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FSH和胰岛素对牛卵泡颗粒细胞长期培养的影响 被引量:12
1
作者 高庆华 蒋超祥 韩春梅 《中国草食动物》 2004年第4期16-18,共3页
McCoy’s5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺 ,对牛卵巢上大 (直径 >8mm)、中 (4mm <直径 <8mm)、小 (直径 <4mm)非闭锁卵泡的颗粒细胞进行无血清培养 ,研究添加不同浓度的促卵泡激素和胰岛素对颗粒细胞... McCoy’s5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺 ,对牛卵巢上大 (直径 >8mm)、中 (4mm <直径 <8mm)、小 (直径 <4mm)非闭锁卵泡的颗粒细胞进行无血清培养 ,研究添加不同浓度的促卵泡激素和胰岛素对颗粒细胞增生、分化和激素分泌的影响。结果 :FSH可以诱导颗粒细胞增生及雌二醇合成能力 ,颗粒细胞的雌二醇合成能力与生理浓度的FSH呈剂量依赖方式。胰岛素对大、中、小卵泡颗粒细胞增生和雌二醇分泌有促进作用。 展开更多
关键词 胰岛素 FSH 卵泡颗粒细胞 细胞培养 剂量 雌二醇 培养基
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动物细胞无血清培养技术研究进展 被引量:12
2
作者 梅建国 庄金秋 沈志强 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期87-89,共3页
动物细胞培养技术建立在组织培养技术基础上,在技术方法、实际应用方面都得到全新发展。该文主要就培养基、工程细胞株、培养仪器和设备等几个重要方面进行综述。
关键词 动物细胞 无血清培养 培养基 工程细胞株
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促卵泡激素和胰岛素对牛卵泡颗粒细胞长期培养的影响 被引量:10
3
作者 高庆华 周虚 +2 位作者 王春清 韩春梅 叶云鹏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期442-443,447,共3页
以M cCoy′s5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺,对牛卵巢上大(直径>8 mm)、中(4 mm<直径<8 mm)、小(直径<4 mm)非闭锁卵泡的颗粒细胞进行无血清培养,研究添加不同浓度的促卵泡激素(FSH)和胰岛素对颗粒细... 以M cCoy′s5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺,对牛卵巢上大(直径>8 mm)、中(4 mm<直径<8 mm)、小(直径<4 mm)非闭锁卵泡的颗粒细胞进行无血清培养,研究添加不同浓度的促卵泡激素(FSH)和胰岛素对颗粒细胞增生、分化和激素分泌的影响。结果,FSH能诱导颗粒细胞增生及提高其雌二醇合成能力,颗粒细胞雌二醇的合成能力与生理浓度的FSH存在剂量依赖关系。胰岛素对大、中、小卵泡颗粒细胞增生和雌激素分泌有促进作用。 展开更多
关键词 无血清培养 颗粒细胞 FSH 雌二醇 胰岛素
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Isolation and Identification of Cancer Stem Cells from Human Osteosarcom by Serum-free Three-dimensional Culture Combined with Anticancer Drugs 被引量:7
4
作者 周松 李锋 +4 位作者 肖骏 熊伟 方忠 陈文坚 牛鹏彦 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2010年第1期81-84,共4页
The cancer stem cells(CSCs)from human osteosarcoma by serum-free three-dimensional culture combined with anticancer drugs were isolated and identified.The primary cells derived from human osteosarcoma were digested by... The cancer stem cells(CSCs)from human osteosarcoma by serum-free three-dimensional culture combined with anticancer drugs were isolated and identified.The primary cells derived from human osteosarcoma were digested by trypsin to prepare a single-cell suspension,and mixed homogeneously into 1.2% alginate gel.Single-cell alginate gel was cultured with serum-free DMEM/F12 medium.Epirubicin(0.8μg/mL)was added to the medium to enrich CSCs.After cultured conventionally for 7 to 10 days,most of cells suspended in ... 展开更多
关键词 three-dimensional culture serum-free culture EPIRUBICIN OSTEOSARCOMA cancer stem cells
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同源GnRH对无血清培养鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的作用 被引量:7
5
作者 汪琳仙 刘金中 张才乔 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期330-335,共6页
选用产蛋规律的鸡,在一个产蛋序列中,排卵前1~3h剖腹收集各级卵泡,分离颗粒层建立卵泡颗粒细胞无血清单层贴壁培养模型。在此基础上,用不同剂量鸡促性腺激素释放激素(GnRH-Ⅱ)单独处理或与羊LH(oLH)协同处理,并... 选用产蛋规律的鸡,在一个产蛋序列中,排卵前1~3h剖腹收集各级卵泡,分离颗粒层建立卵泡颗粒细胞无血清单层贴壁培养模型。在此基础上,用不同剂量鸡促性腺激素释放激素(GnRH-Ⅱ)单独处理或与羊LH(oLH)协同处理,并使用GnRH-Antagonist(GA),以观察GnRH-Ⅱ对颗粒细胞孕酮分泌的影响。研究获得了以下结果:(1)GnRH-Ⅱ对鸡不同卵抱(F1、F3、F5)颗粒细胞孕酮分泌均有促进作用,并呈现剂量-反应关系;(2)GnRH-对oLH促鸡卵泡颗粒细胞孕酮的分泌有明显的协同作用;(3)GnRH拮抗物使GnRH-Ⅱ的促卵泡颗粒细胞孕酮分泌作用受到阻断。 展开更多
关键词 GnRH-Ⅱ 孕酮 卵泡颗粒细胞 无血清培养
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无血清无饲养层条件下培养小鼠胚胎干细胞 被引量:6
6
作者 韩甫 叶荣 +2 位作者 鲍柳君 张军超 张焕相 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2008年第4期254-257,I0002,共5页
目的研究在无血清无饲养层条件下小鼠胚胎干细胞的培养方法,为最终建立无血清无饲养层培养系统打下基础。方法比较小鼠胚胎干细胞ES-S8株在无血清培养体系和有血清培养体系中的生长情况,分析ES-S8细胞克隆形成效率,测定其生长速度;然后... 目的研究在无血清无饲养层条件下小鼠胚胎干细胞的培养方法,为最终建立无血清无饲养层培养系统打下基础。方法比较小鼠胚胎干细胞ES-S8株在无血清培养体系和有血清培养体系中的生长情况,分析ES-S8细胞克隆形成效率,测定其生长速度;然后在撤去血清和饲养层的条件下培养ES-S8细胞,进行AKP染色和表面标记物SSEA-1免疫荧光检测。结果ES-S8细胞在无血清培养条件下细胞生长速度减缓,克隆形成率降低,但AKP染色、SSEA-1免疫荧光均显阳性;在无血清无饲养层条件下ES-S8细胞培养仍能形成克隆,且AKP染色、SSEA-1免疫荧光均显阳性。结论研究表明ES-S8细胞能够在无血清无饲养层的培养条件下生长,保持其良好的未分化特性。 展开更多
关键词 载脂蛋白 四环素调控反式激活子
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铅对胚胎大鼠海马神经元G蛋白mRNA表达的影响 被引量:5
7
作者 颜崇淮 沈晓明 +3 位作者 何稼敏 敖黎明 吴胜虎 吴圣楣 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2000年第1期5-8,共4页
目的研究铅对神经信号传导的关键部位──细胞膜上G蛋白(G-proteins)的mRNA表达水平的影响。方法采用胚胎大鼠海马神经元无血清培养方法,加入s不同浓度的氯化铅溶液,设立无铅暴露的空白对照组,采用逆转录多聚酶链... 目的研究铅对神经信号传导的关键部位──细胞膜上G蛋白(G-proteins)的mRNA表达水平的影响。方法采用胚胎大鼠海马神经元无血清培养方法,加入s不同浓度的氯化铅溶液,设立无铅暴露的空白对照组,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术半定量测定G蛋白三种不同类型α亚基,包括Gs、Gi2和Golα亚基mRNA表达水平,然后对结果进行相关矩阵分析。结果随着铅暴露水平的提高,Gi2α、Go1αmRNA表达水平显著增加,而GsαmRNA表达水平却无明显改变。结论铅暴露可干扰海马神经元G蛋白mRNA的表达,使G蛋白不同α亚基的mRNA表达水平失去平衡,从而影响神经信号的正常传递。 展开更多
关键词 铅毒性 神经元 G-蛋白 MRNA表达 胚胎 海马
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脐血CD34^+细胞及红系祖细胞扩增的实验研究 被引量:5
8
作者 张洁霞 毛平 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期429-433,共5页
脐血是造血祖细胞的丰富来源之一,选择合适的培养条件,体外诱导其定向扩增为红系祖细胞,输入体内产生成熟红细胞。本实验旨在探讨脐血单个核细胞(MNC)体外红系定向扩增的理想因子组合(Flt3配基FL联合TPO、SCF、EPO及FL、SCF、TPO)对CD34... 脐血是造血祖细胞的丰富来源之一,选择合适的培养条件,体外诱导其定向扩增为红系祖细胞,输入体内产生成熟红细胞。本实验旨在探讨脐血单个核细胞(MNC)体外红系定向扩增的理想因子组合(Flt3配基FL联合TPO、SCF、EPO及FL、SCF、TPO)对CD34+细胞扩增的影响。将单个核细胞接种至stemspan无血清培养液中,共分3组:A组为对照组,B组为TPO+SCF+FL+EPO+IGF1组,C组为TPO+SCF+FL组,C组在第6天及以后换液加入EPO和IGF1。于培养0、6、10、14天进行细胞计数,细胞集落测定,流式细胞术测定细胞的CD34、CD34CD71、CD71GPA细胞的比例。结果表明:经10天培养后,B组总细胞数扩增6.89倍,而C组3.06倍;B组CD34+细胞增加4.83,而C组2.47倍;B组集落形成细胞数增加4.3倍,而C组增加2.5倍;B组红系祖细胞BFUE和CFUE数增加5.4倍,而C组3.1倍;B组CD34+CD71+细胞数增加8.72倍,而C组3.37倍;B组CD71+GPA+细胞数增加53.4倍,而C组30.29倍。结论:脐血MNC在无血清培养液中加入FL+SCF+TPO实现了CD34+细胞及集落形成细胞的扩增。脐血MNC在无血清培养液中加入FL+SCF+TPO+EPO+IGF1短期液体培养获得红系祖细胞的扩增,在第0天比6天加入EPO获得更多红祖细胞(P<0.05)。由于TPO+SCF+FL+EPO+IGF1组的集落形成细胞数、CFUE和BFUE数于第10天最多。 展开更多
关键词 脐血 单个核细胞 红系祖细胞 无血清培养 CD34^+细胞
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无血清培养的SP2/0细胞肿瘤学特性的研究 被引量:6
9
作者 李雅婷 窦骏 +4 位作者 赵枫姝 潘猛 王永仿 曹明刚 文萍 《生物技术通讯》 CAS 2008年第1期20-23,共4页
目的:研究无血清培养条件下SP2/0细胞的相关肿瘤学特性。方法:应用MTT法检测用无血清培养所得的SP2/0细胞的增殖能力及这些细胞中SP细胞的比例,并检测它们的体内致瘤性。结果:SP2/0细胞在无血清培养基中增殖缓慢,但当把它们放回含血清... 目的:研究无血清培养条件下SP2/0细胞的相关肿瘤学特性。方法:应用MTT法检测用无血清培养所得的SP2/0细胞的增殖能力及这些细胞中SP细胞的比例,并检测它们的体内致瘤性。结果:SP2/0细胞在无血清培养基中增殖缓慢,但当把它们放回含血清培养中,则表现出比普通培养的SP2/0细胞有更高的增殖能力;无血清培养可以使SP2/0细胞中的SP细胞比例增加;无血清培养的SP2/0细胞比普通培养的SP2/0细胞在鼠体内有更高的体内致瘤性。结论:无血清培养可以增加SP2/0细胞中具有干细胞特性的瘤细胞比例,即可以富集SP2/0细胞的肿瘤干细胞。 展开更多
关键词 无血清培养 增殖能力 SP细胞 肿瘤干细胞
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接种密度对牛颗粒细胞形态及相关基因表达的影响
10
作者 王栋梁 成俊丽 李鹏飞 《山西农业科学》 2024年第3期147-152,共6页
牛卵巢颗粒细胞是雌激素(Estrogen,E_(2))合成的主要来源,具有E_(2)活性的牛颗粒细胞体外模型的建立是研究E_(2)合成与分泌过程中潜在调控机制的重要工具,该细胞模型的建立可为E_(2)合成分子调控机制及牛卵巢卵泡发育机制的研究提供理... 牛卵巢颗粒细胞是雌激素(Estrogen,E_(2))合成的主要来源,具有E_(2)活性的牛颗粒细胞体外模型的建立是研究E_(2)合成与分泌过程中潜在调控机制的重要工具,该细胞模型的建立可为E_(2)合成分子调控机制及牛卵巢卵泡发育机制的研究提供理论与技术支持。细胞接种密度是颗粒细胞体外培养模型的关键因素,高密度可引起细胞生理及分子的显著变化。研究通过不同接种密度下的形态变化和基因表达筛选牛颗粒细胞体外培养最优接种密度,采用长期无血清法培养牛原代颗粒细胞,培养液中添加FSH及IGF-1以诱导E_(2)的合成。培养7 d后,采集6孔板中高(3.0×10^(6)个细胞/孔)、中(2.0×10^(6)个细胞/孔)、低(1.0×10^(6)个细胞/孔)3种不同接种密度的细胞图像进行观测,并利用qRT-PCR技术检测3种不同接种密度中相关基因的表达情况。结果表明,低密度(1.0×10^(6)个细胞/孔)接种细胞呈现成纤维细胞样外观,细胞无聚集倾向;中密度组(2.0×10^(6)个细胞/孔)可观察到少量聚集的细胞团;高密度(3.0×10^(6)个细胞/孔)培养条件下,大多数细胞聚集成细胞团。低密度组(1.0×10^(6)个细胞/孔)中,CYP19A1及FSHR高表达,RGS2及VNN2低表达;高密度组(3.0×10^(6)个细胞/孔)表达量则相反。综上所述,低密度组(1.0×10^(6)个细胞/孔)细胞可作为具有E_(2)活性的牛颗粒细胞体外模型。 展开更多
关键词 颗粒细胞 接种密度 无血清培养 细胞培养模型
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成人成牙本质细胞原位培养的初步研究 被引量:4
11
作者 王晓春 梁景平 +3 位作者 李昊妍 张秀丽 宋爱梅 陈颖 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2006年第1期88-92,共5页
目的:建立成人成牙本质细胞原位培养模型。方法:取20~30岁成人新鲜、健康、完整的第三磨牙30颗,随机分为拔髓实验组、有血清培养组和无血清培养组,每组各10颗。冠根分离,拔髓,将成牙本质细胞保留在牙冠上,进行有血清和无血清的原位培养... 目的:建立成人成牙本质细胞原位培养模型。方法:取20~30岁成人新鲜、健康、完整的第三磨牙30颗,随机分为拔髓实验组、有血清培养组和无血清培养组,每组各10颗。冠根分离,拔髓,将成牙本质细胞保留在牙冠上,进行有血清和无血清的原位培养,每天换液,连续培养7d。通过光镜检测细胞保留情况,扫描电镜检测细胞形态和分布特征,台盼蓝检测细胞活性,对模型进行鉴定。结果:室温拔髓后,成牙本质细胞保留在髓室壁上,在7d的培养过程中细胞有活性,形态保持良好。结论:采用有血清和无血清培养,均可建立成人成牙本质细胞培养模型。 展开更多
关键词 成牙本质细胞 拔髓实验 有血清培养 无血清培养 原位培养
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Vero细胞和流感病毒在无血清条件下的微载体培养 被引量:6
12
作者 何春艳 陈列胜 +1 位作者 吴书军 唐丽丽 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第2期125-128,共4页
目的探索Vero细胞和流感病毒在无血清条件下的微载体培养条件。方法在搅拌瓶中,选择合适的微载体,在无血清条件下培养Vero细胞和流感病毒。观察Vero细胞的生长状况,并检测流感病毒的血凝滴度。结果Vero细胞在Cytodex 3上生长最好,每个... 目的探索Vero细胞和流感病毒在无血清条件下的微载体培养条件。方法在搅拌瓶中,选择合适的微载体,在无血清条件下培养Vero细胞和流感病毒。观察Vero细胞的生长状况,并检测流感病毒的血凝滴度。结果Vero细胞在Cytodex 3上生长最好,每个微载体上接种10个细胞为最佳接种浓度,以MOI=0.005和0.010 CCID50/细胞接种H1N1流感病毒后,在72h时,培养上清病毒血凝滴度达到最高。结论无血清条件下,Vero细胞在Cytodex 3上生长良好,流感病毒能在Vero细胞上成功培养。 展开更多
关键词 无血清培养 微载体 Veto细胞 流感病毒
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F81细胞无血清悬浮驯化后培养猫泛白细胞减少症病毒的研究 被引量:2
13
作者 张久鑫 邵宝顺 +6 位作者 朱辉 贾浩苒 梁琳 汤新明 崔尚金 梁瑞英 王龙涛 《动物医学进展》 北大核心 2023年第1期48-53,共6页
为解决国内猫泛白细胞减少症生物制品短缺的问题,筛选出适用于猫泛白细胞减少症病毒增殖的猫肾细胞系(F81),通过对贴壁F81进行降血清悬浮驯化培养,得到了无血清全悬浮培养F81细胞系。研究建立的F81细胞系在初始传代细胞密度为1×10^... 为解决国内猫泛白细胞减少症生物制品短缺的问题,筛选出适用于猫泛白细胞减少症病毒增殖的猫肾细胞系(F81),通过对贴壁F81进行降血清悬浮驯化培养,得到了无血清全悬浮培养F81细胞系。研究建立的F81细胞系在初始传代细胞密度为1×10^(6)cells/mL时,培养48 h后细胞密度可达到7.02×10^(6)cells/mL。对培养猫泛白细胞减少症病毒工艺进行摸索,确定最佳接毒工艺为同步接毒法,初始接毒细胞密度为1×10^(6)cells/mL、MOI为3.5×10^(-2),培养72 h后收毒,病毒滴度可达到10^(7.25)TCID_(50)/0.1 mL。该方法使用同源细胞系且未添加动物血清,为猫泛白细胞减少症生物制品生产降低了下游生产纯化难度,同时降低了生产成本,可显著提高产品核心竞争力。研究结果可为其他猫用生物制品相关研究提供参考。 展开更多
关键词 F81细胞 细胞驯化 无血清悬浮培养 猫泛白细胞减少症病毒
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Vero细胞无血清培养基研究进展 被引量:6
14
作者 苏晓蕊 岳华 汤承 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第2期87-90,共4页
Vero细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的生产人和动物疫苗的细胞系。为了避免外来污染和血清中不确定成分对细胞生长及其下游工作带来的影响,用无血清培养基或化学成分明确的培养基培养Vero细胞已成为病毒疫苗生产的一个重要... Vero细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的生产人和动物疫苗的细胞系。为了避免外来污染和血清中不确定成分对细胞生长及其下游工作带来的影响,用无血清培养基或化学成分明确的培养基培养Vero细胞已成为病毒疫苗生产的一个重要发展趋势。Vero细胞无血清培养基的组成包括基础培养基和添加因子两大部分,常见的添加因子有转铁蛋白、胰岛素、微量元素、生长因子和维生素等。论文对Vero细胞无血清培养基的研究进展做一综述,以期为Vero细胞的无血清培养基研制及疫苗的生产提供参考。 展开更多
关键词 VERO细胞 无血清培养 进展
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无血清培养对小鼠脑微血管内皮细胞凋亡的影响及其机制 被引量:6
15
作者 史连国 张国平 金惠铭 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期263-265,283,F002,共5页
目的 研究无血清培养诱导小鼠脑微血管内皮细胞凋亡及其可能机制。方法 培养用小鼠脑微血管内皮细胞系bEnd .3。用流式细胞术检测凋亡细胞的百分比;用免疫细胞化学法检测Bax及Bcl- 2蛋白表达;用WesternBlot检测caspase 3蛋白表达。结... 目的 研究无血清培养诱导小鼠脑微血管内皮细胞凋亡及其可能机制。方法 培养用小鼠脑微血管内皮细胞系bEnd .3。用流式细胞术检测凋亡细胞的百分比;用免疫细胞化学法检测Bax及Bcl- 2蛋白表达;用WesternBlot检测caspase 3蛋白表达。结果 bEnd .3细胞经无血清饥饿体外培养12 ,2 4 ,36h后细胞凋亡率明显增加,分别为(13.79±0 .99) % ,(17.80±1.39) % ,(2 0 .5 1±0 .5 5 ) % ,与各自正常血清培养的对照组凋亡率相比,P <0 .0 1。Bax表达明显增强,Bcl -2表达明显减弱,caspase 3明显增强。结论 无血清饥饿培养可诱导bEnd .3细胞发生凋亡,其发生机制与Bax/Bcl 2的变化及caspase 3的激活有关。 展开更多
关键词 无血清培养 脑微血管内皮细胞 细胞凋亡
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无血清悬浮MDCK细胞培养流感病毒纯化工艺的初步建立 被引量:6
16
作者 刘丽 郭骐源 +3 位作者 郝建丽 郭丹丹 张雪梅 吴业红 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1100-1104,1110,共6页
目的建立无血清悬浮MDCK细胞培养流感病毒的下游纯化工艺。方法采用40 L反应器,收获无血清悬浮MDCK细胞培养的流感病毒,经澄清浓缩后,添加不同终浓度(1、10、30、50 U/mL)的Benzonase■核酸酶,置37℃酶解不同时间(2、4、6、8 h),优化核... 目的建立无血清悬浮MDCK细胞培养流感病毒的下游纯化工艺。方法采用40 L反应器,收获无血清悬浮MDCK细胞培养的流感病毒,经澄清浓缩后,添加不同终浓度(1、10、30、50 U/mL)的Benzonase■核酸酶,置37℃酶解不同时间(2、4、6、8 h),优化核酸酶去除细胞残留DNA的条件。采用两步层析法,探讨不同线性流速(60、150、300 cm/h)和上样缓冲液盐离子浓度(150、500、1 000 mmol/L)对复合介质纯化效果的影响;探讨不同线性流速(60、150、300 cm/h)对离子层析介质纯化效果的影响。根据确定的参数进行3批次纯化工艺样品的检测。结果病毒浓缩液经10 U/mL Benzonase?核酸酶37℃酶解6 h后,DNA去除率即可达99%以上。确定复合介质的流速为60 cm/h,上样缓冲液组成为150 mmol/L NaCl+50 mmol/L Tris,pH 7.4,确定离子交换介质流速为150 cm/h。3批纯化工艺样品去除了99.94%的宿主细胞残留蛋白和99.99%的残留DNA,残留DNA达欧盟标准,不高于10 ng/剂。结论初步建立了无血清悬浮MDCK细胞流感疫苗的下游纯化工艺。 展开更多
关键词 核酸酶 悬浮MDCK细胞 无血清培养 流感病毒 残留DNA 残留蛋白 柱层析
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无血清悬浮驯化CHO-K1单克隆细胞株的建立及其表达验证
17
作者 谢涛 孙青 +6 位作者 彭秀娥 张朝 张宽 王翠 刘伯宁 李文宾 姚兵 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第8期945-951,共7页
目的通过无血清悬浮驯化CHO-K1细胞,筛选出单克隆源性可追溯、生长状态良好的宿主细胞株,并进行表达验证。方法采用逐步降低血清含量的方法,将贴壁状态的CHO-K1细胞驯化成适应无血清培养基培养的悬浮细胞;通过单细胞接种/成像系统Verifi... 目的通过无血清悬浮驯化CHO-K1细胞,筛选出单克隆源性可追溯、生长状态良好的宿主细胞株,并进行表达验证。方法采用逐步降低血清含量的方法,将贴壁状态的CHO-K1细胞驯化成适应无血清培养基培养的悬浮细胞;通过单细胞接种/成像系统Verified In-Situ Plate Seeding(简称VIPS系统)筛选单克隆,经连续培养综合评估单克隆细胞的倍增时间、结团率、细胞直径等参数,确定候选克隆;将候选克隆分别转染携带绿色及红色荧光蛋白的质粒,根据荧光蛋白表达情况确定1株克隆作为工程细胞株的宿主细胞。结果驯化获得的CHO-K1细胞适应无血清悬浮培养,倍增时间为20~24 h;通过单克隆筛选和产量评估确定的单克隆细胞株单克隆源性良好且可追溯,以0.5×10~6个/mL的细胞密度接种,培养7 d最高细胞密度可达8.27×10~6个/mL,活率不低于80%,平均倍增时间20.31 h,能较好地表达外源基因。结论通过无血清驯化培养,成功获得单克隆源性可追溯、生长状态良好且能够用于蛋白高表达的CHO-K1细胞株。 展开更多
关键词 CHO-K1细胞 无血清培养 细胞驯化 单克隆筛选 外源蛋白表达
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二次贴壁法高效制备人脐带间充质干细胞 被引量:5
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作者 芦慧颖 杜文敬 +5 位作者 刘春香 孟庆雪 付寅生 石佳宁 张婷婷 张怡 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第6期649-654,共6页
目的采用二次贴壁法高效制备人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)。方法将传统组织块贴壁法弃掉的脐带组织块转移至新的培养瓶中进行二次贴壁,分离hUC-MSCs,并用无血清培养体系连续传代... 目的采用二次贴壁法高效制备人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)。方法将传统组织块贴壁法弃掉的脐带组织块转移至新的培养瓶中进行二次贴壁,分离hUC-MSCs,并用无血清培养体系连续传代,镜下观察细胞形态;分别检测不同代次细胞的增殖能力、细胞周期、免疫表型、多向分化能力。结果二次贴壁法分离的hUC-MSCs在第4天即出现细胞克隆,第8天汇合度可达70%,经过二次贴壁法,1根20 cm的脐带组织共获得P3间充质干细胞(MSCs)总数为1×10~9个。二次贴壁分离的细胞增殖能力旺盛,与一次贴壁获得的干细胞同代次平均倍增时间差异无统计学意义(P>0.05)。传统贴壁法与二次贴壁分离的细胞均表达超过98%的CD73、CD90、CD105和低于2%的CD34、CD45、CD14、CD79a、HLA-DR,且该细胞具有分化为成骨、成软骨和成脂能力。结论经无动物源培养体系体外扩增的二次贴壁分离方法可以获得大量具有MSCs生物学特性的hUC-MSCs,为其规模化临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 二次贴壁法 无血清培养
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用无血清适应的Vero细胞培养H5N1型流感病毒条件的优化 被引量:5
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作者 马磊 耿兴良 +9 位作者 苏杨起 杨家方 常亚军 段男 邹俊如 刘圆圆 刘婧 戴宗祥 李卫东 廖国阳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第7期741-745,共5页
目的优化无血清适应的Vero细胞(SFM-Vero细胞)培养H5N1型流感病毒的条件。方法将H5N1型流感病毒接种于SFM-Vero细胞,于免疫荧光显微镜下观察病毒感染情况。对病毒无血清培养条件MOI(0.05、0.10、0.15、0.20)、细胞培养时间(12、24、36、... 目的优化无血清适应的Vero细胞(SFM-Vero细胞)培养H5N1型流感病毒的条件。方法将H5N1型流感病毒接种于SFM-Vero细胞,于免疫荧光显微镜下观察病毒感染情况。对病毒无血清培养条件MOI(0.05、0.10、0.15、0.20)、细胞培养时间(12、24、36、48 h)、培养液基础培养基(DMEM/F12、M199、RPMI1640及MEM:DMEM/F12混合液)、培养温度(33、33.5、34、34.5、35和37℃)、收获时间(24、36、48、60和72 h)、培养液p H值(6.8、7.1、7.4、7.7、8.0和8.3)和TPCK胰酶浓度(0.5、1.0、1.5μg/ml)进行优化,并检测最佳条件无血清培养的H5N1型流感病毒的血凝效价及形态。结果 H5N1型流感病毒对SFM-Vero细胞具有感染性。最佳无血清培养条件为:MOI=0.1和0.15,细胞培养时间36 h,以DMEM/F12为基础培养基,病毒培养温度33.5和34.5℃,病毒收获时间60 h,培养液p H 7.7,TPCK胰酶浓度为1.0μg/ml。最佳条件无血清培养的H5N1型流感病毒的血凝效价为1∶512,电镜下观察病毒形态完整。结论确定了H5N1型流感病毒对SFM-Vero细胞具有感染性,并优化了SFMVero细胞培养流感病毒的适宜条件,为更具有生物安全性流感疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 无血清培养 VERO细胞 H5N1型流感病毒
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结肠癌干细胞样细胞的体外培养、鉴定及n-3多不饱和脂肪酸对结肠癌干细胞样细胞的抗增殖作用 被引量:5
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作者 方仕 龙健婷 +4 位作者 张冰 杨婷 卢味 李鹤平 石汉平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期2135-2141,共7页
目的:采取无血清培养法培养出SW620细胞球,并对细胞球细胞进行干细胞鉴定;在细胞水平研究n-3多不饱和脂肪酸(n-3 PUFAs)对结肠癌干细胞样细胞的作用。方法:正常培养人结肠癌细胞株SW620并使其逐步适应无血清培养条件,经无血清培养1周后... 目的:采取无血清培养法培养出SW620细胞球,并对细胞球细胞进行干细胞鉴定;在细胞水平研究n-3多不饱和脂肪酸(n-3 PUFAs)对结肠癌干细胞样细胞的作用。方法:正常培养人结肠癌细胞株SW620并使其逐步适应无血清培养条件,经无血清培养1周后收集SW620细胞球。用免疫荧光法检测胚胎干细胞标志物SSEA-1和TRA-1-81;采用real-time PCR的方法检测干细胞相关基因Sox-2和Oct-4的表达情况;对比SW620贴壁细胞和干细胞样细胞(CSCLC)在软琼脂上的克隆形成能力;采用裸鼠移植瘤模型比较2种细胞的成瘤能力;用MTS法对比2种细胞在递增浓度的5-氟尿嘧啶(5-FU)或mitomycin C处理下的生长抑制情况;用MTS法、Annexin V/PI染色和台盼蓝染色分别观察递增浓度二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA)作用于SW620 CSCLC后细胞生长抑制情况、凋亡情况和死亡情况;MTS法检测5-FU或mitomycin C联合n-3 PUFAs对结肠癌CSCLC增殖的影响。结果:无血清培养法成功从SW620中培养出细胞球。细胞球细胞高表达SSEA-1和TRA-1-81并一过性表达Sox-2和Oct-4基因;对5-FU及mitomycin C相对抵抗;在软琼脂上克隆形成率及在裸鼠皮下的成瘤率均显著高于贴壁细胞,表明这些细胞具有干细胞特性,即为来自于SW620的CSCLC。DHA和(或)EPA作用于SW620CSCLC能抑制细胞生长、诱导细胞凋亡,并能增强5-FU及mitomycin C对其抑制作用。结论:无血清培养法能够从SW620细胞中培养出具有干细胞特性的细胞,它们具有高克隆形成能力及高致瘤性,对化疗药物相对抗拒;DHA和EPA能够诱导SW620来源CSCLC发生凋亡并增强化疗药物的抗肿瘤活性。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 肿瘤干细胞 无血清培养 N-3多不饱和脂肪酸 化学治疗
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