TGF-β、Smad信号通路蛋白及α-SMA在糖尿病肾病患者肾组织中的表达和意义 被引量：19

1

作者 房勃龙 韩鸿玲 +1 位作者 张鹏 崔瑾 《天津医药》 CAS 北大核心 2013年第11期1067-1069,I0002,共4页

目的检测转化生长因子(TGF)-β、Smad信号通路蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在糖尿病肾病(DN)患者肾活检组织中的表达,探讨DN的发病机制。方法收集DN肾组织标本28例(DN组);非DM行肾切除的正常肾组织10例为对照组。应用免疫组化方法检... 目的检测转化生长因子(TGF)-β、Smad信号通路蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在糖尿病肾病(DN)患者肾活检组织中的表达,探讨DN的发病机制。方法收集DN肾组织标本28例(DN组);非DM行肾切除的正常肾组织10例为对照组。应用免疫组化方法检测TGF-β1、TGF-β受体(R)Ⅰ、TGF-βRⅡ、Smad2/3、α-SMA在肾组织中的表达。结果 (1)TGF-β1、TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad2/3在DN组和对照组中均有表达,前者高于后者,DN组早期光镜下肾组织未见明显异常时即有明显的高表达,而随着疾病的进展未见表达增高的现象。肾小球、肾小管出现纤维化后并不表达上述因子。(2)对照组的α-SMA仅表达于肾血管、肾小球和肾小管,而肾间质未见α-SMA表达,而DN组α-SMA在上述组织中均有表达。结论TGF-β及Smad信号转导通路参与了DN的发病,DN可能与免疫复合物性肾小球肾炎具有相似的发病机制。 展开更多

关键词 糖尿病肾病 转化生长因子β smad2蛋白质 smad3蛋白质 肌动蛋白类 信号传导 活组织检查 免疫组织化学 Α-平滑肌肌动蛋白

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转化生长因子β／Smad信号传导系统在子宫内膜异位症盆腔粘连患者腹膜中的表达及其意义 被引量：14

2

作者 李成龙 冷金花 +3 位作者 李孟慧 史精华 贾双征 郎景和 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期826-830,共5页

目的探讨转化生长因子（TGF）β／Smad信号传导系统在子宫内膜异位症（内异症）盆腔粘连患者腹膜中的表达变化及其意义。方法选择2009年12月至2010年3月就诊于北京协和医院、由同一妇科医师行腹腔镜手术的育龄妇女20例，其中内异症患者1... 目的探讨转化生长因子（TGF）β／Smad信号传导系统在子宫内膜异位症（内异症）盆腔粘连患者腹膜中的表达变化及其意义。方法选择2009年12月至2010年3月就诊于北京协和医院、由同一妇科医师行腹腔镜手术的育龄妇女20例，其中内异症患者11例[内异症组，其中3例曾经接受过促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a）治疗]，非内异症且无盆腔粘连的卵巢良性肿瘤患者9例为对照组。术中留取患者侧盆壁、远离病灶、肉眼观察形态基本正常的腹膜组织。应用HE染色、Masson染色法观察两组患者腹膜显微结构；应用免疫组化、实时定量（RT）PCR技术检测TGF-131、3和Smad3、7在两组患者腹膜中的表达情况；分析GnRH—a对TGF-131、3和Smad3、7蛋白表达的影响。结果（1）腹膜显微结构：与对照组比较，内异症组患者腹膜问皮细胞核增大、细胞下结缔组织层明显增厚、纤维分布紊乱、成纤维细胞及炎性细胞数量明显增多；（2）TGF-131、3表达水平：内异症组患者腹膜TGF-131、3的表达水平分别为0．170±0．020、0．110±0．010，高于对照组的0．070±0．010、0．050-4-0．020；GnRH-a下调TGF-131表达水平（0．1304-0．030），而上调TGF-133表达水平（0．490±0．090）；（3）Smad3、7表达水平：内异症组患者腹膜Smad3、7的表达水平分别为0．140±0．020、0．1104-0．020，高于对照组的0．024±0．004和0．0144-0．007；GnRH．a显著升高Smad7（0．0404-0．020）水平，但调节Smad3水平的效果不明显。结论内异症患者腹膜显微结构发生了改变，腹膜TGF-13、Smad蛋白及基因表达水平升高，GnRH-a能够调节TGF．13、Smad蛋白表达。 展开更多

关键词 子宫内膜异位症 腹膜 转化生长因子Β smad3蛋白质 smad7蛋白质

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骨髓间充质干细胞对实验性肝纤维化大鼠的作用及其机制 被引量：12

3

作者 周伟 陈鹏飞 +2 位作者 吴小翎 姜蓉 徐艳华 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第2期176-180,共5页

目的探讨骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植后对实验性肝纤维化大鼠的作用及其机制。方法直接贴壁法分离纯化雄性SD大鼠BMSCs;将30只雌性SD大鼠分为3组:正常组、肝纤维化模型组和BMSCs移植组,模型组和BM... 目的探讨骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植后对实验性肝纤维化大鼠的作用及其机制。方法直接贴壁法分离纯化雄性SD大鼠BMSCs;将30只雌性SD大鼠分为3组:正常组、肝纤维化模型组和BMSCs移植组,模型组和BMSCs移植组经皮下注射40%四氯化碳(CCL4),每周3次,复制大鼠肝纤维化模型,建模8周后,BMSCs移植组经尾静脉移植2×106个BMSCs,3 d后再次移植相同剂量的BMSCs,12周后处死各组大鼠,取外周血,分离血清,检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和白蛋白(ALB)水平;取肝组织进行HE、VG染色,观察肝脏病理变化;免疫组化法和荧光定量PCR法检测肝组织中Ⅰ型胶原(TypeⅠcollagen,ColⅠ)和胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达,荧光定量PCR法检测TGFβ1和Smad3 mRNA的表达。结果 BMSCs移植组较模型组大鼠肝组织纤维化程度明显加重;BMSCs移植组ALT和AST水平较模型组明显升高(P<0.05),ALB水平较模型组明显降低(P<0.05);ColⅠ和GFAP在模型组和BMSCs移植组纤维条索中有大量表达,BMSCs移植组中ColⅠ和GFAP mRNA及蛋白的表达量明显高于模型组(P<0.05);模型组和BMSCs移植组中TGFβ1和Smad3 mRNA的表达量明显高于正常组(P<0.05),且BMSCs移植组中TGFβ1和Smad3mRNA的表达量明显高于模型组(P<0.05)。结论 BMSCs移植可加重大鼠肝纤维化,BMSCs通过上调TGFβ/Smad信号传导通路的TGFβ1和Smad3的表达促进肝纤维化的进展。 展开更多

关键词 间质干细胞移植 肝硬化 转化生长因子Β1 smad3蛋白质

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人促红细胞生成素对大鼠急性创面转化生长因子β1／Smad3信号转导通路的影响 被引量：8

4

作者 吕大伦 徐姝娟 +5 位作者 陈雷 丁伟 王合丽 张炜 王帅 徐祥 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期719-726,共8页

目的探究人促红细胞生成素（hEPO）对大鼠急性创面愈合相关转化生长因子β1（TGF－β1）/Smad3信号转导通路的影响。方法选取72只健康SD大鼠，在大鼠背部制成直径约2.5 cm的圆形急性创面，按随机数字表法将大鼠分为生理盐水对照组、低... 目的探究人促红细胞生成素（hEPO）对大鼠急性创面愈合相关转化生长因子β1（TGF－β1）/Smad3信号转导通路的影响。方法选取72只健康SD大鼠，在大鼠背部制成直径约2.5 cm的圆形急性创面，按随机数字表法将大鼠分为生理盐水对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组18只。4组大鼠每日常规清创后，生理盐水对照组大鼠创面予1 mL生理盐水浸润的纱布外敷，低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠创面每天分别予1 mL 50、100、150 U的hEPO浸润的纱布湿敷，再用6层干纱布包扎固定，每天换药1次。治疗3、7、14 d每组取6只大鼠行大体观察并计算创面愈合率，处死后取创面组织采用免疫组织化学法观察CD31和TGF－β1的表达，蛋白质印迹法检测3只大鼠磷酸化Smad3蛋白的表达。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD检验、Bonferroni校正。结果（1）治疗3 d，4组大鼠创面均有明显的渗出并有结痂。治疗7 d，低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠创面均较生理盐水对照组明显缩小。治疗14 d，4组大鼠创面均全部愈合。治疗7 d，与生理盐水对照组相比，中剂量组、高剂量组大鼠创面愈合率明显增加（P〈0.01）；余时间点，各组大鼠创面愈合率相近（P〉0.05）。（2）CD31主要定位在血管上。除低剂量组治疗3、7 d（P〉0.05）外，低剂量组大鼠治疗14 d和中剂量组、高剂量组大鼠治疗3～14 d创面组织中CD31表达均明显高于生理盐水对照组（P〈0.01）；除治疗3 d（P〉0.05）外，中剂量组和高剂量组大鼠治疗7、14 d创面组织中CD31表达均明显高于低剂量组（P〈0.01）；除治疗3 d（P〉0.05）外，高剂量组大鼠治疗7、14 d创面组织中CD31表达明显高于中剂量组（P〈0.01）。（3）除低剂量组治疗3 d（1.9±0.7，P〉0.05）外，低剂量组大鼠治疗7、14 d（3.3±1.0、3.7±0.7）和中剂量组、 展开更多

关键词 抗原 CD31 转化生长因子Β1 smad3蛋白质 伤口愈合 人促红细胞生成素

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荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠TGF-β1及Smad3、7表达的影响 被引量：6

5

作者 刘 赵永忠 +1 位作者 肖绪华 何志国 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第13期1299-1301,共3页

目的探讨荔枝核总黄酮(TFL)对胆汁性肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、7表达的影响及其抗肝纤维化可能的作用机制。方法将雄性SD大鼠70只随机分为假手术组、模型组、TFL大剂量组[200mg/(kg.d)]和TFL小剂量组[100mg/(... 目的探讨荔枝核总黄酮(TFL)对胆汁性肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、7表达的影响及其抗肝纤维化可能的作用机制。方法将雄性SD大鼠70只随机分为假手术组、模型组、TFL大剂量组[200mg/(kg.d)]和TFL小剂量组[100mg/(kg.d)]。采用胆总管结扎制备肝纤维化大鼠模型。分别于术后第2、3、4周处死大鼠,留取肝脏组织。HE染色观察大鼠肝组织病理改变;免疫组织化学法检测TGF-β1、Smad3、7在肝组织内的动态表达。结果假手术组肝组织内TGF-β1、Smad3有少量表达,Smad7呈高表达。与模型组比较,TFL大剂量治疗后大鼠肝组织内纤维化程度降低。随着肝纤维化的形成和发展,第2、3、4周TFL大剂量组大鼠肝组织TGF-β1(3.000±1.309、2.000±1.309、1.800±1.649)、Smad3(2.875±1.458、2.000±1.309、1.833±0.753)与模型组TGF-β1(3.750±1.488、4.333±1.211、5.000±0.817)、Smad3(3.375±0.916、4.000±0.894、4.250±0.500)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TFL能有效地减轻胆总管结扎所致肝纤维化大鼠肝损伤及肝纤维化程度,其机制可能与抑制TGF-β1、Smad3高表达,上调Smad7表达有关。 展开更多

关键词 荔枝核 黄酮 肝硬化 转化生长因子 smad3蛋白质 smad7蛋白质

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姜黄素对大鼠肠纤维化的作用及其机制研究 被引量：6

6

作者 朱梅影 陆允敏 +2 位作者 欧洋肖 张惠箴 陈维雄 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期100-105,共6页

目的 探讨姜黄素在三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的大鼠结肠纤维化中的抗纤维化作用和机制.方法 SD大鼠40只随机分组,模型组（10只）、治疗组（10只）和对照组（10只）分别于第1、8、15、22和29天予TNBS 10 mg、15 mg、20 mg、25 mg和30 mg... 目的 探讨姜黄素在三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的大鼠结肠纤维化中的抗纤维化作用和机制.方法 SD大鼠40只随机分组,模型组（10只）、治疗组（10只）和对照组（10只）分别于第1、8、15、22和29天予TNBS 10 mg、15 mg、20 mg、25 mg和30 mg灌肠,另取10只大鼠给予50%乙醇灌肠,作为阴性对照（正常组）.从实验周期第1天起,治疗组大鼠每日予姜黄素30 mg/kg腹腔注射,对照组每日予0.9%NaCl腹腔注射,模型组和正常组不予处理.采用HE染色及Masson胶原三色染色观察大鼠结肠组织损伤和纤维化变化,采用ELISA法检测结肠黏膜中Th1/Th2型细胞因子IL-2、TNF-α、IL-4、IL-17的含量,采用荧光定量PCR法检测结肠黏膜中肠纤维化相关细胞因子如转化生长因子（TGF）-β1、结缔组织生长因子（CTGF）、Smad3、胶原Ⅰ、ⅢmRNA的表达.结果 模型组与对照组大鼠结肠组织大体损伤评分[（6.14±1.07）分,（6.17±1.47）分]及组织损伤评分[（8.42±1.40）分,（8.17±1.47）分]、胶原面积比（36.59%±4.07%,37.18%±4.05%）较正常组[分别为（2.13±0.64）分,（2.25±1.28）分和25.43%±5.39%]明显升高（均P＜0.05）.模型组与对照组大鼠黏膜组织中IL-2[（378.25±29.90）ng/L,（410.06±64.74）ng/L]、TNF-α[（87.11±23.85）ng/L,（100.41±12.59）ng/L）]、IL-17[（47.80±5.62）ng/L,（41.45±2.12）ng/L]含量及TGF-β1（4.71%±2.71%,4.12%±3.01%）、CTGF（10.33%±6.99%,11.46%±4.72%）、Smad3（9.35%±7.32%,10.11%±3.80%）、胶原Ⅰ（1.52%±1.11%,1.57%±1.35%）、胶原Ⅲ（3.04%±1.33%,3.03%±3.53%）mRNA表达量较正常组[分别为（179.74±20.73）ng/L,（35.47±7.13）ng/L,（14.48±7.52）ng/L和0.90%±1.13%,0.53%±0.47%,0.62%±0.44%,0.16%±0.09%,0.18%±0.10%]均明显升高（均P＜0.05）.而治疗组大鼠结肠组织大体损伤评分[（4.00±1.07）分]及组织损伤评分[（5.13±1.46）分]、胶原面积比（30.01%±7.56%）,IL-2[（223.91±28.04）ng/L]、TNF-α[（44.19± 展开更多

关键词 姜黄素 结肠 纤维化 白细胞介素2 转化生长因子81 smad3蛋白质 大鼠 Sprague—Dawley

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miR-10b靶向TGFBR1/SMAD3通路对特发性矮小症的软骨细胞增殖、肥大的影响机制

7

作者 胡娜 李正宇 +5 位作者 叶春风 吴英 姚庆 黄世祥 李文 朱海琴 《天津医药》 CAS 2024年第2期124-128,共5页

目的研究miR-10b对特发性矮小症(ISS)的影响及作用机制。方法收集ISS患儿(ISS组)和体检健康儿童(健康对照组)各54例,qPCR检验血清miR-10b表达量,分析ISS组患儿血清miR-10b表达与患儿临床资料的关系。采用miR-10b inhibitor、si-TGFBR1... 目的研究miR-10b对特发性矮小症(ISS)的影响及作用机制。方法收集ISS患儿(ISS组)和体检健康儿童(健康对照组)各54例,qPCR检验血清miR-10b表达量,分析ISS组患儿血清miR-10b表达与患儿临床资料的关系。采用miR-10b inhibitor、si-TGFBR1及各自阴性对照转染C28/I2细胞,利用CCK-8实验检测C28/I2细胞增殖能力,Western blot检测侏儒相关转录因子2(RUNX2)、X型胶原α1链(COL10A1)、转化生长因子β受体1(TGFBR1)、SMAD3、pSMAD3蛋白表达量。在StarBase数据库筛选miR-10b靶点,利用双萤光素酶报告基因实验验证miR-10b与TGFBR1的靶向关系。结果ISS组血清miR-10b表达量高于健康对照组,且miR-10b表达越高,患儿的身高、IGF-1、骨特异性碱性磷酸酶的下降越明显(P<0.05)。与NC组相比,miR-10b inhibitor组细胞增殖能力升高,RUNX2、COL10A1、TGFBR1、pSMAD3蛋白表达上调(P<0.05);StarBase数据库提示miR-10b存在TGFBR1的结合位点,双萤光素酶报告基因实验证实两者结合。与si-NC相比,si-TGFBR1组TGFBR1表达量下调,细胞增殖能力下降(P<0.05)。结论miR-10b通过靶向TGFBR1/SMAD3通路在特发性矮小症中抑制软骨细胞的增殖、肥大。 展开更多

关键词 特发性矮小症 受体 转化生长因子βⅠ型 MIR-10B smad3蛋白质

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靶向大鼠Smad3基因的siRNA筛选及其shRNA重组慢病毒的构建 被引量：5

8

作者 陈鹏 郑素军 +5 位作者 王世美 张建军 邢欣悦 张莹 刘梅 段钟平 《临床肝胆病杂志》 CAS 2011年第5期533-537,共5页

目的设计并筛选针对大鼠Smad3基因的siRNA,构建靶向Smad3基因的shRNA重组慢病毒。方法针对大鼠Smad3基因设计并合成6对siRNA(siRNA001～006)及1对无关对照siRNA,转染大鼠肝细胞株BRL-3A,应用Western Blot检测各siRNA对SMAD3蛋白表达的... 目的设计并筛选针对大鼠Smad3基因的siRNA,构建靶向Smad3基因的shRNA重组慢病毒。方法针对大鼠Smad3基因设计并合成6对siRNA(siRNA001～006)及1对无关对照siRNA,转染大鼠肝细胞株BRL-3A,应用Western Blot检测各siRNA对SMAD3蛋白表达的抑制作用,挑选抑制效率高的siRNA。依据所得的序列合成并克隆到pLL3.7载体中,与包装质粒pRSV-rev、pMDLg-pRRE和VSV-G共转染293FT细胞获得靶向Smad3的慢病毒。通过流式细胞仪绿色荧光蛋白(GFP)荧光计数来检测病毒滴度。结果 Western Blot检测证实siRNA001、siRNA005、siRNA006对SMAD3蛋白表达的抑制作用明显,抑制率分别可达83.36%、86.99%及64.88%,而对照siRNA无明显作用。酶切和测序结果显示Smad3 shRNA及对照shRNA重组载体质粒pLL3.7-shRNA构建成功,将构建的质粒进行慢病毒包装可产生有感染活性的慢病毒颗粒。结论筛选出针对大鼠Smad3基因有明显抑制作用的3对siRNA,并成功构建表达相应shRNA的4种重组慢病毒,为研究调控Smad3的表达对肝再生或肝纤维化的影响提供了实验条件。 展开更多

关键词 smad3蛋白质 RNA干扰 RNA 小分子干扰 慢病毒属

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2型糖尿病肾病患者尿中smad3蛋白的水平变化和意义 被引量：6

9

作者 郭凯锋 寇静鑫 +3 位作者 陆俊茜 张磊 于浩泳 陈海冰 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第14期1067-1071,共5页

目的 探讨2型糖尿病患者尿中smad3蛋白水平变化在糖尿病肾病（DN）中的意义及其与DN进展的相关性。方法选取上海交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科2010年5月至2011年8月收治的282例2型糖尿病患者和100名健康对照者，并根据尿标本白... 目的 探讨2型糖尿病患者尿中smad3蛋白水平变化在糖尿病肾病（DN）中的意义及其与DN进展的相关性。方法选取上海交通大学附属第六人民医院内分泌代谢科2010年5月至2011年8月收治的282例2型糖尿病患者和100名健康对照者，并根据尿标本白蛋白与肌酐比率（UACR），将患者分为正常白蛋白尿组（NA组）110例、微量白蛋白尿组（MA组）114例、大量白蛋白尿组即DN组58例。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测尿中smad3水平。同时测定人体参数及相关生化指标包括年龄、血压、体质指数（BMI）、血糖、血脂、尿白蛋白／肌酐（UACR）、肾小球滤过率估计值（eGFR）、糖化血红蛋白等，糖尿病视网膜病变（DR）根据免散瞳眼底照相结果进行评估，将58例DN患者分为不伴DR组（25例）和伴DR组（33例）。结果（1）2型糖尿病组尿smad3的水平显著高于对照组[489（273，1193）比311（179，497）ng／mmolCr，P〈0．01]。（2）按照UACR将2型糖尿病组再分为3组比较尿smad3水平，MA组与NA组相比、DN组与NA组相比、DN组与MA组相比，差异均有统计学意义[552（316，1338）比317（200，594）、1035（503，3035）比317（200，594）、1035（503，3035）比552（316，1338），均P〈0．01]。（3）Pearson相关分析表明尿smad3水平与年龄、收缩压、糖化血红蛋白、尿素氮、肌酐、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、eGFR及UACR显著相关，多元回归分析发现UACR是尿smad3的独立决定因子（p=0．754，P〈0．01）。（4）DN合并DR组尿smad3水平显著高于未合并DR组[1905（806，4303）比595（331，1183），P〈0．01]；DN合并DR组UACR水平与未合并DR组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论2型DN患者尿中smad3水平显著增加，并与ACR显著相关，提示尿smad3有可能作为诊断DN的一个标志物，并可预测DN的严重程度。 展开更多

关键词 糖尿病肾病 smad3蛋白质 白蛋白尿

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转化生长因子-β1对绒毛膜癌JEG-3细胞增殖及Smad3、Smad7表达的影响 被引量：3

10

作者 许倩 李玉红 +1 位作者 李晓茹 张晓红 《天津医药》 CAS 北大核心 2010年第9期746-749,共4页

目的:观察转化生长因子(TGF)-β1对绒毛膜癌JEG-3细胞增殖能力及其Smad3、Smad7蛋白表达的影响。方法:体外培养人绒毛膜癌JEG-3细胞,分别给予不同剂量及不同作用时间的TGF-β1进行诱导,四甲基氮唑比色法检测细胞增殖能力变化,蛋白印迹... 目的:观察转化生长因子(TGF)-β1对绒毛膜癌JEG-3细胞增殖能力及其Smad3、Smad7蛋白表达的影响。方法:体外培养人绒毛膜癌JEG-3细胞,分别给予不同剂量及不同作用时间的TGF-β1进行诱导,四甲基氮唑比色法检测细胞增殖能力变化,蛋白印迹法检测Smad3、Smad7蛋白的表达变化。结果:JEG-3细胞对TGF-β1的诱导作用表现为良好的浓度效应和时间效应。100、200μg/LTGF-β1作用后,细胞增殖率显著增加(P<0.01),Smad3蛋白的相对表达量增加(P<0.05或P<0.01),Smad7蛋白无明显改变(P>0.05);同时100μg/LTGF-β1作用12h后,细胞增殖率显著增加,Smad3蛋白相对表达量增加(P<0.05或P<0.01),Smad7蛋白表达无改变(P>0.05)。结论:外源性TGF-β1能够促进绒毛膜癌JEG-3细胞的增殖,具有良好的浓度效应和时间效应;绒毛膜癌JEG-3细胞逃逸TGF-β1介导的生长抑制作用,可能是由于TGF-β1/Smads信号通路中的Smad3、Smad7蛋白发生异常而致。 展开更多

关键词 转化生长因子β1 绒毛膜癌 细胞增殖 smad3蛋白质 smad7蛋白质 印迹法 蛋白质

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GSK3β促进TGF-β1诱导的肾小管上皮HK-2细胞纤维化 被引量：5

11

作者 赵凯 陈姗 +2 位作者 龚如军 黎松 何凤田 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第19期1921-1924,共4页

目的阐明GSK3β对于肾脏小管间质纤维化的作用。方法以TGF-β1诱导的体外肾小管间质纤维化模型为研究对象,以GSK3β特异抑制剂LiCl处理细胞和不同GSK3β表达质粒(野生型GSK3β表达质粒GSK3β-WT;第9位点上丝氨酸突变为丙氨酸,由此不能... 目的阐明GSK3β对于肾脏小管间质纤维化的作用。方法以TGF-β1诱导的体外肾小管间质纤维化模型为研究对象,以GSK3β特异抑制剂LiCl处理细胞和不同GSK3β表达质粒(野生型GSK3β表达质粒GSK3β-WT;第9位点上丝氨酸突变为丙氨酸,由此不能再被磷酸化失活而具有固有活性的GSK3β突变质粒GSK3β-S9A;第85、86位点上赖氨酸突变为丙氨酸、失去激酶活性的GSK3β突变质粒GSK3β-KD)转染细胞,观察肾脏纤维化的标志性分子纤维连接素蛋白(fibronectin,FN)表达水平的改变,以及对TGF-β/Smad信号通路的作用。结果 LiCl增加HK-2细胞GSK3β的磷酸化,抑制GSK3β的活性,同时降低了细胞基础水平和TGF-β1诱导的FN表达。过表达的GSK3β-WT增强TGF-β1诱导的FN表达,而这种效应在GSK3β-S9A转染细胞更为显著。过表达GSK3β-KD抑制TGF-β1诱导的FN表达。分析对TGF-β/Smad信号通路的作用,LiCl可以抑制TGF-β1诱导的Smad3磷酸化,而对Smad2磷酸化水平无影响。同时,LiCl也不改变Smad3的总蛋白表达。结论 GSK3β通过TGF-β1/Smad3信号通路促HK-2细胞纤维化,抑制GSK3β可以抗纤维化。 展开更多

关键词 肾脏纤维化 糖原合成酶激酶3 转化生长因子β1 smad3蛋白质

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Smad7,Smad3和Smad2在DEHP诱导的尿道下裂大鼠阴茎中的表达 被引量：1

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作者 李明勇 王星 +5 位作者 石秦林 魏光辉 曹友汉 邓湘 许韩峰 李清 《临床小儿外科杂志》 CAS 2018年第2期136-140,共5页

目的研究Smads(7,3和2)在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di-(2-ethylhexyl)phthalate,(DEHP)]诱导的尿道下裂大鼠阴茎组织中的表达变化,探讨尿道下裂发生机制。方法将SD孕鼠随机分为2组:实验组(将DEHP溶于1.5 mL大豆油中灌胃大鼠)和对照组(... 目的研究Smads(7,3和2)在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di-(2-ethylhexyl)phthalate,(DEHP)]诱导的尿道下裂大鼠阴茎组织中的表达变化,探讨尿道下裂发生机制。方法将SD孕鼠随机分为2组:实验组(将DEHP溶于1.5 mL大豆油中灌胃大鼠)和对照组(以1.5 mL大豆油灌胃大鼠),每组20只,自孕12 d(gestation day,GD12)至19 d(GD19)连续每天定时给药1次。至GD20行剖宫产取出雄性胎鼠,切取阴茎组织,采用实时定量PCR和免疫组化法分别检测胎鼠阴茎中Smad7,Smad3和Smad2三者mRNA和蛋白质表达水平。结果经qP CR检测分析后发现,Samd7,Smad3和Smad2三者mRNA在正常对照组相对于内参GAPDH的表达分别是1.00,0.84和1.14,在DEHP暴露组其相对表达分别是1.87,1.36和1.49,且三者在实验组的表达与正常对照组比较,均升高(P值分别为<0.001,0.041和0.021);观察实验组Smad7和p-Smad2/3蛋白表达水平亦有增加趋势。结论DEHP诱导的先天性尿道下裂可能与胎鼠阴茎组织中Smads(7,3和2)的过度表达有关。 展开更多

关键词 尿道下裂 二乙基己基邻苯二甲酸 smad7蛋白质 smad3蛋白质 smad2蛋白质 大鼠

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麝香保心丸联合达格列净对心力衰竭大鼠肾脏纤维化的影响

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作者 朱庆颖 刘科卫 高燕 《转化医学杂志》 2023年第6期303-308,共6页

目的 探讨麝香保心丸和达格列净对心力衰竭大鼠肾脏纤维化的影响。方法 将Wistar雄性大鼠分为对照组(n=8)、模型组(n=9)、麝香保心丸组(n=8)、达格列净组(n=8)和麝香保心丸+达格列净组(n=8)。模型组及各药物组大鼠予以腹腔注射阿霉素制... 目的 探讨麝香保心丸和达格列净对心力衰竭大鼠肾脏纤维化的影响。方法 将Wistar雄性大鼠分为对照组(n=8)、模型组(n=9)、麝香保心丸组(n=8)、达格列净组(n=8)和麝香保心丸+达格列净组(n=8)。模型组及各药物组大鼠予以腹腔注射阿霉素制备心力衰竭模型,造模后各药物组分别给予相应药物灌胃。采用HE染色法观察大鼠肾脏组织病理学变化,Masson染色法观察肾脏纤维化情况并以胶原容积分数(CVF)评估胶原沉积情况;Western blotting法检测大鼠肾脏组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2、Smad3及Smad7蛋白表达情况。结果 模型组肾脏组织CVF高于对照组(P<0.01);各治疗组肾脏组织CVF低于模型组,且麝香保心丸+达格列净组低于麝香保心丸组、达格列净组(P<0.01)。与对照组比较,模型组较多炎性细胞浸润,肾脏纤维化显著,TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达明显增加,Smad7蛋白表达下降(P<0.01);与模型组比较,麝香保心丸组、达格列净组及麝香保心丸+达格列净组肾脏纤维化程度减轻,TGF-β1和Smad3蛋白表达水平下降,Smad7蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论 麝香保心丸和达格列净通过调控TGF-β1/Smads信号通路达到抗心力衰竭大鼠肾脏纤维化的作用,且两药联用效果优于单一用药。 展开更多

关键词 麝香保心丸 达格列净 心力衰竭 肾脏纤维化 胶原容积分数 转化生长因子Β1 smad3蛋白质 大鼠 WISTAR

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MicroRNA-21在单侧输尿管梗阻大鼠间质纤维化肾脏组织中的表达及意义 被引量：4

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作者 雷学智 徐小龙 +6 位作者 胡建敏 孙光曦 李民 郭颖 陈桦 张焕标 赵明 《重庆医学》 CAS 北大核心 2015年第24期3319-3322,共4页

目的观察MicroRNA-21(miRNA-21)在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏组织中的表达,初步探讨其在转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3致大鼠肾间质纤维化(RIF)信号通路中的机制。方法选择20只SD雄性大鼠,分为UUO组和假手术组(Sham组),分别于建模... 目的观察MicroRNA-21(miRNA-21)在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏组织中的表达,初步探讨其在转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3致大鼠肾间质纤维化(RIF)信号通路中的机制。方法选择20只SD雄性大鼠,分为UUO组和假手术组(Sham组),分别于建模后第3天、第7天各采集每组5只大鼠肾脏组织,应用实时荧光定量PCR(Real-time qPCR)方法检测肾脏组织中miRNA-21的表达变化,采用Masson染色、苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学技术评价肾组织纤维化,使用免疫组织化学检测肾脏组织中TGF-β1、Smad3、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况。结果建模后第3天和第7天UUO组肾脏组织中miRNA-21与Sham组比较均升高(P<0.01),7dUUO组肾组织中miRNA-21与3dUUO组相比升高(P<0.01)。建模后3、7dUUO组Masson染色纤维化评分、TGF-β1、Samd3、α-SMA及Col-Ⅰ蛋白阳性表达面积较Sham组升高(P<0.01),以上指标7dUUO组较3dUUO组比较表达增强(P<0.01)。UUO组肾组织中miRNA-21的表达与肾间质纤维化评分正相关(r=0.888,P<0.01);肾组织miRNA-21与TGF-β1、Smad3、Col-Ⅰ、α-SMA蛋白表达呈正相关(r=0.799、0.849、0.882、0.896,P<0.01)。结论 UUO大鼠肾组织中miRNA-21在建模后表达上调,且间质纤维化程度越重表达越高,TGF-β1/Smad3信号通路可能是通过上调miRNA-21从而介导大鼠肾间质纤维化。 展开更多

关键词 微RNAS 输尿管 梗死 转化生长因子β smad3蛋白质

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哺乳类雷帕霉素靶蛋白信号通路对柯萨奇病毒B3诱导的心肌成纤维细胞Smad3蛋白和Ⅰ型胶原表达调控的实验研究 被引量：4

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作者 陈淳媛 孙跃女 +1 位作者 杨作成 蔡姿丽 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期156-160,共5页

目的探讨哺乳类雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对柯萨奇病毒B3（CVB3）诱导的心肌成纤维细胞Smad3蛋白（Smad3）和Ⅰ型胶原表达的调控作用。方法CVB3感染原代培养的SD鼠心肌成纤维细胞，用mTOR的抑制剂—雷帕霉素阻断mTOR信号通路，采... 目的探讨哺乳类雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路对柯萨奇病毒B3（CVB3）诱导的心肌成纤维细胞Smad3蛋白（Smad3）和Ⅰ型胶原表达的调控作用。方法CVB3感染原代培养的SD鼠心肌成纤维细胞，用mTOR的抑制剂—雷帕霉素阻断mTOR信号通路，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot方法检测细胞Smad3和Ⅰ型胶原表达。结果（1）雷帕霉素干预心肌成纤维细胞48h，RT—PCR检测mTOR／β-肌动蛋白（actin）光密度值分别为1nmol/L组0．381±0．022、10nmol/L组0．282±0．014、100nmol/L组0．263±0．012，均低于对照组1．45±0．04，10nmol/L组和100nmol/L组低于1nmol/L组，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。10nmol/L雷帕霉素干预心肌成纤维细胞0h（对照组）、24h．48h、72h，其mTOR／β-actin光密度值分别为0．341±0．022、0．203±0．021、0．163±0．022、0．144±0．013，光密度值随雷帕霉素干预时间的延长而降低（P〈0．05）。（2）RT-PCR和Westernblot测得对照组、CVB3组、CVB3＋雷帕霉素组心肌成纤维细胞Smad3／β-actin光密度值分别为0．63±0．06、1．18±0．03、0．77±0．08，Smad3／β-actin灰度值分别为0．89±0．07、2．27±0．13、0．131±0．013。RT—PCR测得上述各组Ⅰ型胶原／B—actin光密度值分别为1．13±0．06、1．303±0．012、0．82±0．03。以上结果显示CVB3组光密度值／灰度值高于对照组，CVB3＋雷帕霉素组低于CVB3组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论雷帕霉素抑制CVB3诱导的心肌成纤维细胞Smad3和Ⅰ型胶原表达，提示mTOR信号通路可能通过调控Smad及Ⅰ型胶原表达，在CVB3诱导的心肌纤维化过程中起重要作用。 展开更多

关键词 心肌疾病 肠道病毒属 成纤维细胞 smad3蛋白质 胶原Ⅰ型

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光动力疗法对增生性瘢痕成纤维细胞中Smad3蛋白磷酸化的影响 被引量：4

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作者 蔡宏 顾瑛 +3 位作者 刘玮 曾晶 董宁 孙平 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期394-396,共3页

目的探讨增生性瘢痕成纤维细胞（HSF）经过光敏剂血卟啉单甲醚（HMME）诱导，Smad3蛋白在光动力疗法（PDT）中的磷酸化效应。方法将原代培养的HSF分为对照组、PDT组、单纯光敏剂（PS）组和单纯（Laser）激光照射组，经Smad3-FITC染色后... 目的探讨增生性瘢痕成纤维细胞（HSF）经过光敏剂血卟啉单甲醚（HMME）诱导，Smad3蛋白在光动力疗法（PDT）中的磷酸化效应。方法将原代培养的HSF分为对照组、PDT组、单纯光敏剂（PS）组和单纯（Laser）激光照射组，经Smad3-FITC染色后在荧光显微镜上观察各组细胞内Smad3的荧光强度；收集各组细胞经Western印迹法检测Smad3和磷酸化Smad3蛋白的含量。结果在荧光显微镜下观察到各组总体荧光强度相近，但与对照组核内荧光聚集较明显相比，PDT组HSF核内荧光微弱；HSF中磷酸化Smad3蛋白经PDT治疗后含量降低，与对照组相比，二者差异有统计学意义（0．92±0．15比0．20±0．02，P〈0．05），PS组和Laser组中磷酸化Smad3蛋白表达，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PDT能够降低Smad3蛋白磷酸化水平，从而抑制HSF增殖。 展开更多

关键词 瘢痕 肥大性 成纤维细胞 血卟啉光照疗法 smad3蛋白质

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选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞增殖及α平滑肌肌动蛋白、纤维酶原激活物抑制剂-1和Ⅰ型胶原蛋白表达的影响 被引量：2

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作者 徐媛媛 闻广华 +1 位作者 张冲 杨雁 《安徽医药》 CAS 2019年第12期2351-2355,共5页

目的观察选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞(LX 2)增殖及α平滑肌肌动蛋白(α SMA)、纤维酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)和Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)表达的影响。以进一步探究pSmad 3C/3L在肝纤维化进展中的作用机制。方法采用脂质... 目的观察选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞(LX 2)增殖及α平滑肌肌动蛋白(α SMA)、纤维酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)和Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)表达的影响。以进一步探究pSmad 3C/3L在肝纤维化进展中的作用机制。方法采用脂质体转染的技术(FuGENE?HD)向LX 2细胞转染野生型Smad3基因(Smad3 WT)、Smad3连接区磷酸化位点突变的基因(Smad3 EPSM)及Smad3 C末端磷酸化位点突变的基因(Smad33S A)3种质粒,选择性上调LX 2细胞中pSmad 3C/3L的表达水平,以蛋白质印迹法(Western Blot)验证转染效率并检测LX 2细胞中α SMA、PAI 1和Collagen Ⅰ的蛋白表达水平。MTT法检测选择性上调pSmad 3C/3L对LX 2细胞增殖能力的影响。结果转化生长因子 β1(TGF β1)刺激1 h后,与LX 2对照组相比,转染3种质粒组Smad3蛋白表达水平均升高[(0.48±0.02),(0.57±0.03),(0.60±0.02),(0.59±0.03);P<0.05];与Smad3 WT组相比,转染Smad3 EPSM质粒组pSmad3C蛋白表达水平明显升高[(0.33±0.02)比(0.44±0.01),P<0.05],转染Smad33S A质粒组pSmad3L蛋白表达水平明显升高[(0.36±0.01)比(0.42±0.02),P<0.05]。MTT结果显示,转染Smad3 EPSM质粒可抑制LX 2细胞增殖,而转染Smad33S A质粒可促进LX 2细胞的增殖[吸光度值(0.48±0.03)比(0.93±0.05),P<0.05]。TGF β1刺激12 h后,α SMA、PAI 1和Collagen Ⅰ在3种质粒转染组中呈现出差异表达(P<0.05)。结论转染3种质粒成功地选择性上调了LX 2细胞中pSmad 3C/3L的表达,选择性高表达pSmad3L可进一步促进TGF β1诱导的细胞增殖反应、促进α SMA、PAI 1和Collagen Ⅰ的表达,选择性高表达pSmad3C可抑制细胞增殖反应、降低α SMA、PAI 1和Collagen Ⅰ的表达;提示TGF β1诱导的Smad3不同位点磷酸化在LX 2细胞增殖和α SMA,PAI 1,Collagen Ⅰ蛋白表达的调控中发挥重要作用,为肝纤维化的逆转提供了新思路。 展开更多

关键词 肝硬化 肝星状细胞 质粒 转染 smad3蛋白质 转化生长因子Β 脂质体 细胞增殖 印迹法 蛋白质

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1,25(OH)_2D_3对脂肪干细胞分泌Ⅰ型胶原的影响及作用机制 被引量：2

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作者 翟敏 胡晓根 +3 位作者 刘虹麟 许世清 王在 张文健 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第9期1370-1375,共6页

背景:脂肪间充质干细胞具有促进创伤修复的作用,但其分泌的Ⅰ型胶原会促进瘢痕形成,因此,寻找抑制脂肪间充质干细胞分泌胶原的方法将进一步增强其应用价值。目的:观察1,25(OH)_2D_3对脂肪间充质干细胞分泌Ⅰ型胶原的影响及其作用机制。... 背景:脂肪间充质干细胞具有促进创伤修复的作用,但其分泌的Ⅰ型胶原会促进瘢痕形成,因此,寻找抑制脂肪间充质干细胞分泌胶原的方法将进一步增强其应用价值。目的:观察1,25(OH)_2D_3对脂肪间充质干细胞分泌Ⅰ型胶原的影响及其作用机制。方法:(1)利用胶原酶消化法分离培养人脂肪间充质干细胞,将第4代脂肪间充质干细胞分别培养在含不同浓度(10^(-7),10^(-8),10^(-9),10^(-10),0 mol/L)1,25(OH)_2D_3的DMEM/F12培养基中干预4 d,收集细胞培养上清,采用ELISA方法检测Ⅰ型胶原水平;(2)选取1,25(OH)_2D_3抑制Ⅰ型胶原分泌作用最明显的浓度对脂肪间充质干细胞进行干预,通过Real-time PCR检测1,25(OH)_2D_3干预前后细胞内Smad3的mRNA表达,Western blot检测1,25(OH)_2D_3干预前后细胞内Smad3总蛋白和磷酸化蛋白表达;(3)在1,25(OH)_2D_3干预基础上加入SMAD3抑制剂SIS3对脂肪间充质干细胞进行干预,4 d后收集细胞培养上清,采用ELISA方法检测Ⅰ型胶原水平,以分析Smad3信号通路在其中的作用。结果与结论:(1)1,25(OH)_2D_3对人脂肪间充质干细胞分泌Ⅰ型胶原的影响表现为剂量依赖性抑制作用;(2)Real-time PCR和Western blot结果显示1,25(OH)_2D_3干预后Smad3表达水平有一定升高;Western blot结果显示磷酸化Smad3蛋白含量显著升高;(3)Smad3抑制剂可阻断1,25(OH)_2D_3对Ⅰ型胶原分泌的抑制作用;(4)这些结果表明,1,25(OH)_2D_3可能通过上调Smad3的表达及活性来抑制人脂肪间充质干细胞分泌Ⅰ型胶原。 展开更多

关键词 脂肪组织 间质干细胞 骨化三醇 胶原Ⅰ型 smad3蛋白质 组织工程

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压力对增生性瘢痕形成及TGF-β1/Smad信号通路的影响 被引量：1

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作者 曹鹏 王运帷 +6 位作者 姚明 李少珲 陈阳 朱婵 冷倩 任丽颖 官浩 《中华整形外科杂志》 CSCD 2022年第7期804-813,共10页

目的研究压力对增生性瘢痕(HTS)形成及转化生长因子β1(TGF-β1)/Sma和Mad同源物蛋白(Smad)信号通路的影响。方法健康成年新西兰大白兔12只(空军军医大学动物实验中心提供),用直径为1 cm的圆形打孔器在每侧兔耳腹侧标记出4个圆形创面,... 目的研究压力对增生性瘢痕(HTS)形成及转化生长因子β1(TGF-β1)/Sma和Mad同源物蛋白(Smad)信号通路的影响。方法健康成年新西兰大白兔12只(空军军医大学动物实验中心提供),用直径为1 cm的圆形打孔器在每侧兔耳腹侧标记出4个圆形创面,用手术小圆刀沿标记线切开皮肤全层至兔耳软骨膜,分离软骨膜及全层皮肤,刮除创面残留组织,暴露创面,术后第28天观察瘢痕形成情况。兔耳HTS模型构建成功后进行分组,采用自身对照研究,兔左耳设为实验组,右耳为对照组,用抽签法于每侧兔耳选取2个HTS模型作为研究对象,每组24个。实验组:使用4-0尼龙丝线将直径为1.5 cm的圆形钕铁硼磁铁垫上压力垫片缝合至兔耳软骨上,使用Flexiforce压力传感器测量压力大小并每周进行调整,将压力控制在20~25 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),每天持续时间≥23 h;对照组:不做处理。在施加压力后第40天观察兔耳瘢痕大体形态,并切取组织行HE、Masson染色进行组织学研究,计算瘢痕增生指数(SEI)、成纤维细胞数、角质层厚度;采用荧光定量PCR检测TGF-β1、Smad3、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA相对表达量;采用蛋白质印迹法检测TGF-β1、CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA蛋白相对表达量及Smad3磷酸化蛋白(p-Smad3)相对表达量(p-Smad3与Smad3蛋白表达量的比值)。使用Excel 2019、GraphPad Prim 8.0软件进行数据统计分析,计量资料均符合正态分布,以x±s表示,2组间比较采用配对样本t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果12只兔共形成96个创面,有27个创面无明显增生,其余69个创面形成突出皮肤表面、质地坚硬、暗红色的瘢痕增生样组织块,瘢痕形成率为71.9%(69/96)。施加压力后第40天,与对照组相比,实验组瘢痕外观凸起明显降低,硬度变软,颜色稍浅;HE染色和Masson染色结果显示,实验组中角质层厚度、SEI和成纤 展开更多

关键词 瘢痕 压力治疗 增生性瘢痕 转化生长因子Β1 smad3蛋白质 信号通路

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成人真皮成纤维细胞中转化生长因子β1转录调控Meox1的机制及对细胞迁移的影响

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作者 卫志远 李海胜 +6 位作者 周俊峄 韩超 董惠 吴玉章 贺伟峰 田易 罗高兴 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期224-233,共10页

目的探讨成人真皮成纤维细胞(HDF-a)中转化生长因子β1(TGF-β1)对Meox1的转录调控机制及细胞迁移功能的影响。方法(1)取HDF-a系细胞,用RPMI 1640完全培养基培养(下称常规培养),将细胞分为TGF-β1刺激组和空白对照组。TGF-β1刺激组细... 目的探讨成人真皮成纤维细胞(HDF-a)中转化生长因子β1(TGF-β1)对Meox1的转录调控机制及细胞迁移功能的影响。方法(1)取HDF-a系细胞,用RPMI 1640完全培养基培养(下称常规培养),将细胞分为TGF-β1刺激组和空白对照组。TGF-β1刺激组细胞加入10μL质量浓度为1 mg/μL的TGF-β1刺激,空白对照组加入等量磷酸盐缓冲液。培养72 h,取2组部分细胞进行转录组测序,筛选出2组差异表达比值≥2且P<0.01的基因,对差异基因进行功能富集分析与京都基因和基因组百科全书代谢途径分析,记录Meox1每百万转录本(TPM)表达值,样本数为3;取2组部分细胞,采用实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)法检测Meox1 mRNA表达,样本数为3。(2)取对数生长期HDF-a系细胞(细胞生长期下同)常规培养,分为空质粒组和Smad2过表达组、Smad3过表达组、Smad4过表达组,分别转染2μg pcDNA3.1空质粒和各自搭载Smad2、Smad3、Smad4的pcDNA3.1质粒,转染6 h后常规培养48 h,实时荧光定量RT-PCR法检测各组细胞中Meox1 mRNA的表达,样本数为3。(3)取HDF-a系细胞常规培养,同实验(1)分组处理,常规培养72 h,采用染色质免疫共沉淀-定量PCR(ChIP-qPCR)法检测2组细胞中Smad2、Smad3和Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度,样本数为3。(4)取HDF-a系细胞常规培养,分为阴性干扰组、小干扰RNA(siRNA)-Smad2组、siRNA-Smad3组、siRNA-Smad4组和空质粒组、Smad2过表达组、Smad3过表达组、Smad4过表达组,分别转染50μmol/L随机siRNA、siRNA-Smad2、siRNA-Smad3、siRNA-Smad4和2μg pcDNA3.1空质粒及各自搭载Smad2、Smad3、Smad4的pcDNA3.1质粒,转染6 h后常规培养48 h,ChIP-qPCR法检测相应组别细胞中Smad2、Smad3和Smad4蛋白在Meox1启动子上的富集度,样本数为3。(5)取2个批次HDF-a系细胞常规培养,均分为阴性干扰组、siRNA-Meox1组、空质粒组、Meox1过表达组,分别转染50μmol/L随机siRNA、siRNA-Meox1和2μg pcDNA3.1空质粒、搭载Meox1的pcDNA3.1质 展开更多

关键词 转化生长因子Β1 smad2蛋白质 smad3蛋白质 细胞迁移分析 Meox1 成人真皮成纤维细胞

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