中的病理意义. 展开更多
关键词 干扰素调节因子 剪接体 赶体异构现象 转录 遗传
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白细胞介素-24 delE5对人类白血病细胞系K562的抑制作用 被引量：2
4
作者 王琳 马小彤 +4 位作者 董成亚 张芳 段永娟 杨宾霞 林永敏 《白血病．淋巴瘤》 CAS 2010年第3期129-132,共4页
目的 探索白细胞介素（IL）-24 delE5对人类白血病细胞系K562的抑制作用.方法 用TPA诱导白血病细胞系U937和HL-60向单核-巨噬细胞分化后,检测mda-7/IL-24及其选择性剪接体IL-24delE5的表达.构建IL-24 delE5真核表达载体,稳定转染K562细... 目的 探索白细胞介素（IL）-24 delE5对人类白血病细胞系K562的抑制作用.方法 用TPA诱导白血病细胞系U937和HL-60向单核-巨噬细胞分化后,检测mda-7/IL-24及其选择性剪接体IL-24delE5的表达.构建IL-24 delE5真核表达载体,稳定转染K562细胞.通过MTT法、集落形成实验、流式细胞术、Annexin-V/PI检测及动物实验,观察IL-24 delE5对K562细胞增殖、集落形成、细胞周期、凋亡及体内致瘤性的影响;同时与mda-7/IL-24进行比较.结果 在TPA诱导分化的U937和HL-60细胞中发现IL-24 delE5的表达.稳定转染IL-24 delE5的K562增殖及集落形成明显下降,与空载体相比,G0/G1期细胞比例由（24.46±3.99）%增至（42.69±3.04）%,细胞周期阻滞于G0/G1期,体内实验证实K562细胞移植瘤生长明显被抑制.与mda-7/IL-24相比,上述各实验结果差异均无统计学意义.结论 IL-24 delE5与mda-7/IL-24一样对人类白血病细胞系K562具有明显的体内外抑制作用,该作用可能与IL-24 delE5所引起细胞周期G0/G1期阻滞有关. 展开更多
关键词 黑素瘤分化相关基因 剪接体 基因治疗 K562细胞 细胞周期
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血小板内皮细胞黏附分子的剪接体在胚胎干细胞血管形成过程中的表达 被引量：1
5
作者 李宗金 徐斌 +6 位作者 李妍涵 卢士红 郑以州 杨仁池 王征宇 钱冠清 韩忠朝 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第19期1299-1304,共6页
目的探讨血小板内皮细胞黏附分子(PECAM)1的剪接体在胚胎干细胞分化过程中的表达规律。方法体外培养胚胎干细胞,在细胞因子的作用下形成胚胎样小体(EB);然后将EB种植到胶原中,在细胞因子的作用下诱导出芽性血管新生。分别利用免疫组织... 目的探讨血小板内皮细胞黏附分子(PECAM)1的剪接体在胚胎干细胞分化过程中的表达规律。方法体外培养胚胎干细胞,在细胞因子的作用下形成胚胎样小体(EB);然后将EB种植到胶原中,在细胞因子的作用下诱导出芽性血管新生。分别利用免疫组织化学、流式细胞术、逆转录聚合酶链反应等方法检测胚胎干细胞及其分化过程中PECAM1、Oct4及胚胎阶段特异性抗原(SSEA)1的表达。应用克隆分析的方法检测不同的PECAM1剪接体在EB形成和出芽性血管新生过程中的表达分布。结果PECAM1主要表达在胚胎干细胞细胞连结部位。随着胚胎干细胞的分化,Oct4及SSEA1表达下降。胚胎干细胞表达8种PECAM1的剪接体,包括全长、Δ12、Δ14、Δ15、Δ12&14、Δ12&15、Δ14&15、Δ12&14&15,其中Δ15和Δ14&15表达水平最高。在胚胎干细胞形成EB和出芽性血管新生过程中,剪接体表达水平发生变化,其中Δ12&14&15的表达明显上升,Δ15表达下降。结论未分化的胚胎干细胞表达PECAM1,剪接体的表达变化可能参与了胚胎干细胞的血管形成。 展开更多
关键词 血小板内皮细胞黏附分子 剪接体 胚胎干细胞 血管形成 表达 细胞培养
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骨髓增生异常综合征患者中U2AF1基因突变的研究进展 被引量：1
6
作者 朱屿倩 吴凌云 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2019年第2期149-153,共5页
骨髓增生异常综合征(MDS)为一组起源于造血干细胞的异质性髓系克隆性疾病,其发生、发展是一个多步骤的病理过程。相关基因突变及表观遗传学异常与MDS的发病机制密切相关。U2AF1基因在MDS中突变发生率较高,U2AF1基因突变可以引起RNA剪接... 骨髓增生异常综合征(MDS)为一组起源于造血干细胞的异质性髓系克隆性疾病,其发生、发展是一个多步骤的病理过程。相关基因突变及表观遗传学异常与MDS的发病机制密切相关。U2AF1基因在MDS中突变发生率较高,U2AF1基因突变可以引起RNA剪接体对前体mRNA的3′剪接位点(3′SS)的异常识别而产生异常的mRNA。近年研究结果表明,U2AF1基因突变可能是MDS及急性髓细胞白血病(AML)发生、发展中的早期事件,伴该突变的MDS患者通常具有较高的向白血病转化的风险与较低的生存率。综合考虑U2AF1基因突变及其相关的分子生物学改变,对于预测MDS患者的预后具有重要的临床价值。笔者拟就U2AF1基因突变的分子机制及其功能意义进行综述,以期为寻找MDS新的靶向治疗方式提供理论依据。 展开更多
关键词 骨髓增生异常综合征 剪接因子U2AF 剪接体 突变 预后
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人肝肿瘤细胞选择性白细胞介素-7剪接变异体cDNA的克隆和序列测定 被引量：1
7
作者 潘德顺 吴培诚 孔凡虎 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期1411-1413,共3页
目的 :寻找人肝肿瘤细胞选择性的白细胞介素 - 7(IL - 7)剪接变异体。方法 :运用自行设计的IL -7引物 ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)技术 ,分离正常肝组织、原发肝癌组织、培养肝癌细胞株IL - 7mRNA ,再对电泳所获条带进行克隆、... 目的 :寻找人肝肿瘤细胞选择性的白细胞介素 - 7(IL - 7)剪接变异体。方法 :运用自行设计的IL -7引物 ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)技术 ,分离正常肝组织、原发肝癌组织、培养肝癌细胞株IL - 7mRNA ,再对电泳所获条带进行克隆、测序。结果 :正常肝组织、原发肝癌组织、培养肝癌细胞株 (BEL - 74 0 2和SMMC - 772 1)都能检测到IL - 7mRNA ,而且从肝癌组织、培养肝癌细胞株分离出 1条新带 ,经亚克隆及测序 ,证实该条带系人IL -7基因cDNA第 4外显子缺乏所致。结论 :肝癌组织及培养的肝癌细胞株存在选择性IL - 7剪接变异体。该变异体的发现 。 展开更多
关键词 白细胞介素7 克隆 分子 序列分析 肝肿瘤 剪接体
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Numb基因及其可变剪接在胰腺癌中的研究进展
8
作者 李鹏昊 郑楷炼 +1 位作者 许熊飞 金钢 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2022年第12期2897-2900,共4页
胰腺癌是一种常见的消化道肿瘤,恶性程度高,预后极差。目前针对胰腺癌有多种治疗方案,但效果均不太理想。阐明胰腺癌发病机制仍是临床亟需解决的重要难题。可变剪接是真核生物基因表达调控的重要手段,同一基因的剪接异构体介导产生不同... 胰腺癌是一种常见的消化道肿瘤,恶性程度高,预后极差。目前针对胰腺癌有多种治疗方案,但效果均不太理想。阐明胰腺癌发病机制仍是临床亟需解决的重要难题。可变剪接是真核生物基因表达调控的重要手段,同一基因的剪接异构体介导产生不同生物学表型,其异常可导致诸多疾病的产生。Numb,一种重要的细胞命运决定蛋白,其可变剪接近年来被发现与癌症的发生密切相关。在胰腺癌中Numb的选择性剪接可产生多种不同亚型的Numb蛋白,对癌症相关通路的活化以及肿瘤细胞生物学行为具有不同的调节作用,探索Numb的剪接异构体在胰腺癌中不同功能有利于解释胰腺癌发病机理和新疗法的开发。本文就Numb蛋白在胰腺癌中研究进展进行综述,着重探讨其剪接异构体功能特点以及不同亚型对胰腺癌各方面的调节作用。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 NUMB 剪接体
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两例成骨不全症患者候选剪接变异的致病性鉴定 被引量：1
9
作者 米欢 李璐璐 +3 位作者 曹一璇 杨涛 翁习生 赵秀丽 《中华骨科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期576-583,共8页
目的对2例中国汉族成骨不全症(osteogenesis imperfecta,OI)患者进行突变检测,对其候选剪接变异进行致病性鉴定。方法采用常规酚-氯仿法从2例中国汉族OI先证者的外周血中提取基因组DNA,通过全外显子组测序(WES)进行致病突变筛查;针对检... 目的对2例中国汉族成骨不全症(osteogenesis imperfecta,OI)患者进行突变检测,对其候选剪接变异进行致病性鉴定。方法采用常规酚-氯仿法从2例中国汉族OI先证者的外周血中提取基因组DNA,通过全外显子组测序(WES)进行致病突变筛查;针对检出的可能引起RNA剪接异常的疑似致病变异,构建Minigene分析变异对于剪接的影响,进而确定其致病性。结果在先证者1中发现可能影响剪接的杂合变异:COL1A1:c.858+1858+5delGTAAG;先证者2同时存在COL1A2的两个变异,一个为可能引起异常剪接的杂合变异c.1405-7C>T,另一个为杂合错义变异c.2972G>T(p.G991V)。Minigene实验分析证实家系1的变异导致COL1A1基因第12外显子发生跳跃,家系2变异位点c.1405-7C>T对COL1A2的转录后剪接没有影响。先证者2的COL1A2基因的G991为一个高度保守的氨基酸,经生物信息学分析c.2972G>T(p.G991V)可能为真正的OI致病变异。结论先证者1的COL1A1剪接位点变异c.858+1858+5delGTAAG是导致OI的致病性变异;排除先证者2中COL1A2变异c.1405-7C>T的致病性,确定COL1A2基因变异c.2972G>T(p.G991V)为先证者2的致病原因。针对WES提示的剪接变异进行Minigene分析,不仅实现了突变致病性鉴定,丰富了OI的突变谱,而且为患者产前诊断和后续机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 骨发育不全 遗传学研究 剪接体 遗传变异 遗传关联研究
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原发性痛风患者外周血单个核细胞半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1基因转录剪接体的研究 被引量：1
10
作者 党万太 周京国 +7 位作者 谢文光 蔡燕 青玉凤 邱亚 赵明才 蒋红 李玲琴 周畅 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期400-404,I0001,共6页
目的 了解原发性痛风（PG）患者的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1（CASP1）基因及各转录剪接体mRNA表达水平及作用.方法 用半定量RT-PCR法检测96例PG患者和96名健康体检者（HC） PBMCs中CASP1基因及各转录剪接体mRNA表达水平.用蛋白印... 目的 了解原发性痛风（PG）患者的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1（CASP1）基因及各转录剪接体mRNA表达水平及作用.方法 用半定量RT-PCR法检测96例PG患者和96名健康体检者（HC） PBMCs中CASP1基因及各转录剪接体mRNA表达水平.用蛋白印迹法检测PG患者和HCPBMCs中CASP1、NF-κB（p105/p50）蛋白表达水平.对各观察组间的mRNA表达水平采用Wilcoxon秩和检验,蛋白表达水平采用t检验.结果 PG组CASP1基因mRNA表达量显著高于健康体检组[0.199 7（0.634 5）和1.151 7（1.969 6）,Z=-6.454,P=0.000],PG组CASP1基因转录剪接体6、7 mRNA表达量显著低于HC组[分别为4.448 7（5.029 6）和3.020 9（2.877 3）、4.930 1（4.8861）和3.456 4（2.655 6）,Z均=-3.735,P均=0.000],CASP1基因转录剪接体α、β、γ、x mRNA表达在PG组与HC组差异无统计学意义[分别为2.083 1（4.404 5）和2.043 1（2.688 2）、2.249 5（3.328 0）和2.082 6（3.119 9）、2.911 3（4.287 1）和2.789 8（2.538 2）、2.413 5（4.712 4）和2.511 3（2.429 0）,P均＞0.05];PG组CASP1蛋白表达显著低于HC组（64.82±10.76和0.78±0.24,t=76.379,P＜0.01）,PG组NF-κB （p105/p50）蛋白表达显著高于HC组（0.127±0.008和0.263±0.106,t=-26.322,P＜0.01）.结论 CASP1基因及各转录剪接体mRNA在PG患者中表达异常,提示在PG患者的炎症反应中CASP1基因及各转录剪接体可能发挥重要的介导作用;PG患者CASP1蛋白表达水平与CASP1基因部分转录剪接体mRNA表达趋势一致,提示若对CASP1部分基因转录剪接体进行有效的药物干预可能对PG患者的治疗起到一定的作用. 展开更多
关键词 痛风 基因 剪接体 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1
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人nanog-delta48基因的克隆及其真核表达载体的构建
11
作者 邓璐林 章诺贝 张吉翔 《天津医药》 CAS 北大核心 2012年第9期912-915,共4页
目的:构建pcDNA5/FRT-nanog-delta48真核表达载体,检测其在肝癌SMMC-7721细胞中的表达。方法:通过RT-PCR的方法克隆nanog基因的选择性剪接变异体nanog-delta48全长编码序列,连接入pMD18-T载体,经鉴定正确后亚克隆入pcDNA5/FRT,构建pcDNA... 目的:构建pcDNA5/FRT-nanog-delta48真核表达载体,检测其在肝癌SMMC-7721细胞中的表达。方法:通过RT-PCR的方法克隆nanog基因的选择性剪接变异体nanog-delta48全长编码序列,连接入pMD18-T载体,经鉴定正确后亚克隆入pcDNA5/FRT,构建pcDNA5/FRT-nanog-delta48真核表达载体,测序无误后经脂质体介导转染到SMMC-7721细胞中,通过RT-PCR初步鉴定其在SMMC-7721细胞中的表达,并通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测转染前后的细胞增殖活力。结果:成功克隆nanog-delta48基因全长编码区,测序证明pcDNA5/FRT-nanog-delta48重组真核表达载体构建成功,使其在SMMC-7721细胞中过表达,MTT检测nanog-delta48转染入SMMC-7721细胞后,增殖能力增强。结论:剪接变异体nanog-delta48基因可能具有与nanog基因类似的活性。 展开更多
关键词 基因 干细胞 剪接体 克隆 分子 基因表达 转染 人类
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神经系统显著表达的丝氨酸/精氨酸富集蛋白1在小鼠大脑发育过程中的表达与分布
12
作者 张薇 范立梅 +1 位作者 李林林 彭正羽 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期51-57,共7页
目的：研究神经系统显著表达的丝氨酸/精氨酸富集蛋白1（NSSR1）在中枢神经系统中的表达情况,比较在小鼠发育过程中NSSR1在中枢神经系统中的表达差异.方法：收集不同胎龄的胎鼠中枢神经系统样本以及不同生长时期的小鼠大脑样品,通过蛋... 目的：研究神经系统显著表达的丝氨酸/精氨酸富集蛋白1（NSSR1）在中枢神经系统中的表达情况,比较在小鼠发育过程中NSSR1在中枢神经系统中的表达差异.方法：收集不同胎龄的胎鼠中枢神经系统样本以及不同生长时期的小鼠大脑样品,通过蛋白质印迹法检测NSSR1蛋白在各样品中的表达量,通过免疫组织化学法检测NSSR1在小鼠大脑不同部位发育过程中的表达分布.结果：小鼠中枢神经系统中NSSR1的蛋白表达量在胚胎期9~14 d期间显著增加,其相对表达量从0.186增加至0.445,在出生后则一直维持着比较高水平的表达.免疫组织化学法分析结果显示,在胚胎期12 d的胎鼠中,NSSR1蛋白表达集中在室管膜外侧的套层和边缘层中,在室管膜层中未见表达.在新生小鼠和成年小鼠大脑中NSSR1的表达存在差异：在大脑海马中,成年小鼠NSSR1的表达显著增强,而新生小鼠NSSR1的表达较低;在小脑中,成年大鼠的NSSR1广泛分布在小脑皮质包括浦肯野氏细胞、颗粒细胞等神经元细胞中,而新生鼠的NSSR1主要在浦肯野氏细胞中表达.结论：NSSR1在小鼠大脑中的表达受到发育调控. 展开更多
关键词 DNA结合蛋白质类 丝氨酸 精氨酸富集蛋白1 剪接体 脑 生长和发育 中枢神经系统 胚胎 哺乳动物 印迹法 蛋白质 免疫组织化学
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干扰素调节因子3及其可变剪接体与肿瘤
13
作者 刘钟桧 孙丹 刘新民 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2017年第3期196-200,共5页
干扰素调节因子3（IRF3）作为干扰素调节因子家族的重要成员，在调控I型干扰素及其下游基因中发挥关键作用，并参与多种生物学过程。研究发现其可抑制肿瘤细胞的生长和转移，并诱导细胞凋亡，发挥抑癌基因作用。该作用机制涉及肿瘤免疫... 干扰素调节因子3（IRF3）作为干扰素调节因子家族的重要成员，在调控I型干扰素及其下游基因中发挥关键作用，并参与多种生物学过程。研究发现其可抑制肿瘤细胞的生长和转移，并诱导细胞凋亡，发挥抑癌基因作用。该作用机制涉及肿瘤免疫与炎症反应、凋亡及上皮间质转化等过程。IRF3可变剪接体可负性调控IRF3功能，影响肿瘤发生发展。相关的信号通路、发病机制研究为肿瘤早期诊断、治疗提供了新的思路。 展开更多
关键词 干扰素调节因子3 剪接体 肿瘤
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抑癌基因kruppel样因子6及其剪接体蛋白对HepG2细胞增殖和分化的影响
14
作者 潘修成 陈智 +3 位作者 季芳 郭忠胜 陈明 傅涓涓 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期683-687,共5页
目的研究抑癌基因Kruppel样冈子（KLF）6及其剪接体蛋白对肝癌细胞株HepG2细胞增殖和分化的影响。方法RTPCR扩增肝细胞癌组织中KLF6剪接体cDNA并测定其序列；构建KLF6剪接体真核表达喷粒pcDNA3．1A（-）／KLF6V。转染HepG2细胞后，经G41... 目的研究抑癌基因Kruppel样冈子（KLF）6及其剪接体蛋白对肝癌细胞株HepG2细胞增殖和分化的影响。方法RTPCR扩增肝细胞癌组织中KLF6剪接体cDNA并测定其序列；构建KLF6剪接体真核表达喷粒pcDNA3．1A（-）／KLF6V。转染HepG2细胞后，经G418筛选获得稳定表达KLF6全长和其剪接体蛋白的HepG2细胞，分别命名为HepG2／KLF6和HepG2／KLF6V。四甲基偶氮唑盐法测定该两种HepG2细胞的增殖活性；同时分别以放射免疫法或Westernblot技术测定白蛋白、甲胎蛋白或P21^WAFI、细胞周期素D1蛋白在HepG2／KLF6或HepG2／KLF6V细胞中的表达情况。结果从肝细胞癌组织中扩增出一种KLF6剪接体，序列分析提示该剪接体缺失127nt，引起KLF6蛋白近羧基端缺失42个氨基酸；KLF6VmRNA在肝癌及癌旁组织均有表达，但癌组织表达水平明艟增高。HepG2／KLF6细胞牛长速度较慢而HepG2／KLF6V细胞增殖较快，同时HepG2／KLF6细胞P21^WAFI蛋白表达及白蛋白分泌水平明显高于HepG2／KLF6V细胞，而细胞周期素D1表达及甲胎蛋白分泌水平在HepG2／KLF6V细胞高于HepG2／KLF6细胞。结论肝细胞癌组织中存在KLF6剪接体，该剪接体能对抗全长KLF6基因抑制细胞生长、促进细胞分化等的功能。 展开更多
关键词 癌 肝细胞 剪接体 基因 抑制 细胞分化 Kruppel样因子6
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太行鸡胚PRLR基因表达与主翼羽和覆主翼羽长关系
15
作者 杜小龙 张乐超 +4 位作者 赵丽杰 乔宁 高明 李兰会 李祥龙 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1847-1853,共7页
旨在探究催乳素受体(PRLR)基因不同剪切体表达对不同胚龄快慢羽太行鸡主翼羽和覆主翼羽生长影响。采集18和19胚龄太行鸡肝脏DNA、左翅皮肤组织RNA、右翅主翼羽和覆主翼羽,测量主翼羽和覆主翼羽长,通过PCR鉴定鸡胚羽型和性别、检测PRLR... 旨在探究催乳素受体(PRLR)基因不同剪切体表达对不同胚龄快慢羽太行鸡主翼羽和覆主翼羽生长影响。采集18和19胚龄太行鸡肝脏DNA、左翅皮肤组织RNA、右翅主翼羽和覆主翼羽,测量主翼羽和覆主翼羽长,通过PCR鉴定鸡胚羽型和性别、检测PRLR基因不同剪切体在鸡翅皮肤组织的表达变化,分析羽型、胚龄和性别对主翼羽和覆主翼羽长影响和PRLR剪切体表达变化,明确PRLR基因剪切体类型表达量与快慢羽鸡主翼羽和覆主翼羽长间关系。结果显示性别对主翼羽和覆主翼羽的长度均没有显著影响(P>0.05),但胚龄和羽型对两种羽毛长度均有显著影响(P<0.05)。18胚龄时快羽鸡主翼羽和覆主翼羽长显著长于慢羽鸡(P<0.05),19胚龄时快慢羽鸡间主翼羽长度仍然保持显著差异(P<0.05),而覆主翼羽的长度显著差异消失(P>0.05);18胚龄两种羽型鸡的主翼羽均长于覆主翼羽(P<0.05),而19胚龄慢羽鸡的主翼羽和覆主翼羽间长度差异消失(P>0.05)。鸡胚皮肤组织共发现PRLRS1和PRLRS2两种剪切体,胚龄和性别对二者的表达均没有显著影响(P>0.05),羽型影响PRLRS2的表达(P>0.05),19胚龄时慢羽PRLRS2表达显著高于快羽(P<0.05)。本试验推断快慢羽太行鸡18胚龄时主翼羽与覆主翼羽的长度差异,以及两种羽毛长度在快慢羽鸡间的差异已经凸现,但19胚龄慢羽鸡覆主翼羽生长速度增加,两种羽型鸡的覆主翼羽长度差异以及慢羽鸡两种羽毛间长度差异消失;慢羽鸡19胚龄PRLRS2高表达,可能促进了其覆主翼羽生长。该研究结果为揭示快慢羽鸡主、覆主翼羽长度差异的形成以及PRLRS2在调控羽型形成作用机制提供数据支持和理论参考。 展开更多
关键词 太行鸡 PRLR 剪切体 羽型 羽长
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人胰腺癌编码SUFU蛋白的新剪接体
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作者 徐清 满晓华 +4 位作者 高军 李兆申 龚燕芳 吴红玉 金晶 《中华胰腺病杂志》 CAS 2013年第4期231-234,共4页
目的分析人胰腺癌组织和细胞中Hedgehog信号通路主要成员SUFU蛋白的剪接体。方法用反转录和3’cDNA末端快速扩增（3’RACE）法扩增suppresseroffused（SUFU）片段，测序发现一个新的外显子，应用RT—PCR方法扩增全长含新外显子的SUFU（n... 目的分析人胰腺癌组织和细胞中Hedgehog信号通路主要成员SUFU蛋白的剪接体。方法用反转录和3’cDNA末端快速扩增（3’RACE）法扩增suppresseroffused（SUFU）片段，测序发现一个新的外显子，应用RT—PCR方法扩增全长含新外显子的SUFU（nSUFU）。采用脂质体法将nSUFU及SUFU转染SWl990细胞，应用蛋白质印迹法检测SWl990细胞及胰腺癌组织新剪接体编码的蛋白质的表达。结果通过3’RACE法的第二轮巢式PCR扩增产物约600bp，经测序并将其序列与NCBI网站Blast序列对比分析发现，在SUFUmRNAisoforml（NM_016169．3）的第10外显子和第11外显子之间插入了一个长为126bp的新外显子。通过对SWl990细胞的验证，包含新外显子的完整的新剪接体片段长约1400bp。转染nSUFU的SWl990细胞强表达nSUFU蛋白，胰腺癌组织既表达SUFU蛋白，又表达nSUFU蛋白。结论人类胰腺癌组织和细胞中存在一种新的可以编码SUFU蛋白的剪接体。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 HEDGEHOG信号通路 剪接体 SUFU
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前体mRNA可变剪接调节因子NSSR1在大肠癌中的表达
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作者 张薇 沈权 沈嘉希 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期540-544,共5页
目的:研究神经系统显著表达的前体mRNA可变剪接调节因子NSSR1在大肠癌中的表达。方法:应用RT-PCR、Western blot以及免疫组织化学染色方法观测小鼠肠道等组织和人类大肠癌中NSSR1的mRNA和蛋白的表达以及分布。结果:NSSR1的mRNA在小鼠的... 目的:研究神经系统显著表达的前体mRNA可变剪接调节因子NSSR1在大肠癌中的表达。方法:应用RT-PCR、Western blot以及免疫组织化学染色方法观测小鼠肠道等组织和人类大肠癌中NSSR1的mRNA和蛋白的表达以及分布。结果:NSSR1的mRNA在小鼠的大脑、小脑、心脏、肝脏、大肠以及肺等组织中均有表达,而蛋白只在神经系统表达,在肠道中无表达。在人体正常肠道组织中,NSSR1只在肠黏膜上皮细胞中表达;而在大肠癌细胞中,NSSR1存在显著表达且主要分布在细胞核中。结论:NSSR1在大肠癌中高表达,这可能与NSSR1在大肠癌发生发展中的生物学功能有关。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 精氨酸/遗传学 丝氨酸/遗传学 RNA 信使 剪接体 免疫组织化学 基因表达 蛋白质类/遗传学
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人EIF2B4基因一个新的可变剪接产物及其鉴定
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作者 周春燕 富显果 +3 位作者 廖娟 张晓 张朵 兰风华 《福建医科大学学报》 2012年第1期36-38,共3页
目的对人EIF2B4基因新的可变剪接产物进行鉴定。方法应用长链RT-PCR技术扩增人外周血EIF2B4基因编码区全长序列并进行T克隆及序列测定,用常规RT-PCR对新型可变剪接产物进行验证。结果在EIF2B4基因转录产物中检测出正常变异体2和3(两者... 目的对人EIF2B4基因新的可变剪接产物进行鉴定。方法应用长链RT-PCR技术扩增人外周血EIF2B4基因编码区全长序列并进行T克隆及序列测定,用常规RT-PCR对新型可变剪接产物进行验证。结果在EIF2B4基因转录产物中检测出正常变异体2和3(两者只相差3个碱基),同时发现一个外显子7缺失26bp的转录产物。结论利用长链RT-PCR结合T克隆-测序的方法,发现人EIF2B4基因的一个新型可变剪接产物。 展开更多
关键词 剪接体 内含子 真核细胞起始因子2B 基因 逆转录聚合酶链反应 分子 克隆 序列分析
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CLN6基因复合杂合突变导致神经元蜡样脂褐质沉积症一家系遗传学研究
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作者 楼铁 黄颖之 董旻岳 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期373-377,共5页
目的:探讨一个常染色体隐性遗传神经元蜡样脂褐质沉积症(NCL)家系的遗传学原因。方法:应用目标区捕获高通量靶向测序对先证者进行候选基因突变筛查,并通过PCR测序在先证者及其父母中对突变位点进行验证;RT-PCR及TA克隆测序考察上述两种... 目的:探讨一个常染色体隐性遗传神经元蜡样脂褐质沉积症(NCL)家系的遗传学原因。方法:应用目标区捕获高通量靶向测序对先证者进行候选基因突变筛查,并通过PCR测序在先证者及其父母中对突变位点进行验证;RT-PCR及TA克隆测序考察上述两种突变是否影响剪接。结果:测序结果显示先证者存在CLN6:c.486+2T>C和c.486+4A>T复合杂合突变,分别来自父母双方。RT-PCR及TA克隆测序提示两种突变均可导致两种异常剪接。结论:CLN6:c.486+2T>C和c.486+4A>T复合杂合突变很可能为该NCL家系患者的遗传学病因,新突变基因丰富了CLN6基因突变谱。 展开更多
关键词 神经元蜡样质脂褐质沉积病/遗传学 病因学 基因 突变 剪接体 聚合酶链反应
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NCAM L1小基因模型的建立及其剪接模式研究
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作者 张薇 沈权 彭正羽 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期427-431,共5页
目的:建立可用于前体mRNA可变剪接分析的NCAM L1小基因模型。方法:以人基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得NCAM L1小基因片段,并将其克隆至真核表达载体中,构建小基因的质粒。在此基础上,用NCAM L1小基因模型转染HeLa、COS-1、PFSK及R28细... 目的:建立可用于前体mRNA可变剪接分析的NCAM L1小基因模型。方法:以人基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得NCAM L1小基因片段,并将其克隆至真核表达载体中,构建小基因的质粒。在此基础上,用NCAM L1小基因模型转染HeLa、COS-1、PFSK及R28细胞,并用RT-PCR进行被剪接的小基因产物的半定量检测。结果:NCAM L1小基因在4种细胞中的剪接模式不同,在PFSK以及Hela细胞中,存在2种剪接亚型,而在COS-1以及R28细胞中只有一种剪接亚型存在。结论:所构建的NCAM L1小基因可用于细胞水平的基因剪接分析。 展开更多
关键词 Hela细胞 质粒 遗传载体 剪接体 NCAML1 小基因 前体MRNA 可变剪接
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