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多重耐药基因cfr在食品动物源大肠杆菌中流行特点的调查 被引量:4
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作者 赵丽青 侯宏波 +4 位作者 刘小琴 李伟 张秀凤 刘健华 曾振灵 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1464-1468,共5页
为调查多重耐药基因cfr在我国多个地区食品动物源大肠杆菌中的流行情况及耐药现状,对2014年从广东、山东、江苏等11个省份分离得到的4 702株大肠杆菌,采用PCR和测序方法验证cfr阳性菌株,并通过临床常用药物敏感性测定、脉冲场凝胶电泳... 为调查多重耐药基因cfr在我国多个地区食品动物源大肠杆菌中的流行情况及耐药现状,对2014年从广东、山东、江苏等11个省份分离得到的4 702株大肠杆菌,采用PCR和测序方法验证cfr阳性菌株,并通过临床常用药物敏感性测定、脉冲场凝胶电泳分型(PFG E)和Southern杂交定位等方法,确定分离株的耐药表型和cfr基因在大肠杆菌中的传播方式。结果显示,共检出cfr阳性菌株9株,检出率为0.19%。药敏试验结果显示,9株cfr阳性菌株对氯霉素、氟苯尼考、氨苄西林、四环素、多西环素均耐药,对亚胺培南均表现为敏感,对庆大霉素、新霉素耐药率在60%以上,对其他药物耐药率介于10%~50%之间。PFGE结果显示,有2株来自同一养殖场的菌株谱型相似,表明存在克隆传播。Southern杂交结果显示,cfr基因定位于大小为70~400 kb之间的质粒上。上述调查结果表明,多重耐药基因cfr在食品动物源源大肠杆菌中的检出率较低,但在广东地区较为流行。 展开更多
关键词 大肠杆菌 多重耐药基因cfr 药物敏感性 脉冲场凝胶电泳 杂交定位
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大肠埃希菌O157:H7志贺毒素Ⅱ变种的分布 被引量:1
2
作者 丁韧 杨晋川 +1 位作者 顾玲 郑翰 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期1038-1039,共2页
目的 了解徐州地区E .coliO15 7:H7分离菌株Stx2毒素变种Stx2vha在人及畜禽中的携带分布情况。方法 用特异性探针Southern杂交检测菌株中是否携带Stx2vha毒素变种。结果  6 6株分离株中 35株为Stx2vha毒素变种阳性 ,占 5 3% ,13株为S... 目的 了解徐州地区E .coliO15 7:H7分离菌株Stx2毒素变种Stx2vha在人及畜禽中的携带分布情况。方法 用特异性探针Southern杂交检测菌株中是否携带Stx2vha毒素变种。结果  6 6株分离株中 35株为Stx2vha毒素变种阳性 ,占 5 3% ,13株为Stx2原毒素阳性 ,占 19 7% ,17株为Stx2毒素阴性 ,占 2 5 8% ,另有 1株不同于其它菌株是否为新的毒素变种需进一步确证。 35株Stx2vha阳性菌株在羊、病人、牛、猪、鸡的分离率分别为 37 1% ,2 5 7% ,17 1% ,11 4 % ,4 5 %。结论 含有Stx2vha毒力基因菌株是徐州地区O15 7:H7菌株的优势菌型 。 展开更多
关键词 大肠杆菌 O157 H7 southern杂交 志贺毒互变种 Stx2vh
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电泳印迹和分子杂交技术在肝内HBV DNA研究中的应用 被引量:1
3
作者 吕凌 姚集鲁 彭文伟 《中山医科大学学报》 CSCD 1992年第1期62-64,共3页
应用DNA电泳转移、生物素探针Southern杂交及不同探针重复杂交等3项新技术研究肝炎肝癌的肝内HBV DNA分子状态。经过方法学比较以电泳印迹取代毛细渗吸法对65例肝炎肝癌病人的101份肝内组织DNA进行尼龙膜快速转移和HBV DNA杂交,结果检出... 应用DNA电泳转移、生物素探针Southern杂交及不同探针重复杂交等3项新技术研究肝炎肝癌的肝内HBV DNA分子状态。经过方法学比较以电泳印迹取代毛细渗吸法对65例肝炎肝癌病人的101份肝内组织DNA进行尼龙膜快速转移和HBV DNA杂交,结果检出HBV DNA分子状态里整合型15份、游离型31份、整合型合并游离型30份。其中12例乙型肝炎标本为经生物素探针杂交检测,结果全部检出游离型HBV DNA。还有3例乙型肝炎标本和2例其它肝炎标本为经重复杂交检测,即先用^(32)P探针杂交继去探针再用生物素探针杂交,结果乙型肝炎标本两次杂交HBV DNA都阳性,其它肝炎标本两次均阴性。阳性者表现为3.2kb和2.3kb电泳位置呈现杂交带,代表HBV之松弛环状和超螺旋状结构。由于两种探针各含不同序列,故结果可对待检基因进行初步序列分析。本实验表明,上述3项技术对临床医学研究有广泛的应用价值。 展开更多
关键词 电泳印迹 分子杂交 乙型肝炎 DNA
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检测HCA-RNA的RT-PCR技术改进与应用
4
作者 吕凌 姚集鲁 +2 位作者 彭文伟 高志良 黄仰甦 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 1993年第3期226-231,共6页
以台湾株丙型肝炎病毒的非结构区基因序列(HCV-T_3)设计内外五条呈巢式排列的引物,结合AGPC核酸一步抽提法,寡聚核苷酸探针5′末端标记法和Southern电泳转移杂交法,建立简捷特异检测HCV-RNA的逆转录一多聚酶链反应(RT-PCR)技术。应用这... 以台湾株丙型肝炎病毒的非结构区基因序列(HCV-T_3)设计内外五条呈巢式排列的引物,结合AGPC核酸一步抽提法,寡聚核苷酸探针5′末端标记法和Southern电泳转移杂交法,建立简捷特异检测HCV-RNA的逆转录一多聚酶链反应(RT-PCR)技术。应用这一技术对121例非甲非乙型肝炎患者和45例抗HCV阳性的慢性乙型肝炎患者进行了血浆HCV-RNA检测,结果阳性率分别为66.1%(80/121)和66.7%(30/45)。本文对这一技术的方法学、HCV-RNA与抗HCV的关系、血液暴露史对HCV感染的意义以及HBV与HCV的重叠感染进行了讨论。 展开更多
关键词 HCV-RNA 抗HCV RT-PCR技术 末端标记 慢性乙型肝炎患者 逆转录-多聚酶链反应 丙型肝炎病毒 核酸 电泳 基因序列
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用地高辛标记探针检测转人肾素基因小鼠
5
作者 姜立群 陈兰英 《基础医学与临床》 CSCD 2000年第2期83-86,共4页
采用地高辛标记探针,建立了一种快速检测和筛选转人肾素基因小鼠的方法。对实验中杂交液的选择、杂交液中探针的浓度、预杂交时间、抗体孵育前封闭时间和洗膜条件等影响因素进行了系统观察与分析,从而确定了以地高辛标记探针检测转人... 采用地高辛标记探针,建立了一种快速检测和筛选转人肾素基因小鼠的方法。对实验中杂交液的选择、杂交液中探针的浓度、预杂交时间、抗体孵育前封闭时间和洗膜条件等影响因素进行了系统观察与分析,从而确定了以地高辛标记探针检测转人肾素基因小鼠方法中的最佳实验条件。结果表明,该方法不仅安全、快速,而且灵敏度高,稳定性好。 展开更多
关键词 地高辛 转基因小鼠 肾素基因
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改良CTAB法用于多年生植物组织基因组DNA的大量提取 被引量:183
6
作者 陈昆松 李方 +2 位作者 徐昌杰 张上隆 傅承新 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期529-531,共3页
根据多年生植物组织富含多酚、多糖的具体特性,对现有的DNA提取方法进行了改进。通过增加提取缓冲液中β 巯基乙醇用量,简化氯仿/异戊醇抽提液步骤,改用经-20℃预冷异丙醇沉淀DNA等,对CTAB法加以改进。改进后方法具有以下优点:(1)获得的... 根据多年生植物组织富含多酚、多糖的具体特性,对现有的DNA提取方法进行了改进。通过增加提取缓冲液中β 巯基乙醇用量,简化氯仿/异戊醇抽提液步骤,改用经-20℃预冷异丙醇沉淀DNA等,对CTAB法加以改进。改进后方法具有以下优点:(1)获得的DNA质量良好,提取过程无明显的DNA降解,基本上排除了多酚物质的干扰;(2)用获得的DNA进行Southern杂交,可得到理想的杂交信号,可满足相关的分子研究要求;(3)操作简便。 展开更多
关键词 猕猴桃 DNA 提取 southern杂交
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利用大白菜小孢子胚状体获得抗除草剂转基因植株 被引量:25
7
作者 刘凡 姚磊 +2 位作者 李岩 曹鸣庆 刘公社 《华北农学报》 CSCD 北大核心 1998年第4期93-98,共6页
大白菜小孢子培养获得的子叶期胚状体,经粉碎的玻璃碴摩擦后,与农杆菌共培养,在加筛选剂Basta(含phosphinothricin5mg/L)的培养基上,再生出数株绿苗。自交留种后,对其后代苗期进行的Basta抗性鉴... 大白菜小孢子培养获得的子叶期胚状体,经粉碎的玻璃碴摩擦后,与农杆菌共培养,在加筛选剂Basta(含phosphinothricin5mg/L)的培养基上,再生出数株绿苗。自交留种后,对其后代苗期进行的Basta抗性鉴定显示,有4株抗此除草剂。Southern杂交结果显示,抗性植株的基因组中各有一个bar基因插入位点。对转化株的小孢子进行再培养,后代小孢子植株对Basta抗性的分离比显示。 展开更多
关键词 大白菜 小孢子胚胎 根癌农杆菌 除草剂抗性
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半夏凝集素基因(pta)导入水稻及其表达的初步研究 被引量:37
8
作者 张红宇 吴先军 +3 位作者 唐克轩 汪旭东 孙小芬 周开达 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1013-1019,共7页
半夏凝集素基因是一种有重要价值的抗虫基因。利用RACE PCR技术克隆出半夏凝集素 (pta)基因 ,并将它构建到载体pCAMBIA1 30 5中形成双元载体 (含pta基因和hpt基因 )。利用农杆菌介导法将pta基因转入粳稻品种鄂宜 1 0 5、中花 1 2和籼稻... 半夏凝集素基因是一种有重要价值的抗虫基因。利用RACE PCR技术克隆出半夏凝集素 (pta)基因 ,并将它构建到载体pCAMBIA1 30 5中形成双元载体 (含pta基因和hpt基因 )。利用农杆菌介导法将pta基因转入粳稻品种鄂宜 1 0 5、中花 1 2和籼稻品种E优 5 32成熟胚诱导的愈伤组织中。通过PCR检测 ,从 1 1 7株T0 代再生植株中筛选出 36株 (其中鄂宜 1 0 5、中花 1 2、E优 5 32分别为 1 9株、7株、1 0株 )转基因植株。对这些转基因后代植株进行Southernblot分析和RT PCR分析表明 :pta基因已经整合到受体细胞基因组中 ,并在转录水平上得到了有效表达。通过对转基因后代的遗传分析 ,成功地从T1 代表现为 1∶2∶1孟德尔分离的分离群体中筛选出 7个独立转基因水稻纯系 (其中包括 4个鄂宜 1 0 5、1个中花 1 2和 2个E优 5 32转基因纯系 )。对这 7个独立转基因水稻T2 代纯系进行褐飞虱生物抗性鉴定和田间隔离喂养实验 ,结果显示 ,这些转基因纯系对褐飞虱的存活率和发育进度均有显著的抑制作用。同时 ,实验结果还表明 2~ 5mg L的 2 ,4 D是愈伤组织诱导和生长的必需条件 ,而且受体的基因型对愈伤组织诱导率和转化频率均有显著影响 ,在同等条件下 。 展开更多
关键词 半夏凝集素基因 抗虫 转基因水稻 southern blot RT-PCR
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富含多糖的转基因石斛基因组DNA提取方法(英文) 被引量:25
9
作者 张妙彬 潘丽晶 +2 位作者 范干群 陈继敏 程萍 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第1期209-214,共6页
在石斛兰转基因研究中,需通过PCR和Southern杂交等手段检测外源基因是否转入并整合到转化植株基因组。由于转化石斛植株生长缓慢,且含有多糖,因此从转化植株中提取高质量的基因组DNA以尽快对转基因苗进行分子检测存在较大困难。本研究... 在石斛兰转基因研究中,需通过PCR和Southern杂交等手段检测外源基因是否转入并整合到转化植株基因组。由于转化石斛植株生长缓慢,且含有多糖,因此从转化植株中提取高质量的基因组DNA以尽快对转基因苗进行分子检测存在较大困难。本研究旨在通过改良现有的DNA提取法(CTAB法或SDS法),克服转化石斛植株基因组DNA提取中碰到的产量低,纯度不高而导致难以进行PCR或酶切等问题。在本研究所用的3种改良法中,方法Ⅱ能从少量的转化石斛苗中提取出高产量和高纯度的基因组DNA。研究结果表明方法Ⅱ提取的基因组DNA完全适用于转基因石斛的外源基因PCR扩增,限制性酶切和Southern杂交分析。 展开更多
关键词 石斛兰 DNA提取 多糖 PCR southern杂交
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银杏苯丙氨酸解氨酶基因的克隆和序列分析 被引量:19
10
作者 程水源 杜何为 +1 位作者 许锋 陈昆松 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2005年第5期573-577,共5页
根据其他植物PAL基因的DNA序列的保守区域,设计了一对简并引物,经PCR扩增,得到一条862 bp的特异性扩增带。将PCR扩增产物构建到T-载体并测序,获得了862 bp DNA序列。通过分析所得的862 bp DNA序列及其编码的氨基酸序列,与其他植物PAL基... 根据其他植物PAL基因的DNA序列的保守区域,设计了一对简并引物,经PCR扩增,得到一条862 bp的特异性扩增带。将PCR扩增产物构建到T-载体并测序,获得了862 bp DNA序列。通过分析所得的862 bp DNA序列及其编码的氨基酸序列,与其他植物PAL基因的DNA序列和蛋白质序列分别进行比较,证实了所得序列为银杏PAL基因的部分序列。Gbpal1已经被Genebank收录,序列号为AY578145。Southern杂交结果表明银杏PAL是一个多基因家族。 展开更多
关键词 银杏 PAL 克隆 southern blot
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PEG介导原生质体转化获得水稻转基因植株 被引量:8
11
作者 李文彬 孙勇如 +3 位作者 王革娇 SalaF StanchinaE Castiglione 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1995年第5期409-412,共4页
Embryogenic cell suspension cultures were obtained from calli developed from mature rice seeds of a Japonica type Italian cultivar, Roncarolo. Protoplasts were isolated and transformed by PEG treated method with plasm... Embryogenic cell suspension cultures were obtained from calli developed from mature rice seeds of a Japonica type Italian cultivar, Roncarolo. Protoplasts were isolated and transformed by PEG treated method with plasmid pHP23 carrying the NPTⅡ gene which encodes resistance to antibiotic G 418. Protoplast derived colonies were selected in presence of the inhibitor. Plants were regenerated and transplanted into soil in the green house. The presence of foreign gene in the regenerated plants was verified by PCR and Southern analysis. 展开更多
关键词 水稻 原生质体 转化 PEG 转基因植株
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利用抑制消减杂交技术筛选猪蛔虫性别差异表达基因 被引量:16
12
作者 吴绍强 邹丰才 +3 位作者 翁亚彪 宋慧群 林瑞庆 朱兴全 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期1040-1045,共6页
为了筛选线虫的性别特异性基因,为线虫乃至寄生虫的性别控制提供新的工具,本研究选择猪蛔虫(Ascarissuum)为模型,分别提取雌性和雄性成虫的mRNA后,采用Clontech公司的PCR-selectTM试剂盒进行反转录合成cDNA并进行抑制消减杂交(SSH),构... 为了筛选线虫的性别特异性基因,为线虫乃至寄生虫的性别控制提供新的工具,本研究选择猪蛔虫(Ascarissuum)为模型,分别提取雌性和雄性成虫的mRNA后,采用Clontech公司的PCR-selectTM试剂盒进行反转录合成cDNA并进行抑制消减杂交(SSH),构建猪蛔虫雌、雄虫性别差异表达的消减cDNA文库,并采用地高辛(DIG)标记的cDNA探针进行Southern杂交检验所构建文库的消减效率。结果表明,雌、雄虫性别差异表达的消减cDNA文库均具有很强的性别特异性。随机从各库中各抽取25个克隆进行测序及在线BLAST分析,发现在25个雄虫ESTs中有20个已知ESTs,5个新的ESTs;25个雌虫ESTs中有11个已知ESTs,还有8个可能为新基因。猪蛔虫性别差异表达的消减cDNA文库的成功构建,为进一步研究性别特异基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 抑制消减杂交技术 筛选 蛔虫 性别差异基因 CDNA文库
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中国水稻条斑病细菌avrBs3/PthA家族基因的克隆和序列分析 被引量:19
13
作者 邹丽芳 陈功友 +1 位作者 武晓敏 王金生 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期929-935,共7页
水稻条斑病细菌(Xanthomonasoryzaepv.oryzicola,Xooc)和水稻白叶枯病菌(X.oryzaepv.oryzae,Xoo)是稻黄单胞菌种下的致病变种,是水稻上的模式病原菌。用Xoo无毒基因avrXa3对应的NLS和AD区域的DNA片段构建探针,筛选Xooc基因文库,再通过... 水稻条斑病细菌(Xanthomonasoryzaepv.oryzicola,Xooc)和水稻白叶枯病菌(X.oryzaepv.oryzae,Xoo)是稻黄单胞菌种下的致病变种,是水稻上的模式病原菌。用Xoo无毒基因avrXa3对应的NLS和AD区域的DNA片段构建探针,筛选Xooc基因文库,再通过酶切归类和Southern杂交分析,从Xooc中获得2个avBs3r/PthA家族基因克隆,分别被命名为avr/Pth13和avr/Pth14。序列测定结果显示,它们与avrBs3PthA家族成员,几乎一样的5′端和3′端、1个亮氨酸拉链(leucinezipper,LZ)、3个核定位信号(nuclearlocalizationsignal,NLS)和1个酸性转录活化域(acidictranscriptionalactivationdomain,AD),不同的只是102bp重复单元的重复次数不等:avr/Pth13基因102bp重复5.5次,avr/Pth14基因为19.5次。蛋白质水平上同列比较发现,AvrBs3/PthA家族成员34aa重复单元的第12和第13位氨基酸为HD的至少需要3个,才可能满足毒性或无毒性功能。将avr/Pth13和avr/Pth14基因分别导入Xoo菌株PXO99A中之后,在抗水稻白叶枯病近等基因系上测定其致病性,发现avr/Pth13基因增强了PXO99A的致病能力,而avr/Pth14基因则减弱了PXO99A的致病力。以上结果提示,Xooc与Xoo一样,都存在avrBs3/PthA基因家族的无毒基因。从Xooc中克隆avr/Pth13和avr/Pth14基因在国内外尚属首次,? 展开更多
关键词 中国 水稻条斑病细菌 avrBs3/PthA基因家族 基因克隆 序列分析 致病性
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农杆菌介导石斛兰遗传转化的研究 被引量:17
14
作者 张妙彬 梁擎中 +3 位作者 肖浩 岑鹏 范干群 潘丽晶 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期565-570,共6页
利用根癌农杆菌介导转化石斛兰类原球茎(PLBs),研究了石斛兰对潮霉素的敏感性,并通过gus瞬时表达率比较不同类型农杆菌、侵染液浓度及乙酰丁香酮(AS)等对石斛兰转化的影响。结果表明:带有pCAMBIA1301的根癌农杆菌(Agrobacterium... 利用根癌农杆菌介导转化石斛兰类原球茎(PLBs),研究了石斛兰对潮霉素的敏感性,并通过gus瞬时表达率比较不同类型农杆菌、侵染液浓度及乙酰丁香酮(AS)等对石斛兰转化的影响。结果表明:带有pCAMBIA1301的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105(简称为E1301)比带有相同表达载体的LBA4404(简称L1301)对石斛兰的转化效率更高,前者约为后者的6倍;较高浓度的侵染液转化效率更高(OD600为1.0或1.2时的转化效率约为OD600为0.6或0.8时的2倍);在农杆菌生长至OD600值为0.8时,添加AS可提高转化效率;而当OD600为0.6、1.0和1.2时,添加AS反而不同程度地降低转化效率;在各种处理中,OD600为1.0时不添加AS的转化效率最高,达44.4%。经过5—6个月选择培养,抗性小苗经GUS染色、PCR和Southern杂交检测证明为转基因植株。 展开更多
关键词 石斛兰 GUS 根癌农杆菌 转化 southern杂交
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不结球白菜抗病基因同源序列的克隆及分析 被引量:14
15
作者 王彦华 侯喜林 +2 位作者 申书兴 陈雪平 王梅 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期2621-2626,共6页
目的利用同源序列法分离不结球白菜抗病基因同源序列。方法根据植物抗病基因TIR-NBS-LRR保守区设计简并引物,对不结球白菜基因组DNA及cDNA进行PCR扩增。结果获得了10个具有通读氨基酸序列的片段。同源性比较发现,该10个片段均属于TIR-NB... 目的利用同源序列法分离不结球白菜抗病基因同源序列。方法根据植物抗病基因TIR-NBS-LRR保守区设计简并引物,对不结球白菜基因组DNA及cDNA进行PCR扩增。结果获得了10个具有通读氨基酸序列的片段。同源性比较发现,该10个片段均属于TIR-NBS-LRR类抗病基因同源序列(RGA),与已知R基因相应区段的氨基酸序列一致性为50%~66%。与已知抗病基因聚类分析结果显示,该10个RGA序列可以分为5大类。利用RGA950作为探针进行Southern杂交,结果表明,其在基因组中存在多拷贝。结论本研究成功获得了不结球白菜RGA序列,为进一步克隆不结球白菜的R基因奠定了基础。 展开更多
关键词 不结球白菜 抗病基因同源序列 TIR—NBS—LRR southern杂交
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绿色荧光蛋白标记荧光假单胞菌P303及其生存能力检测 被引量:12
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作者 张霞 张杰 +2 位作者 李国勋 黄大昉 陈中义 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期280-286,共7页
构建了含有荧光假单胞菌自身启动子PP303的中间质粒载体pGFP.然后利用mini-Tn5转座子,通过接合转移,将两个带有不同启动子的绿色荧光蛋白基因分别整合到荧光假单胞菌P303染色体上,获得了在488nm波长下发光稳定的P303m1和P303m3菌株.PCR... 构建了含有荧光假单胞菌自身启动子PP303的中间质粒载体pGFP.然后利用mini-Tn5转座子,通过接合转移,将两个带有不同启动子的绿色荧光蛋白基因分别整合到荧光假单胞菌P303染色体上,获得了在488nm波长下发光稳定的P303m1和P303m3菌株.PCR鉴定和Southern印迹结果均证明绿色荧光蛋白已随机插入P303染色体.SDS-PAGE结果表明,含有PA1/04/03启动子的P303m3菌株GFP表达量低于含有PP303启动子的P303m1菌株,染色体标记的GFP表达量低于质粒标记.室内平板抑菌试验结果表明,P303m1与出发菌株P303抑菌活性相当,对九种植物病原真菌有较强的拮抗作用.定殖、生存竞争能力研究表明,荧光假单胞菌在自然土壤中和大白菜根际都具有较强的定殖能力.P303和P303m1在自然土壤中第60天的菌量分别为1.63×104和3.3×102cfu/g土(湿重),大白菜根际第50天的菌量分别为3.29×106和4.1×104cfu/g根(湿重). 展开更多
关键词 荧光假单胞菌 绿色荧光蛋白 接合转移 southern杂交 定殖 绿色荧光蛋白标记 竞争能力 绿色荧光蛋白基因 southern 检测
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牛泡沫病毒(BSV)3026毒株的分离及分子生物学鉴定 被引量:13
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作者 刘淑红 陈荷新 +4 位作者 陈家童 梁栋 陈启民 耿运琪 Wood.C. 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期140-145,共6页
从一头牛免疫缺陷病毒(BIV)检测阳性的3026号牛外周血中,分离到一株病毒,即3026病毒株。体外细胞培养和反转录分析证明,此病毒是一反转录病毒,可在胎牛肺细胞中引起典型的泡沫样病变,形成合胞体。PCR扩增和Sou... 从一头牛免疫缺陷病毒(BIV)检测阳性的3026号牛外周血中,分离到一株病毒,即3026病毒株。体外细胞培养和反转录分析证明,此病毒是一反转录病毒,可在胎牛肺细胞中引起典型的泡沫样病变,形成合胞体。PCR扩增和Southern杂交显示,此病毒的cDNA和PCR产物均可与牛泡沫病毒(BSV)阳性对照的HirtDNA杂交。3′LTR上游一段330bp的PCR产物序列分析表明,3026毒株与BSV阳性对照相比发生了两个碱基的改变。所有这些表明,3026病毒是一株新发现的BSV毒株。 展开更多
关键词 牛病毒 牛泡沫病毒 分离 分子生物学鉴定
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肝癌和癌周双份肝组织的HBV DNA整合状况 被引量:14
18
作者 吕凌 彭文伟 何树初 《临床肝胆病杂志》 CAS 1992年第2期63-65,共3页
本文对30例肝癌患者的肝组织进行研究,从其中24例HBsAg(+)病人检出HBVDNA整合者21例,其中癌组织有整合者18例,癌周组织有整合者15例,双份组织均有整合者13例。6例HBsAg(-)者的1例癌周组织也检出HBVDNA整合。杂交带分析发现,不同病例和... 本文对30例肝癌患者的肝组织进行研究,从其中24例HBsAg(+)病人检出HBVDNA整合者21例,其中癌组织有整合者18例,癌周组织有整合者15例,双份组织均有整合者13例。6例HBsAg(-)者的1例癌周组织也检出HBVDNA整合。杂交带分析发现,不同病例和同一例肝内不同组织整合带数目和电泳位置不一致。23例癌周肝组织有明显的碎屑坏死,这可能与整合、癌变有关。 展开更多
关键词 肝细胞肝癌 乙肝病毒 整合杂交
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麻疯树(Jatropha curcas)毒蛋白curcin基因家族成员的分离和描述 被引量:10
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作者 张金平 秦小波 +1 位作者 徐莺 陈放 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期1042-1046,共5页
麻疯树curcin基因家族中4个成员通过PCR扩增被分离.它们都不含有内含子,序列分析表明它们编码Ⅰ型核糖体失活蛋白(Ribosome-Inactivating Proteins,RIPs),证明curcin基因如同大多数RIPs一样由多基因家族编码.四个curcin基因家族成员和... 麻疯树curcin基因家族中4个成员通过PCR扩增被分离.它们都不含有内含子,序列分析表明它们编码Ⅰ型核糖体失活蛋白(Ribosome-Inactivating Proteins,RIPs),证明curcin基因如同大多数RIPs一样由多基因家族编码.四个curcin基因家族成员和另两个已知curcin基因家族成员的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)的序列比对结果显示curcin基因家族成员至少可分为两个亚类群,亚类群之间的氨基酸序列相似性低于88%.分别将这4个curcin基因家族成员命名为curA2、curA3、curB2、curB3.对四条基因启动子区和ORF生物信息学分析推测curB2、curB3可能是被真菌及逆境诱导的curcin基因家族成员全长,而curA2、curA3可能是麻疯树胚乳贮存的curcin基因家族成员全长.Southern杂交结果显示,麻疯树基因组中至少有3个以上curcin基因家族成员. 展开更多
关键词 麻疯树毒蛋白 基因家族 核糖体失活蛋白 southern杂交
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葡萄无核基因的SCAR标记及Southern blot分析 被引量:7
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作者 杨英军 王跃进 +2 位作者 周鹏 王西平 张剑侠 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2002年第6期77-80,共4页
 根据无核基因特异RAPD标记的序列进行分析,合成1对特异引物P1+P3(序列分别是P1:5′CTCATCTTCTTGATGGTGAT3′;P3:5′AAGTGAAGAACATCATTAAGAAC3′),对30个葡萄材料进行PCR扩增,成功地将RAPD标记转换成SCAR标记。并对含有该标记序列的重...  根据无核基因特异RAPD标记的序列进行分析,合成1对特异引物P1+P3(序列分别是P1:5′CTCATCTTCTTGATGGTGAT3′;P3:5′AAGTGAAGAACATCATTAAGAAC3′),对30个葡萄材料进行PCR扩增,成功地将RAPD标记转换成SCAR标记。并对含有该标记序列的重组质粒进行Hind 和Spe 双酶切,获得的310bp片段回收后制成探测葡萄无核基因存在与否的杂交探针,成功地对7个葡萄品种进行Southernblot分析,实现了分子标记检测葡萄无核基因的目的。 展开更多
关键词 葡萄 无核基因 SCAR标记 southern-blot分析
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