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仙台病毒假病毒装甲RNA标准质控品的制备及其应用
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作者 齐欣尧 李明 +3 位作者 费东亮 孙莉 马跃宇 马鸣潇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第9期1085-1089,1095,共6页
目的基于Ms2噬菌体制备内含仙台病毒(Sendai virus,SeV)RNA的假病毒装甲RNA标准质控品,以期应用于SeV感染的诊断及该病毒的分子生物学安全检测。方法将SeV的L基因片段插入质粒pET-28b-Ms2中,构建重组质粒pET-28b-Ms2-L(SeV)。将重组质... 目的基于Ms2噬菌体制备内含仙台病毒(Sendai virus,SeV)RNA的假病毒装甲RNA标准质控品,以期应用于SeV感染的诊断及该病毒的分子生物学安全检测。方法将SeV的L基因片段插入质粒pET-28b-Ms2中,构建重组质粒pET-28b-Ms2-L(SeV)。将重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白,即SeV假病毒装甲RNA标准质控品。将标准质控品置电镜下观察其形态,并进行10%SDS-PAGE分析、抗DNaseⅠ及抗RNsaeA试验、稳定性分析。采用重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术对SeV、小鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)、小鼠肺炎病毒(pneumonia virus of mice,PVM)、汉坦病毒(Hantaan virus,HV)、呼肠弧病毒Ⅲ型(reovirus typeⅢ,ReoⅢ)、小鼠细小病毒(minute virus of mice,MVM)进行检测,验证标准质控品的效果。结果标准质控品于电镜下呈Ms2噬菌体假病毒颗粒结构,相对分子质量约为14000,可有效抵抗DNaseⅠ及RNsaeA的降解。标准质控品于-80℃保存6个月、-20℃保存6个月、28℃保存5、10、15 d后仍具有良好的稳定性。仅SeV可见RPA特异性扩增曲线,其他病毒均未出现扩增曲线。结论本研究构建的SeV假病毒装甲RNA标准质控品具有良好的稳定性及特异性,可作为SeV的各项分子生物学安全检测的阳性对照。 展开更多
关键词 仙台病毒 MS2噬菌体 假病毒 装甲RNA 标准质控品
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仙台病毒抗肿瘤的研究进展 被引量:2
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作者 张泉 朱慧霞 +2 位作者 李翎瑜 谭海明 薛整风 《实验动物与比较医学》 CAS 2014年第6期515-518,共4页
仙台病毒是实验大、小鼠的常见病原之一.大、小鼠感染仙台病毒后,可通过诱生Ⅰ型干扰素、调节免疫应答和致肿瘤细胞凋亡等干预肿瘤生长,该病毒已逐渐被开发为一种新型、高效的抗肿瘤制剂.本文综述了仙台病毒抗肿瘤、对科学研究的干扰作... 仙台病毒是实验大、小鼠的常见病原之一.大、小鼠感染仙台病毒后,可通过诱生Ⅰ型干扰素、调节免疫应答和致肿瘤细胞凋亡等干预肿瘤生长,该病毒已逐渐被开发为一种新型、高效的抗肿瘤制剂.本文综述了仙台病毒抗肿瘤、对科学研究的干扰作用等方面进展. 展开更多
关键词 仙台病毒(sev) 肿瘤 干扰素 免疫调节 凋亡
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Sendai virus-based immunoadjuvant in hydrogel vaccine intensity-modulated dendritic cells activation for suppressing tumorigenesis 被引量:2
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作者 Bin Zheng Wenchang Peng +4 位作者 Lin Gan Mingming Guo Shuchao Wang Xiao-Dong Zhang Dong Ming 《Bioactive Materials》 SCIE 2021年第11期3879-3891,共13页
The conventional immunoadjuvants in vaccine have weak effect on stimulating antigen presentation and activating anti-tumor immunity.Unexpectedly,we discovered that non-pathogenic Sendai virus(SeV)could activate antige... The conventional immunoadjuvants in vaccine have weak effect on stimulating antigen presentation and activating anti-tumor immunity.Unexpectedly,we discovered that non-pathogenic Sendai virus(SeV)could activate antigen-presenting cells(APCs)represented by dendritic cells(DCs).Here,we designed an injectable SeV-based hydrogel vaccine(SHV)to execute multi-channel recruitment and stimulation of DCs for boosting the specific immune response against tumors.After the release of the NIR-triggered antigens from tumor cells,dendritic cells around the vaccine efficiently transport the antigens to lymph nodes and present them to T lymphocytes,thereby inducing systemic anti-tumor immune memory.Our findings demonstrated that the SHV with excellent universality,convenience and flexibility has achieved better immune protection effects in inhibiting the occurrence of melanoma and breast cancer.In conclusion,the SHV system might serve as the next generation of personalized anti-tumor vaccines with enhanced features over standard vaccination regimens,and represented an alternative way to suppress tumorigenesis. 展开更多
关键词 Hydrogel vaccine sendai virus(sev) IMMUNOADJUVANT Dendritic cells IMMUNOPROTECTION
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小鼠仙台病毒TaqMan-MGB探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立
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作者 孙权麟 马跃宇 +5 位作者 孙莉 费东亮 白杰英 张旭 李明 马鸣潇 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期144-152,共9页
仙台病毒(Sendai virus, SeV)能够引起啮齿类动物呼吸道疾病,引起免疫应答,严重影响SPF级动物模型实验结果,实验动物质量国家标准T/CALAS49-2017也将其作为SPF级大小鼠质量检测必检项目之一。为了开发用于快速检测及日常监测SeV的分子... 仙台病毒(Sendai virus, SeV)能够引起啮齿类动物呼吸道疾病,引起免疫应答,严重影响SPF级动物模型实验结果,实验动物质量国家标准T/CALAS49-2017也将其作为SPF级大小鼠质量检测必检项目之一。为了开发用于快速检测及日常监测SeV的分子生物学诊断方法,本研究基于TaqMan-MGB探针荧光技术,根据GenBank中SeV的L基因的保守区段(8 556-15 242)序列,设计了1对特异性引物与1条5‵端携带羧基荧光素(FAM)与3‵端为淬灭基团(Eclipse)标记的TaqMan探针,标准品进行稀释建立标准曲线,并经反应条件优化,建立了TaqMan-MGB探针荧光定量RT-PCR检测方法,并对其特异性、敏感性与重复性进行评估。结果显示,最佳优化反应条件为:反应体系,20μmol/L;引物和探针浓度,10μmol/L和15μmol/L;退火温度,54℃;在特异性试验中,除SeV检测出现特异性曲线外,其他鼠类常见病毒均未出现特异性曲线;在敏感性试验中,Sev最低检测限为5.29×10^(1)拷贝/μL。在重复性试验中,其批内变异系数为0.44%~0.77%,批间变异系数为0.44%~1.03%。对临床样本进行检测,检出率高于常规的RT-PCR方法。因此,以SeV L基因保守序列为靶基因建立的TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法具有敏感性高、特异性强、良好的重复性等优点,适用于对SPF级实验动物的SeV定期监测以及对野生鼠类的SeV日常监测和流行病学调查,为相关研究提供了良好的技术支持。 展开更多
关键词 仙台病毒(sev) TAQMAN-MGB探针 qRT-PCR方法
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仙台病毒F基因的克隆及原核表达
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作者 王宗耀 王胜昌 +1 位作者 胡建华 高诚 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第6期430-435,共6页
目的利用原核表达系统表达仙台病毒(Sendai Virus)F蛋白主要抗原片段FP(S),并对表达产物进行免疫学初步研究。方法根据GenBank公布的仙台病毒F蛋白(gi:9627219)的基因序列设计特异性引物,通过RT-PCR扩增出F基因的主要抗原片段FP(S),插入... 目的利用原核表达系统表达仙台病毒(Sendai Virus)F蛋白主要抗原片段FP(S),并对表达产物进行免疫学初步研究。方法根据GenBank公布的仙台病毒F蛋白(gi:9627219)的基因序列设计特异性引物,通过RT-PCR扩增出F基因的主要抗原片段FP(S),插入pMD-18-T载体中,鉴定正确后克隆入pQE31原核表达载体中,将鉴定正确的pQE31-FP(S)转化大肠埃希菌M15,IPTG诱导表达,对大肠埃希菌裂解物进行SDS-PAGE和Western-blot验证。结果大肠埃希菌表达的FP(S)相对分子质量约26×103,与预期相符;能与SeV阳性血清发生特异性反应,出现单一条带。结论原核表达的FP(S)蛋白有良好的抗原性,为检测仙台病毒抗体的ELISA检测方法的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 仙台病毒 F基因 克隆 诱导表达
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