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逆转录环介导等温扩增技术检测南方菜豆花叶病毒 被引量：10
1
作者 郭立新 段维军 +3 位作者 徐亚飞 徐颖 张永江 张吉红 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期349-356,共8页
根据南方菜豆花叶病毒外壳蛋白基因序列设计并合成了4组RT-LAMP引物,通过引物筛选试验,确定SB1组引物为最佳引物,并进行了引物特异性与灵敏度检测试验,最终建立了南方菜豆花叶病毒的RT-LAMP检测方法。灵敏度检测试验显示,RT-LAMP方法比... 根据南方菜豆花叶病毒外壳蛋白基因序列设计并合成了4组RT-LAMP引物,通过引物筛选试验,确定SB1组引物为最佳引物,并进行了引物特异性与灵敏度检测试验,最终建立了南方菜豆花叶病毒的RT-LAMP检测方法。灵敏度检测试验显示,RT-LAMP方法比普通RT-PCR法灵敏度高10倍,而检测时间明显缩短,整个反应过程只需40 min。此外,体系中加入钙黄绿素,反应结束后,可裸眼观察颜色变化来判定结果。本研究所建立的SBMV RT-LAMP方法具有快速、稳定、灵敏、特异、操作简单的特点,适合于SBMV的现场快速检测。 展开更多
关键词 南方菜豆花叶病毒 逆转录环介导等温扩增 检测
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实时荧光RT-PCR-步法检测南方菜豆花叶病毒 被引量：7
2
作者 白静 陈红运 +2 位作者 傅俊范 李桂芬 朱水芳 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期78-82,共5页
南方菜豆花叶病毒(Southern bean mosaic virus,SBMV)是我国二类检疫性有害生物,以南方菜豆花叶病毒日本分离物(SBMV-J)总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增病毒外壳蛋白基因及其上游基因的cDNA片断并将其克隆到pMD18-T载体上。序列分析结... 南方菜豆花叶病毒(Southern bean mosaic virus,SBMV)是我国二类检疫性有害生物,以南方菜豆花叶病毒日本分离物(SBMV-J)总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增病毒外壳蛋白基因及其上游基因的cDNA片断并将其克隆到pMD18-T载体上。序列分析结果表明:SBMV-J cp基因由801个核苷酸组成,编码266个氨基酸,SBMV-J与其它分离物及株系cp基因的核苷酸序列同源性为83%～97%,氨基酸序列同源性为86%～97%。由于SBMV各分离物及株系cp基因的同源性较低,难于设计出较长的普通PCR引物。通过较短引物设计和TaqMan-MGB探针技术,建立了SBMV的实时荧光RT-PCR一步检测方法。该方法的检测低限是0．16 pg,最佳检测总RNA的量是0．16 ng。 展开更多
关键词 南方菜豆花叶病毒 外壳蛋白基因 序列分析 实时荧光RT-PCR
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MAP-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析测定南方菜豆花叶病毒 被引量：2
3
作者 张书圣 焦奎 +3 位作者 陈洪渊 王曼霞 张成良 张作芳 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2000年第8期1200-1204,共5页
提出间氨基酚 ( MAP) -H2 O2 -辣根过氧化物酶 ( HRP)伏安酶联免疫分析新体系 ,并用于南方菜豆花叶病毒 ( SBMV)的测定 .以线性扫描二阶导数伏安法检测 HRP催化 H2 O2 氧化 MAP的产物 ,用于游离 HRP及 SBMV的测定 ,灵敏度均高于经典的 E... 提出间氨基酚 ( MAP) -H2 O2 -辣根过氧化物酶 ( HRP)伏安酶联免疫分析新体系 ,并用于南方菜豆花叶病毒 ( SBMV)的测定 .以线性扫描二阶导数伏安法检测 HRP催化 H2 O2 氧化 MAP的产物 ,用于游离 HRP及 SBMV的测定 ,灵敏度均高于经典的 ELISA显色光度法 .本法对 HRP测定的线性范围为 1 .0× 1 0 - 8～1 .0× 1 0 - 6 g/L,检测限为 3 .8× 1 0 - 9g/L;对 SBMV测定的线性范围为 4 .0～ 50 0 0 ng/m L,检测限为 4 .0ng/m L.用所建立的方法测定病毒感染病叶澄清液的最高稀释比为 1∶ 1 .5× 1 0 5 ,并与现行的 ELISA显色光度法进行对照 。 展开更多
关键词 南方菜豆花叶病毒 HRP 分析 免疫分析 伏安法
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南方菜豆花叶病毒(SBMV)两典型株系特异cDNA和RNA探针的制备及应用 被引量：7
4
作者 李尉民 张成良 谢联辉 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期243-248,共6页
南方菜豆花叶病毒（ＳＢＭＶ）主要有２株系：菜豆株系（ＳＢＭＶ－Ｂ）和豇豆株系（ＳＢＭＶ－Ｃ），血清学方法不能予以区分。根据已报道的核酸序列设计了２对特异引物，进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增并克隆到载体Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ中，序... 南方菜豆花叶病毒（ＳＢＭＶ）主要有２株系：菜豆株系（ＳＢＭＶ－Ｂ）和豇豆株系（ＳＢＭＶ－Ｃ），血清学方法不能予以区分。根据已报道的核酸序列设计了２对特异引物，进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增并克隆到载体Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ中，序列测定予以证实后利用随机引物法合成放射性ｃＤＮＡ探针，再进行体外转译合成地高辛ＵＴＰ标记的ＲＮＡ探针。２种探针均可分别特异地检测Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ膜上的ＳＢＭＶ－Ｂ和ＳＢＭＶ－Ｃ。ＲＮＡ探针检测ＳＢＭＶ－Ｂ和ＳＢＭＶ－Ｃ灵敏度分别为：０．１μｇ和０．０１μｇ。 展开更多
关键词 菜豆 花叶病毒 探针 CDNA RNA
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