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猪圆环病毒3型TaqMan荧光定量PCR方法的建立和初步应用
被引量：
12
1
作者
李畅
库旭钢
+3 位作者
王俊伟
李静
朱玲
何启盖
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第6期1320-1326,共7页
为了灵敏而便捷的检测猪圆环病毒3型(PCV3),根据PCV3ORF2基因组保守序列设计合成4对引物,先使用荧光染料(SYBR)定量PCR法验证其能否有效扩增目的片段,并根据结果和引物对所扩增序列的交集进一步设计TaqMan探针,通过优化反应条件和反应...
为了灵敏而便捷的检测猪圆环病毒3型(PCV3),根据PCV3ORF2基因组保守序列设计合成4对引物,先使用荧光染料(SYBR)定量PCR法验证其能否有效扩增目的片段,并根据结果和引物对所扩增序列的交集进一步设计TaqMan探针,通过优化反应条件和反应体系建立快速检测PCV3的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,SYBR染料法和TaqMan探针法均能有效地扩增PCV3标准质粒以及其他阳性样品,并且对1.29×10~2~1.29×10~9拷贝·μL^(-1)的PCV3标准质粒(Pmd18-t-Cap)呈现良好的线性关系,该方法的检测灵敏度为1.29×10~2拷贝·μL^(-1),比常规PCR的灵敏度高100倍,该方法与猪圆环病毒2型、猪轮状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等病毒基因以及猪链球菌、猪肺炎支原体等细菌基因均无交叉反应,具有良好的特异性;批次内重复和批次间重复试验结果显示变异系数(CV)均小于1.5%,呈良好的可重复性。用该方法对2016年至2017年间收集的124份来自湖北省等地的猪病料DNA样品进行检测,结果显示本地区PCV3阳性率为8.06%(10/124),PCV2和PCV3共感染率为8.06%(10/124)。上述结果表明,本研究建立TaqMan荧光定量PCR能够灵敏特异的检测圆环病毒3型,为圆环病毒3型的临床检测提供有效手段。
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关键词
圆环病毒3型
sybr
荧光
定量pcr
TaqMan
荧光
定量pcr
检测
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职称材料
SYBR荧光定量PCR方法分析猪瘟石门强毒的组织分布
被引量：
5
2
作者
牛金鹏
韩雪英
+6 位作者
郝华芳
孙孟娇
杜恩岐
张淑霞
杨增岐
党如意
王兴龙
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期1798-1801,1807,共5页
为研究急性感染期猪瘟病毒在组织中的分布,本试验建立了猪瘟病毒实时定量PCR检测方法,通过与普通PCR及套式PCR方法比较,发现实时定量PCR具有较高的灵敏度和特异性,能够用于猪瘟病毒的检测;以此方法为基础,对人工接种猪瘟石门强毒急性死...
为研究急性感染期猪瘟病毒在组织中的分布,本试验建立了猪瘟病毒实时定量PCR检测方法,通过与普通PCR及套式PCR方法比较,发现实时定量PCR具有较高的灵敏度和特异性,能够用于猪瘟病毒的检测;以此方法为基础,对人工接种猪瘟石门强毒急性死亡猪体内病毒分布进行了检测,结果发现急性感染期猪瘟病毒主要集中在扁桃体、脾脏、淋巴结及回肠。本研究初步揭示了猪瘟强毒在急性感染期死亡猪体内的分布情况,为猪瘟致病机理及感染控制的研究奠定了基础。
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关键词
sybr
荧光
定量pcr
猪瘟
组织分布
原文传递
解毒化淤颗粒对急性肝衰竭小鼠肝细胞Caspase-3 mRNA表达的影响
被引量：
23
3
作者
毛德文
陈月桥
+3 位作者
余晶
黄古叶
王丽
龙富立
《时珍国医国药》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第9期2251-2254,共4页
目的探讨解毒化瘀颗粒抑制急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡的作用及可能的机制。方法将昆明小鼠随机分为空白组、模型组、解毒化淤颗粒组、安宫牛黄丸组、乳果糖组,用D-GalN+LPS腹腔注射构建急性肝衰竭的小鼠模型,观察各组小鼠存活率,SYBR荧...
目的探讨解毒化瘀颗粒抑制急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡的作用及可能的机制。方法将昆明小鼠随机分为空白组、模型组、解毒化淤颗粒组、安宫牛黄丸组、乳果糖组,用D-GalN+LPS腹腔注射构建急性肝衰竭的小鼠模型,观察各组小鼠存活率,SYBR荧光实时定量PCR法检测肝细胞内天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3 mRNA)的表达。结果成模后48 h存活率解毒化淤颗粒组高于其他药物组;促凋亡因子Caspase-3在解毒化淤颗粒组肝组织中表达量低,而在其他药物干预组及模型组中则高表达。结论急性肝衰竭中Caspase-3表达与肝细胞凋亡程度有相关性,解毒化淤颗粒能下调内毒素肝损伤肝细胞Caspase-3表达并抑制其凋亡效应,降低肝衰竭小鼠死亡率,提示解毒化淤颗粒抑制肝细胞凋亡有可能是其防治急性肝衰竭的机制之一。
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关键词
解毒化瘀颗粒
急性肝衰竭
细胞凋亡
sybr
荧光
实时
定量pcr
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职称材料
题名
猪圆环病毒3型TaqMan荧光定量PCR方法的建立和初步应用
被引量：
12
1
作者
李畅
库旭钢
王俊伟
李静
朱玲
何启盖
机构
华中农业大学农业微生物学国家重点实验室
华中农业大学动物医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第6期1320-1326,共7页
基金
国家生猪产业技术体系资助项目(CARS-35)
文摘
为了灵敏而便捷的检测猪圆环病毒3型(PCV3),根据PCV3ORF2基因组保守序列设计合成4对引物,先使用荧光染料(SYBR)定量PCR法验证其能否有效扩增目的片段,并根据结果和引物对所扩增序列的交集进一步设计TaqMan探针,通过优化反应条件和反应体系建立快速检测PCV3的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,SYBR染料法和TaqMan探针法均能有效地扩增PCV3标准质粒以及其他阳性样品,并且对1.29×10~2~1.29×10~9拷贝·μL^(-1)的PCV3标准质粒(Pmd18-t-Cap)呈现良好的线性关系,该方法的检测灵敏度为1.29×10~2拷贝·μL^(-1),比常规PCR的灵敏度高100倍,该方法与猪圆环病毒2型、猪轮状病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等病毒基因以及猪链球菌、猪肺炎支原体等细菌基因均无交叉反应,具有良好的特异性;批次内重复和批次间重复试验结果显示变异系数(CV)均小于1.5%,呈良好的可重复性。用该方法对2016年至2017年间收集的124份来自湖北省等地的猪病料DNA样品进行检测,结果显示本地区PCV3阳性率为8.06%(10/124),PCV2和PCV3共感染率为8.06%(10/124)。上述结果表明,本研究建立TaqMan荧光定量PCR能够灵敏特异的检测圆环病毒3型,为圆环病毒3型的临床检测提供有效手段。
关键词
圆环病毒3型
sybr
荧光
定量pcr
TaqMan
荧光
定量pcr
检测
Keywords
porcine circovirus type 3（PCV3）
sybr
q
pcr
TaqMan q
pcr
detection
分类号
S852.659.2 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
SYBR荧光定量PCR方法分析猪瘟石门强毒的组织分布
被引量：
5
2
作者
牛金鹏
韩雪英
郝华芳
孙孟娇
杜恩岐
张淑霞
杨增岐
党如意
王兴龙
机构
西北农林科技大学动物医学院
东北大学理学院
出处
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期1798-1801,1807,共5页
基金
教育部直属高校基本科研业务费资助项目(QN2011106)
文摘
为研究急性感染期猪瘟病毒在组织中的分布,本试验建立了猪瘟病毒实时定量PCR检测方法,通过与普通PCR及套式PCR方法比较,发现实时定量PCR具有较高的灵敏度和特异性,能够用于猪瘟病毒的检测;以此方法为基础,对人工接种猪瘟石门强毒急性死亡猪体内病毒分布进行了检测,结果发现急性感染期猪瘟病毒主要集中在扁桃体、脾脏、淋巴结及回肠。本研究初步揭示了猪瘟强毒在急性感染期死亡猪体内的分布情况,为猪瘟致病机理及感染控制的研究奠定了基础。
关键词
sybr
荧光
定量pcr
猪瘟
组织分布
Keywords
sybr
real-time
pcr
classical swine fever
tissue distribution.
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
解毒化淤颗粒对急性肝衰竭小鼠肝细胞Caspase-3 mRNA表达的影响
被引量：
23
3
作者
毛德文
陈月桥
余晶
黄古叶
王丽
龙富立
机构
广西中医学院附属第一医院
出处
《时珍国医国药》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第9期2251-2254,共4页
基金
广西高校百名中青年学科带头人资助计划项目(No.20056409)
广西科学研究与技术开发计划应用基础研究专项(No.0639053)
文摘
目的探讨解毒化瘀颗粒抑制急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡的作用及可能的机制。方法将昆明小鼠随机分为空白组、模型组、解毒化淤颗粒组、安宫牛黄丸组、乳果糖组,用D-GalN+LPS腹腔注射构建急性肝衰竭的小鼠模型,观察各组小鼠存活率,SYBR荧光实时定量PCR法检测肝细胞内天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3 mRNA)的表达。结果成模后48 h存活率解毒化淤颗粒组高于其他药物组;促凋亡因子Caspase-3在解毒化淤颗粒组肝组织中表达量低,而在其他药物干预组及模型组中则高表达。结论急性肝衰竭中Caspase-3表达与肝细胞凋亡程度有相关性,解毒化淤颗粒能下调内毒素肝损伤肝细胞Caspase-3表达并抑制其凋亡效应,降低肝衰竭小鼠死亡率,提示解毒化淤颗粒抑制肝细胞凋亡有可能是其防治急性肝衰竭的机制之一。
关键词
解毒化瘀颗粒
急性肝衰竭
细胞凋亡
sybr
荧光
实时
定量pcr
Keywords
Jieduhuayu granule
Acute liver failure
Apoptosis
sybr
fluorescence RT -
pcr
分类号
R285.5 [医药卫生—中药学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪圆环病毒3型TaqMan荧光定量PCR方法的建立和初步应用
李畅
库旭钢
王俊伟
李静
朱玲
何启盖
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
12
下载PDF
职称材料
2
SYBR荧光定量PCR方法分析猪瘟石门强毒的组织分布
牛金鹏
韩雪英
郝华芳
孙孟娇
杜恩岐
张淑霞
杨增岐
党如意
王兴龙
《中国兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
5
原文传递
3
解毒化淤颗粒对急性肝衰竭小鼠肝细胞Caspase-3 mRNA表达的影响
毛德文
陈月桥
余晶
黄古叶
王丽
龙富立
《时珍国医国药》
CAS
CSCD
北大核心
2009
23
下载PDF
职称材料
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