联合表达BMP2和Sox9促进体外培养间充质干细胞成软骨分化 被引量：8

1

作者 廖军义 周年 +7 位作者 林良波 易世雄 凡廷旭 赵辰 胡宁 梁熙 司维柯 黄伟 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期317-322,共6页

目的探讨联合表达骨形态发生蛋白2(BMP2)和Sox9对间充质干细胞(MSCs)成软骨分化的影响,为构建组织工程软骨提供实验依据。方法以小鼠胚胎骨髓MSCs(C3H10T1/2)为种子细胞,重组腺病毒BMP2诱导其分化,联用重组腺病毒Sox9过表达Sox9信号,重... 目的探讨联合表达骨形态发生蛋白2(BMP2)和Sox9对间充质干细胞(MSCs)成软骨分化的影响,为构建组织工程软骨提供实验依据。方法以小鼠胚胎骨髓MSCs(C3H10T1/2)为种子细胞,重组腺病毒BMP2诱导其分化,联用重组腺病毒Sox9过表达Sox9信号,重组腺病毒GFP作为对照。Real-Time PCR检测成软骨标志物Ⅱ型胶原(Col2a1)、蛋白聚糖(Aggrecan)、X型胶原(Col10a1)表达变化;Alcian blue染色了解细胞基质糖胺聚糖合成情况;免疫组化和Western blotting检测Col2a1合成情况。结果 BMP2能诱导C3H10T1/2细胞成软骨分化,当与Sox9联合作用时,Sox9可促进BMP2诱导的(Col2a1、Aggrecan、Col10a1)基因表达上调;促进细胞基质糖胺聚糖、Col2a1蛋白合成。结论 BMP2与Sox9联合作用可以促进体外培养MSCs成软骨分化,可能为组织工程软骨提供新的方法。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白2 sox9 间充质干细胞 成软骨分化 BONE morphogenetic protein 2 sox9

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肝癌细胞内Sox17基因表达水平与细胞迁移、侵袭力的相关性研究 被引量：3

2

作者 黄子明 张洪义 +4 位作者 赵刚 李志杰 肖军 闫舫 吕丽萍 《现代肿瘤医学》 CAS 2012年第12期2457-2460,共4页

目的:从基因表达水平上探讨肝肿瘤细胞内Sox17的mRNA表达量与细胞迁移、侵袭力的相关性。方法:收集4种肝肿瘤细胞HepG2、MHCC-97L、LM3、SK-Hep-1及一种非肿瘤肝上皮细胞QSG7701,Real-Time PCR法检测细胞内Sox17、CTTN基因的mRNA表达水... 目的:从基因表达水平上探讨肝肿瘤细胞内Sox17的mRNA表达量与细胞迁移、侵袭力的相关性。方法:收集4种肝肿瘤细胞HepG2、MHCC-97L、LM3、SK-Hep-1及一种非肿瘤肝上皮细胞QSG7701,Real-Time PCR法检测细胞内Sox17、CTTN基因的mRNA表达水平,细胞划痕和Transwell小室侵袭实验检测肝肿瘤细胞迁移、侵袭力。对Sox17基因的表达水平与CTTN的表达量及细胞划痕、Transwell小室侵袭的实验结果进行秩相关检验。结果:与非肿瘤细胞相比,肿瘤细胞内Sox17表达水平普遍较低,CTTN的表达水平较高;在4种肝肿瘤细胞中,Sox17基因的表达水平与CTTN的mRNA的表达水平及细胞划痕区域细胞生长速度、Transwell小室穿膜细胞数的统计结果呈负相关,秩相关系数rs=-1。结论:肝肿瘤细胞内Sox17基因的表达水平的高低与细胞的迁移、侵袭力呈负相关。 展开更多

关键词 肝肿瘤 sox17 CTTN cortactin蛋白 细胞分化

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同源域蛋白Nanog与胚胎干细胞的自我更新研究进展 被引量：1

3

作者 钱斓兰 徐海伟 《生命科学》 CSCD 2007年第3期311-315,共5页

胚胎干细胞作为一种具有自我更新能力的细胞,可以在体外无限对称性分裂,同时保持未分化状态,具有向各种类型细胞分化的潜能。基于这一特性,胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)有着极其广阔的应用前景。维持ES细胞自我更新的机制至... 胚胎干细胞作为一种具有自我更新能力的细胞,可以在体外无限对称性分裂,同时保持未分化状态,具有向各种类型细胞分化的潜能。基于这一特性,胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)有着极其广阔的应用前景。维持ES细胞自我更新的机制至今尚未阐明,推测ES细胞的自我更新机制是一个包括细胞外刺激、细胞内多种因子共同参与的复杂的网络调节系统。近年来发现同源域蛋白Nanog在这个网络调节系统中处于中心地位,对ES细胞自我更新的维持起着关键作用。本文就近年来关于Nanog在ES细胞自我更新维持中的作用,以及它与其他信号通路之间的对话,阐明ES细胞自我更新的维持机制。 展开更多

关键词 Nanog蛋白 ES细胞 LIF OCT4 sox2 自我更新 全能性

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可溶性Sox2-11R重组蛋白的制备与鉴定

4

作者 李侠 姜少帅 +2 位作者 韩菲 张鹏飞 张运海 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期798-804,共7页

旨在通过原核表达制备可溶性Sox2-11R重组蛋白,并验证其穿膜能力。首先,采用增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)与蛋白转导域11聚精氨酸(11 arginine,11R)的融合表达和与成纤维细胞的共孵育验证11R的穿膜能... 旨在通过原核表达制备可溶性Sox2-11R重组蛋白,并验证其穿膜能力。首先,采用增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)与蛋白转导域11聚精氨酸(11 arginine,11R)的融合表达和与成纤维细胞的共孵育验证11R的穿膜能力。其次,将目的基因Sox2-11R在原核表达载体pET30a中表达,通过优化表达条件获取可溶性Sox2-11R重组蛋白。最后,利用Ni柱纯化重组蛋白,SDS-PAGE及Western blotting对其进行鉴定;并用免疫荧光染色验证重组蛋白是否具有进入细胞核的能力。结果表明,成功构建了pET30a-Sox2-11R原核表达载体,纯化的Sox2-11R重组蛋白具有穿膜能力,且在细胞培养基中具有较高溶解度,这为制备其他重编程因子的重组蛋白提供了参考,也为外源蛋白诱导iPSCs奠定了基础。 展开更多

关键词 sox2 重组蛋白 可溶性 制备

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基于SwissPdbViewer和MATLAB对人类SOX蛋白三级结构建模及分析(英文)

5

作者 陈启龙 郑文岭 +2 位作者 姚文娟 吴飞珍 马文丽 《系统仿真学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第14期3637-3643,共7页

SOX蛋白具有一个与DNA特异结合的高保守HMG-box结合域。利用MATLAB的Sequence Analysis工具从Genbank中下载人类SOX蛋白序列信息,二次筛选获得22个有效的序列数据。以三级结构已知的SOX2、SRY、SOX5为模板,联合SwissPdbViewer与MATLAB,... SOX蛋白具有一个与DNA特异结合的高保守HMG-box结合域。利用MATLAB的Sequence Analysis工具从Genbank中下载人类SOX蛋白序列信息,二次筛选获得22个有效的序列数据。以三级结构已知的SOX2、SRY、SOX5为模板,联合SwissPdbViewer与MATLAB,采用同源建模方法对SOX蛋白HMG-box进行建模、预测;利用MATLAB的Visualization Tool分析预测结果的三维结构。结果显示SOX蛋白HMG-box的三级结构极为相似,由3个α螺旋和2个热力学结构不稳定的loop区构成;表面静电分析显示SOX蛋白C端有一个可能与其它小分子或蛋白质的相互作用位点的N/C腔。SOX蛋白的上述空间结构可能与其活性与功能的调控有关。 展开更多

关键词 MATLAB SwissPdbViewer 同源建模 三级结构预测 sox蛋白

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SOX1蛋白表达与宫颈腺癌甲基化及预后的关系

6

作者 袁敏 袁建林 古扎丽努尔·阿不力孜 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2021年第2期182-186,共5页

目的分析SOX1蛋白表达与宫颈腺癌甲基化程度及生存的关系,进一步探究SOX1在宫颈腺癌发生发展过程中的作用。方法收集2015年1月~2017年6月在新疆医科大学附属肿瘤医院保存的新鲜初治原发宫颈腺癌组织10例、宫颈鳞状细胞癌组织10例、正常... 目的分析SOX1蛋白表达与宫颈腺癌甲基化程度及生存的关系,进一步探究SOX1在宫颈腺癌发生发展过程中的作用。方法收集2015年1月~2017年6月在新疆医科大学附属肿瘤医院保存的新鲜初治原发宫颈腺癌组织10例、宫颈鳞状细胞癌组织10例、正常宫颈组织10例,采用亚硫酸盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)进行SOX1甲基化程度检测,同时运用免疫组化方法检测三组石蜡包埋标本SOX1蛋白表达情况。另选取明确由宫颈腺癌导致复发或死亡的石蜡标本17例进行免疫组化检测。结果 BSP检测结果显示SOX1在宫颈腺癌组织中甲基化表达状态良好,三组差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果发现SOX1蛋白在宫颈腺癌组与宫颈鳞癌组低表达、正常宫颈组高表达,差异有统计学意义(P<0.05),但宫颈腺癌组与宫颈鳞癌组SOX1蛋白表达无显著差异(P>0.05);SOX1蛋白表达与生存结局无相关性。结论宫颈腺癌中SOX1蛋白低表达,有望成为宫颈腺癌诊断的分子标记物。 展开更多

关键词 sox1 宫颈腺癌 蛋白表达 甲基化

原文传递

基于SwissPdbViewer和MATLAB对东北虎Sox蛋白三级结构建模及分析(英文)

7

作者 梁俊毅 陈启龙 《四川动物》 CSCD 北大核心 2008年第6期997-1002,共6页

SOX蛋白具有一个与DNA特异结合的高保守HMG-box结构域。为研究东北虎SOX蛋白三级结构的分子机理,利用MATLAB的Bioinformatics工具从GenBank中下载东北虎SOX蛋白序列信息,以三级结构已知的SOX2为模板,联合SwissPdbViewer与MATLAB,采用同... SOX蛋白具有一个与DNA特异结合的高保守HMG-box结构域。为研究东北虎SOX蛋白三级结构的分子机理,利用MATLAB的Bioinformatics工具从GenBank中下载东北虎SOX蛋白序列信息,以三级结构已知的SOX2为模板,联合SwissPdbViewer与MATLAB,采用同源建模方法对SOX蛋白HMG-box进行建模、预测;利用MATLAB的Visualization Tool分析预测结果的三维结构。结果显示PtSox蛋白的HMG-box由3个α-螺旋和2个loop区构成;热稳定性分析表明PtSox蛋白loop区的热力学结构不稳定;表面静电分布显示出PtSox蛋白C-端的中间有一个可能与其它小分子或蛋白质的相互作用位点的N/C腔,上述空间结构可能与其活性与功能的调控有关。 展开更多

关键词 sox蛋白 MATLAB 同源建模 三级结构 东北虎

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骨形态发生蛋白-2与椎间盘细胞Sox9和Ⅱ型胶原基因的调控关系 被引量：12

8

作者 赵勇 王文波 +2 位作者 李吉友 卢宇 霍锐 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2005年第10期612-615,共4页

目的:探讨骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对椎间盘细胞Sox9和Ⅱ型胶原基因表达的调节作用。方法:应用逆转录聚合酶链反应和Western印迹检测不同浓度BMP-2对培养的人椎间盘细胞中软骨特异性基因Sox9和Ⅱ型胶原基因表达的调节作用。结果:BMP-2... 目的:探讨骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对椎间盘细胞Sox9和Ⅱ型胶原基因表达的调节作用。方法:应用逆转录聚合酶链反应和Western印迹检测不同浓度BMP-2对培养的人椎间盘细胞中软骨特异性基因Sox9和Ⅱ型胶原基因表达的调节作用。结果:BMP-2浓度为100ng/ml和1000ng/ml时,椎间盘细胞中Sox9和Ⅱ型胶原基因mRNA表达与0ng/ml组(对照组)相比明显增加(P<0.05);在蛋白水平的检测中,也得到了一致的结果。结论:BMP-2可以按照剂量依赖方式正向调节椎间盘细胞Sox9和Ⅱ型胶原基因的表达,提示BMP-2可能对退变早期的椎间盘具有修复功能。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白-2 sox基因 胶原 基因表达 椎间盘

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肿瘤干细胞标记物CD133、CD44、SOX2、OCT4、ALDH1在NSCLC中的表达及临床意义 被引量：11

9

作者 梁洪享 钟竑 +3 位作者 罗勇 黄燕 丁昭珩 丁罡 《实用癌症杂志》 2013年第5期472-475,共4页

目的探讨肿瘤干细胞标记物CD133、CD44、SOX2、OCT4、ALDH1在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法,检测70例NSCLC组织中CD133、CD44、SOX2、OCT4、ALDH1蛋白的表达情况。结果 CD133、CD44、SOX2、O... 目的探讨肿瘤干细胞标记物CD133、CD44、SOX2、OCT4、ALDH1在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法,检测70例NSCLC组织中CD133、CD44、SOX2、OCT4、ALDH1蛋白的表达情况。结果 CD133、CD44、SOX2、OCT4、ALDH1在70例NSCLC组织中阳性表达率分别为88.57%、98.57%、100.00%、100.00%、100.00%,强阳性表达率分别为48.57%、67.14%、67.14%、31.43%、50.00%;NSCLC组织中CD44与SOX2共表达分析存在统计学意义(P=0.028);70例NSCLC中CD44++SOX2++组合占38.57%(27/70),CD44++ALDH1++组合占34.29%(24/70),SOX2++ALDH1++组合占34.29%(24/70),CD133++SOX2++组合占31.43%(22/70),双强阳性NSCLC组织与非双强阳性NSCLC组织比较,病理分化程度方面均有差别,双强阳性NSCLC组织多为中、低分化,而非双强阳性NSCLC组织倾向高分化。上述4种双强阳性组织与非双强阳性组织在病理分化程度上比较,均有统计学意义(P值分别为0.0022、0.0463、0.0463、0.003)。结论 NSCLC组织中OCT4、CD44、SOX2、CD133、ALDH1表达阳性率高;CD44与SOX2存在共表达关系;双强阳性组合CD44++SOX2++、CD44++ALDH1++、SOX2++ALDH1++、CD133++SOX2++,有可能对研究NSCLC干细胞标记物有一定的帮助。 展开更多

关键词 肿瘤干细胞 CD133蛋白 CD44蛋白 sox2蛋白 OCT4蛋白 ALDH1蛋白 非小细胞肺癌 免疫组织化 学方法

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肺癌组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白水平检测及其临床价值探讨 被引量：9

10

作者 邹淳缘 许晓峰 +1 位作者 卢仁泉 郭林 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期36-44,共9页

背景与目的:肺癌发病机制具有多样性,但一经确认,往往已错过最佳治疗时机,本文通过探讨肺癌组织和外周血中抑癌基因(p53)、蛋白基因产物(PGP9.5)、转录因子(SOX2)、肿瘤相关基因编码蛋白(GAGE7)、解旋酶(GBU4-5)和黑色素瘤抗原(MAGE A1... 背景与目的:肺癌发病机制具有多样性,但一经确认,往往已错过最佳治疗时机,本文通过探讨肺癌组织和外周血中抑癌基因(p53)、蛋白基因产物(PGP9.5)、转录因子(SOX2)、肿瘤相关基因编码蛋白(GAGE7)、解旋酶(GBU4-5)和黑色素瘤抗原(MAGE A1)蛋白水平的相关性,同时分析其在肺癌诊疗中的应用价值。方法:回顾并分析2018年5月—2020年5月在复旦大学附属肿瘤医院确诊的100例肺癌患者的病历资料,临床TNM分期Ⅰ期25例,Ⅱ期45例,Ⅲa期30例;非小细胞肺癌80例,小细胞肺癌20例;取手术切除的肿瘤组织和癌旁组织,采用免疫组织化学染色法检测上述6种蛋白的水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)法检测其基因表达,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测外周血中6种蛋白的抗体阳性情况。结果:肿瘤组织中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平均明显高于癌旁组织(P<0.05);将其与肿瘤的临床病理学特征进行相关分析发现,肿瘤组织和外周血中的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平与肿瘤TNM分期和分化级别有关(P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤直径、病理学类型无关(P>0.05)。肿瘤组织中6种蛋白的表达水平与外周血清表达具有较好的一致性(P>0.05)。结论:肺癌肿瘤组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白表达阳性与肿瘤TNM分期及分化级别密切相关。 展开更多

关键词 肺癌 抑癌基因p53 蛋白基因产物(PGP9.5) 转录因子(sox2) 肿瘤相关基因编码蛋白(GAGE7) 解旋酶(GBU4-5) 黑色素瘤抗原(MAGE A1)

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SOX2蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义 被引量：10

11

作者 陈尚忠 周自华 +2 位作者 邹媚 袁志华 蔡昭 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2011年第11期991-994,共4页

目的研究SOX2蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义。方法收集80例结直肠癌手术标本及20例正常的肠黏膜标本,采用免疫组化法检测SOX2蛋白在标本中的表达情况。结果 SOX2蛋白在正常肠黏膜中不表达,在结直肠癌中高表达,表达率为41.3%。SOX2... 目的研究SOX2蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义。方法收集80例结直肠癌手术标本及20例正常的肠黏膜标本,采用免疫组化法检测SOX2蛋白在标本中的表达情况。结果 SOX2蛋白在正常肠黏膜中不表达,在结直肠癌中高表达,表达率为41.3%。SOX2表达水平与TNM分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、组织学分化程度、Ki-67和p53基因表达水平均相关(P<0.05)。SOX2高表达组患者术后的5年生存率和无瘤生存率分别为39.4%和21.2%,低表达组患者分别为95.7%和83.0%,差异有统计学意义(P=0.000)。结论 SOX2蛋白在正常结直肠黏膜组织中不表达,在结直肠癌组织中表达率高,并可作为预测结直肠癌转移和预后的生物学指标。 展开更多

关键词 结直肠癌 sox2蛋白 预后

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SOX2、SOX7蛋白在喉癌及癌旁组织中的表达及其临床意义 被引量：5

12

作者 孟欣雨 崔颖 +1 位作者 穆兰 刘瑶 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期282-286,共5页

目的检测SOX2蛋白、SOX7蛋白、β-连环蛋白(β-catenin)及细胞周期素(CyclinD1)蛋白在喉癌及癌旁正常上皮组织中的表达,并初步探讨其在喉癌发生中的临床意义。方法将收集到的65例喉癌组织和其中40例对应癌旁正常上皮组织的石蜡切片进行... 目的检测SOX2蛋白、SOX7蛋白、β-连环蛋白(β-catenin)及细胞周期素(CyclinD1)蛋白在喉癌及癌旁正常上皮组织中的表达,并初步探讨其在喉癌发生中的临床意义。方法将收集到的65例喉癌组织和其中40例对应癌旁正常上皮组织的石蜡切片进行免疫组化染色,检测SOX2、SOX7、β-catenin及CyclinD1蛋白的表达。结果SOX2、β-catenin及CyclinD1蛋白在喉癌组织中的阳性表达率高于癌旁正常上皮组织(P<0.05),SOX7蛋白在喉癌组织中的阳性表达率低于癌旁正常上皮组织(P<0.05);喉癌组织中SOX2、SOX7、β-catenin及CyclinD1蛋白的阳性表达率与淋巴结转移及T分期相关(P<0.05),与吸烟、饮酒、年龄、性别、分化程度、临床分型等均无相关性(P>0.05);在喉癌组织中β-catenin和cyclinD1与SOX2蛋白的表达呈正相关(φ=0.732,P<0.001;φ=0.844,P<0.001),与SOX7蛋白的表达呈负相关(φ_(SOX7与β-catenin)=-0.213,P<0.001;φ_(SOX7与cyclinD1)=-0.455,P<0.001),且β-catenin与cyclinD1的表达呈正相关(φ=0.661,P<0.001),SOX2与SOX7的表达呈负相关(φ=-0.388,P=0.002)。结论SOX2、β-catenin及CyclinD1蛋白在喉癌组织中高表达,SOX7蛋白在喉癌组织中低表达,推测SOX2、SOX7蛋白可能对喉癌的进展有一定影响。 展开更多

关键词 喉癌 sox2蛋白 sox7蛋白 Β-CATENIN蛋白 CYCLIND1蛋白

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补骨脂素联合转化生长因子β1诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞的分化 被引量：8

13

作者 高子茏 李婷 +1 位作者 吕政 沈骅睿 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2022年第30期4884-4888,共5页

背景:软骨细胞受损后再生能力较差,以干细胞为基础的治疗方案已成为关节软骨修复的新型治疗方法。目的:观察补骨脂素联合转化生长因子β1诱导大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的作用。方法:全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠骨髓间充质干细... 背景:软骨细胞受损后再生能力较差,以干细胞为基础的治疗方案已成为关节软骨修复的新型治疗方法。目的:观察补骨脂素联合转化生长因子β1诱导大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的作用。方法:全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,CCK-8实验筛选出补骨脂素促进骨髓间充质干细胞增殖的有效浓度;将第3代骨髓间充质干细胞分为正常对照组(含体积分数为10%胎牛血清、100 U/mL双抗的低糖DMEM培养液)、补骨脂素组(在正常对照组基础上添加10^(-7)mol/L地塞米松、50 mg/L维生素C、10μmol/L补骨脂素)、补骨脂素联合转化生长因子β1组(在正常对照组基础上添加10μg/L转化生长因子β1、10^(-7)mol/L地塞米松、50 mg/L维生素C、10μmol/L补骨脂素)、阳性对照组(在正常对照组基础上添加10μg/L转化生长因子β1、10^(-7)mol/L地塞米松、50 mg/L维生素C)。诱导21 d后,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色鉴定Ⅱ型胶原表达;RT-PCR和Western blot分别检测软骨分化标记基因Ⅱ型胶原、SOX-9的mRNA和蛋白表达。结果与结论:①免疫细胞化学染色显示,正常对照组未见阳性细胞,其余3组均可见Ⅱ型胶原阳性细胞;②与正常对照组比较,补骨脂素组、联合组及阳性对照组SOX-9、Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05),其中联合组效果最佳(P<0.01),且明显优于阳性对照组及补骨脂素组(P<0.05);③结果表明,在一定的浓度范围内,补骨脂素可以促进骨髓间充质干细胞增殖;补骨脂素可以诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化,其与转化生长因子β1联合使用具有协同促进作用。 展开更多

关键词 补骨脂素 骨髓间充质干细胞 软骨细胞 成软骨分化 转化生长因子Β Ⅱ型胶原 sox-9蛋白 诱导分化

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自体、同种异体纯化富血小板血浆治疗兔膝骨关节炎的差异 被引量：7

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作者 赵露婷 方其林 +1 位作者 唐海燕 胥方元 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2021年第26期4123-4129,共7页

背景:活化后的纯化富血小板血浆可促进软骨细胞的增殖,调控关节内炎症反应,有效治疗膝骨关节炎。目的:对比自体、同种异体纯化富血小板血浆修复膝骨关节炎的效果。方法:取32只3月龄新西兰大耳兔,采用随机数字表法分4组,每组8只:正常组... 背景:活化后的纯化富血小板血浆可促进软骨细胞的增殖,调控关节内炎症反应,有效治疗膝骨关节炎。目的:对比自体、同种异体纯化富血小板血浆修复膝骨关节炎的效果。方法:取32只3月龄新西兰大耳兔,采用随机数字表法分4组,每组8只:正常组不作任何处理;模型组、自体纯化富血小板血浆组、异体纯化富血小板血浆组通过关节内注射木瓜蛋白酶与L-半胱氨酸混合溶液制备膝骨关节炎模型,造模2周后,自体纯化富血小板血浆组、异体纯化富血小板血浆组分别关节内注射自体纯化富血小板血浆与同种异体纯化富血小板血浆,每2周注射1次,共注射3次。末次注射2周后,进行关节软骨大体观察、组织学观察与免疫组化观察。实验经西南医科大学实验动物管理委员会批准。结果与结论:①大体观察:模型组关节软骨表面粗糙,出现软骨缺损、侵蚀、溃疡,关节骨赘形成,有大量的关节腔积液,自体纯化富血小板血浆组关节软骨损伤及骨赘形成轻于模型组,异体纯化富血小板血浆组关节软骨损伤及骨赘形成与模型组相比无明显改善;②组织学观察:与模型组相比,自体纯化富血小板血浆组软骨结构、基质染色、细胞、潮线等各方面均明显改善(P均<0.05),异体纯化富血小板血浆组软骨结构有一定改善(P<0.05),但细胞排列、基质染色、潮线方面改善不明显;③免疫组化观察:自体纯化富血小板血浆组、异体纯化富血小板血浆组骨形态发生蛋白2与Sox9表达量的高于模型组(P<0.05),自体纯化富血小板血浆组骨形态发生蛋白2表达量高于异体纯化富血小板血浆组(P<0.05);④结果表明,自体、同种异体纯化富血小板血浆均能在一定程度上改善膝骨关节炎软骨细胞的增殖能力,促进软骨细胞修复,但自体纯化富血小板血浆的治疗效果更为明显。 展开更多

关键词 实验 动物 兔 膝骨关节炎 纯化富血小板血浆 骨形态发生蛋白2 sox9

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绿色荧光蛋白标记SOX9基因慢病毒载体的构建及在兔骨髓间充质干细胞中的表达 被引量：6

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作者 刘伟 王杰 +2 位作者 幸永明 赵宏 龚德军 《中国实验诊断学》 2017年第1期140-145,共6页

目的构建绿色荧光蛋白标记的SOX9基因慢病毒载体,转染兔骨髓间充质干细胞,观察SOX9基因的表达情况。方法双酶切从GeneArt提供的含SOX9基因序列的质粒13ABIV6C_1366933并克隆到pLenti6.3_MCS_IRES2-EGFP载体,获得含SOX9基因的质粒pLMIG-1... 目的构建绿色荧光蛋白标记的SOX9基因慢病毒载体,转染兔骨髓间充质干细胞,观察SOX9基因的表达情况。方法双酶切从GeneArt提供的含SOX9基因序列的质粒13ABIV6C_1366933并克隆到pLenti6.3_MCS_IRES2-EGFP载体,获得含SOX9基因的质粒pLMIG-13GS0345-1,通过293T细胞包装后获得绿色荧光蛋白标记的SOX9基因慢病毒载体(Lenti-SOX9-GFP),将Lenti-SOX9-GFP转染兔骨髓间充质干细胞后观察SOX9基因的表达情况。结果测序结果显示质粒pLMIG-13GS0345-1中的插入序列与基因库中SOX9(NM_000346)基因序列完全一致,成功构建Lenti-SOX9-GFP慢病毒载体。Lenti-SOX9-GFP转染兔骨髓间充质干细胞后可观察到绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR与Western Blot检测结果证明Lenti-SOX9-GFP转染目的细胞后可在mRNA及蛋白水平成功表达SOX9。结论本实验成功构建了绿色荧光蛋白标记的携带SOX9基因的Lenti-SOX9-GFP慢病毒载体,并在兔骨髓间充质干细胞中成功表达,为下一步研究提供前期实验基础。 展开更多

关键词 慢病毒载体 骨髓间充质干细胞 椎间盘 sox9基因 绿色荧光蛋白

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转录因子SOX3对卵巢颗粒细胞增殖和雌二醇分泌的影响 被引量：1

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作者 蔡睿 张浩 +3 位作者 刘壮 陈远华 谢芬芬 洪强 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第3期371-376,383,共7页

目的研究性别决定区Y框蛋白3(SOX3)对人卵巢颗粒细胞(KGN)增殖和雌二醇分泌的影响。方法在NCBI数据库Gene-Bank中搜索人SOX3(NM_005634.3)的基因序列,用PCR方法扩增目的基因SOX3,将其克隆到慢病毒载体pLV-EF1a-GFP-2A-Puro上,获得过表... 目的研究性别决定区Y框蛋白3(SOX3)对人卵巢颗粒细胞(KGN)增殖和雌二醇分泌的影响。方法在NCBI数据库Gene-Bank中搜索人SOX3(NM_005634.3)的基因序列,用PCR方法扩增目的基因SOX3,将其克隆到慢病毒载体pLV-EF1a-GFP-2A-Puro上,获得过表达慢病毒重组质粒pLV-EF1a-GFP-2A-Puro-SOX3;将测序正确的过表达慢病毒重组质粒以及包装质粒(pGag/Pol、pRev、pVSV-G)共同转染到人胚肾细胞系(HEK 293T)细胞中(pLV-SOX3组),将pLV-EF1a-GFP-2A-Puro及包装质粒(pGag/Pol、pRev、pVSV-G)共同转染到HEK 293T细胞中(pLV-NC组),转染48 h后收集两组慢病毒颗粒并测定病毒的滴度,将两组慢病毒感染KGN细胞,经嘌呤霉素筛选2周后,获得稳定表达的细胞系;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法检测两组中SOX3的mRNA和蛋白水平;CCK-8法检测两组细胞增殖能力;ELISA测定两组雌二醇的浓度。结果PCR产物的鉴定和测序结果表明SOX3基因片段扩增成功,酶切和测序结果表明过表达慢病毒重组质粒构建完成;慢病毒感染HEK 293T细胞后可检测到绿色荧光,表明慢病毒包装成功;慢病毒感染KGN细胞后经嘌呤霉素筛选,荧光显微镜下观察细胞表达绿色荧光;RT-qPCR和Western blot检测结果均表明pLV-SOX3组中SOX3表达水平高于pLV-NC组(P<0.05)。CCK-8检测结果表明,pLV-SOX3组较pLV-NC组细胞增殖能力明显增强(P<0.01)。ELISA结果显示,pLV-SOX3组雌二醇浓度较pLV-NC组升高(P<0.05)。结论过表达转录因子SOX3能够促进KGN的增殖和雌二醇分泌。 展开更多

关键词 sox3 卵巢颗粒细胞 慢病毒载体 增殖 雌二醇 绿色荧光蛋白

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周期性动态压力对海藻酸钠培养间充质干细胞成软骨分化的作用 被引量：5

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作者 赵永亮 冯军宇 +6 位作者 王刚 姬健钧 门亚勋 谭利 石俊俊 程相允 杨自权 《中华关节外科杂志（电子版）》 CAS 2016年第4期52-56,共5页

目的观察延迟性周期性动态压缩应力对立体培养条件下骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响,探讨力学因素在软骨分化过程中的作用机制。方法 KM小鼠骨髓间充质干细胞分离,体外培养至第3代,与海藻酸钠混匀制作成海藻酸钠凝胶。根据实验设计,... 目的观察延迟性周期性动态压缩应力对立体培养条件下骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响,探讨力学因素在软骨分化过程中的作用机制。方法 KM小鼠骨髓间充质干细胞分离,体外培养至第3代,与海藻酸钠混匀制作成海藻酸钠凝胶。根据实验设计,进行7 d的相应的预培养。实验分为4组:空白对照组:普通培养液组,静态培养;实验组:完全成软骨诱导液,后7 d加力培养;单纯诱导组:完全成软骨诱导液,静态培养14 d;阴性对照组:普通培养液,后7 d加力培养。于培养第7和14天分离各组细胞,采用RT-PCR分析SOX9、ROCK1及Col2的表达,应用免疫荧光技术对各组处理前后的Ⅱ型胶原蛋白(Col2)表达进行检测,Image J软件进行图像定量检测。正态计量资料采用均数±标准差表示,组间计量资料采用单因素方差分析,组间多重比较采用SNKq检验法。结果预培养7 d后,实验组SOX9、Col2及ROCK1的mRNA表达与对照组比较有统计学差异(P<0.01)。14 d后,实验组中压力干预组SOX9及Col2的mRNA表达与未受力组比较有统计学差异(P<0.01),ROCK1的mRNA表达与未受力组比较有统计学差异(P<0.01)。免疫荧光显示压力组Col2蛋白表达高于未受力组。结论延迟性周期性动态压缩应力可促进间充质干细胞成软骨分化,ROCK信号通路可能参与有关调控。 展开更多

关键词 软骨发生 力学传导 细胞 sox9蛋白 小鼠

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山羊SOX2多克隆抗体制备 被引量：5

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作者 刘平 张昀 +7 位作者 郑喜邦 李恭贺 岑小妹 岳磊磊 宗自杰 卢晟盛 卢克焕 张明 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期178-183,共6页

【目的】构建山羊Sox2原核表达载体—pRSET-Sox2,并将诱导表达、纯化的His-Sox2融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备Sox2多克隆抗体。【方法】从pMD18T-Sox2载体上以Bam H I和Xho I双酶切截取Sox2片段,然后将其亚克隆到pRSET-A表达载体上,获... 【目的】构建山羊Sox2原核表达载体—pRSET-Sox2,并将诱导表达、纯化的His-Sox2融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备Sox2多克隆抗体。【方法】从pMD18T-Sox2载体上以Bam H I和Xho I双酶切截取Sox2片段,然后将其亚克隆到pRSET-A表达载体上,获得pRSET-Sox2重组质粒。转化了pRSET-Sox2的大肠杆菌BL21(DE3),1 mmol.L-1 IPTG 37℃诱导4 h,SDS-PAGE电泳及Western blotting检测融合蛋白表达。相同条件下大量增菌诱导,用Ni-NTA argrose介质分离纯化His-Sox2重组蛋白。将体外复性的融合蛋白皮下注射新西兰大白兔,间隔2—3周注射一次,共4次。最后一次注射后7 d,采血分离血清,用Western blotting检测抗体特异性。【结果】(1)原核表达载体pRSET-Sox2在大肠杆菌BL21(DE3)得到了高效表达;(2)纯化的His-Sox2融合蛋白能够满足多克隆抗体制备的要求;(3)经Western blotting检测,Sox2多克隆抗体能与His-Sox2融合蛋白特异性结合。【结论】制备了高特异性山羊Sox2多克隆抗体,为深入探讨山羊Sox2基因的生物学功能奠定了基础,也为山羊(iPS)细胞检测创造了良好条件。 展开更多

关键词 sox2 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体 山羊

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miRNA-138模拟物转染对人乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响及其机制 被引量：3

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作者 董超 黄远丽 徐正丰 《山东医药》 CAS 2019年第3期5-8,共4页

目的观察miRNA-138模拟物(miRNA-138 mimics)对人乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨其可能机制。方法选取人高侵袭性乳腺细胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-468)及人低侵袭性乳腺癌细胞系(MCF-7)和人正常乳腺上皮细胞系(HBL-100),qRT-PCR... 目的观察miRNA-138模拟物(miRNA-138 mimics)对人乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨其可能机制。方法选取人高侵袭性乳腺细胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-468)及人低侵袭性乳腺癌细胞系(MCF-7)和人正常乳腺上皮细胞系(HBL-100),qRT-PCR法检测微小RNA-138(miRNA-138);取MDA-MB-231并分为两组,miRNA-138 mimics组细胞系以miRNA-138 mimics转染,miR-NC组细胞系以miR阴性对照模拟物(miR-NC)转染,qRT-PCR法检测miRNA-138,Transwell迁移和侵袭实验测算迁移细胞数、侵袭细胞数,Western blotting法检测SOX4蛋白及上皮间质转化(EMT)相关标志物(E-cadherin、Fibronectin、Vimentin蛋白)。结果 MDA-MB-231、MDA-MB-468、MCF-7、HBL-100中miRNA-138相对表达量分别为0.23±0.08、0.42±0.05、0.56±0.11、1.03±0.04,MDAMB-231、MDA-MB-468、MCF-7与HBL-100比较,MDA-MB-231、MDA-MB-468与MCF-7比较,P均<0.05。miRNA-138 mimics组和miR-NC组miRNA-138相对表达量分别为13.35±0.35、0.98±0.05,两组比较,P <0.05。miRNA-138 mimics组和miR-NC组迁移细胞数分别为(210±30)、(340±18)个,侵袭细胞数分别为(100±16)、(190±26)个,两组比较,P均<0.05。miRNA-138 mimics组SOX、E-cadherin、Fibronectin、Vimentin蛋白灰度值分别为0.16±0.08、0.59±0.16、0.42±0.14、0.17±0.09,miR-NC组分别为0.77±0.19、0.12±0.06、1.19±0.21、0.44±0.12,两组比较,P均<0.05。结论 miRNA-138 mimics能够抑制乳腺癌细胞侵袭和迁移,机制可能与其调控SOX4基因抑制乳腺癌细胞EMT有关。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 乳腺癌 微小RNA-138 细胞侵袭能力 细胞迁移能力 sox4蛋白 E-CADHERIN蛋白 Fibronectin蛋白 Vimentin蛋白

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骨形态发生蛋白2信号通路与骨发生发育及损伤修复 被引量：5

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作者 侯波 王毅 沈宇辉 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第2期342-346,共5页

背景:骨形态发生蛋白在骨形成过程中、骨折愈合后以及骨质破坏后骨诱导方面起着重要作用,它可以作为启动调节因子和别的信号通路共同促进新骨形成。内源性骨形态发生蛋白2的调节可以作为未来骨修复领域的一个新的靶点。目的:通过分析和... 背景:骨形态发生蛋白在骨形成过程中、骨折愈合后以及骨质破坏后骨诱导方面起着重要作用,它可以作为启动调节因子和别的信号通路共同促进新骨形成。内源性骨形态发生蛋白2的调节可以作为未来骨修复领域的一个新的靶点。目的:通过分析和总结1988年以来骨形态发生蛋白信号传导通路在软骨内成骨、维持成人骨骼生长发育中的作用机制,探索骨形态发生蛋白信号通路在骨的发育以及损伤修复中的作用。方法:分别以"骨形态发生蛋白、软骨内成骨、骨修复","bonereduction"为检索词,应用计算机检索重庆维普(VIP)期刊全文数据库及PubMed数据库1998年1月至2009年12月有关文章。纳入有关骨形态发生蛋白信号通路及其作用的文献。排除与研究目的无关和内容重复者。保留34篇文献做进一步分析。结果与结论:骨形态发生蛋白信号通路诱导骨再生潜能在脊柱外科手术、骨折后愈合以及骨破坏后骨诱导等诸多领域成为研究热点。在骨形成过程中,骨形态发生蛋白也作为启动调节因子和别的信号通路相互影响共同促进新骨形成,出生后,骨形态发生蛋白也参与骨骼动态平衡的维持。在骨的微环境中,骨形态发生蛋白和其他影响骨质动态平衡的信号通路共同为诱导骨形成的合成代谢疗法提供了一个新靶点,这为骨修复时骨形态发生蛋白控制新骨的形成提供了一个新的思路。 展开更多

关键词 组织构建 组织构建学术探讨 骨形态发生蛋白2 信号通路 骨 损伤修复 软骨内成骨 微环境 骨再生 骨形成 成骨细胞 sox9 省级基金

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