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日本血吸虫乳酸脱氢酶基因的获得和序列分析 被引量：2
1
作者 刘传爱 肖建华 +3 位作者 梁瑜 曾桥 万志刚 杨秋林 《实用预防医学》 CAS 2004年第1期17-20,共4页
目的　从日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)成虫cDNA文库中筛选日本血吸虫新基因 ,为日本血吸虫病的诊断或防治提供靶抗原。　方法　筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 ,随机挑取重组阳性克隆进行DNA测序 ,再对新基因序列进行步移法测序... 目的　从日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)成虫cDNA文库中筛选日本血吸虫新基因 ,为日本血吸虫病的诊断或防治提供靶抗原。　方法　筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 ,随机挑取重组阳性克隆进行DNA测序 ,再对新基因序列进行步移法测序获取全长cDNA ,并利用生物信息学技术对其进行分析。　结果　获得了 1个新基因 ,其cDNA全长 12 5 1bp(AY2 2 5 190 ) ,编码 3 3 1个氨基酸 ,编码蛋白与人类或螈、蟾蜍、鸡、鼠及猪等其它生物的乳酸脱氢酶高度同源。　结论　利用表达序列标签法、步移法测序和生物信息学技术三者相结合 ,成功获得了编码日本血吸虫乳酸脱氢酶基因的cDNA全长序列。 展开更多
关键词 日本血吸虫 乳酸脱氢酶 表达序列标签 步移法 生物信息学
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重组日本血吸虫FKBP12基因的酶活性及其转录水平鉴定 被引量：1
2
作者 麦璟莹 朱郇悯 +4 位作者 马长玲 陈晓湘 赵晶晶 陈姗 李孜 《热带医学杂志》 CAS 2008年第6期529-532,共4页
目的对日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)FK506结合蛋白12(FKBP12)进行肽基脯氨酸顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,PPIase)活性鉴定,并比较它与26 000 Mr的谷胱甘肽转移酶(Sj26GST)基因在成虫、尾蚴和虫卵的转录水... 目的对日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)FK506结合蛋白12(FKBP12)进行肽基脯氨酸顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,PPIase)活性鉴定,并比较它与26 000 Mr的谷胱甘肽转移酶(Sj26GST)基因在成虫、尾蚴和虫卵的转录水平。方法从成虫RNA中RT-PCR扩增SjFKBP12基因,将其克隆入pGEX-4T-1载体中,诱导表达重组融合蛋白,经纯化后进行PPIase活性测定。利用RT-PCR半定量分析SjFKBP12基因与Sj26GST基因的转录水平。结果将SjFKBP12基因成功克隆入pGEX-4T-1载体中后,表达、纯化的重组融合蛋白有PPIase活性。SjFKBP12在尾蚴与虫卵期的转录水平相仿,都高于Sj26GST基因,是成虫期转录水平的1.5倍左右。结论成功鉴定了重组SjFKBP12酶活性,SjFKBP12在尾蚴和虫卵期较高的转录水平,为将其进行疫苗等研究提供了依据。 展开更多
关键词 日本血吸虫:FKBPl2 PPIASE
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日本血吸虫核苷二磷酸激酶基因的获得和序列分析
3
作者 张愉快 肖建华 +3 位作者 梁瑜 曾桥 万志刚 廖力 《南华大学学报（医学版）》 2004年第1期13-16,共4页
目的　从日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)成虫cDNA文库中筛选日本血吸虫新基因 ,为日本血吸虫病的防治提供药物靶标或候选疫苗。方法　筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 ,随机挑取重组阳性克隆进行DNA测序 ,再对新基因序列进行步移法... 目的　从日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)成虫cDNA文库中筛选日本血吸虫新基因 ,为日本血吸虫病的防治提供药物靶标或候选疫苗。方法　筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 ,随机挑取重组阳性克隆进行DNA测序 ,再对新基因序列进行步移法测序获取全长cDNA ,并利用生物信息学技术对其进行分析。结果　获得了 1个编码日本血吸虫核苷二磷酸激酶新基因的cDNA序列(AY2 2 6980 ) ,全长 5 94bp ,编码 1 5 7个氨基酸 ,编码蛋白与人类或鸽、鸡、鼠及果蝇的核苷二磷酸激酶高度同源。结论　利用表达序列标签法、步移法测序和生物信息学技术三者相结合 ,成功获得了编码日本血吸虫核苷二磷酸激酶基因的cDNA序列。 展开更多
关键词 日本血吸虫 二磷酸核苷激酶 CDNA文库 表达序列标签 步移法 生物信息学
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钉螺感染目平外睾吸虫的分泌物及其对杀灭不同时间再感染日本血吸虫幼虫的进一步观察
4
作者 唐崇惕 卢明科 +1 位作者 彭文峰 陈东 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期93-98,共6页
目的湖北钉螺(Oncomelania hupensis)先感染目平外睾吸虫(Exorchis mupingensis)虫卵后,再间隔不同时间感染日本血吸虫(Schistosoma japonicum)毛蚴,观察螺体分泌物的强度对血吸虫幼虫损害和被杀灭情况的关系。方法钉螺感染目平外睾吸... 目的湖北钉螺(Oncomelania hupensis)先感染目平外睾吸虫(Exorchis mupingensis)虫卵后,再间隔不同时间感染日本血吸虫(Schistosoma japonicum)毛蚴,观察螺体分泌物的强度对血吸虫幼虫损害和被杀灭情况的关系。方法钉螺感染目平外睾吸虫后分别于21d、37d、55d、70d和85d再感染血吸虫毛蚴。钉螺经双重感染后4-82d,作钉螺整体连续埋蜡切片、染色制片和全片观察,并记录血吸虫幼虫残体数。结果与结论单独感染外睾吸虫的钉螺,和两吸虫感染间隔时间为21-85d的钉螺,螺体都产生大量血淋巴细胞和分泌物,它们会围攻再侵入的日本血吸虫早期幼虫并侵入其体内,血吸虫幼虫结构发生异常、停止发育直至死亡。两种吸虫双重感染的间隔时间愈长,螺体血淋巴细胞数随时间增加而逐渐减少;而螺体分泌物不断增多,并见于血吸虫幼虫残骸内,螺体攻击血吸虫幼虫的效力愈强。这现象在单独感染日本血吸虫的钉螺体内未见到。 展开更多
关键词 湖北钉螺 日本血吸虫 目平外睾吸虫 血淋巴细胞 分泌物
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日本血吸虫p50亲免素基因的扩增及其免疫学特性
5
作者 李孜 余新炳 +2 位作者 吴忠道 徐劲 胡旭初 《热带医学杂志》 CAS 2006年第2期115-119,共5页
目的扩增日本血吸虫(Sj)p50亲免素(IP)基因全长cDNA和DNA序列,进行原核克隆和研究其免疫学特性。方法从Sj成虫RNA中RT-PCR扩增Sjp50亲免素基因完整的编码阅读框,从Sj成虫基因组中扩增其DNA序列,对其cDNA序列和DNA序列进行比较分析,寻找... 目的扩增日本血吸虫(Sj)p50亲免素(IP)基因全长cDNA和DNA序列,进行原核克隆和研究其免疫学特性。方法从Sj成虫RNA中RT-PCR扩增Sjp50亲免素基因完整的编码阅读框,从Sj成虫基因组中扩增其DNA序列,对其cDNA序列和DNA序列进行比较分析,寻找内含子。将其cDNA序列克隆入pET30a(+)体中,原核表达并纯化表达产物,Western-blot比较重组蛋白与Sj体内相应天然蛋白的免疫原性和免疫反应性,间接免疫荧光法对p50亲免素进行组织定位。结果Sjp50IP基因DNA序列与cDNA相比,有6个内含子;重组p50IP与Sj体内的天然蛋白具有相同的免疫学特性,该蛋白位于Sj成虫的被膜上。结论成功扩增得到了Sjp50IP基因的全长编码区的cDNA序列和DNA序列,其DNA序列中有6个内含子;重组Sjp50IP的免疫学特性支持将该基因作为疫苗进行进一步的研究。 展开更多
关键词 日本血吸虫 中国大陆株 p50亲免素 免疫学特性
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日本血吸虫pcDNA3.1(+)-SjPGK重组质粒的构建及鉴定
6
作者 梁瑜 肖建华 +4 位作者 刘传爱 廖力 伍和平 张愉快 杨秋林 《实用预防医学》 CAS 2004年第6期1092-1094,共3页
目的　构建日本血吸虫中国大陆株磷酸甘油酸激酶基因片段 (SjPGK )的真核表达重组质粒 ,寻找新的预防日本血吸虫病的候选疫苗分子。　方法　采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术 ,从日本血吸虫总RNA中体外扩增SjPGK基因片段 ;克隆入... 目的　构建日本血吸虫中国大陆株磷酸甘油酸激酶基因片段 (SjPGK )的真核表达重组质粒 ,寻找新的预防日本血吸虫病的候选疫苗分子。　方法　采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术 ,从日本血吸虫总RNA中体外扩增SjPGK基因片段 ;克隆入pMD18-T载体中 ,然后挑取阳性克隆经双酶切分析、PCR鉴定 ;亚克隆入真核表达载体pcDNA3 .1(+ )中 ,阳性克隆经鉴定后进行脱氧核糖核酸序列测定 ;运用Blast程序 ,将测序结果及其推导的编码氨基酸序列与NCBI数据库在核苷酸水平和氨基酸水平进行同源性比较。　结果　RT -PCR特异性扩增出一条长约 83 0bp大小的条带 ;重组质粒pMD18-T -SjPGK和 pcDNA3 .1(+ ) -SjPGK经双酶切和以质粒为模板进行PCR扩增 ,均可获得一条与RT -PCR产物一致的DNA片段 ;脱氧核糖核酸序列测定和分析结果表明 :SjPGK基因片段长为 83 0bp ,与SmPGK的核苷酸同源性为 85 % ,分值为 672 ;氨基酸同源性为 94% ,分值为 473。　结论　成功地构建 pcDNA3 .1(+ ) -SjPGK重组质粒 ,为构建其核酸疫苗提供了条件。 展开更多
关键词 日本血吸虫 磷酸甘油酸激酶 基因克隆 序列测定
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检测抗Sj23HD IgG在监测预警哨鼠血吸虫感染早期诊断中的价值 被引量：4
7
作者 王玠 余传信 +7 位作者 张伟 杨坤 殷旭仁 钱春艳 宋丽君 沈双 许永良 杨静 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第8期594-598,共5页
目的探讨检测抗日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水肽段(Sj23HD)抗体IgG对血吸虫感染监测预警哨鼠进行早期诊断的价值。方法在潜在高风险血吸虫感染水域投放哨鼠,第一批哨鼠分别于回收后第14、35d采血,分离血清,第35d解剖查虫,第二批哨鼠分别于... 目的探讨检测抗日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水肽段(Sj23HD)抗体IgG对血吸虫感染监测预警哨鼠进行早期诊断的价值。方法在潜在高风险血吸虫感染水域投放哨鼠,第一批哨鼠分别于回收后第14、35d采血,分离血清,第35d解剖查虫,第二批哨鼠分别于第21、50d采血,分离血清,第50d解剖查虫。以重组Sj23HD为抗原,通过常规ELISA和Western blot方法检测哨鼠血清抗Sj23HD抗体IgG,并与解剖查虫结果进行比较。结果 ELISA检测第一批预警哨鼠回收后第14d特异性抗体IgG阳性率为0.4%,第35d阳性率为3.7%;Western blot检测阳性率分别为1.7%和3.7%;第35d解剖,成虫阳性率为0.92%。ELISA检测第二批预警哨鼠回收后第21d特异性抗体IgG阳性率为2.4%,第50d阳性率为12.5%,Western blot阳性率分别为为5.2%和12%。第50d解剖,成虫阳性率为8.2%。两批哨鼠回收后14d、21d,Western blot法阳性率均比常规ELISA法高,两种免疫学方法的阳性率与解剖查虫法阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抗Sj23HD抗体IgG ELISA和Western blot检测的敏感性高于解剖查虫法,能提前哨鼠预警的时间,提高预警效果;Western blot法敏感性和特异性均显著高于ELISA法,更具实用价值。 展开更多
关键词 血吸虫 日本 sj23HD 特异性抗体IgG 哨鼠 早期诊断 免疫印迹法
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日本血吸虫信号蛋白14-3-3的虫体免疫定位 被引量：20
8
作者 刘庆中 沈继龙 汪学龙 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期330-332,共3页
目的　研究抗重组日本血吸虫信号蛋白 1 4 3 3(rSj1 4 3 3)单克隆抗体对天然Sjl4 3 3的结合活性 ,观察Sj1 4 3 3在虫体内的定位。　方法　从阳性钉螺体内逸出尾蚴 ,感染家兔 ,分别于感染后 1 5d和 4 2d剖杀 ,静脉灌注法收集童虫和... 目的　研究抗重组日本血吸虫信号蛋白 1 4 3 3(rSj1 4 3 3)单克隆抗体对天然Sjl4 3 3的结合活性 ,观察Sj1 4 3 3在虫体内的定位。　方法　从阳性钉螺体内逸出尾蚴 ,感染家兔 ,分别于感染后 1 5d和 4 2d剖杀 ,静脉灌注法收集童虫和成虫制备冰冻切片。利用rSj1 4 3 3单克隆抗体 ,间接免疫荧光法探讨信号蛋白 1 4 3 3虫体内的分布。　结果　免疫荧光染色结果显示 ,rSj1 4 3 3单克隆抗体可特异性地结合天然Sj1 4 3 3抗原表位 ,背景清晰 ,Sj1 4 3 3广泛分布在雌、雄成虫的皮层、皮下层、肌层和实质层 ,前三种组织中特异性荧光呈线状分布 ,实质中特异性荧光弥散 ;童虫中Sj1 4 3 3也广泛的分布在皮层、皮下层、肌层和实质层。　结论　免疫荧光染色成功地确定了Sj1 4 3 3蛋白在成虫和 1 展开更多
关键词 日本血吸虫信号蛋白14-3-3 虫体 免疫定位 单克隆抗体 sj14-3-3 成虫 童虫
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日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa抗原编码基因的核酸疫苗研究 被引量：6
9
作者 苏川 马磊 +7 位作者 王荣芝 邵莉君 吴海玮 沈蕾 范乐明 陈淑贞 张兆松 吴观陵 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第6期6-10,共5页
为探索日本血吸虫（中国大陆株）２２．６ｋＤａ 抗原（Ｓｊ２２．６）编码基因用作核酸疫苗的可行性，将ｐＣＭＶ／Ｓｊ２２．６基因重组质粒经肌肉注射免疫了一批ＢＡＬＢ／ｃ小鼠并进行攻击感染试验，结果表明此重组质粒能在小鼠体... 为探索日本血吸虫（中国大陆株）２２．６ｋＤａ 抗原（Ｓｊ２２．６）编码基因用作核酸疫苗的可行性，将ｐＣＭＶ／Ｓｊ２２．６基因重组质粒经肌肉注射免疫了一批ＢＡＬＢ／ｃ小鼠并进行攻击感染试验，结果表明此重组质粒能在小鼠体内持续存在、稳定表达并诱导小鼠产生特异性的抗Ｓｊ２２．６ 抗体。 展开更多
关键词 日本血吸虫 pCMV-β 核酸疫苗 编码基因 sj22.6
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