内蒙古绒山羊毛囊不同发育时期BMP2、Noggin及SHH基因在皮肤中的表达 被引量：13

1

作者 苏蕊 张文广 +2 位作者 常子丽 王瑞军 李金泉 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期54-57,共4页

采用功能分类基因芯片方法,分析内蒙古绒山羊皮肤毛囊发育兴盛期和休止期BMP2、Noggin及SHH基因在皮肤中的表达,探讨其对毛囊发育的作用方式。结果表明:与兴盛期相比,休止期BMP2、Noggin及SHH基因表达分别上调24.61倍、下调0.16倍、下调... 采用功能分类基因芯片方法,分析内蒙古绒山羊皮肤毛囊发育兴盛期和休止期BMP2、Noggin及SHH基因在皮肤中的表达,探讨其对毛囊发育的作用方式。结果表明:与兴盛期相比,休止期BMP2、Noggin及SHH基因表达分别上调24.61倍、下调0.16倍、下调0.22倍。BMP基因可抑制毛囊发育,且与维持毛囊处于休止期有关;在毛囊发育兴盛期,Noggin基因起强抑制BMP2基因表达的作用;在毛囊发育过程中,Noggin对BMP2基因的抑制作用至少是部分通过SHH实现的。 展开更多

关键词 山羊 毛囊发育 BMP2基因 Noggin基因 shh基因 表达

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Shh基因与消化道肿瘤的关系 被引量：4

2

作者 赵华 张凯 《医学综述》 2013年第2期234-236,共3页

Hedgehog(Hh)信号通路是一条非常重要的转导途径,其异常表达将对细胞的生长、发育、增殖及分化产生深远的影响,可导致多种恶性肿瘤的发生。Sonic Hedgehog(Shh)基因是Shh信号通路的核心,该基因可作为某些肿瘤的诊断及预后评价的指标。... Hedgehog(Hh)信号通路是一条非常重要的转导途径,其异常表达将对细胞的生长、发育、增殖及分化产生深远的影响,可导致多种恶性肿瘤的发生。Sonic Hedgehog(Shh)基因是Shh信号通路的核心,该基因可作为某些肿瘤的诊断及预后评价的指标。研究显示Hh信号通路在食管癌、胃癌、髓母细胞瘤、前列腺癌等多种肿瘤中表达,且与肿瘤的发生、发展及转移密切相关。 展开更多

关键词 shh信号通路 shh基因 消化道肿瘤

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环巴胺对胃癌细胞BGC-823增殖凋亡及Shh、Gli-1基因表达的影响 被引量：4

3

作者 任雪萍 姜藻 +2 位作者 刘飞 顾晓怡 高峰 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2008年第3期188-191,共4页

目的:探讨环巴胺对胃癌细胞BGC-823增殖凋亡及Shh、Gli-1基因表达的影响。方法:采用MTT法检测环巴胺对BGC-823细胞的生长抑制效应,倒置显微镜及AO/EB荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Shh、Gli-1... 目的:探讨环巴胺对胃癌细胞BGC-823增殖凋亡及Shh、Gli-1基因表达的影响。方法:采用MTT法检测环巴胺对BGC-823细胞的生长抑制效应,倒置显微镜及AO/EB荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Shh、Gli-1 mRNA的表达情况。结果:环巴胺可明显抑制BGC-823细胞的生长,呈时间-剂量依赖性,并出现典型的细胞形态学改变;经32、64、96μmol.L-1的环巴胺作用24 h后的凋亡率依次为12.50%、31.50%、56.10%,明显高于空白对照组的2.10%(均P<0.01);Shh及Gli-1 mRNA均表达,环巴胺可下调Gli-1 mRNA表达,但对Shh mRNA表达无明显影响。结论:环巴胺可以抑制胃癌细胞BGC-823增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Gli-1基因表达有关。 展开更多

关键词 环巴胺 胃癌细胞 细胞凋亡 shh Gli-1 基因表达

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TCDD诱发斑马鱼胚胎shh基因表达降低及其对下颌发育的影响 被引量：1

4

作者 杨景峰 董武 +1 位作者 曹颖霞 王思珍 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期506-512,共7页

2,3,7,8-四氯-二苯基-对-二恶英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)为毒性 很强的环境污染物质。用O-1．0μg／L的TCDD处理受精后24 h(24 hpf)的斑马鱼胚至观察时为止,进行了形 态学观察、基因阻断、原位杂交、TUNEL染色以及... 2,3,7,8-四氯-二苯基-对-二恶英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)为毒性 很强的环境污染物质。用O-1．0μg／L的TCDD处理受精后24 h(24 hpf)的斑马鱼胚至观察时为止,进行了形 态学观察、基因阻断、原位杂交、TUNEL染色以及免疫学染色等实验。结果表明,TCDD处理后会引起斑马鱼 下颌短小,Shh基因在下颌部表达降低;而在芳烃基受体AhR功能阻断的胚胎中,TCDD并没有引起斑马鱼下 颌短小,同时也没有观察到Shh基因表达缺失;免疫学染色表明TCDD和Shh阻断物质Cyclopamine均可引起 斑马鱼下颌区域增殖细胞的减少。TCDD引起的下颌短小可能是首先引起以AhR为媒介的Shh表达缺失,进而 造成下颌部增殖细胞减少。 展开更多

关键词 shh基因 芳烃基受体 二恶英 基因阻断 下颌 斑马鱼

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两品种兔皮肤Shh基因的表达规律研究 被引量：4

5

作者 孙露露 黄冬维 +2 位作者 陈胜 吴信生 赵辉玲 《中国草食动物科学》 CAS 2013年第4期5-8,共4页

采用实时荧光定量PCR技术研究Shh基因在皖系长毛兔和比利时兔不同周龄皮肤中的表达规律,结果表明：Shh基因在两个兔品种中的表达规律并不完全一致,但均在毛生长旺盛期表达量相对较高。Shh基因在皖系长毛兔0~22周龄中的表达量均相对较高... 采用实时荧光定量PCR技术研究Shh基因在皖系长毛兔和比利时兔不同周龄皮肤中的表达规律,结果表明：Shh基因在两个兔品种中的表达规律并不完全一致,但均在毛生长旺盛期表达量相对较高。Shh基因在皖系长毛兔0~22周龄中的表达量均相对较高,在比利时兔中0~6周龄时表达量相对较高,8～22周龄时表达量较低。由此推测Shh基因与家兔毛生长相关。 展开更多

关键词 皖系长毛兔 比利时兔 shh基因 实时荧光定量PCR 表达

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实时定量PCR检测慢性粒细胞白血病患者Shh、Smo基因的表达水平 被引量：3

6

作者 朱华民 李扬秋 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期267-269,共3页

目的建立Hedgehog信号通路功能性基因Shh和功能性受体蛋白Smo基因的定量检测方法,并分析其在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者中的表达水平。方法利用实时定量PCR检测20例CML患者和作为正常对照(8例)的健康人外周血... 目的建立Hedgehog信号通路功能性基因Shh和功能性受体蛋白Smo基因的定量检测方法,并分析其在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者中的表达水平。方法利用实时定量PCR检测20例CML患者和作为正常对照(8例)的健康人外周血细胞中Shh、Smo基因的表达水平,以β2微球蛋白(β2-M)基因作为内对照。结果 CML组Shh、Smo表达水平均明显高于正常对照组(P<0.05)。结论成功建立Shh、Smo基因的定量检测方法;Shh、Smo基因在CML中高表达。 展开更多

关键词 shh Smo基因 慢性粒细胞白血病 实时定量PCR 基因表达

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多鳍鱼Shh基因克隆与同源性分析 被引量：3

7

作者 张昌盛 刘群 +3 位作者 李湘涛 翟红 王俊杰 孙永华 《科技导报》 CAS CSCD 2007年第12期23-27,共5页

根据已报道的软骨鱼、硬骨鱼、两栖类、鸟类、哺乳类和人的Sonichedgehog(Shh)基因序列,在Shh基因保守区设计一对简并性引物,利用PCR技术从多鳍鱼cDNA中扩增Shh基因。结果显示,多鳍鱼Shh基因全长1263bp,编码421个氨基酸。通过同源性比... 根据已报道的软骨鱼、硬骨鱼、两栖类、鸟类、哺乳类和人的Sonichedgehog(Shh)基因序列,在Shh基因保守区设计一对简并性引物,利用PCR技术从多鳍鱼cDNA中扩增Shh基因。结果显示,多鳍鱼Shh基因全长1263bp,编码421个氨基酸。通过同源性比较发现,多鳍鱼与肺鱼的同源性最高,为82.5%,二级结构分析表明,Shh蛋白含有30.71%的α螺旋,21.67%的扩展线条和47.62%的无规卷曲,不含β片层;并以蛋白质结构数据库(PDB)中已解析的Shh蛋白的三维结晶结构(3D)为模板,利用http://www.expasy.org/swissmod/SWISS-MODEL.html同源模建Shh蛋白的三维结构,为进一步研究Shh基因在胚胎体节发育和肢芽图式形成中的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 多鳍鱼 shh基因 分子进化 同源性分析

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Hedgehog信号通路相关基因在大肠癌的表达及其临床意义 被引量：2

8

作者 吴莹莹 李瑜元 《广州医学院学报》 2009年第5期1-5,共5页

目的:研究Hedgehog信号通路相关基因SHH、SMO、GLI_1在大肠癌中的表达及其临床意义。方法:用RT-PCR检测43例大肠癌切除标本的癌组织和距离癌10 cm以上的癌旁组织的SHH、SMO、GLI_1 mRNA表达的阳性率,并与20例非肠癌患者的正常大肠组织对... 目的:研究Hedgehog信号通路相关基因SHH、SMO、GLI_1在大肠癌中的表达及其临床意义。方法:用RT-PCR检测43例大肠癌切除标本的癌组织和距离癌10 cm以上的癌旁组织的SHH、SMO、GLI_1 mRNA表达的阳性率,并与20例非肠癌患者的正常大肠组织对照,分析其与大肠癌患者临床和病理各变量的相关性。结果:大肠癌组织SHH mRNA表达阳性率为27.9%,与癌旁组织的18.6%比较,差异无显著性(p>0.05),但显著高于正常组织的0%(P<0.05)。大肠癌组织SMO、GLI_1 mRNA表达阳性率分别为83.7%、34.9%,显著高于癌旁组织的58.1%、16.3%及正常组织的0%、0%(P<0.05)。SHH、SMO、GLI_1 mRNA表达阳性率之间并无相关性,阳性率与患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤部位、肿瘤浸润深度、病理分型等变量均无相关性(P>0.05)。结论:Hedgehog信号通路相关基因SHH、SMO、GLI_1 mRNA在大肠癌组织中表达阳性率显著增高,其表达与临床和病理各变量不相关。 展开更多

关键词 HEDGEHOG信号通路 基因 大肠癌 shh SMO GLI1

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结肠癌组织中Shh和Gli1基因的表达及临床意义 被引量：1

9

作者 蔡清河 涂海健 +2 位作者 余加和 杨莺卿 谢志勇 《中国医药科学》 2011年第9期12-14,21,共4页

目的探讨Shh和Gli1基因在结肠癌组织中的表达及意义。方法应用RT-PCR方法和免疫组织化学对38例结肠癌手术切除的标本进行Shh和Gli1基因表达检测,评估Shh和Gli1基因表达与结肠癌临床病理的关系。结果癌组织的Shh和Gli1基因呈高表达,与癌... 目的探讨Shh和Gli1基因在结肠癌组织中的表达及意义。方法应用RT-PCR方法和免疫组织化学对38例结肠癌手术切除的标本进行Shh和Gli1基因表达检测,评估Shh和Gli1基因表达与结肠癌临床病理的关系。结果癌组织的Shh和Gli1基因呈高表达,与癌旁组织比较,两者有显著性差异;Shh和Gli1基因表达强度与癌的分期密切相关,早期结肠癌的表达强度明显高于进展期癌。结论 Shh信号通路异常的活性状态有可能参与结肠癌的发生过程。Shh和Gli1基因检测对评估结肠癌的分期和预后具有重要意义。 展开更多

关键词 肿瘤 结肠 shh基因 Gli1基因

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人牙胚Shh的基因克隆和序列分析 被引量：1

10

作者 林媛 吴补领 +3 位作者 陆群 孙强 周鹏 韩骅 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2003年第11期622-624,共3页

目的 :从人牙胚组织克隆Shh的全部编码区 ,测定并分析其基因序列。方法 :利用RT -PCR方法 ,扩增人Shh基因片段 ,将基因片段插入 pMD18-T载体 ,限制性内切酶酶切鉴定 ,测定序列。 结果 :从人牙胚中成功扩增Shh ,Blast分析与GeneBank公布... 目的 :从人牙胚组织克隆Shh的全部编码区 ,测定并分析其基因序列。方法 :利用RT -PCR方法 ,扩增人Shh基因片段 ,将基因片段插入 pMD18-T载体 ,限制性内切酶酶切鉴定 ,测定序列。 结果 :从人牙胚中成功扩增Shh ,Blast分析与GeneBank公布的Shh基因编码区一致。结论 展开更多

关键词 牙胚 shh基因 克隆 基因序列分析 RT-PCR 牙胚发育

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实时荧光定量PCR检测多鳍鱼Shh基因表达标准品质粒和标准曲线的构建 被引量：1

11

作者 张昌盛 王俊杰 +2 位作者 李湘涛 翟红 刘群 《科技导报》 CAS CSCD 2007年第13期41-44,共4页

为了快速、准确定量多鳍鱼Shh基因在机体组织中的表达水平,根据笔者克隆的Shh基因序列,选择其高度保守区域设计一对引物,对多鳍鱼各组织提取mRNA,经RT-PCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌DH5α。筛选后得到重组标准品质... 为了快速、准确定量多鳍鱼Shh基因在机体组织中的表达水平,根据笔者克隆的Shh基因序列,选择其高度保守区域设计一对引物,对多鳍鱼各组织提取mRNA,经RT-PCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌DH5α。筛选后得到重组标准品质粒,对重组标准品质粒进行酶切、PCR和测序鉴定,表明Shh基因保守区段已经成功克隆。将重组标准品质粒进行倍比稀释,然后以此为模板,进行荧光定量PCR,系统自动分析软件显示Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系。回归方程为y=-0.32x+10.47,回归系数为1.00。构建Shh基因表达检测标准品质粒和标准曲线,建立检测多鳍鱼Shh基因荧光定量PCR方法,为进一步研究Shh基因在组织中的动态分布和研究多鳍鱼系统发育奠定了基础。 展开更多

关键词 shh基因 实时荧光定量PCR 标准曲线 多鳍鱼

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SHH基因在高度近视患者中的突变研究 被引量：1

12

作者 杜艳蕾 郭向明 +4 位作者 肖学珊 贾小云 黎仕强 郭莉 张清炯 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2004年第3期305-307,共3页

目的　研究定位于 7q3 6的SHH基因突变与高度近视发病的关系。方法　收集高度近视先证者 178例 ,制备外周血白细胞基因组DNA ,PCR扩增SHH基因 3个外显子及其邻近内含子 ,SSCP 异源双链法分析PCR产物 ,寻找可能的变异。结果　分析 178例... 目的　研究定位于 7q3 6的SHH基因突变与高度近视发病的关系。方法　收集高度近视先证者 178例 ,制备外周血白细胞基因组DNA ,PCR扩增SHH基因 3个外显子及其邻近内含子 ,SSCP 异源双链法分析PCR产物 ,寻找可能的变异。结果　分析 178例高度近视先证者SHH基因全部 3个外显子及邻近内含子 ,未发现任何变异。结论　SHH基因突变可能与本组高度近视无关。 展开更多

关键词 高度近视 shh基因 SSCP-异源双链

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Shh和Fgf8介导的视黄酸对22q11.2微缺失综合征心肌细胞TBX1表达的影响

13

作者 刘苗 吴小艳 +1 位作者 徐佳伟 金润铭 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第20期1569-1572,共4页

目的探讨Shh和Fgf8介导的视黄酸(RA)对22q11.2微缺失综合征中心肌细胞TBX1基因的调节机制。方法出生1～2 d SD乳鼠26只,分离培养乳鼠心肌细胞,48 h后用流式分选方法分选纯化心肌细胞,纯化的心肌细胞继续培养48 h。分为空白对照组;阴性... 目的探讨Shh和Fgf8介导的视黄酸(RA)对22q11.2微缺失综合征中心肌细胞TBX1基因的调节机制。方法出生1～2 d SD乳鼠26只,分离培养乳鼠心肌细胞,48 h后用流式分选方法分选纯化心肌细胞,纯化的心肌细胞继续培养48 h。分为空白对照组;阴性对照组;处理1组:1×10-7mol/L RA;处理2组:3×10-7mol/L RA;处理3组:5×10-7mol/L RA。采用RT-PCR和Western blot方法分别检测乳鼠心肌细胞Shh、Fgf8 mRNA和蛋白相对量表达的变化。结果Shh和Fgf8在乳鼠心肌细胞有少量的表达,给予RA刺激后,与空白对照组比较,3×10-7mol/L RA使细胞内Shh mRNA和蛋白水平分别增加1.51倍和1.10倍(t=11.328,15.598 Pa<0.05),5×10-7mol/LRA使细胞内Shh mRNA和蛋白水平分别增加2.21倍和2.38倍(t=13.761,18.982Pa<0.05);3×10-7mol/L RA使细胞内Fgf8 mRNA和蛋白水平分别增加2.50倍和0.80倍(t=14.368,24.226 Pa<0.05),而5×10-7mol/LRA使细胞内Fgf8 mRNA和蛋白水平分别增加3.48倍和2.04倍(t=23.926,26.364 Pa<0.05)。结论RA可以上调乳鼠心肌细胞Shh和Fgf8的表达,且呈剂量依赖效应。Shh和Fgf8参与了RA对心肌细胞TBX1的调节过程。 展开更多

关键词 视黄酸 TBX1基因 shh基因 Fgf8基因

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ICR鼠皮肤Sonic Hedgehog(Shh)基因的克隆及表达

14

作者 朱晓芳 王琴 +4 位作者 成蓓 高慧 原志伟 朱国强 范卫新 《中国麻风皮肤病杂志》 2009年第9期665-667,共3页

目的:检测ICR胎鼠皮肤组织克隆Sonic Hedgehog(Shh)基因在胎鼠皮肤的表达。方法:分离12.5～16.5 d胎龄的胎鼠背部皮肤,用Trizol-酚-氯仿抽提法提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增胎鼠皮肤Shh全部编码基因,重组于pMD19-T载体进行克隆测序分析... 目的:检测ICR胎鼠皮肤组织克隆Sonic Hedgehog(Shh)基因在胎鼠皮肤的表达。方法:分离12.5～16.5 d胎龄的胎鼠背部皮肤,用Trizol-酚-氯仿抽提法提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增胎鼠皮肤Shh全部编码基因,重组于pMD19-T载体进行克隆测序分析。应用合成地高辛标记的反义Shh-mRNA探针,整体原位杂交技术检测Shh基因在ICR鼠皮肤上的表达。结果:从15.5 d胎鼠背部皮肤中成功扩增Shh基因,Blast分析与GeneBank公布的Shh基因编码区一致。同时15.5 d以后胎鼠背部皮肤检测到Shh基因的表达。结论:Shh基因可能参与了皮肤毛囊的形成。 展开更多

关键词 Sonic Hedgehog(shh) 克隆 基因表达 ICR鼠

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基因芯片技术检测Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织microRNA-210表达的影响

15

作者 何伟亮 田小超 +3 位作者 赵亚靖 张凯华 楚宝 王贺波 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2021年第2期67-70,共4页

目的探讨Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织microRNA-210表达的影响。方法建立小鼠脑皮质梗死模型,基因芯片技术筛选出脑梗死小鼠脑皮质组织差异表达基因,并应用qRT-PCR技术对其差异性表达进行验证。给予Shh蛋白治疗后,应用qRT-PCR技术观察... 目的探讨Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织microRNA-210表达的影响。方法建立小鼠脑皮质梗死模型,基因芯片技术筛选出脑梗死小鼠脑皮质组织差异表达基因,并应用qRT-PCR技术对其差异性表达进行验证。给予Shh蛋白治疗后,应用qRT-PCR技术观察Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织microRNA-210表达。应用ATP试剂盒检测Shh蛋白对脑梗死小鼠脑皮质组织ATP活性的变化。结果与对照组相比,基因芯片筛选出脑梗死小鼠脑皮质组织中差异表达microRNA 17个,其中表达上调8个,表达下调9个。进一步筛选出microRNA-210,运用q-PCR技术验证其在脑梗死后脑皮质组织中表达上调(P<0.05)。与脑梗死组相比较,经Shh蛋白干预后小鼠皮质组织microRNA-210表达上调(P<0.05)与对照组相比,脑梗死组ATP含量下降,Shh蛋白干预后,ATP含量有所上升(P<0.05)。结论Shh蛋白可能通过上调microRNA-210逆转能量生成障碍对脑梗死发挥治疗作用。 展开更多

关键词 脑梗死 基因芯片 shh蛋白 microRNA-210 能量生成

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山麻鸭SHH基因克隆和组织表达

16

作者 李秀金 陈永浩 +5 位作者 孙敬帅 石逸夫 林晓冰 欧阳宏佳 黄运茂 田允波 《仲恺农业工程学院学报》 CAS 2019年第2期1-5,共5页

本研究旨在克隆鸭SHH基因了解其组织表达情况,以山麻鸭为试验材料,采集下丘脑、垂体和卵巢组织样品,提取RNA逆转录后进行SHH基因克隆,并采用实时荧光定量PCR方法检测其表达水平.本试验克隆获得山麻鸭SHH基因cDNA序列878bp,包含了5′UTR1... 本研究旨在克隆鸭SHH基因了解其组织表达情况,以山麻鸭为试验材料,采集下丘脑、垂体和卵巢组织样品,提取RNA逆转录后进行SHH基因克隆,并采用实时荧光定量PCR方法检测其表达水平.本试验克隆获得山麻鸭SHH基因cDNA序列878bp,包含了5′UTR113bp和编码序列765bp,编码255个氨基酸.氨基酸序列同源性比对发现,山麻鸭SHH基因与其他禽类的同源性较高,在物种间的保守性高.山麻鸭SHH基因在下丘脑表达量显著高于垂体和各级卵泡组织(P<0.01);而在大黄卵泡中表达极显著低于大白卵泡和小黄卵泡(P<0.01).本研究克隆获得SHH基因部分序列并检测其组织表达规律,为后续功能研究打下基础. 展开更多

关键词 山麻鸭 shh 基因克隆 组织表达

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用Western Blot和原位杂交法研究Shh在小鼠牙胚钟状晚期的表达 被引量：1

17

作者 周彦秋 林久祥 贾弘禔 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期210-212,I001,共4页

目的　从形态学和半定量分析两方面研究Shh(SonicHedghog)基因在小鼠牙胚钟状晚期的表达 ,探讨Shh在牙胚钟状晚期的生物学作用。方法　取出生后 1、2、3、5和 7d(P1,P2 ,P3,P5 ,P7)的Balb/c纯系小鼠牙胚 ,用Western印迹方法检测Shh的表... 目的　从形态学和半定量分析两方面研究Shh(SonicHedghog)基因在小鼠牙胚钟状晚期的表达 ,探讨Shh在牙胚钟状晚期的生物学作用。方法　取出生后 1、2、3、5和 7d(P1,P2 ,P3,P5 ,P7)的Balb/c纯系小鼠牙胚 ,用Western印迹方法检测Shh的表达量 ;原位杂交检测Shh在出生后1d和 3d天乳鼠牙胚中的表达部位与强度。结果　钟状晚期Shh特异表达于成釉细胞层 ,其强度随出生天数增加而减弱 ;随着成釉细胞发育成熟 ,4 4 5 0 0Shh表达量逐渐降低 ,P1的吸光光度值为P7的 5 5倍。P1,P2与P3可检测出活性Shh N片段。结论　Shh在钟状晚期特异地表达于成釉细胞层 。 展开更多

关键词 Western Blot 原位杂交法 shh 小鼠 牙胚发育 钟状晚期

原文传递

BRD4通过SHH信号通路诱导甲状腺癌细胞增殖、侵袭与迁移 被引量：9

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作者 冀凯伦 刘琪 +2 位作者 牟作峰 马晓东 李国楼 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期860-866,共7页

背景与目的:甲状腺癌是目前发病率最高的内分泌系统恶性肿瘤之一,目前的综合治疗手段虽然效果较好,但是部分患者在随后的治疗中会出现继发性摄碘率下降,131I治疗效果差,从而导致复发及远处转移。近年来的研究发现,溴样结构域蛋白4(doubl... 背景与目的:甲状腺癌是目前发病率最高的内分泌系统恶性肿瘤之一,目前的综合治疗手段虽然效果较好,但是部分患者在随后的治疗中会出现继发性摄碘率下降,131I治疗效果差,从而导致复发及远处转移。近年来的研究发现,溴样结构域蛋白4(double bromodomain-containing protein 4,BRD4)可促进多种恶性肿瘤的进展,因此本研究旨在探究BRD4在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)细胞中的作用,寻找治疗甲状腺癌的特异性靶点。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测PTC组织和癌周组织中BRD4的表达差异,应用si BRD4干扰基因转染PTC细胞株TPC-1,应用蛋白[质]印迹法(Western blot)检验沉默效果,通过MTT实验、平板克隆实验、Transwell小室侵袭与迁移实验检验沉默BRD4前后PTC细胞株TPC-1活力、增殖、迁移及侵袭等生物学行为的变化。进一步应用Western blot及RTFQ-PCR检测钠碘转运体(sodium iodide symporter,NIS)基因及蛋白的表达变化,以及SHH信号通路下游基因SHH、GLI1表达变化情况。结果:BRD4在PTC组织中表达明显增高(P<0.05);在体外实验中BRD4沉默后PTC细胞株TPC-1的细胞活力、增殖、迁移与侵袭能力下降。此外,BRD4沉默后NIS基因及蛋白表达增高,SHH信号通路下游基因SHH、GLI1表达降低(P<0.05)。结论:BRD4通过上调SHH信号通路相关基因促进PTC细胞的侵袭与迁移,沉默BRD4可以促进NIS的表达,BRD4有望成为治疗甲状腺癌的新靶点。 展开更多

关键词 甲状腺癌 溴样结构域蛋白4 shh信号通路 钠碘转运体基因

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YBX1截短体抑制髓母细胞瘤DAOY的迁移和干性增殖能力

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作者 赖俊伟 叶子 +1 位作者 俞婷婷 程雁 《生物技术》 CAS 2024年第3期304-310,352,共8页

[目的]利用CRISPR/Cas9技术构建YBX1基因截短的SHH型髓母细胞瘤DAOY细胞系,探讨截短的YBX1对DAOY细胞迁移和干性增殖的影响。[方法]设计针对YBX1基因的sgRNA序列,并将其插入pX330载体构建sgYBX1表达质粒。DAOY细胞经pX330-sgYBX1和耐青... [目的]利用CRISPR/Cas9技术构建YBX1基因截短的SHH型髓母细胞瘤DAOY细胞系,探讨截短的YBX1对DAOY细胞迁移和干性增殖的影响。[方法]设计针对YBX1基因的sgRNA序列,并将其插入pX330载体构建sgYBX1表达质粒。DAOY细胞经pX330-sgYBX1和耐青霉素质粒转染,药筛后采用极限稀释法挑取单克隆细胞系,使用测序及蛋白质印迹技术检测YBX1基因编辑的情况,利用免疫荧光实验检测YBX1截短体在DAOY细胞内的定位情况,并通过CCK8、Transwell、克隆形成实验、低黏附板成球实验检测YBX1截短体对DAOY细胞增殖、迁移及干性的影响。[结果]测序结果表明,在DAOYYBX1-trunc细胞系中,YBX1基因编码区缺失144个碱基,导致合成肽段的第21~68氨基酸(位于A/P domain和CSD结构域)缺失。免疫荧光实验结果表明截短的YBX1蛋白定位富集在细胞核内。与未编辑细胞相比,DAOYYBX1-trunc细胞的增殖能力基本不变,但迁移能力减弱了50%,克隆形成能力削减了54%,细胞成球能力削减了68%。[结论]成功构建YBX1蛋白在21~68氨基酸截短的DAOY细胞系,其削弱了DAOY细胞的迁移及干性增殖能力。 展开更多

关键词 YBX1基因 DAOY shh型髓母细胞瘤 冷休克结构域 截短体 细胞定位 迁移 干性增殖

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Shh信号通路对小鼠胚胎肺发育的调控作用 被引量：5

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作者 包和婧 马树东 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期274-282,共9页

目的探讨经典Shh信号通路对小鼠胚胎肺发育过程中上皮、间质(支气管软骨、平滑肌)发育的调控作用。方法利用免疫组化检测Shh通路受体Smo(Smoothened)以及血小板源性生长因子受体(Pdgfr-α)的表达;利用Pdgfr-α间质特异性表达的特点构建P... 目的探讨经典Shh信号通路对小鼠胚胎肺发育过程中上皮、间质(支气管软骨、平滑肌)发育的调控作用。方法利用免疫组化检测Shh通路受体Smo(Smoothened)以及血小板源性生长因子受体(Pdgfr-α)的表达;利用Pdgfr-α间质特异性表达的特点构建Pdgfr-α-cre,通过他莫昔芬的诱导,在E12.5-E16.5(E,embryo)天转基因小鼠肺间质中特异性敲除Shh关键信号分子Smo;利用免疫荧光观察E12.5-E16.5小鼠胚胎肺间质特异性敲除Shh信号通路之后,小鼠胚胎肺发育过程中上皮、间质(支气管软骨、平滑肌)发育的改变,探讨Shh信号通路在小鼠胚胎肺发育过程中对上皮-间质转化的作用。结果 Smo在假腺期早期的肺上皮与间质中显著表达,后表达量逐渐下调,主要集中在肺间质,Pdgfr-α在假腺期早期胚胎肺中集中在远端肺上皮及间质,后期逐渐往近端间质发展,直至集中在主支气管周围的近端间质;首次利用Pdgfr-α-Cre系统在间质中特异性敲除Smo,成功制备了Smo缺失小鼠模型;与对照组肺相比,E12.5-E16.5基因敲除组小鼠的肺体积缩小,支气管分支形成减少;近端上皮指标P63的表达量下降(P<0.05);平滑肌标志物表达水平发生改变;支气管软骨发育滞后,黏蛋白表达量下降。结论 Shh信号通路的时空特异表达在小鼠胚胎肺上皮、间质(支气管软骨、平滑肌)发育的起着重要的调控作用。 展开更多

关键词 shh信号通路 基因敲除 肺发育 免疫荧光

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