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落地生根S-腺苷高半胱氨酸水解酶基因的克隆及生物信息学分析 被引量：4
1
作者 苏振声 苏文锋 +6 位作者 杨秉建 张利娟 李亚超 白宇清 闫纯 曾会明 钟天秀 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期227-235,共9页
为了解落地生根（Kalanchoe daigremontiana）的SAHH基因功能，采用RACE技术从其叶片克隆了SAHH的全长cDNA序列，命名为KdSAHH。结果表明，KdSAHH全长为1748 bp，含1458 bp完整的开放阅读框（ORF），推测编码485个氨基酸。预测落地生根S... 为了解落地生根（Kalanchoe daigremontiana）的SAHH基因功能，采用RACE技术从其叶片克隆了SAHH的全长cDNA序列，命名为KdSAHH。结果表明，KdSAHH全长为1748 bp，含1458 bp完整的开放阅读框（ORF），推测编码485个氨基酸。预测落地生根SAHH蛋白分子量约为53 kDa，理论等电点为5.59~5.682。Scanprostie和DNAstar预测表明，落地生根SAHH蛋白在进化上非常保守，与苜蓿的亲缘关系较近。以黄羽扇豆为模板，利用SWISS-MODLE和Phyre程序模拟的落地生根SAHH蛋白亚基三维结构有一定差异。这些为落地生根KdSAHH的表达和功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 落地生根 S-腺苷高半胱氨酸水解酶 sahh 克隆 生物信息学
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变异链球菌LuxS缺陷株甲基循环通路的恢复构建 被引量：2
2
作者 王玉霞 高丽 +5 位作者 江文欣 马瑞 唐子圣 朱彩莲 何智妍 黄正蔚 《上海口腔医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期385-390,共6页
目的:以变异链球菌LuxS缺陷株为模型,构建其密度感应缺陷的甲基循环恢复株。方法:以LuxS为阳性表达对照,通过在变异链球菌LuxS缺陷株中异源表达SahH,实现其代谢通路的恢复构建。通过Western印迹、反转录PCR和信号分子AI-2分泌检测,验证... 目的:以变异链球菌LuxS缺陷株为模型,构建其密度感应缺陷的甲基循环恢复株。方法:以LuxS为阳性表达对照,通过在变异链球菌LuxS缺陷株中异源表达SahH,实现其代谢通路的恢复构建。通过Western印迹、反转录PCR和信号分子AI-2分泌检测,验证目的蛋白的表达。采用SAS8.0软件包对数据进行统计学分析。结果:Western印迹检测2种蛋白在大肠杆菌中均得到正确表达,验证了克隆载体的正常表达能力;反转录PCR验证了变异链球菌LuxS缺陷株中luxS及sahH mRNA的存在;发光实验证实LuxS阳性表达对照株AI-2的分泌能力恢复。结论:成功构建变异链球菌LuxS缺陷的代谢恢复株,为探讨LuxS的调控机制提供了分子生物学工具及实验对照。 展开更多
关键词 变异链球菌 生物膜 密度感应 LUXS sahh
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大肠杆菌密度感应缺陷株中sahH基因克隆与表达的研究 被引量：2
3
作者 王倩 黄正蔚 《口腔医学》 CAS 2011年第8期449-452,共4页
目的利用克隆和表达sahH基因,恢复大肠杆菌密度感应缺陷株的甲基循环通路。方法通过扩增铜绿假单胞菌sahH基因,克隆到pGEX4T-1载体上,继而转入大肠杆菌密度感应缺陷株。诱导培养后,经考马斯亮蓝染色及蛋白印迹鉴定SahH-GST融合蛋白的表... 目的利用克隆和表达sahH基因,恢复大肠杆菌密度感应缺陷株的甲基循环通路。方法通过扩增铜绿假单胞菌sahH基因,克隆到pGEX4T-1载体上,继而转入大肠杆菌密度感应缺陷株。诱导培养后,经考马斯亮蓝染色及蛋白印迹鉴定SahH-GST融合蛋白的表达。结果成功扩增并克隆了sahH基因,在大肠杆菌密度感应缺陷株中表达出约75 ku大小的蛋白,其大小与SahH-GST蛋白相符。结论大肠杆菌密度感应缺陷株内可以表达外源基因sahH,恢复了甲基循环的该菌株可进一步应用于密度感应与代谢循环调节作用的实验。 展开更多
关键词 密度感应 sahh基因 克隆 蛋白印迹
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sahH基因在变异链球菌LuxS缺陷株内表达对胞外多糖合成的影响 被引量：1
4
作者 胡戌琛 王玉霞 +3 位作者 江文欣 牛晨光 林文珍 黄正蔚 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期254-258,共5页
目的·研究sahH基因在变异链球菌LuxS缺陷株内的表达对其胞外多糖合成的影响。方法·以构建的LuxS缺陷株转有sahH基因的sahH+LuxS-SmUA159、LuxS缺陷株转有空质粒的PIB169+LuxS-SmUA159(背景对照)及变异链球菌SmUA159野生株为... 目的·研究sahH基因在变异链球菌LuxS缺陷株内的表达对其胞外多糖合成的影响。方法·以构建的LuxS缺陷株转有sahH基因的sahH+LuxS-SmUA159、LuxS缺陷株转有空质粒的PIB169+LuxS-SmUA159(背景对照)及变异链球菌SmUA159野生株为研究模型。实时荧光定量PCR观察胞外多糖合成相关基因的转录水平,蒽酮法观察生物膜胞外多糖合成情况。结果·与SmUA159和PIB169+LuxS-SmUA159菌株相比,sahH基因转入株sahH+LuxS-SmUA159的4种被检测基因(gtfA、gtfB、gtfC、gtfD)中,gtfA和gtfD转录水平有显著差异(均P<0.05),而gtfB和gtfC无明显差异。SmUA159、PIB169+LuxS-SmUA159和sahH+LuxS-SmUA159胞外多糖合成量无明显差异。结论·sahH基因转入可影响变异链球菌胞外多糖合成相关基因的表达,但不影响细菌总体胞外多糖合成量。 展开更多
关键词 变异链球菌 胞外多糖 基因表达 细菌 sahh基因
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毛白杨S-腺苷高半胱氨酸水解酶基因PtSAHHA的克隆、表达及SNP关联分析 被引量：3
5
作者 巩琛锐 王璐 +1 位作者 杜庆章 张德强 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第11期67-76,共10页
组合运用分子生物学及生物信息学方法,首次从毛白杨成熟木质部中分离出编码S-腺苷高半胱氨酸水解酶基因PtSAHHA的cDNA克隆。序列分析表明,毛白杨PtSAHHA cDNA片段全长为1 935 bp,其内部含有大小为1 458 bp的完整开放阅读框架,可编码含有... 组合运用分子生物学及生物信息学方法,首次从毛白杨成熟木质部中分离出编码S-腺苷高半胱氨酸水解酶基因PtSAHHA的cDNA克隆。序列分析表明,毛白杨PtSAHHA cDNA片段全长为1 935 bp,其内部含有大小为1 458 bp的完整开放阅读框架,可编码含有485个氨基酸残基的蛋白质。组织特异性Realtime-PCR结果显示,PtSAHHA在木质部中表达丰度最高,在形成层和老叶中表达丰度中等,在嫩叶中表达丰度最低。在此基础上,组合利用MAGE5.0和DnaSP5软件对毛白杨自然群体中45株基因型个体的PtSAHHA序列进行对比和分析,共检测到166个单核苷酸多态性(SNP)位点,SNP频率为1/15 bp,多样性指数πT为0.010 58。在外显子区域共检测到88个SNP位点,其中同义突变位点34个,错义突变位点53个及1个无义突变位点;同义突变的核苷酸多样性πSynonymous=0.024 91,是非同义突变核苷酸多样性πNonsynonymous=0.002 33的10倍,推测毛白杨PtSAHHA基因编码区在毛白杨物种演化过程中受到较强的纯化选择压力。对PtSAHHA基因内的SNPs连锁不平衡分析结果表明,随着核苷酸序列长度增加至800 bp,即r2<0.1,SNPs的连锁不平衡水平已衰退至不明显。在此基础上,在由426株毛白杨基因型个体组成的关联作图群体内,对频率大于10%的42个常见SNP标记位点与6个木材品质性状进行关联分析,检测到3个SNP标记与3个表型性状显著关联。研究结果为基于分子标记的毛白杨优良木材品质性状定向辅助育种提供理论依据。 展开更多
关键词 毛白杨 S-腺苷高半胱氨酸水解酶 单核苷酸多态性 连锁不平衡 木材品质性状
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布鲁菌半胱氨酸水解酶在甲硫氨酸循环中的催化活性研究 被引量：1
6
作者 徐达 吴小卡 +6 位作者 荆雅玮 左佳坤 米荣升 黄燕 陈兆国 王成明 韩先干 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期697-702,共6页
[目的]细菌的sah H基因编码S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(Sah H),该酶参与细菌的甲硫氨酸循环(AMC),调控细菌的多种生理功能。[方法]通过构建重组表达质粒p ET28a-Bru-sah H和p ET28a-Pse-sah H,分别表达布鲁菌(Brucella abortus)S2308株... [目的]细菌的sah H基因编码S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(Sah H),该酶参与细菌的甲硫氨酸循环(AMC),调控细菌的多种生理功能。[方法]通过构建重组表达质粒p ET28a-Bru-sah H和p ET28a-Pse-sah H,分别表达布鲁菌(Brucella abortus)S2308株和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PAO1株的Sah H重组蛋白Bru-Sah H和Pse-Sah H。将纯化后的Bru-Sah H、Pse-Sah H以及我们前期表达纯化的禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)的Pfs和Lux S蛋白,分别在体外催化S-腺苷同型半胱氨酸(SAH),通过对产物同型半胱氨酸(HCY)的浓度测定,评价不同重组蛋白的催化活性,并对催化底物时产生的自诱导分子2(AI-2)活性进行检测。[结果]Bru-Sah H和Pse-Sah H分别催化1 mmol·L-1SAH生成38和47μmol·L-1HCY,而APEC的Pfs和Lux S蛋白能催化相同浓度的SAH产生401μmol·L-1HCY。运用哈维弧菌BB170检测上述底物的AI-2活性,结果表明只有同时采用AEPC的Pfs和Lux S蛋白催化SAH,才能形成有活性的AI-2分子,而Bru-Sah H和Pce-Sah H均不能催化SAH形成活性AI-2分子。[结论]Bru-Sah H能催化SAH生成HCY,为进一步研究sah H在布鲁菌感染过程中的作用提供依据。 展开更多
关键词 布鲁菌 甲硫氨酸循环 S-腺苷同型半胱氨酸水解酶 催化活性 信号分子AI-2
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氧化型辅酶NAD^+及布氏杆菌SahH活性位点对SahH催化活性的影响
7
作者 荆雅玮 左佳坤 +7 位作者 王志豪 胡剑刚 黄燕 米荣升 苗晋锋 PHOUTHAPANE Vanhnaseng 陈兆国 韩先干 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期903-909,共7页
[目的]本文旨在鉴定影响布氏杆菌S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(S-adenosylhomocysteine hydrolase,SahH)催化S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)产生同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)的催化活性位点。[方法]将表达载体pET28a-B... [目的]本文旨在鉴定影响布氏杆菌S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(S-adenosylhomocysteine hydrolase,SahH)催化S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)产生同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)的催化活性位点。[方法]将表达载体pET28a-Bru-sahH转化大肠杆菌BL21中,表达、纯化布氏杆菌SahH(Bru-SahH)蛋白,分析辅酶NAD+、磷酸化修饰及活性位点对Bru-SahH催化活性的影响。[结果]添加NAD+后,Bru-SahH的催化活性降低85.6%;对Bru-SahH质谱分析表明,其444位丝氨酸为可能的磷酸化位点,对该位点突变后Bru-SahH催化SAH形成HCY的活性降低85.5%;生物信息学分析表明,Bru-SahH的337位和338位氨基酸为其活性位点,分别对上述2个位点进行单突变和双突变,突变后的Bru-SahH催化活性降低90.8%以上。[结论]Bru-SahH的337、338和444位氨基酸是其催化活性位点,添加外源性NAD+可抑制其催化活性。 展开更多
关键词 布氏杆菌 S-腺苷同型半胱氨酸水解酶 酶活性 活性位点
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可逆型的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶抑制剂DZ2002对银屑病的治疗作用及机制研究 被引量：1
8
作者 林泽民 马萌 +2 位作者 何世君 唐炜 左建平 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1089-1089,共1页
目的 DZ2002是可逆型的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH)抑制剂,通过抑制细胞内甲基化反应,发挥显著的免疫抑制及免疫调节活性。本研究观察了DZ2002对咪喹莫特(imiquimod)诱导的小鼠银屑病模型的疗效作用及对病理性效应细胞功能的调控。... 目的 DZ2002是可逆型的S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHH)抑制剂,通过抑制细胞内甲基化反应,发挥显著的免疫抑制及免疫调节活性。本研究观察了DZ2002对咪喹莫特(imiquimod)诱导的小鼠银屑病模型的疗效作用及对病理性效应细胞功能的调控。方法 (1)运用10周龄正常雌性BALB/C小鼠,采用咪喹莫特乳膏涂抹背部及双侧耳部皮肤,建立小鼠银屑病模型,并以DZ2002软膏自造模当日起每天涂抹小鼠背部及双侧耳部皮肤,连续涂抹15 d,持续观察药物对银屑病小鼠的体重、背部及耳部皮肤损伤(红斑、鳞屑、皮层增厚)程度的影响作用;(2)采用流式细胞术,对DZ2002治疗干预银屑病小鼠脾脏淋巴细胞进行活化表型及病理性细胞亚群分析,并同时对受损皮肤中炎性细胞浸润情况及细胞表型进行分析;(3)ELISA法检测银屑病样小鼠损伤皮肤中炎性细胞因子水平,考察DZ2002治疗对皮肤病灶炎症反应的控制作用;(4)运用Western blotting检测DZ2002治疗对银屑病小鼠脾脏淋巴细胞中,炎症信号通路转导关键分子磷酸化水平的影响。结果 (1)DZ2002能够缓解咪喹莫特诱导的小鼠银屑病严重程度,持续改善小鼠背部及耳部皮肤红斑、鳞屑、皮层增厚情况,并显著降低模型小鼠脾指数;(2)DZ2002治疗持续降低银屑病小鼠脾脏淋巴细胞中CD44+CD62L-的效应性活化T细胞比例,减少病理性Th17亚型细胞比例;(3)DZ2002治疗显著减少T细胞及IL-17分泌细胞向皮损部位的浸润;(4)DZ2002治疗显著降低银屑病皮损部位IL-17炎性细胞因子的含量;(5)DZ2002治疗可下调银屑病模型小鼠脾淋巴细胞中JNK/STAT及MAPK炎症信号通路转导强度,并降低脾细胞中SAHH的表达水平。结论 DZ2002对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病具有显著的干预和治疗作用,能通过抑制效应性T细胞向损伤皮肤的浸润,减少病灶部位炎性细胞因子含量,并降低Th17型细胞比例、下调其下游炎症信 展开更多
关键词 sahh抑制剂 银屑病 炎性浸润
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