丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3反式激活SV40病毒早期启动子的研究 被引量：15

1

作者 刘妍 成军 +5 位作者 牟劲松 陆荫英 王建军 李克 王琳 张玲霞 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期44-46,共3页

聚合酶链反应(PCR)扩增丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3基因 ,克隆至真核表达载体pcDNA3 1(- )中 ,构建HCV　NS3基因真核表达载体 pcDNA3 1(- ) NS3;以该质粒转染肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞 ,免疫印迹方法 (Westernblotting)检测转染... 聚合酶链反应(PCR)扩增丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3基因 ,克隆至真核表达载体pcDNA3 1(- )中 ,构建HCV　NS3基因真核表达载体 pcDNA3 1(- ) NS3;以该质粒转染肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞 ,免疫印迹方法 (Westernblotting)检测转染细胞中HCVNS3蛋白的瞬时表达 ;与报告质粒pCAT3 promoter共转染HepG2细胞 ,用酶联免疫吸附方法 (ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性。结果显示 ,质粒pcDNA3 1(- ) NS3在HepG2细胞瞬时表达HCVNS3蛋白 ,共转染实验中pcDNA3 1(- ) NS3组的CAT表达活性是空质粒对照组的 4 6倍。表明构建的表达载体能在哺乳动物细胞中表达出相应蛋白 ,并能够反式激活SV4 0病毒早期启动子。本研究为进一步克隆HCVNS3蛋白反式激活的靶基因 。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白NS3 反式激活 sv40病毒 早期启动子

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细胞永生化的研究进展 被引量：10

2

作者 杨娜娜 王娟 杜立新 《中国畜牧兽医》 CAS 2005年第1期37-39,共3页

正常细胞的增殖能力有限 ,经过一定时间的增殖后 ,最终会进入一种生长抑制状态 ,而一些肿瘤细胞可以无限增殖。作者简要阐明了永生化细胞分子机制 ,并对细胞永生化方法进行了概述。

关键词 细胞 永生化 衰老 端粒酶 sv40病毒 EB

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SV40病毒对体外培养的人角朊细胞的转化 被引量：6

3

作者 苏映军 陈璧 +3 位作者 汤朝武 胡大海 姜笃银 贾赤宇 《第四军医大学学报》 1999年第5期382-385,共4页

目的：研究ＳＶ４０（ｓｉｍｉａｎｖｉｒｕｓ４０）病毒对人角朊细胞的体外转化作用以及转化后细胞生物学特性的改变．方法：采用体外共培养法以ＳＶ４０野生型病毒感染人包皮角朊细胞，观察病毒基因在细胞内的表达以及细胞表型的改变... 目的：研究ＳＶ４０（ｓｉｍｉａｎｖｉｒｕｓ４０）病毒对人角朊细胞的体外转化作用以及转化后细胞生物学特性的改变．方法：采用体外共培养法以ＳＶ４０野生型病毒感染人包皮角朊细胞，观察病毒基因在细胞内的表达以及细胞表型的改变情况．结果：分离获得了可长期体外培养的ＳＶ４０转化细胞克隆，已传２３代以上，体外存活超过２５０ｄ；ＤＮＡ印迹实验显示ＳＶ４０大Ｔ基因已整合至细胞染色体内，间接免疫荧光检测示多数细胞胞核内有大Ｔ基因产物的表达；转化细胞对裸鼠无致瘤性，并可正常表达角蛋白．结论：ＳＶ４０病毒转化人角朊细胞后可使其在体外长期培养，该细胞的获得为进一步研究外源性基因对角朊细胞生长的调控奠定了基础． 展开更多

关键词 sv40病毒 角朊细胞 细胞转化 体外培养

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体外长期培养人转化角朊细胞系的生物学特征 被引量：4

4

作者 苏映军 陈璧 +1 位作者 贾赤宇 汤朝武 《第四军医大学学报》 1999年第5期386-388,共3页

目的：研究ＳＶ４０病毒转化的人角朊细胞系在体外长期培养过程中的细胞生物学特征．方法：采用细胞培养法观察转化细胞系的克隆形成率、细胞生命曲线以及血清、Ｃａ２＋对其生长分化的影响．结果：与正常角朊细胞相比，转化角朊细胞系... 目的：研究ＳＶ４０病毒转化的人角朊细胞系在体外长期培养过程中的细胞生物学特征．方法：采用细胞培养法观察转化细胞系的克隆形成率、细胞生命曲线以及血清、Ｃａ２＋对其生长分化的影响．结果：与正常角朊细胞相比，转化角朊细胞系于体外形成克隆所需的最低接种密度有所降低，但接触抑制特性仍未丧失．转化细胞在体外已传代培养２５代，对血清的依赖性降低，可被Ｃａ２＋诱导分化而形成细胞膜片结构．结论：本研究所观察的转化细胞系可在体外长期传代培养，并保留了正常角朊细胞的部分生物学特征，该细胞系在创面修复研究中具有一定价值． 展开更多

关键词 角朊细胞系 细胞培养 sv40病毒 人

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SV40T抗原胃壁细胞特异性表达载体的构建与鉴定 被引量：3

5

作者 陈辉 侯艺芳 +3 位作者 乐晓平 金辉 马慧洁 张钦宪 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第18期2004-2008,共5页

目的:构建在胃壁细胞中特异性表达SV40T抗原的真核表达裁体并进行鉴定.方法:采用酚-氯仿法从昆明小鼠肝细胞中提取基因组DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增H^+/K^+ATPaseβ亚基启动子,产物命名为HK.将PCR产物纯化回收后与pMT18-T载体相连,并... 目的:构建在胃壁细胞中特异性表达SV40T抗原的真核表达裁体并进行鉴定.方法:采用酚-氯仿法从昆明小鼠肝细胞中提取基因组DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增H^+/K^+ATPaseβ亚基启动子,产物命名为HK.将PCR产物纯化回收后与pMT18-T载体相连,并将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),构建pcDNA3.1(-)/HK;从含SV40T基因片段的质粒p LITAg中酶切回收SV40T基因,与pcDNA3.1(-)/HK相连,构建胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV,并测序鉴定.结果:pcDNA3.1(-)/HKSV用XbaⅠ、BarnHⅠ双酶切可得到1kb H^+/K^+ATPaseβ亚基启动子,2.7 kb SV40T基因与5.4 kb pcDNA3.1(-)载体3条DNA条带.用XbaⅠ、KpnⅠ双酶切电泳,可见到约3.7与5.4 kb的两条DNA条带;用BamHⅠ单酶切电泳,可见到2.7与6.4 kb的2条DNA条带;用EcoRⅠ单酶切,只见到约9.1 kb的1条DNA条带,酶切电泳结果均与设计一致.测序结果显示,H^+/K^+ATPaseβ亚基启动子与SV40T基因成功构建于pcDNA3.1(-)真核表达载体中.结论:构建在胃壁细胞中特异性表达SV40T基因的真核表达载体,为进一步转基因小鼠及胃癌动物模型的建立提供了稳定、可靠的分子工具. 展开更多

关键词 sv40病毒 T抗原 真核表达 载体构建

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SV40大T抗原在人脑肿瘤中的表达 被引量：3

6

作者 甄海宁 章翔 +5 位作者 步星耀 张志文 黄文晋 张萍 梁景文 王西玲 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期272-274,共3页

目的　检测 Ｓ Ｖ４０ 早期区域基因编码产物大 Ｔ 抗原（ Ｔａｇ）在人脑肿瘤中的表达，探讨 Ｓ Ｖ４０ 与人脑肿瘤发生的病因学关系。方法　采用免疫共沉淀、银染色及 Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测 ６５ 例人脑肿瘤组织、８ 例正常人... 目的　检测 Ｓ Ｖ４０ 早期区域基因编码产物大 Ｔ 抗原（ Ｔａｇ）在人脑肿瘤中的表达，探讨 Ｓ Ｖ４０ 与人脑肿瘤发生的病因学关系。方法　采用免疫共沉淀、银染色及 Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测 ６５ 例人脑肿瘤组织、８ 例正常人脑组织及 ２ 株人脑胶质瘤细胞系中 Ｔａｇ 的表达。结果　 Ｔａｇ 在 ８ 例室管膜瘤、２ 例脉络丛乳头状瘤及 ２ 株人脑胶质瘤细胞系中全部表达；垂体腺瘤 Ｔａｇ 阳性率为 ９０％ （９／１０），星形胶质细胞瘤７３％ （１１／１５），脑 膜瘤 ７０％ （７／１０），多形性 胶质母细胞 瘤５０％ （４／８），髓母细胞瘤 ３３％ （２／６）；５ 例少枝胶质细胞瘤、１例松果体瘤及 ８ 例正常人脑组织无 Ｔａｇ 表达。结论　 Ｓ Ｖ４０感染与人脑肿瘤的发生有一定关系。 展开更多

关键词 sv40病毒 抗原 多瘤病毒转化 脑肿瘤

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多瘤病毒及其相关的移植肾病 被引量：3

7

作者 刘龙山 王长希 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期558-560,共3页

多瘤病毒(polyoma virus)属乳多空病毒科,目前已知13种,其中与人类相关的主要有BK多瘤病毒(BKV)、JC病毒(JCV)和SV 40病毒.多瘤病毒相关的移植肾病(PVN),多数由BKV感染引起,因此常被称为BKV相关的移植肾病(BKVN).BKV于1971年从1例肾移... 多瘤病毒(polyoma virus)属乳多空病毒科,目前已知13种,其中与人类相关的主要有BK多瘤病毒(BKV)、JC病毒(JCV)和SV 40病毒.多瘤病毒相关的移植肾病(PVN),多数由BKV感染引起,因此常被称为BKV相关的移植肾病(BKVN).BKV于1971年从1例肾移植术后输尿管狭窄的患者体内分离而得. 展开更多

关键词 BK多瘤病毒 肾移植 肾病 病毒感染性疾病 术后输尿管狭窄 sv40病毒 乳多空病毒 肾功能丧失 BKV

原文传递

SV40病毒T抗原真核载体的构建与表达 被引量：2

8

作者 王鹰 邓军 +1 位作者 杨希川 郝飞 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期256-259,共4页

目的设计、构建SV40病毒T抗原真核表达载体,并导入真核细胞进行表达鉴定。方法采用重叠延伸拼接法,从pUC19-SV40载体中亚克隆切除内含子的SV40病毒T抗原基因全长片段,EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切后定向克隆至pEGFP-N1真核表达载体上,酶切鉴定... 目的设计、构建SV40病毒T抗原真核表达载体,并导入真核细胞进行表达鉴定。方法采用重叠延伸拼接法,从pUC19-SV40载体中亚克隆切除内含子的SV40病毒T抗原基因全长片段,EcoRⅠ/BamHⅠ双酶切后定向克隆至pEGFP-N1真核表达载体上,酶切鉴定重组质粒;用脂质体转染的方法将构建的载体导入原代培养的正常人成纤维细胞进行表达,检测SV40病毒T抗原基因在成纤维细胞内的表达。结果SV40病毒T抗原基因成功克隆至pEGFP-N1真核表达载体中;转染成纤维细胞提取基因组DNA及总RNA,分别经PCR和RT-PCR反应扩增出288 bp的特异性片段。结论本试验构建的SV40病毒T抗原重组质粒为利用SV40T抗原进行真核细胞研究提供了稳定、可靠的分子工具。 展开更多

关键词 sv40病毒 T抗原 真核载体 表达

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具有软骨细胞表型特征的永生化兔髁突软骨细胞系的建立

9

作者 段小红 吴军正 +1 位作者 杨彤元 王会信 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期26-28,共3页

目的 :建立具有稳定软骨细胞表型特征的永生化兔髁突细胞系。方法 :采用逆转录病毒载体介导的方法将SV40大T抗原基因导入原代培养的兔髁突软骨细胞 ,利用G418筛选阳性克隆并对其进行扩大培养 ,通过RNA点杂交检测转基因细胞I、II型胶原... 目的 :建立具有稳定软骨细胞表型特征的永生化兔髁突细胞系。方法 :采用逆转录病毒载体介导的方法将SV40大T抗原基因导入原代培养的兔髁突软骨细胞 ,利用G418筛选阳性克隆并对其进行扩大培养 ,通过RNA点杂交检测转基因细胞I、II型胶原基因的转录。结果 :有一株克隆在体外 1年半稳定传代10 0次以上 ,命名为永生化髁突软骨细胞系 (immortalizedmandibularcondylarchondrocyte ,IMCC) ,点杂交显示IMCC有I、II型前胶原基因的转录。结论 :获得具有稳定软骨细胞表型特征的永生化兔髁突细胞系。 展开更多

关键词 软骨细胞表型特征 永生化 sv40病毒 兔 下颌骨髁状突 软骨细胞系 建立

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肾移植术后BK病毒感染的诊治进展 被引量：1

10

作者 倪晓洁 陈必成 《现代实用医学》 2018年第12期1557-1560,共4页

多瘤病毒属乳头多瘤空泡病毒科病毒,目前已知的主要包括BK病毒(BKV)、JV病毒(JCV)和SV40病毒,均为广泛分布于哺乳动物的裸露小DNA病毒,不具外膜,呈对称的20面体,直径为45 nm。病毒基因组包含三个区域,分别为:(1)早期区域:编码大小T抗原... 多瘤病毒属乳头多瘤空泡病毒科病毒,目前已知的主要包括BK病毒(BKV)、JV病毒(JCV)和SV40病毒,均为广泛分布于哺乳动物的裸露小DNA病毒,不具外膜,呈对称的20面体,直径为45 nm。病毒基因组包含三个区域,分别为:(1)早期区域:编码大小T抗原,在病毒转化、复制和基因表达的调节方面起作用;(2)晚期区域:编码3种病毒衣壳蛋白V1P、V2P、V3P;(3)非编码的调节区域。这3种多瘤病毒在基因水平上有70%~75%的同源性,彼此难区分,但无血清交叉反应。 展开更多

关键词 病毒感染 BK病毒 肾移植术后 诊治 sv40病毒 多瘤病毒 DNA病毒 病毒基因组

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SV40大T抗原在人脑肿瘤中与p53形成特异性复合物 被引量：1

11

作者 甄海宁 章翔 +7 位作者 步星耀 黄文晋 张萍 梁景文 王西玲 陈镔复 张志文 易声禹 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期73-76,共4页

目的　探讨SV40早期区域基因编码产物大T抗原 (Tag)表达及与抑癌蛋白p5 3的相互作用在人脑肿瘤发生发展中的意义。方法　采用免疫共沉淀及Western印迹法检测 43例人脑肿瘤组织及 5例正常人脑组织中Tag的表达 ,并对 18例Tag阳性瘤组织检... 目的　探讨SV40早期区域基因编码产物大T抗原 (Tag)表达及与抑癌蛋白p5 3的相互作用在人脑肿瘤发生发展中的意义。方法　采用免疫共沉淀及Western印迹法检测 43例人脑肿瘤组织及 5例正常人脑组织中Tag的表达 ,并对 18例Tag阳性瘤组织检测Tag p5 3复合物的存在。结果　Tag在 5例室管膜瘤及 2例脉络丛乳头状瘤中全部表达 ,垂体腺瘤 (5 / 6 )、星形胶质细胞瘤 (7/10 )、脑膜瘤 (4 / 6 )、多形性胶质母细胞瘤 (3/ 5 )及髓母细胞瘤 (2 / 5 )均有Tag的表达 ,3例少枝胶质细胞瘤、1例松果体瘤及 5例正常人脑组织无Tag表达 ;检测 18例Tag阳性瘤组织均发现Tag与 p5 3形成特异性复合物。结论　在人脑肿瘤组织中Tag广泛表达 ,Tag可与p5 3形成特异性复合物 ,Tag p5 3特异性复合物的形成导致 p5 3失活 。 展开更多

关键词 sv40病毒 T抗原 抑癌蛋白P53 脑肿瘤

原文传递

恒河猴外周血及肾组织SV40病毒基因分析 被引量：1

12

作者 刘建生 刘馨 +2 位作者 徐冬蕾 邵聪文 侯宗柳 《中国病毒学》 CSCD 2003年第1期79-81,共3页

SV40即猿猴病毒40(simian virus 40),是DNA肿瘤病毒的原型代表,其基因结构为共价闭合环状双股DNA分子,标准参考株SV40-776含5243个核甘酸,不同分离株bp数略有差异.

关键词 sv40病毒 大T抗原 小T抗原 恒河猴

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pcDNA3.0-SV40T重组表达质粒的构建及鉴定

13

作者 李融 赵国琦 韩庆广 《家畜生态学报》 2009年第2期81-83,105,共4页

选用pGEM-SV40 T质粒经XhoI单酶切获得SV40 T基因片段,并将其插入pcDNA3.0载体,构建重组质粒pcDNA3.0-SV40 T,为建立永生化细胞系奠定基础。结果表明,经酶切鉴定证实,SV40T基因片段已经成功插入载体中。构建的SV40病毒T抗原重组质粒为利... 选用pGEM-SV40 T质粒经XhoI单酶切获得SV40 T基因片段,并将其插入pcDNA3.0载体,构建重组质粒pcDNA3.0-SV40 T,为建立永生化细胞系奠定基础。结果表明,经酶切鉴定证实,SV40T基因片段已经成功插入载体中。构建的SV40病毒T抗原重组质粒为利用SV40T抗原进行真核细胞研究提供了稳定、可靠的分子工具。 展开更多

关键词 sv40病毒 T抗原 重组质粒 永生化

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动物园工作人员感染SV40病毒的危险情况不详

14

作者 张薇 《传染病网络动态》 2005年第2期6-7,共2页

据Medscape．com 12月14日报道(原载J Infect Dis 2004；39：190)，对254例北美动物园工作人员的研究提示，与灵长类的动物有密切接触的动物园工作人员的猿病毒40(SV40)感染危险呈上升趋势。但要明确感染风险的确切水平以及是否人感染S... 据Medscape．com 12月14日报道(原载J Infect Dis 2004；39：190)，对254例北美动物园工作人员的研究提示，与灵长类的动物有密切接触的动物园工作人员的猿病毒40(SV40)感染危险呈上升趋势。但要明确感染风险的确切水平以及是否人感染SV40后不会发病等具体情况则需要进行大样本调查才能明确。 展开更多

关键词 感染 工作人员 密切接触 sv40病毒 危险 发病 大样本 动物园

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动物遗传工程

15

《生物技术通报》 CAS CSCD 1996年第5期95-98,共4页

961945 作为药理学工具的转基因动物[英]/Buerki,K.…//Adv.Drug Res.-1995,26.-143～177[译自DBA,1995,14(24),95-14457] 综述内容如下:(1)产生遗传改良动物的方法;(2)获得功能模型,如点突变或克隆序列的定向插入,cre/lox-介导的基因... 961945 作为药理学工具的转基因动物[英]/Buerki,K.…//Adv.Drug Res.-1995,26.-143～177[译自DBA,1995,14(24),95-14457] 综述内容如下:(1)产生遗传改良动物的方法;(2)获得功能模型,如点突变或克隆序列的定向插入,cre/lox-介导的基因或转基因的活化;(3)丧失功能模式,如反义RNA、核酶或显性阴性突变的表达、 展开更多

关键词 转基因 促生长素 罗非鱼 卵母细胞 培养基 启动子 sv40病毒 绿色荧光蛋白 转基因表达 受精卵

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活SV40病毒早期启动子的研究 被引量：13

16

作者 刘妍 段惠娟 +5 位作者 成军 王建军 陆荫英 牟劲松 王琳 张玲霞 《军医进修学院学报》 CAS 2003年第2期81-83,共3页

目的 :探讨丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS5A的反式激活作用。方法 :扩增HCVNS5A基因 ,构建HCVNS5A基因真核表达载体 pcDNA3 1( ) NS5A ;并转染肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞 ,免疫印迹方法检测转染细胞中HCVNS5A蛋白的瞬时表达 ;与报告... 目的 :探讨丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS5A的反式激活作用。方法 :扩增HCVNS5A基因 ,构建HCVNS5A基因真核表达载体 pcDNA3 1( ) NS5A ;并转染肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞 ,免疫印迹方法检测转染细胞中HCVNS5A蛋白的瞬时表达 ;与报告质粒 pCAT3- promoter共转染HepG2细胞 ,用酶联免疫吸附方法检测细胞中氯霉素乙酰转移酶 (CAT)的表达活性。结果 :质粒pcDNA3 1( ) NS5A在HepG2细胞瞬时表达HCVNS5A蛋白 ,共转染实验中 pcDNA3 1( ) NS5A组的CAT表达活性是空质粒对照组的 3 8倍。结论 :构建的表达载体能在哺乳动物细胞中表达出相应蛋白 ,并能够反式激活SV4 0病毒早期启动子。本研究为进一步克隆HCVNS5A蛋白反式激活的靶基因 。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白 NS5A反式激活sv40病毒 多瘤病毒

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应用PCR方法检测SV40病毒基因 被引量：2

17

作者 任丽虹 林凌 +4 位作者 白巍 孙明 马波 李琦涵 候宗柳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2001年第1期31-32,共2页

目的 建立一种有效的ＳＶ４０毒基因检测方法。方法以ＳＶ４０－７７６标准株ＤＮＡ为模板，以针 对 ＳＶ４０ ３种抗原设计的 ３对引物进行各自的 ＰＣＲ扩增、克隆、测序，再以恒河猴全血 ＤＮＡ为模板，同样用以上 ３对 引物进行各... 目的 建立一种有效的ＳＶ４０毒基因检测方法。方法以ＳＶ４０－７７６标准株ＤＮＡ为模板，以针 对 ＳＶ４０ ３种抗原设计的 ３对引物进行各自的 ＰＣＲ扩增、克隆、测序，再以恒河猴全血 ＤＮＡ为模板，同样用以上 ３对 引物进行各自ＰＣＲ扩增，再以同样步骤克隆、测序。最后以筛选得到的ＳＶ４０ＰＣＲ检测引物对１４７份猴血ＤＮＡ进行 检测。结果３对引物中只有ＳＴ和ＲＲ引物可有效地从猴血中进行ＳＶ４０基因片段扩增。用该引物对１４７份猴全 血ＤＮＡ检测结果表明，在猴群中ＳＶ４０病毒的感染率较高。结论应用该方法检测ＳＶ４０感染灵敏、简便、快速。 展开更多

关键词 sv40病毒基因 PCR检测 恒河猴 全血DNA

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SV40病毒与人类肿瘤

18

《抗癌》 2002年第2期45-45,共1页

关键词 病因 sv40病毒 肿瘤

原文传递

青髓灰质炎 猿病毒

19

《首都医药》 2004年第15期21-21,共1页

关键词 髓灰质炎 猿病毒 疫苗 sv40病毒感染

原文传递