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大肠杆菌二硫键形成相关蛋白的结构、功能及其在基因工程表达外源蛋白上的应用 被引量：11
1
作者 张众 黄华樑 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期261-266,共6页
大肠杆菌分泌蛋白二硫键的形成是一系列蛋白协同作用的结果 ,主要是Dsb家族蛋白 ,迄今为止共发现了DsbA、DsbB、DsbC、DsbD、DsbE和DsbG。在体内 ,DsbA负责氧化两个巯基形成二硫键 ,DsbB则负责DsbA的再氧化。DsbC和DsbG负责校正DsbA导... 大肠杆菌分泌蛋白二硫键的形成是一系列蛋白协同作用的结果 ,主要是Dsb家族蛋白 ,迄今为止共发现了DsbA、DsbB、DsbC、DsbD、DsbE和DsbG。在体内 ,DsbA负责氧化两个巯基形成二硫键 ,DsbB则负责DsbA的再氧化。DsbC和DsbG负责校正DsbA导入的异常二硫键 ,DsbD则负责对DsbC和DsbG进行再还原 ,DsbE的功能与DsbD类似。除了直接和二硫键的形成相关外 ,DsbA、DsbC和DsbG都有分子伴侣功能。它们的分子伴侣功能独立于二硫键形成酶的活性并且对二硫键形成酶活性具有明显的促进作用。基于Dsb蛋白的功能特性 ,利用它们以大肠杆菌为宿主表达外源蛋白 ,特别是含有二硫键的蛋白 ,取得了很多成功的例子。本文简要介绍了这方面的进展 。 展开更多
关键词 大肠杆菌 二硫键形成相关蛋白 结构 功能 基因工程 表达 外源蛋白 应用
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从噬菌体抗体库中筛选抗Cry1Ac蛋白单链抗体 被引量：4
2
作者 王耘 刘媛 +2 位作者 王祥 钱亚萍 刘贤进 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1146-1148,共3页
目的:从Tomlinson J噬菌体抗体库中筛选人源化抗Cry1Ac蛋白单链抗体(scFv)并进行鉴定。方法:以Cry1Ac蛋白为抗原包被固相,经4轮"吸附-洗脱-扩增"过程后,挑取单克隆,用ELISA法测定特异性结合活性,并对其进行基因序列测定。结果... 目的:从Tomlinson J噬菌体抗体库中筛选人源化抗Cry1Ac蛋白单链抗体(scFv)并进行鉴定。方法:以Cry1Ac蛋白为抗原包被固相,经4轮"吸附-洗脱-扩增"过程后,挑取单克隆,用ELISA法测定特异性结合活性,并对其进行基因序列测定。结果:经过4轮筛选,获得了2株能与Cry1Ac蛋白特异性结合的阳性克隆。结论:利用噬菌体抗体库技术可以不经过免疫制备出高特异性的人源化抗Cry1Ac蛋白scFv,为Cry1Ac毒素蛋白检测提供了条件。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 Cry1Ac蛋白 单链抗体
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单链抗体导向卵巢上皮癌进行靶向基因转移的实验研究 被引量：3
3
作者 孔北华 宋莉 +2 位作者 刘春生 马道新 王瑾瑜 《现代妇产科进展》 CSCD 2000年第5期324-327,共4页
目的 :探讨靶向性基因转移载体—含抗MUC 1单链抗体的慢病毒对MUC 1+卵巢上皮癌细胞系SKOV 3细胞进行基因转移的特异性 ,为卵巢上皮癌的靶向性基因治疗提供实验基础。方法 :将针对SKOV 3细胞上抗原MUC 1的单链抗体基因构建到慢病毒包膜... 目的 :探讨靶向性基因转移载体—含抗MUC 1单链抗体的慢病毒对MUC 1+卵巢上皮癌细胞系SKOV 3细胞进行基因转移的特异性 ,为卵巢上皮癌的靶向性基因治疗提供实验基础。方法 :将针对SKOV 3细胞上抗原MUC 1的单链抗体基因构建到慢病毒包膜结构质粒 (pM .TC .G) ,以报告基因绿色荧光蛋白 (GFP)基因作为目的基因。用磷酸钙沉淀法进行Anti MUC 1(ScFv)慢病毒包装 ,感染共培养的卵巢癌细胞SKOV 3(MUC 1+)和正常人成纤维细胞GF(MUC 1- ) ,荧光显微镜下观察感染效果。竞争抑制实验即病毒感染前加入Anti MUC 1单抗是否抑制病毒感染。结果 :荧光显微镜下观察到Anti MUC 1(ScFv)介导的慢病毒对共培养的SKOV 3(MUC 1+)和GF(MUC 1- )细胞的感染有明显差别 ,非Anti MUC 1(ScFv)介导的慢病毒对共培养的SKOV 3(MUC 1+)和GF(MUC 1- )的感染未见显著性差别 ,证明Anti MUC 1(ScFv)介导的慢病毒可对MUC 1+的卵巢细胞靶向性转染。病毒感染前加入Anti MUC 1单抗则可抑制病毒靶向性感染。此竟争抑制实验表明 ,病毒感染是由其抗体组成部分介导 ,故有抗体靶向性。结论 :Ani MUC 1(ScFv)介导的慢病毒可对MUC - 1+卵巢上皮癌细胞靶向性基因转移。 展开更多
关键词 单链抗体 卵巢肿瘤 细胞系 转染
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抗明胶酶单链抗体与力达霉素融合蛋白抗肿瘤作用机制及疗效研究 被引量：2
4
作者 高瑞娟 尚伯杨 +3 位作者 盛唯瑾 赵春燕 李电东 甄永苏 《中国医药生物技术》 2014年第4期250-259,共10页
目的探讨抗明胶酶单链抗体Fv与力达霉素(LDM)融合蛋白的抗肿瘤作用机制及疗效。方法采用三联径向加压C4柱制备LDM发色团AE,体外分子重建将其装入融合蛋白Fv-LDP中,Superdex 75层析获得Fv-LDP-AE。反相HPLC测定纯度或相对含量。流式细胞... 目的探讨抗明胶酶单链抗体Fv与力达霉素(LDM)融合蛋白的抗肿瘤作用机制及疗效。方法采用三联径向加压C4柱制备LDM发色团AE,体外分子重建将其装入融合蛋白Fv-LDP中,Superdex 75层析获得Fv-LDP-AE。反相HPLC测定纯度或相对含量。流式细胞术测定DNA含量;采用SA-β-gal染色、Western blot和细胞伤口愈合实验分别检测药物对细胞衰老、蛋白表达和迁移的影响;通过动物模型评价药物疗效。结果 Fv-LDP-AE承袭了LDM诱导肿瘤细胞周期阻滞、凋亡和裂亡的作用特点,并显示出更强的诱导衰老和抗迁移作用。Fv-LDP-AE诱导凋亡和抑制迁移依次与caspases通路激活和MMP-2降调节有关。Fv-LDP-AE可抑制小鼠和裸鼠移植瘤生长,抑制率分别可达到86.6%和82.5%。结论 Fv-LDP-AE对小鼠和裸鼠移植瘤有效,可能与其对细胞周期阻滞、凋亡、裂亡和衰老的诱导以及迁移的抑制有关。 展开更多
关键词 明胶酶类 单链抗体 肿瘤微环境 力达霉素
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噬菌体抗体库中筛选抗GST单链抗体及其活性鉴定 被引量：2
5
作者 唐喆伟 韩红辉 +3 位作者 杜冰 王群 钱旻 李恺 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期375-378,共4页
从Tomlinson(I+J)噬菌体抗体库中筛选获得了特异性抗GST蛋白的单链抗体(scFv),并在E.coliHB2151进行表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,scFv可在细菌周质腔中进行可溶性表达,其分子量约为30 kD,与理论预期值相符;ELISA鉴定结果显示... 从Tomlinson(I+J)噬菌体抗体库中筛选获得了特异性抗GST蛋白的单链抗体(scFv),并在E.coliHB2151进行表达,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,scFv可在细菌周质腔中进行可溶性表达,其分子量约为30 kD,与理论预期值相符;ELISA鉴定结果显示,周质腔中的scFv具有抗原结合功能,而且这种结合可以被GST纯蛋白所抑制,其IC50值约为3.07 ng/ml,证明该scFv具有特异性结合GST蛋白的活性。本研究表明,利用噬菌体抗体库技术可以不经过免疫就能获得高特异性的人源化抗GST蛋白的scFv。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 筛选 单链抗体 GST
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99Tcm-血管细胞黏附分子-1单链抗体用于动脉粥样硬化模型兔的显像研究 被引量：2
6
作者 刘纯宝 张晓 +5 位作者 宋夷龄 张凤真 张影影 王怡春 兰晓莉 张永学 《中华核医学与分子影像杂志》 北大核心 2017年第6期346-350,共5页
目的 观察99Tcm标记的VCAM-1 scFv（99Tcm-scFv-VCAM-1）对粥样硬化造模兔的显像效果,探索其对探测粥样硬化病变的可行性.方法 以HYNIC为双功能螯合剂进行99Tcm标记,用PD-10柱纯化99Tcm-scFv-VCAM-1,并用快速薄层层析法测定其标记率、... 目的 观察99Tcm标记的VCAM-1 scFv（99Tcm-scFv-VCAM-1）对粥样硬化造模兔的显像效果,探索其对探测粥样硬化病变的可行性.方法 以HYNIC为双功能螯合剂进行99Tcm标记,用PD-10柱纯化99Tcm-scFv-VCAM-1,并用快速薄层层析法测定其标记率、放化纯.采用内膜免疫损伤法加高脂饮食法对新西兰大白兔进行粥样硬化造模,以病理切片验证主动脉粥样硬化病变.造模兔注射显像剂后分别于1和2 h时处死,取各组织测质量及放射性计数.另外对造模组和对照组兔注射显像剂后分别于1和2 h行平面显像,观察腹主动脉放射性摄取情况.显像后主动脉组织行免疫组织化学染色,分析其VCAM-1表达情况.采用两样本t检验比较组间差异.结果 99Tcm-scFv-VCAM-1标记率为75%~83%,放化纯为（98.54±1.03）%,比活度为216 MBq/nmol.病理检测证实,粥样硬化造模兔主动脉有斑块形成,而对照组未见斑块存在.生物分布提示,显像剂主要经肾脏排泄.兔的99Tcm-scFv-VCAM-1平面显像可见造模组腹主动脉显像剂摄取高于对照组,二者T/B比值在2 h分别为3.68±0.73、2.42±0.39（n=5）,差异有统计学意义（t=2.950,P＜0.05）.免疫组织化学染色证实造模组主动脉有粥样硬化斑块存在,并有大量VCAM-1表达.结论 99Tcm-scFv-VCAM-1可作为分子探针用于探测模型兔动脉粥样硬化,为粥样硬化的早期诊断提供了实验依据. 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 血管细胞粘附分子-1 单链抗体 同位素标记 锝 放射性核素显像 兔
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^(131)I标记的甲状腺未分化癌人源单链抗体在荷瘤裸鼠模型的放射免疫显像 被引量：1
7
作者 刘倩 刘琼 +4 位作者 李文波 许璐 周静 刘影 庞华 《中国医学影像学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期321-324,共4页
目的测定^(131)I标记的甲状腺未分化癌(ATC)人源单链抗体(scFv)的放射性纯度与比活度,并探讨其在荷瘤裸鼠模型的体内分布情况和放射免疫显像特点,以期为ATC的诊断及治疗提供一种新的方法。材料与方法接种ATC细胞构建荷人ATC裸鼠模型。... 目的测定^(131)I标记的甲状腺未分化癌(ATC)人源单链抗体(scFv)的放射性纯度与比活度,并探讨其在荷瘤裸鼠模型的体内分布情况和放射免疫显像特点,以期为ATC的诊断及治疗提供一种新的方法。材料与方法接种ATC细胞构建荷人ATC裸鼠模型。采用氯胺T法实现scFv的^(131)I标记,Sephadex G25M柱纯化标记抗体,采用三氯醋酸法测定其标记率,采用纸层析法测定^(131)I标记scFv的放化纯度、室温稳定性及血清稳定性。荷瘤裸鼠尾静脉注射^(131)I-scFv后12、24、48、72 h取各组织器官分析^(131)I-scv在体内组织器官中的生物分布情况,另取荷瘤裸鼠尾静脉注射^(131)I-scFv后12、24、48、72 h进行SPECT静态显像,观察瘤内放射性浓聚,待肿瘤清晰显影,进行SPECT/CT图像融合。结果纯化后的^(131)I-scFv标记率为91.64%,放化纯度为(93.3±0.3)%;^(131)I-scFv放于室温及血清孵育1、6、12、24 h后所测得放射性化学纯度均高于90%。^(131)I-scFv在肿瘤组织、肝、肾、肠、血液中具有较高的放射性分布。SPECT显示^(131)I-scFv能够在肿瘤组织中选择性浓聚,肿瘤组织靶/非靶比值在48 h时达最高为4.38,且显影最清晰。结论成功制备^(131)I-scFv,^(131)I-scFv在荷瘤裸鼠模型中有较好的显像效果,为进一步开展ATC的诊断及治疗研究奠定基础。 展开更多
关键词 甲状腺肿瘤 癌 碘放射性同位素 单链抗体 放射免疫显像 体层摄影术 发射型计算机 单光子 体层摄影术 X线计算机 疾病模型 动物 小鼠 裸
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从噬菌体抗体库中筛选抗HIV-Tat蛋白单链抗体 被引量：1
8
作者 邵锴 姜海燕 +4 位作者 张国利 岳玉环 朱平 吴广谋 刘瑞田 《中国实验诊断学》 2008年第5期592-594,共3页
目的从Tomlinson(I+J)噬菌体抗体库中筛选人源化抗HIV-Tat蛋白单链抗体(scFv)并进行鉴定。方法以HIV-Tat蛋白为抗原,通过"吸附-洗脱-扩增"过程从噬菌体抗体库中筛选特异性抗Tat蛋白单链抗体,对其进行基因序列测定,并检测其抗... 目的从Tomlinson(I+J)噬菌体抗体库中筛选人源化抗HIV-Tat蛋白单链抗体(scFv)并进行鉴定。方法以HIV-Tat蛋白为抗原,通过"吸附-洗脱-扩增"过程从噬菌体抗体库中筛选特异性抗Tat蛋白单链抗体,对其进行基因序列测定,并检测其抗原结合活性。结果经过筛选,获得了1株能与Tat蛋白特异性结合的阳性克隆,经检索kabat数据库,发现其轻、重链可变区分别属于VκⅠ型、VHⅢ型。结论利用噬菌体抗体库技术可以不经过免疫制备出高特异性的人源化抗Tat蛋白单链抗体。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 HIV-Tat蛋白 单链抗体
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骨硬化蛋白单链抗体对骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响 被引量：1
9
作者 李世飞 祝孟海 +1 位作者 张树东 姚琦 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第1期1-6,共6页
背景:拮抗骨硬化蛋白可影响Wnt/β-catenin信号通路,刺激成骨活动,增加骨合成代谢。目的:观察骨硬化蛋白单链抗体对小鼠骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响。方法:全骨髓贴壁法分离得到C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,成骨诱导14 d后茜素... 背景:拮抗骨硬化蛋白可影响Wnt/β-catenin信号通路,刺激成骨活动,增加骨合成代谢。目的:观察骨硬化蛋白单链抗体对小鼠骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响。方法:全骨髓贴壁法分离得到C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,成骨诱导14 d后茜素红染色,成脂诱导7 d后油红O染色,检测骨髓间充质干细胞的分化能力;取第3代骨髓间充质干细胞,实验组用含50μg/L骨硬化蛋白单链抗体(Scl-scFv)的α-MEM完全培养基培养,对照组用等量α-MEM完全培养基培养,MTT法检测细胞的增殖能力;第7天Real-Time PCR检测Col1、ALP、RUNX2、OPN、OCN的mR NA表达,同时进行碱性磷酸酶染色;第4,7,10天Western blot检测Col1和OPN蛋白表达,ELISA检测细胞培养上清中骨钙素水平。结果与结论:(1)骨髓间充质干细胞成骨诱导后茜素红染色可见明显钙结节,成脂诱导后油红O染色可见橘红色油滴;(2)随着培养时间的延长,实验组的吸光度值与对照组比较差异无显著性意义;(3)实验组Col1、ALP、RUNX2、OPN、OCN的mRNA表达均高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05),碱性磷酸酶染色强于对照组;(4)实验组Col1、OPN蛋白水平高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);(5)结果表明,骨硬化蛋白单链抗体对骨髓间充质干细胞增殖无明显作用,可以促进其向成骨分化。 展开更多
关键词 骨髓 间质干细胞 单链抗体 细胞分化 组织工程
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单域抗体在肿瘤治疗中的研究进展及应用 被引量：1
10
作者 段妍 施维 《国际生物制品学杂志》 CAS 2016年第3期144-146,155,共4页
自1993年发现单域抗体至今，单域抗体的研究和应用取得了突破性的进展。单域抗体除了作为诊断试剂和药物或靶向递送体系外，还可用于肿瘤成像诊断。此文就单域抗体在肿瘤免疫治疗和肿瘤成像方面的研究进展及应用进行综述。
关键词 单链抗体 肿瘤 免疫疗法 分子成像
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携带Hsp47特异性siRNA的人源单链抗体融合蛋白诱导人原代肝星状细胞凋亡研究 被引量：1
11
作者 曾艳丽 张晓菊 +2 位作者 尚佳 丁岗强 康谊 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期843-848,共6页
目的 构建携带Hsp47特异性siRNA的人源单链抗体融合蛋白,并探讨其诱导肝星状细胞凋亡的作用. 方法 通过噬菌体展示技术得到单链抗体,采用分子克隆的方法将单链抗体ScFv和鱼精蛋白截短体tp基因融合,经转化,筛选,酶切连接测序后诱导表达... 目的 构建携带Hsp47特异性siRNA的人源单链抗体融合蛋白,并探讨其诱导肝星状细胞凋亡的作用. 方法 通过噬菌体展示技术得到单链抗体,采用分子克隆的方法将单链抗体ScFv和鱼精蛋白截短体tp基因融合,经转化,筛选,酶切连接测序后诱导表达并纯化蛋白,间接免疫荧光检测人原代肝星状细胞,人正常肝细胞7701对ScFv/tP融合蛋白的内吞效率;凝胶迁移阻滞实验检测ScFv/tP融合蛋白与DNA结合活性;Hsp47靶向性siRNA转染人原代肝星状细胞后,利用RT-PCR和Western blot分别检测细胞内Hsp47 mRNA和蛋白的表达情况;ScFv/tP融合蛋白介导Hsp47siRNA转染肝星状细胞后,采用流式细胞仪和Western blot分析其对细胞凋亡的影响,用CCK-8法分析其对细胞增殖的影响.两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析.结果 所获得的ScFv/tP融合蛋白能够被人原代肝星状细胞内化进入细胞内,而不能被人正常肝细胞所内化,由ScFv/tP融合蛋白介导的Hsp47-siRNA能够降低人原代肝星状细胞Hsp47 mRNA及蛋白的表达水平,且转染后能够诱导肝星状细胞凋亡的发生. 结论 人源单链抗体融合蛋白是一种良好的载体,能够转移靶向Hsp47特异性siRNA的诱导人原代肝星状细胞凋亡. 展开更多
关键词 肝硬化 单链抗体 细胞凋亡
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抗体药物的设计及其研究进展
12
作者 王明蓉 史晋海 +4 位作者 何勇智 代云见 余馨 丛聪 何明跃 《国际生物制品学杂志》 CAS 2016年第5期252-259,共8页
先进的展示技术为重组抗体的筛选和改造提供了有效而灵活的方法.通过展示技术可以获得更适用于诊断和治疗的优化分子,而后者不能直接通过动物免疫接种的方式获得.展示技术可通过自动化或与新一代测序技术和阵列技术联合应用得到进一步提... 先进的展示技术为重组抗体的筛选和改造提供了有效而灵活的方法.通过展示技术可以获得更适用于诊断和治疗的优化分子,而后者不能直接通过动物免疫接种的方式获得.展示技术可通过自动化或与新一代测序技术和阵列技术联合应用得到进一步提高,形成高通量筛选技术平台,用于筛选多种对应大量基因组编码靶标的抗体.从头设计抗体已开始成为制造新抗体的一种策略,但仍具有技术挑战性.然而,抗体-抗原结构数据库的不断增加和计算工具的不断开发,都表明这些挑战是可以克服的.预计未来以物理分子模拟知识为基础的计算方法,将成为提高抗体设计准确性和成功性的主要驱动力. 展开更多
关键词 药物设计 抗体 单链抗体 互补决定区 抗体亲和力
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基于TNF功能表位设计新型人源单链抗体
13
作者 常宏 吕明 +6 位作者 乔春霞 李新颖 耿晶 周婷婷 林周 沈倍奋 冯健男 《中国医药生物技术》 2014年第4期241-249,共9页
目的：开发基于 TNF 功能表位的新型人源单链抗体。方法利用自主研制的鼠抗 TNF-α中和单抗 Z12能特异性识别 TNF-α的141-146位功能表位特性，通过理论模拟构建 TNF/抗体 Z12相互作用的复合物模型设计获得功能性拮抗肽（PT2、PT3、PT4... 目的：开发基于 TNF 功能表位的新型人源单链抗体。方法利用自主研制的鼠抗 TNF-α中和单抗 Z12能特异性识别 TNF-α的141-146位功能表位特性，通过理论模拟构建 TNF/抗体 Z12相互作用的复合物模型设计获得功能性拮抗肽（PT2、PT3、PT4、PT7）以及单域抗体 PTVH5（以人抗体可变区重链框架 VH5为支架合理展示 PT2、PT3、PT4），利用计算机辅助分子设计以及同源模建、分子对接方法，进一步合理选择人抗体可变区轻链框架（Vκ1）作为展示支架，通过构象判别、作用能比较以及识别区域确认并选择合适的连接肽设计新型单链分子 ScFv_AB1。结果理论分析发现，ScFv_AB1稳定性较好，识别 TNF-α的141-146功能位点（即 Z12识别的位点）。生物学实验证明， ScFv_AB1能与 TNF-α结合、抑制 TNF-α与TNFR 的结合、抑制 TNF-α介导的细胞毒作用。结论初步验证了“借助计算机模建，基于人抗体可变区的框架结构和拮抗肽设计单链抗体分子”的策略是可行的，从而为人源小分子抗体的制备提供了一条可供选择的途径。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 α 单链抗体 计算机辅助设计 支架 同源模建 拮抗肽
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从噬菌体抗体库中筛选抗角蛋白单链抗体
14
作者 夏汝山 乔媛媛 +4 位作者 王刚 陈宇萍 沈柱 王琰 刘玉峰 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期459-461,464,共4页
目的　从半合成噬菌体抗体库中筛选人源性抗角蛋白单链抗体 (scFv)并进行鉴定。方法　以人表皮角蛋白为抗原 ,通过“吸附 洗脱 扩增”过程从噬菌体抗体库中筛选特异性抗角蛋白单链抗体 ,对其抗原结合活性、识别角蛋白的相对分子质量 (... 目的　从半合成噬菌体抗体库中筛选人源性抗角蛋白单链抗体 (scFv)并进行鉴定。方法　以人表皮角蛋白为抗原 ,通过“吸附 洗脱 扩增”过程从噬菌体抗体库中筛选特异性抗角蛋白单链抗体 ,对其抗原结合活性、识别角蛋白的相对分子质量 (Mr)和序列进行分析鉴定。结果　经过筛选 ,获得 6株能与角蛋白特异性结合的阳性克隆 ,所识别角蛋白的Mr 相同 ,均在 5 6 0 0 0～ 5 70 0 0之间 ;序列分析显示 ,所获抗体克隆的可变区基因分别属于免疫球蛋白基因家族的不同亚群。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 角蛋白 单链抗体
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抗人结缔组织因子人源单链抗体的筛选、表达及活性鉴定
15
作者 周云 包林 +6 位作者 金秋 张黎 蔡雪婷 卢悟广 曹鹏 焦永军 张建平 《山东医药》 CAS 2013年第20期15-17,21,I0002,共5页
目的从人源噬菌体抗体文库中筛选抗人结缔组织生长因子(CTGF)单链抗体(ScFv),原核表达并鉴定其活性。方法以重组人源CTGF(rhCTGF)为靶标,对人源噬菌体抗体文库进行筛选;用Phage-ELISA筛选阳性克隆并进行原核表达、纯化,获得了高纯度的S... 目的从人源噬菌体抗体文库中筛选抗人结缔组织生长因子(CTGF)单链抗体(ScFv),原核表达并鉴定其活性。方法以重组人源CTGF(rhCTGF)为靶标,对人源噬菌体抗体文库进行筛选;用Phage-ELISA筛选阳性克隆并进行原核表达、纯化,获得了高纯度的ScFv蛋白,通过ELISA和Millicell迁移实验鉴定其活性。结果经过3轮筛选,获得1株特异性抗人CTGF ScFv 1C5,ELISA显示1C5能与rhCTGF特异性结合;在Millicell迁移实验中,1C5能抑制CTGF的生物学功能,具有中和活性。结论成功筛选到1株抗人CTGF的ScFv,有望在CTGF相关疾病的治疗上发挥作用。 展开更多
关键词 结缔组织生长因子 噬菌体展示技术 单链抗体 靶向治疗
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全人源抗体基因库的构建及抗表皮生长因子受体单链抗体的筛选
16
作者 余馨 何勇智 +6 位作者 丛聪 李坤 代云见 张勇侠 何静 王明蓉 何明跃 《国际生物制品学杂志》 CAS 2016年第3期122-127,共6页
目的从肿瘤患者外周血中构建全人源单链可变区抗体基因库，并采用真核核糖体展示技术高效筛选全人源抗表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）单链抗体。方法采用PCR技术从52例晚期肿瘤患者外周血中构建大容量的... 目的从肿瘤患者外周血中构建全人源单链可变区抗体基因库，并采用真核核糖体展示技术高效筛选全人源抗表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）单链抗体。方法采用PCR技术从52例晚期肿瘤患者外周血中构建大容量的全人源抗体基因库。针对EGFR抗原靶标，应用真核核糖体展示技术对该基因库进行高效富集筛选。通过大肠埃希菌表达体系对回收的基因库进行克隆、表达，并鉴定抗体活性。结果构建的全人源抗体基因库库容估算为4．3×1013。分子。对该基因库进行3轮富集筛选后，获得EGFR富集的单链抗体基因库。对回收基因库进行克隆、表达，并随机鉴定了49个克隆，获得结合力为10-8～10-7mol／L的2株全人源抗EGFR单链抗体。结论利用肿瘤患者外周血，结合核糖体展示技术可以较快获得具有医用价值的全人源单链抗体。 展开更多
关键词 基因文库 单链抗体 核糖体展示技术 外周血
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新型双特异性单链抗体BiTEs及其在肿瘤治疗中的应用前景 被引量：2
17
作者 于蕊 陈昭烈 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第4期1-6,共6页
BiTEs(bispecificTcellengagers)是一种以T细胞作为效应细胞的双特异性单链抗体 ,它具有两个抗原结合臂 ,可以同时和T细胞及靶细胞结合 ,并激活细胞毒性T细胞杀伤病变细胞。和其它双特异性抗体相比 ,BiTEs的分子柔韧性更好 ,能更好地促... BiTEs(bispecificTcellengagers)是一种以T细胞作为效应细胞的双特异性单链抗体 ,它具有两个抗原结合臂 ,可以同时和T细胞及靶细胞结合 ,并激活细胞毒性T细胞杀伤病变细胞。和其它双特异性抗体相比 ,BiTEs的分子柔韧性更好 ,能更好地促进CD3复合体和肿瘤靶标的连接 ,并且它不受T细胞受体和靶细胞上MHCⅠ类分子的约束 ,不需要共刺激分子的参与 ,是一种极具应用潜力的抗体形式。就BiTEs的结构、作用机理及其在肿瘤临床上的应用前景几个方面做一综述。 展开更多
关键词 BITES 双特异性单链抗体 细胞毒性T细胞 肿瘤 临床治疗
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表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)单链抗体亲和力检测的间接ELISA的建立及优化 被引量：1
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作者 张煜彬 吴忠秀 +3 位作者 何彬 杨畅 李勇军 刘亭 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期73-78,共6页
目的建立检测表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ)单链抗体PD0721亲和力检测的ELISA,并且对实验条件进行优化。方法利用本课题组制备的单链抗体PD0721,建立检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA,并采用棋盘滴定法对实验条件中的抗体抗原浓... 目的建立检测表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ)单链抗体PD0721亲和力检测的ELISA,并且对实验条件进行优化。方法利用本课题组制备的单链抗体PD0721,建立检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA,并采用棋盘滴定法对实验条件中的抗体抗原浓度、二抗浓度、包被条件等方面进行优化,对本方法的灵敏度及精密度进行考察。结果使用PBS稀释抗原至1.25 mg/L于4℃包被12 h,加入120 ng/mL PD0721单链抗体以及1∶8000的酶标抗体为最佳检测结果。优化后的结果,在PD0721单链抗体浓度为15 ng/mL~480 ng/mL范围内回归模型拟合效果良好,最低检测限为7.5 ng/mL。组内差异系数为0.11%~0.99%,组间差异系数为0.68%~3.15%。结论建立了能准确、稳定检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ) PD0721 间接ELISA 单链抗体
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抗人B-淋巴细胞刺激因子噬菌体单链抗体库的构建
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作者 韩威 田瑞阳 +3 位作者 刘惠 姚新生 杨胜利 龚毅 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期715-720,共6页
目的构建抗人B-淋巴细胞刺激因子噬菌体单链抗体库。方法从B-淋巴细胞刺激因子免疫小鼠的脾细胞中抽提总RNA,经逆转录聚合酶反应合成cDNA,分别扩增小鼠重链可变区基因和轻链可变区基因。通过重叠延伸拼接法将重链可变区基因和轻链可变... 目的构建抗人B-淋巴细胞刺激因子噬菌体单链抗体库。方法从B-淋巴细胞刺激因子免疫小鼠的脾细胞中抽提总RNA,经逆转录聚合酶反应合成cDNA,分别扩增小鼠重链可变区基因和轻链可变区基因。通过重叠延伸拼接法将重链可变区基因和轻链可变区基因组装成单链抗体基因,重组于载体pFUSE5,电转化E.coliXL 1-Blue。在辅助噬菌体援救下,构建成噬菌体单链抗体库。采用聚合酶链反应、核苷酸序列测定和酶联免疫分析鉴定单链抗体库的特征。结果本抗体库的噬菌体库容量约1×106,单链抗体基因插入效率为93%,存在序列差异性并含有抗B-淋巴细胞刺激因子单链抗体。结论成功地构建了抗人B-淋巴细胞刺激因子单链噬菌体抗体库,为筛选抗B-淋巴细胞刺激因子单链抗体药物奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 人B-淋巴细胞刺激因子 单链抗体 噬菌体展示技术 聚合酶链反应
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pIRES-scFvCD_(44)-TRAIL对人乳腺癌细胞株抑制作用的研究
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作者 魏杨辉 黄耀 张卫星 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第14期11-15,共5页
目的探讨CD44单链抗体sc Fv CD44、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)双基因共表达真核载体(p IRES-sc Fv CD44-TRAIL)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株的抑制作用。方法 1细胞实验:采用RT-PCR二步法构建p IRES-sc Fv CD44-TRAIL并转染MDA... 目的探讨CD44单链抗体sc Fv CD44、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)双基因共表达真核载体(p IRES-sc Fv CD44-TRAIL)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞株的抑制作用。方法 1细胞实验:采用RT-PCR二步法构建p IRES-sc Fv CD44-TRAIL并转染MDA-MB-231细胞(转染组);设转染p IRES空质粒的空白组及不作任何处理的阴性组。转染24 h后采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率;行划痕试验比较各组细胞迁移情况,计算划痕愈合率。2移植瘤实验:建立乳腺癌荷瘤裸鼠模型8只并随机分为实验组及对照组。实验组皮下注射p IRES-sc Fv CD44-TRAIL 100μL/只,隔日1次,共5次;对照组注射等量生理盐水。观察两组移植瘤生长情况,计算抑瘤率;采用免疫组化法检测两组瘤组织中Ki67的表达水平。结果 1细胞实验:转染组细胞凋亡率明显高于、划痕愈合率明显低于空白组和阴性组。2移植瘤实验:观察组抑瘤率为79.8%;观察组Ki67的阳性细胞率明显低于对照组,P<0.05。结论 p IRES-sc Fv CD44-TRAIL可抑制人乳腺癌细胞及其移植肿瘤的生长及转移。 展开更多
关键词 CD44单链抗体 肿瘤坏死因子可溶性相关凋亡诱导配体 乳腺癌
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