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Shc1对M1型巨噬细胞极化的作用研究
1
作者 胡苗清 黄成珍 +2 位作者 陈厚早 聂宇 廉虹 《中国分子心脏病学杂志》 CAS 2023年第4期5548-5553,共6页
目的 通过干扰小鼠巨噬细胞Shc1基因,探究Shc1对脂多糖LPS刺激巨噬细胞极化的作用。方法 分离C57BL/6J成年小鼠(6~8周)的巨噬细胞,加入LPS刺激24 h后,提取细胞RNA反转录为cDNA,利用siRNA技术敲低Shc1基因(si-Shc1),和对照组(Si-NC)同时... 目的 通过干扰小鼠巨噬细胞Shc1基因,探究Shc1对脂多糖LPS刺激巨噬细胞极化的作用。方法 分离C57BL/6J成年小鼠(6~8周)的巨噬细胞,加入LPS刺激24 h后,提取细胞RNA反转录为cDNA,利用siRNA技术敲低Shc1基因(si-Shc1),和对照组(Si-NC)同时处理48 h后检测Shc1的mRNA和蛋白的敲低水平,利用RT-qPCR分别检测促炎因子、转录因子和抑炎因子的mRNA水平变化;在Si-NC和si-Shc1组中使用脂多糖LPS刺激24 h后,利用RT-qPCR分别检测促炎因子、转录因子和抑炎因子的mRNA水平变化。结果 LPS刺激可以促进M1型巨噬细胞分泌促炎因子(P<0.000 1),且增强转录因子的RNA水平(P<0.000 1);与si-NC组相比,si-Shc1会增强细胞中促炎因子TNF-α的RNA水平(P<0.001),降低IL-1β、IL-6和iNOS的RNA水平(P<0.001);敲低Shc1的细胞加入LPS刺激后,促炎因子以及转录因子的RNA水平与未处理细胞组相当。结论 Shc1参与调控促炎因子的表达,但不参与脂多糖LPS对M1型巨噬细胞的极化作用。 展开更多
关键词 shc1 M1型巨噬细胞 极化作用 促炎因子 抑炎因子
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Shc1在肝癌组织中的表达及对肝癌SMMC-7721细胞增殖迁移能力的影响 被引量：2
2
作者 戴敏 刘俊 +5 位作者 朱海燕 顾澄宇 陶汉川 乔谦 杨树东 蔡兵 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期944-951,共8页
目的探讨Shc1在肝癌组织中的表达情况及其对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移能力的影响。方法采用实时定量PCR、蛋白质印迹法、免疫组织化学法检测33例肝癌及其对应的癌旁组织中Shc1的表达情况,并分析Shc1蛋白表达量与临床特征间的关系;... 目的探讨Shc1在肝癌组织中的表达情况及其对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移能力的影响。方法采用实时定量PCR、蛋白质印迹法、免疫组织化学法检测33例肝癌及其对应的癌旁组织中Shc1的表达情况,并分析Shc1蛋白表达量与临床特征间的关系;培养肝癌SMMC-7721细胞,以siRNA技术干扰Shc1的表达,采用MTT法和细胞划痕试验分别检测干扰Shc1对细胞增殖活力和迁移能力的影响。结果在33对样本中,肝癌组织中Shc1的表达高于癌旁组织(P<0.05);Shc1表达于肝癌细胞的胞质中。无肝硬化的患者Shc1阳性率(100%)高于伴肝硬化者(54.2%),术前Child-Pugh分级A级的患者Shc1阳性率(75.9%)高于B级或C级的患者(0%),术前血AFP阳性患者Shc1阳性率(79.2%)高于AFP阴性患者(33.3%),术后病理EdmondsonⅢ、Ⅳ级患者Shc1阳性率(84.2%)高于Ⅰ、Ⅱ级的患者(42.9%),差异均有统计学意义(P<0.05)。干扰Shc1表达后,随时间延长,SMMC-7721细胞增殖、迁移明显受到抑制(P<0.05)。结论 Shc1在肝癌组织中高表达,且Shc1的阳性率与有无肝硬化、Child-Pugh分级、术前AFP、病理Edmondson分级相关;干扰Shc1的表达可抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖、迁移能力。 展开更多
关键词 shc1 肝细胞癌 细胞增殖 细胞迁移 RNA干扰
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人p52Shc1蛋白的真核表达及其活性鉴定
3
作者 邓昊 熊玉锋 +1 位作者 杨恒 郝文波 《生物技术》 北大核心 2017年第5期434-439,共6页
[目的]构建带his标签的人p52Shc1基因真核表达载体,并根据其生物学活性进行鉴定。[方法]采用PCR技术以Shc1 cDNA基因为模板扩增Shc1基因,将其插入pEnter载体构建pEnter-p52shc1重组质粒,将重组质粒与空载体分别转入293T细胞,利用Western... [目的]构建带his标签的人p52Shc1基因真核表达载体,并根据其生物学活性进行鉴定。[方法]采用PCR技术以Shc1 cDNA基因为模板扩增Shc1基因,将其插入pEnter载体构建pEnter-p52shc1重组质粒,将重组质粒与空载体分别转入293T细胞,利用Western Blot检测p52Shc1表达情况,并使用cck-8法绘制细胞生长曲线。[结果]通过双酶切获得2条与目的基因大小相符的片段,测序结果显示符合率为100%,Western Blot结果显示在52 kDa大小处出现清晰单一条带,cck-8法绘制的细胞生长曲线显示,转染重组质粒pEnter-p52Shc1的细胞生长速率明显大于转染pEnter空载的细胞(P<0.01)。[结论]成功构建带his标签的人p52Shc1基因真核表达载体并在293T细胞中成功表达,转染重组质粒并表达p52Shc1蛋白的293T细胞的增值速率明显提高。 展开更多
关键词 p52shc1 293T 重组质粒构建 真核表达 cck-8法
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