血清饥饿法用于细胞周期同步化的方法学研究 被引量：12

1

作者 宋春娇 吕冰洁 +4 位作者 张小玲 史忠诚 傅松滨 李璞 李钰 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期362-364,共3页

目的　探讨血清饥饿法进行细胞周期同步化实验的影响因素。方法　用无血清和低血清浓度培养基饥饿 Anip973和 AGZY83 -a两种人肺腺癌细胞系 ,分别在培养 48h、72 h和 5d时收集各组细胞 ,用流式细胞分析仪分析细胞周期各时相细胞百分数... 目的　探讨血清饥饿法进行细胞周期同步化实验的影响因素。方法　用无血清和低血清浓度培养基饥饿 Anip973和 AGZY83 -a两种人肺腺癌细胞系 ,分别在培养 48h、72 h和 5d时收集各组细胞 ,用流式细胞分析仪分析细胞周期各时相细胞百分数。结果　 Anip973细胞系在含 0 .2 % FBS的 RPMI 1640培养基中培养 5d得到理想结果 ,G0 -G1期细胞百分比高达 84.19%。 AGZY83 -a在含 0 .2 % FBS的 RPMI 1640培养基中培养 48h也获得较满意的结果 ,G0 -G1期细胞百分比达 61.3 0 %。结论　细胞类型、血清浓度和饥饿时间是血清饥饿法进行细胞周期同步化实验成功与否的影响因素。可应用血清饥饿法使不同细胞系同步于 G0 展开更多

关键词 血清 饥饿法 细胞周期 方法学 流式细胞分析仪

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供体细胞对猪体细胞克隆胚胎早期发育的影响 被引量：10

2

作者 潘登科 张运海 +3 位作者 孙秀柱 李燕 吴常信 李宁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期331-336,共6页

以中国农业大学实验用小型猪香猪胎儿成纤维细胞、成年耳成纤维细胞和颗粒细胞3种细胞系为供体细胞进行核移植。比较了血清饥饿法和接触抑制法处理胎儿成纤维细胞诱导进入G0/G1期的效率,发现二者差异不显著(P>0.05),血清饥饿2d和4d... 以中国农业大学实验用小型猪香猪胎儿成纤维细胞、成年耳成纤维细胞和颗粒细胞3种细胞系为供体细胞进行核移植。比较了血清饥饿法和接触抑制法处理胎儿成纤维细胞诱导进入G0/G1期的效率,发现二者差异不显著(P>0.05),血清饥饿2d和4d差异不明显,同样接触抑制2d和4d差异也不显著(P>0.05)。系统研究了影响克隆胚胎发育的供体因素:血清饥饿与否、细胞形态、细胞类型及个体差异等,结果表明:血清饥饿处理对克隆胚的早期发育没有明显的促进作用;圆形光滑细胞有利于细胞融合,对早期发育无显著影响(P>0.05);不同个体、不同类型的供体细胞对克隆胚囊胚发育率有一定的影响。 展开更多

关键词 胎儿成纤维细胞 血清饥饿 细胞类型 克隆胚胎

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牛供体细胞的来源、血清饥饿和预激活对核移植卵体外胚胎发育的影响 被引量：7

3

作者 李雪峰 安志兴 +3 位作者 李煜 郭继彤 李向臣 张涌 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期35-38,共4页

牛皮肤成纤维细胞经血清饥饿或预激活处理后获得核胞体 ,并注入去核卵母细胞内构建重组胚。检查重组胚 2 4h和 36h卵裂率以及 8d囊胚率 ,以评估供体细胞及其处理方法对体细胞核移植效果的影响。实验结果表明 :来自 3个年龄 (6、 18和 3... 牛皮肤成纤维细胞经血清饥饿或预激活处理后获得核胞体 ,并注入去核卵母细胞内构建重组胚。检查重组胚 2 4h和 36h卵裂率以及 8d囊胚率 ,以评估供体细胞及其处理方法对体细胞核移植效果的影响。实验结果表明 :来自 3个年龄 (6、 18和 36月龄 )、 2个品系 (红安格斯肉牛和荷斯坦奶牛 )的 4头供体牛皮肤细胞重组胚的卵裂率和囊胚率均无差异。生长到完全汇合的 36月龄荷斯坦牛供体细胞血清饥饿 10～ 13d组重组胚的 36h卵裂率显著低于 0d (对照 )、 3～ 5d和 6～ 9d组 ,囊胚率显著低于 3～ 5d组 ;经 5 μmol/L离子霉素或7%乙醇预激活 5min重组胚的卵裂率和囊胚率均与对照组无差异。 展开更多

关键词 牛 供体细胞 来源 血清饥饿 预激活 体外胚胎发育 体细胞核移植

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Transwell和Wound healing在细胞迁移中的应用比较 被引量：11

4

作者 唐杰 陈龙菊 +2 位作者 王军 王配军 陈道帮 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2007年第6期687-689,共3页

目的:比较分析transwell和划痕法(Wound healing)检测细胞迁移能力的差异,探讨两种方法在血清饥饿调节的血管平滑肌细胞迁移中的应用。方法:用DMEM和含10%小牛血清的DMEM分别作用于体外培养的大鼠血管平滑肌细胞24h,采用transwell迁移... 目的:比较分析transwell和划痕法(Wound healing)检测细胞迁移能力的差异,探讨两种方法在血清饥饿调节的血管平滑肌细胞迁移中的应用。方法:用DMEM和含10%小牛血清的DMEM分别作用于体外培养的大鼠血管平滑肌细胞24h,采用transwell迁移小室和划痕方法检测血清饥饿(serum starvation)和有血清条件下平滑肌细胞的迁移能力。结果:transwell法和划痕法分别显示了VSMC在血清饥饿组的迁移数目和距离明显比10%血清刺激组少和短。结论:两种方法都能较好地反映细胞的迁移能力,即血清饥饿组明显低于10%血清刺激组。但划痕法更适用于本实验。 展开更多

关键词 TRANSWELL 划痕 血管平滑肌细胞 血清饥饿

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一个人类线粒体转录终止样因子基因的克隆 被引量：8

5

作者 陈瑶 何云刚 +2 位作者 余敏 钱伟 谭德勇 《云南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2003年第S1期205-209,共5页

比较血清培养细胞和血清饥饿细胞的基因表达差异,获得了一段血清饥饿细胞中表达的cDNA序列,通过搜索表达序列标签(EST),拼接出完整的基因序列,通过PCR克隆获得全长cDNA序列.该基因全长1472bp,编码框预测有365个氨基酸.GenBank搜索,该基... 比较血清培养细胞和血清饥饿细胞的基因表达差异,获得了一段血清饥饿细胞中表达的cDNA序列,通过搜索表达序列标签(EST),拼接出完整的基因序列,通过PCR克隆获得全长cDNA序列.该基因全长1472bp,编码框预测有365个氨基酸.GenBank搜索,该基因与已有的人类线粒体转录终止因子有较大的同源性.所以,该基因可能是一个线粒体转录终止样因子. 展开更多

关键词 血清饥饿 线粒体转录终止样因子基因 克隆 生物信息学

原文传递

血清饥饿和接触抑制两种G0期同步化方法效果评价 被引量：8

6

作者 严丽萍 陶茂萱 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期275-278,共4页

目的 评价血清饥饿和接触抑制两种方法对细胞周期G0期同步化效果，并分析再进入细胞周期各期的时点。方法 利用体外细胞培养技术，采用流式细胞术分析人胚肺成纤维细胞血清饥饿0～48h以及恢复血清培养0～24h内细胞周期分布改变；分析接... 目的 评价血清饥饿和接触抑制两种方法对细胞周期G0期同步化效果，并分析再进入细胞周期各期的时点。方法 利用体外细胞培养技术，采用流式细胞术分析人胚肺成纤维细胞血清饥饿0～48h以及恢复血清培养0～24h内细胞周期分布改变；分析接触抑制3天及传代后24h钿胞周期分布改变。结果 血清饥饿48h后能够达到较好的同步化效果，血清再刺激16h细胞进入细胞周期进程，G1期的细胞在16h后明显减少，24h时达到最低点；S期的细胞在16h后明显增加，于20h左右达到峰值；G2期的细胞在20h时增加明显，24h时达峰值。接触抑制同步化3天后G0达83．36％，传代后，G1期的细胞在13h后逐渐减少，S期的细胞在13h后逐渐增加，于22h时达峰值，G2期的细胞在19h后逐渐增加，25h时达峰值。结论血清饥饿48h或者接触抑制3天均能使体外培养人胚肺成纤维细胞达到G0期同步化状态，恢复血清16h和传代后13h细胞逐渐进入周期。血清饥饿法要优于接触抑制法。 展开更多

关键词 血清饥饿 接触抑制 同步化 流式细胞术

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供体细胞培养处理方法对水牛核移植效果的影响 被引量：5

7

作者 杨素芳 石德顺 +3 位作者 冯贵雪 韦精卫 韦英明 陆凤花 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期612-616,共5页

以经常规培养法 (DMEM+10 % FCS)、血清饥饿法 (DMEM+0 .5 % FCS培养 5～ 10 d)和 Apidicolin- APD结合血清饥饿法 (0 .1mg/ L APD培养 2 4 h,DMEM+0 .5 % FCS培养 1～ 18d)培养处理的水牛卵巢颗粒细胞和水牛成体耳部成纤维细胞作供核 ... 以经常规培养法 (DMEM+10 % FCS)、血清饥饿法 (DMEM+0 .5 % FCS培养 5～ 10 d)和 Apidicolin- APD结合血清饥饿法 (0 .1mg/ L APD培养 2 4 h,DMEM+0 .5 % FCS培养 1～ 18d)培养处理的水牛卵巢颗粒细胞和水牛成体耳部成纤维细胞作供核 ,分别采取带下注核法和胞质内注核法进行核移植。同一供核细胞各处理组间的核移植胚融合率 (以颗粒细胞作供核 )以及重组胚的囊胚发育率无明显差异 (P>0 .0 5 ) ,但经 APD+0 .5 % FCS培养处理供体细胞核移植后的分裂率显著高于其他组 (P<0 .0 5 )。用 7%乙醇处理的成体耳部成纤维细胞进行核移植 ,其重组胚的分裂率和囊胚发育率与对照组 (不含乙醇 )均无明显差异 (P>0 .0 5 )。结果表明 ,(1)血清饥饿处理水牛供体细胞对其核移植效果没有影响 ;(2 ) DNA合成抑制剂 APD结合血清饥饿培养处理水牛颗粒细胞和成体耳部成纤维细胞 ,可提高其核移植效果 ;(3)乙醇预激活处理水牛成体耳部成纤维细胞 。 展开更多

关键词 供体细胞 培养方法 水牛 核移植效果

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山羊胎儿成纤维细胞转染人t-PA指形区缺失基因及其核移植研究 被引量：5

8

作者 赵晓娥 安志兴 +4 位作者 马保华 武浩 高立功 刘新颖 张涌 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第1期1-5,共5页

采用阳离子脂质体法将人t-PA指形区缺失基因乳腺特异性表达载体(pEBT)导入山羊胎儿成纤维细胞,以山羊胎儿成纤维细胞和转染的山羊胎儿成纤维细胞作供体,构建核移植胚,对其体外发育情况进行了研究,比较了2种供体细胞(山羊胎儿成纤维细胞... 采用阳离子脂质体法将人t-PA指形区缺失基因乳腺特异性表达载体(pEBT)导入山羊胎儿成纤维细胞,以山羊胎儿成纤维细胞和转染的山羊胎儿成纤维细胞作供体,构建核移植胚,对其体外发育情况进行了研究,比较了2种供体细胞(山羊胎儿成纤维细胞和转人t-PA指形区缺失基因的山羊胎儿成纤维细胞)及转人t-PA指形区缺失基因的山羊胎儿成纤维细胞饥饿处理与否对核移植胚胎体外发育的影响。结果表明,早期核移植胚有荧光蛋白(GFP)的表达;以山羊胎儿成纤维细胞作供体细胞时,核移植胚的桑葚胚率(50.3%)及囊胚率(16.0%)均高于以转人t-PA指形区缺失基因胎儿成纤维细胞为供体时的桑葚胚率(48.4%)和囊胚率(10.9%),但差异不显著(P>0.05);转人t-PA指形区缺失基因的山羊胎儿成纤维细胞经饥饿处理后,其核移植胚胎的卵裂率(73.6%)与不饥饿时的卵裂率(73.9%)差异不显著;饥饿处理后核移植胚胎的桑葚胚率(48.5%)和囊胚率(11.2%)均高于不饥饿处理的桑葚胚率(39.2%)和囊胚率(9.2%),但差异不显著(P>0.05)。本研究成功地构建了转人t-PA指形区缺失基因的体细胞核移植胚胎,体外囊胚率为11.2%。 展开更多

关键词 山羊 血清饥饿 t-PA基因 转基因核移植胚 囊胚率

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短期血清饥饿胁迫对猪骨骼肌卫星细胞代谢及自噬发生的影响

9

作者 王怡 高娟 +3 位作者 胡悦旻 杨跃飞 范博钧 鞠辉明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3408-3417,共10页

旨在研究短期饥饿胁迫对猪骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells,SMSCs)代谢及自噬发生的影响,解析自噬机制在骨骼肌发育调控网络中的地位和作用,为改良家猪产肉性状提供理论依据。将本实验室分离并保存的SMSCs细胞系复苏,... 旨在研究短期饥饿胁迫对猪骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells,SMSCs)代谢及自噬发生的影响,解析自噬机制在骨骼肌发育调控网络中的地位和作用,为改良家猪产肉性状提供理论依据。将本实验室分离并保存的SMSCs细胞系复苏,按培养体系中血清浓度将细胞分为20%血清组(对照组)、15%血清组、10%血清组、5%血清组和0%血清组,以形成不同程度的饥饿胁迫。当细胞融合度达到70%~80%后再培养24 h进行检测,每组4个重复。流式细胞术检测各组细胞凋亡率、膜电位和活性氧水平;试剂盒测定ATP水平;WB检测自噬标志蛋白LC3B-Ⅱ、p62和通路相关蛋白AMPK、mTOR的表达;透射电镜检测细胞线粒体形态和细胞器的变化。结果显示,随着细胞中血清浓度降低,细胞活力、p62蛋白量、p-mTOR/mTOR比值逐渐降低;细胞凋亡率、ROS水平、ATP水平、LC3B-Ⅱ蛋白水平、p-AMPK/AMPK比值、细胞内自噬溶酶体数量、细胞核及线粒体异常率则逐渐升高;与对照组相比,15%组膜电位显著升高,5%和0%组极显著降低。这表明,短期血清饥饿胁迫能诱导基于AMPK/mTOR信号通路的自噬发生,加快细胞代谢,但同时存在加快细胞凋亡、抑制细胞增殖等毒副作用。 展开更多

关键词 猪 自噬 SMSCs 血清饥饿胁迫 AMPK/mTOR通路

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长时间血清饥饿胁迫对猪骨骼肌卫星细胞代谢和自噬的影响

10

作者 高娟 范博钧 +3 位作者 吴雅婕 王怡 杨跃飞 鞠辉明 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第2期32-38,共7页

为了探究长时间、不同程度饥饿胁迫条件对原代猪骨骼肌卫星细胞(SMSCs)代谢和自噬的影响,本试验通过控制SMSCs培养体系中血清浓度以形成不同程度饥饿胁迫,其中20%血清培养浓度为正常对照组,15%、10%、5%和0%血清培养浓度为试验组。细胞... 为了探究长时间、不同程度饥饿胁迫条件对原代猪骨骼肌卫星细胞(SMSCs)代谢和自噬的影响,本试验通过控制SMSCs培养体系中血清浓度以形成不同程度饥饿胁迫,其中20%血清培养浓度为正常对照组,15%、10%、5%和0%血清培养浓度为试验组。细胞培养96 h后,通过流式细胞术检测各组细胞凋亡率、线粒体膜电位和活性氧(ROS)水平,通过ATP检测试剂盒测定细胞内ATP水平,通过Western blot检测各组细胞蛋白中自噬标志蛋白LC3b、p62以及AMPK-mTOR自噬信号通路中p-AMPK/AMPK和p-mTOR/mTOR蛋白的表达。结果显示,与20%血清组相比,0%血清和5%血清细胞凋亡率极显著上调(P<0.01),10%血清组细胞凋亡率显著上调(P<0.05);各试验组线粒体膜电位均极显著下降(P<0.01),ROS水平和ATP水平均极显著上调(P<0.01);细胞中LC3b蛋白的相对表达量随血清浓度降低而升高,p62蛋白的相对表达量随血清浓度降低而降低;p-mTOR/mTOR比值随血清浓度降低而降低,p-AMPK/AMPK比值随血清浓度降低而升高。结果表明,通过长期减少SMSCs培养体系中血清浓度,可以促进细胞代谢加快和凋亡发生,并且通过AMPK/mTOR信号通路激发细胞发生自噬,上述变化的程度与血清减少的程度呈正相关。本试验为后续探索不同程度饥饿胁迫对动物肌肉发育影响的研究提供理论依据。 展开更多

关键词 血清饥饿 自噬 细胞代谢 AMPK/mTOR通路 骨骼肌卫星细胞

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自噬基因Beclin1启动子细胞自噬模型的建立 被引量：6

11

作者 黄凤媛 李菲 +11 位作者 曾飞剑 李昀骏 侯秋科 黄俊铭 胡跃强 陈东风 黎辉 李伊为 邓汝东 周健洪 魏刚 黄贵华 《广州中医药大学学报》 CAS 2015年第2期325-330,388,共7页

【目的】构建自噬基因Beclin1启动子报告基因细胞自噬模型,为筛选出以Beclin1为靶标的中药提供新的细胞模型。【方法】采用瞬时转染双荧光素酶报告基因测定法,确定最佳转染浓度、时间等条件,及Beclin1基因启动子转录活性细胞自噬模型的... 【目的】构建自噬基因Beclin1启动子报告基因细胞自噬模型,为筛选出以Beclin1为靶标的中药提供新的细胞模型。【方法】采用瞬时转染双荧光素酶报告基因测定法,确定最佳转染浓度、时间等条件,及Beclin1基因启动子转录活性细胞自噬模型的建立和验证,观察血清饥饿、过氧化氢氧化损伤及自噬激活剂雷帕霉素3种自噬刺激因素对Beclin1基因启动子转录活性PC12细胞自噬模型的影响。【结果】血清饥饿诱导12 h,Beclin1基因启动子转录活性是体积分数10%血清组的1.8倍,而血清饥饿诱导18、24 h与诱导12 h比较其转录活性无明显变化;300μmol/L过氧化氢诱导9 h,Beclin1基因启动子转录活性是0μmol/L过氧化氢组的1.3倍;雷帕霉素在浓度0.1、1 nmol/L可上调Beclin1基因启动子转录活性,并呈浓度依赖性,而5 nmol/L及更高浓度的雷帕霉素可下调Beclin1基因启动子转录活性。【结论】成功建立用Beclin1基因启动子报告基因检测Beclin1基因启动子转录活性特异性的细胞发生自噬模型,血清饥饿、过氧化氢、自噬激活剂雷帕霉素3种自噬刺激因素可诱导Beclin1基因启动子的转录活性。 展开更多

关键词 Beclin1基因启动子 转录活性 细胞模型 血清饥饿 氧化应激 自噬 细胞培养

原文传递

一个血清抑制基因的克隆 被引量：5

12

作者 谭德勇 赖建华 +3 位作者 钱伟 余敏 陈瑶 何婕 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第5期816-819,共4页

比较血清培养细胞和血清饥饿细胞的基因表达差异 ,获得了一段血清饥饿细胞中特异表达的cDNA序列 ,以此序列出发 ,通过搜索表达序列标签 (EST) ,拼接出完整的基因序列 ,通过PCR分段克隆获得全长cDNA序列 .该基因全长 5 4 2 9bp ,编码框... 比较血清培养细胞和血清饥饿细胞的基因表达差异 ,获得了一段血清饥饿细胞中特异表达的cDNA序列 ,以此序列出发 ,通过搜索表达序列标签 (EST) ,拼接出完整的基因序列 ,通过PCR分段克隆获得全长cDNA序列 .该基因全长 5 4 2 9bp ,编码框预测有 791个氨基酸残基 .GenBank搜索 ,该基因与已有的细胞周期调控基因没有同源性 .所以 ,该基因是一个新的与细胞周期有关的基因 (GenBank接受号 :AY0 5 0 16 9) .由于该基因最初发现在无血清培养条件下表达 ,故叫血清抑制基因 (seruminhibitgene,Si 1基因 ) . 展开更多

关键词 血清抑制基因 血清饥饿 基因克隆

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白藜芦醇对血清饥饿诱导的人胃癌细胞SGC-7901上皮间质转化影响 被引量：5

13

作者 徐刚 甘惠中 +3 位作者 史冠男 高倩 袁媛 彭琼 《中华实用诊断与治疗杂志》 2015年第11期1078-1081,共4页

目的探讨白藜芦醇(resveratrol)对血清饥饿诱导的人胃癌细胞SGC-7901上皮间质转化的影响及机制。方法体外培养胃癌细胞SGC-7901分为对照组(普通培养液,不加白藜芦醇)、白藜芦醇+正常组(普通培养液,加白藜芦醇)、饥饿组(无血清培养液,不... 目的探讨白藜芦醇(resveratrol)对血清饥饿诱导的人胃癌细胞SGC-7901上皮间质转化的影响及机制。方法体外培养胃癌细胞SGC-7901分为对照组(普通培养液,不加白藜芦醇)、白藜芦醇+正常组(普通培养液,加白藜芦醇)、饥饿组(无血清培养液,不加白藜芦醇)、白藜芦醇+饥饿组(无血清培养液,加白藜芦醇),采用MTT法检测各组胃癌细胞凋亡的半抑制浓度,采用细胞划痕试验检测各组胃癌细胞迁移距离,采用实时荧光定量PCR法检测各组胃癌细胞上皮间质转化相关因子Snail、E-cadherin及vimentin mRNA表达情况,采用Western blot法检测各组胃癌细胞Snail、Ecadherin及vimentin蛋白表达情况。结果对照组、饥饿组胃癌细胞凋亡的半抑制浓度分别为(43.90±2.29)、(40.57±1.83)μmol/L;饥饿组胃癌细胞迁移距离[(25.27±0.93)mm]明显大于对照组[(16.20±0.89)mm]、白藜芦醇+正常组[(11.77±0.40)mm]和白藜芦醇+饥饿组[(15.77±0.63)mm](P均<0.05),对照组大于白藜芦醇+正常组(P<0.05);饥饿组细胞Snail mRNA和蛋白(3.07±0.19、1.74±0.04)、vimentin mRNA和蛋白(3.89±0.24、5.06±0.65)表达水平明显高于对照组(Snail mRNA和蛋白分别为1、1,vimentin mRNA和蛋白分别为1、1)、白藜芦醇+正常组(Snail mRNA和蛋白分别为0.65±0.05、0.88±0.03,vimentin mRNA和蛋白分别为0.52±0.02、2.48±0.12)和白藜芦醇+饥饿组(Snail mRNA和蛋白分别为0.62±0.03、0.88±0.02,vimentin mRNA和蛋白分别为0.68±0.05、1.75±0.03)(P均<0.05),E-cadherin mRNA和蛋白表达水平(0.20±0.01、0.24±0.01)明显低于对照组(1、1)、白藜芦醇+正常组(1.69±0.09、1.72±0.07)和白藜芦醇+饥饿组(1.98±0.07、1.43±0.01)(P均<0.05);白藜芦醇+饥饿组细胞Snail、E-cadherin、vimentin mRNA和蛋白水平与对照组、白藜芦醇+正常组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论白藜芦醇可抑制血清饥饿诱导的人胃癌细胞SGC-7901上皮间质转化,从而抑制胃癌的侵袭、转移� 展开更多

关键词 白藜芦醇 血清饥饿 上皮间质转化 胃癌细胞

原文传递

血清饥饿对兔成纤维细胞生长的影响 被引量：2

14

作者 寇全安 张涌 +1 位作者 李裕强 郭继彤 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 1999年第5期17-21,共5页

用含体积分数０．５％ 血清的ＤＭ ＥＭ 直接饥饿胎儿及皮肤成纤维细胞，细胞数先是略有增长，然后逐渐下降。胎儿和皮肤成纤维细胞在血清梯度饥饿期间，更换含体积分数为４％ ，２％ 和１％ 血清的ＤＭＥＭ，细胞仍缓慢增长；更换含体... 用含体积分数０．５％ 血清的ＤＭ ＥＭ 直接饥饿胎儿及皮肤成纤维细胞，细胞数先是略有增长，然后逐渐下降。胎儿和皮肤成纤维细胞在血清梯度饥饿期间，更换含体积分数为４％ ，２％ 和１％ 血清的ＤＭＥＭ，细胞仍缓慢增长；更换含体积分数为０．５％ 血清的培养液后，细胞数逐渐降低。血清饥饿成纤维细胞后，细胞直径明显小于对数生长期的细胞（２０，１９ＶＳ３６ μｍ ，Ｐ＜ ０．０１）。血清饥饿的成纤维细胞，ＰＣＮＡ 单抗染色阴性，证明离开了细胞周期，进入Ｇ０ 期。 展开更多

关键词 成纤维细胞 体外培养 血清饥饿 兔 胚胎移植

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血清饥饿对原代人脐静脉内皮细胞周期同步化的影响 被引量：4

15

作者 覃乙芯 吴卓敏 +6 位作者 徐茜 廖文婕 贺帅 岑柏宏 廖路敏 王震 季爱民 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1140-1143,共4页

目的探讨人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的最佳饥饿条件,以建立高效稳定的HUVECs体外分离提取方法,并为HUVECs相关实验提供研究基础。方法用0.1%Ⅱ型胶原酶灌注脐静脉腔消化15 min,收集细胞并用内皮... 目的探讨人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的最佳饥饿条件,以建立高效稳定的HUVECs体外分离提取方法,并为HUVECs相关实验提供研究基础。方法用0.1%Ⅱ型胶原酶灌注脐静脉腔消化15 min,收集细胞并用内皮细胞专用培养基(含5%内皮细胞基础培养基、1%内皮细胞生长因子、1%青链霉素),置37℃,5%CO2培养箱培养。在倒置显微镜下观察细胞形态特点,并用细胞免疫荧光方法对所得细胞进行鉴定。用流式细胞术检测所得HUVECs的纯度,并检测0%、0.1%、0.5%、1%血清浓度的培养基饥饿处理0、6、12、18、24 h对细胞周期的影响。结果 0.1%Ⅱ型胶原酶消化可以得到HUVECs,细胞培养呈典型的铺卵石状排列,细胞较密处呈涡旋状排列。免疫荧光检测细胞VIII因子相关抗原表达呈阳性。流式检测细胞纯度高达99.67%。不同血清浓度培养基培养6 h可获得70%左右的G0/G1期细胞;培养12 h可获得80%~90%的G0/G1期细胞;培养18、24 h可获得95%左右的G0/G1期细胞。结论 0.1%Ⅱ型胶原酶充盈静脉管腔可以获得高纯度的原代HUVECs。完全无血清培养基培养12 h即可获得纯度超过80%的G0/G1期HUVECs。 展开更多

关键词 人脐静脉内皮细胞 细胞原代培养 血清饥饿 细胞周期

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16HBE细胞上皮间质转化模型建立以及麻黄-甘草药对对其影响 被引量：4

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作者 姚露 魏盼 +4 位作者 王思齐 袁为远 王霄彤 郑劼 洪敏 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期284-289,共6页

目的 体外诱导人支气管上皮细胞(16HBE)上皮间质转化(EMT)最适条件摸索以及探讨麻黄甘草对EMT的影响。方法 以16HBE细胞株为研究对象,分别给予转化生长因子β1(TGF-β1)单一刺激以及血清饥饿联合刺激,运用Western blot法检测上皮及间质... 目的 体外诱导人支气管上皮细胞(16HBE)上皮间质转化(EMT)最适条件摸索以及探讨麻黄甘草对EMT的影响。方法 以16HBE细胞株为研究对象,分别给予转化生长因子β1(TGF-β1)单一刺激以及血清饥饿联合刺激,运用Western blot法检测上皮及间质特征性蛋白的表达。运用免疫荧光检测E-Cadherin和N-Cadherin胞内表达分布情况。运用qPCR检测上皮及间质特征性基因的表达水平。血清饥饿联合TGF-β1刺激,给予麻黄甘草药对干预,Western blot法检测上皮及间质特征性蛋白的表达水平。结果 TGF-β1可诱导16HBE细胞由结构规则、质密均匀的鹅卵石状向纺锤体状转化。TGF-β1单独刺激可诱导16HBE细胞N-Cadherin、α-SMA蛋白表达升高,对E-Cadherin、ZO-1蛋白表达未见明显影响。而当细胞密度为15%时,血清饥饿联合TGF-β1可诱导16HBE细胞N-Cadherin、α-SMA、Vimentin、CollagenⅠ蛋白、基因水平升高以及E-Cadherin、ZO-1蛋白、基因水平降低,并且ECadherin蛋白分布紊乱,上皮结构破坏。血清饥饿联合TGF-β1刺激,麻黄甘草药对可抑制NCadherin、α-SMA的表达,并恢复ECadherin蛋白的表达,对ZO1无明显影响。结论 血清饥饿联合TGF-β1能体外诱导16HBE细胞建立稳定可重复的EMT模型,可用于体外研究哮喘发生EMT相关机制。麻黄甘草药对一定程度上可抑制16HBE细胞EMT过程。 展开更多

关键词 人支气管上皮细胞 上皮间质转化 TGF-Β1 血清饥饿 药对

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麋鹿皮肤成纤维细胞的细胞周期同步化研究 被引量：1

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作者 赵雪萍 谢献胜 +6 位作者 王子玉 孙永成 丁晓麟 武杰 许丹 王锋 丁玉华 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期84-87,共4页

为给体细胞核移植提供更多的G0/G1期供体细胞以提高克隆的成功率,本试验采用不同的接触抑制和血清饥饿时间及含羞草酸(m imosine)不同浓度和时间3种方法对麋鹿皮肤成纤维细胞进行同期化处理,然后利用流式细胞仪分析细胞周期。结果表明,... 为给体细胞核移植提供更多的G0/G1期供体细胞以提高克隆的成功率,本试验采用不同的接触抑制和血清饥饿时间及含羞草酸(m imosine)不同浓度和时间3种方法对麋鹿皮肤成纤维细胞进行同期化处理,然后利用流式细胞仪分析细胞周期。结果表明,接触抑制24 h G0/G1期比例可达91.95%;血清饥饿24 h有89.42%的细胞处于G0/G1期,当处理时间超过144 h细胞凋亡和异常聚集的比例会增加;适宜浓度(0.4 mmol.L-1)的含羞草酸处理24 h能使麋鹿成纤维细胞同步化至G0/G1期,但易引起细胞损伤。 展开更多

关键词 麋鹿 细胞周期同步化 接触抑制 血清饥饿 含羞草酸

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家兔供体细胞的发育周期与重构胚发育的关系 被引量：3

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作者 郝茹 王玉阁 +1 位作者 张正旺 杜淼 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2004年第6期631-634,共4页

采用血清饥饿法处理体外培养的兔子胎儿成纤维细胞,并将其作为供体细胞移入去核卵母细胞内构建重构胚胎。检查供体细胞的细胞周期对重构胚的融合率、分裂率和着床率的影响。实验结果表明:培养基中血清含量在0.5%的情况下,G0/G1期的细胞... 采用血清饥饿法处理体外培养的兔子胎儿成纤维细胞,并将其作为供体细胞移入去核卵母细胞内构建重构胚胎。检查供体细胞的细胞周期对重构胚的融合率、分裂率和着床率的影响。实验结果表明:培养基中血清含量在0.5%的情况下,G0/G1期的细胞比例由正常培养条件下(培养液中含有10%FCS)的73.2%明显地增加到86%以上。饥饿1-3天的细胞作为供体细胞构建重构胚时,可明显提高重构胚的融合率,但是不同的饥饿时间其融合率并无显著的差异。饥饿处理可明显增加重构胚的分裂率,以饥饿处理3天为最佳。 展开更多

关键词 家兔 供体细胞 发育周期 重构胚发育 血清饥饿法 胎儿成纤维细胞 体细胞核移植

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奶牛耳成纤维细胞的分离培养及培养条件的研究 被引量：4

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作者 霍道坦 陶勇 +5 位作者 田宁宁 权青 白海 胡敏兰 张运海 章孝荣 《中国奶牛》 2008年第6期14-17,共4页

本试验研究了奶牛耳成纤维细胞的体外培养,培养液、消化液、胰岛素和血清饥饿对细胞的影响。采用组织块贴壁法培养了奶牛耳成纤维细胞,采用0.25%胰蛋白酶差别消化获得了纯化的奶牛耳成纤维细胞。用三种不同的培养液即DMEM(低糖)、DMEM(... 本试验研究了奶牛耳成纤维细胞的体外培养,培养液、消化液、胰岛素和血清饥饿对细胞的影响。采用组织块贴壁法培养了奶牛耳成纤维细胞,采用0.25%胰蛋白酶差别消化获得了纯化的奶牛耳成纤维细胞。用三种不同的培养液即DMEM(低糖)、DMEM(高糖)、DMEM/F12,对细胞进行培养,结果细胞群体倍增时间均在2.3～2.5d,DMEM(高糖)的培养效果稍好。用三种不同的消化液(0.25%胰蛋白酶,0.02%EDTA,0.25%胰蛋白酶+0.02% EDTA)对传代细胞进行消化,结果表明0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA所用时间短,消化后培养细胞贴壁率高。在培养液中添加胰岛素能促进细胞的生长。对指数生长期的细胞进行血清饥饿后,细胞仍保持着较高的活力。 展开更多

关键词 耳成纤维细胞 体外培养 血清饥饿 髓岛素 奶牛

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血清饥饿激活表皮生长因子受体诱导胃癌耐药 被引量：3

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作者 王俊雄 蔡习强 +2 位作者 聂勇战 郝建宇 樊代明 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第1期23-29,共7页

目的探讨血清饥饿对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)高表达胃癌细胞化学药物治疗(以下简称化疗)敏感性的影响及其作用机制。方法将胃癌细胞分为4组:正常对照组、饥饿组、化疗药处理组、饥饿+化疗药处理组。采... 目的探讨血清饥饿对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)高表达胃癌细胞化学药物治疗(以下简称化疗)敏感性的影响及其作用机制。方法将胃癌细胞分为4组:正常对照组、饥饿组、化疗药处理组、饥饿+化疗药处理组。采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]方法观察肿瘤细胞的存活率,两两比较验证血清饥饿对化疗药敏感性的影响。采用Western blotting法观察细胞EGFR及其下游靶分子细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK),蛋白激酶B(RAC-alpha serine/threonine-protein kinase,Akt)的磷酸化水平变化;最后进一步借助EGFR单克隆抗体西妥昔单抗抑制EGFR的磷酸化的活性,观察其对胃癌细胞化疗感性的影响。结果与对照组相比,胃癌细胞SGC7901血清饥饿时对多种化疗药物的敏感性下降,血清饥饿可促进EGFR、ERK磷酸化,差异有统计学意义(P<0.05)。EGFR单克隆抗体可部分逆转血清饥饿所导致的化疗药耐药。结论缺营养饥饿可诱导EGFR高表达胃癌细胞化疗耐药,其诱导机制可能与激活EGFR/ERK信号通路有关。 展开更多

关键词 胃癌 血清饥饿 表皮生长因子受体 耐药

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