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AMIGO2通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进鼻咽癌细胞的增殖
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作者 叶旺忠 许元基 +6 位作者 叶韵斌 黄心怡 刘枋 李洁羽 林智忠 柏朋刚 陈传本 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1093-1099,共7页
目的:探讨Ig样结构域2黏附分子(adhesion molecule with Ig like domain 2,AMIGO2)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞增殖中的作用及其机制。方法:选用2017年9月至11月福建省肿瘤医院收集的10例NPC组织和10例正常鼻咽黏膜上... 目的:探讨Ig样结构域2黏附分子(adhesion molecule with Ig like domain 2,AMIGO2)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞增殖中的作用及其机制。方法:选用2017年9月至11月福建省肿瘤医院收集的10例NPC组织和10例正常鼻咽黏膜上皮组织标本,以及NPC细胞系CNE-1、CNE-2、SUNE-1、6-10B、C666-1和人永生化鼻咽黏膜上皮细胞株NP69,用qPCR法检测NPC组织和细胞中AMIGO2 mRNA的表达。构建慢病毒载体干扰AMIGO2表达,用qPCR法验证其干扰效率;用CCK-8法、克隆形成及流式细胞术检测干扰AMIGO2表达对NPC细胞增殖、克隆形成和凋亡的影响,用Western blotting检测干扰AMIGO2表达对NPC细胞增殖及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关标志蛋白表达的影响。结果:AMIGO2在NPC组织和CNE-2和SUNE-1细胞中高表达(均P<0.01)。慢病毒AMIGO2感染后,CNE-2和SUNE-1细胞的AMIGO2干扰效率均达50%以上。干扰AMIGO2表达,显著降低CNE-2和SUNE-1细胞增殖及克隆形成能力(均P<0.01)、明显提高细胞的凋亡率(均P<0.01);降低SUNE-1细胞中PI3K、AKT和mTOR磷酸化蛋白的表达水平(均P<0.01)、下调survivin和PCNA蛋白的表达水平(均P<0.01)。结论:AMIGO2通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进NPC细胞增殖并抑制其凋亡,提示AMIGO2可能是NPC治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 Ig样结构域2黏附分子 鼻咽癌 sune-1细胞 CNE-2细胞 增殖 凋亡 信号通路
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X射线诱导γH2AX焦点形成的定量分析及其致DNA双链断裂的动态变化 被引量:3
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作者 董隽 王成涛 +7 位作者 张纯 任玉峰 欧阳斌 张天 王振宇 Gloria C.Li Fuqiu He 文碧秀 《中华放射肿瘤学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期303-308,共6页
目的 比较DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs^+/+)和DNA-PKcs^-/-小鼠胚胎成纤维细胞(MEF) X射线诱导γH2AX焦点形成的定量分析,并对鼻咽癌SUNE-1细胞进行X射线致DNA DSB动态变化。方法 采用蛋白印迹检测DNA-PKcs蛋白表达情况,细... 目的 比较DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs^+/+)和DNA-PKcs^-/-小鼠胚胎成纤维细胞(MEF) X射线诱导γH2AX焦点形成的定量分析,并对鼻咽癌SUNE-1细胞进行X射线致DNA DSB动态变化。方法 采用蛋白印迹检测DNA-PKcs蛋白表达情况,细胞免疫荧光检测X射线5 Gy诱导的γH2AX焦点形成,通过ImageJ软件分析γH2AX焦点形成数量的差异。结果 DNA-PKcs在DNA-PKcs^-/-和DNA-PKcs^+/+ MEF细胞中分别表达缺失和正常。应用γH2AX焦点/细胞和γH2AX焦点/mm2分析方法动态分析X射线诱导的DNA-PKcs^+/+、DNA-PKcs^-/-MEF细胞和SUNE-1细胞DSB形成的总体趋势一致;照后 0.5~1.0 h大量γH2AX焦点形成,DNA-PKcs^+/+ MEF细胞于照后6.0 h完成修复,DNA-PKcs^-/-MEF和SUNE-1细胞X射线后于照后24.0 h完成修复。γH2AX焦点/细胞的峰值出现在照后1.0 h,γH2AX焦点/mm2的峰值则出现在照后0.5 h。对于DNA-PKcs^+/+和DNA-PKcs^-/-MEF细胞,γH2AX焦点/细胞在照后0.5、1.0、3.0、6.0、12.0 h的不同,而γH2AX焦点/mm2在照后3.0、6.0、12.0 h不同。结论 利用细胞免疫荧光动态检测照后致γH2AX焦点/细胞或γH2AX焦点/mm2的分析方法为动态定量研究DSB损伤及修复提供了新的思路。 展开更多
关键词 非同源末端连接 DNA依赖蛋白激酶催化亚基 γH2AX焦点 sune-1细胞系
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慢病毒介导荧光素酶表达的人鼻咽癌细胞小鼠模型的建立 被引量:2
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作者 吕景礼 李二毛 +2 位作者 李晓艳 周问渠 刘启才 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第36期7005-7009,共5页
目的:建立荧光素酶标记的人鼻咽癌细胞裸鼠模型,活体成像系统监测肿瘤的生长并与肿瘤的体积进行对比。方法:构建表达荧光素酶基因2(luc2)的慢病毒载体,与辅助质粒共转染293T细胞以制备慢病毒,感染人鼻咽癌SUNE1细胞后经嘌呤霉素筛选获... 目的:建立荧光素酶标记的人鼻咽癌细胞裸鼠模型,活体成像系统监测肿瘤的生长并与肿瘤的体积进行对比。方法:构建表达荧光素酶基因2(luc2)的慢病毒载体,与辅助质粒共转染293T细胞以制备慢病毒,感染人鼻咽癌SUNE1细胞后经嘌呤霉素筛选获得表达luc2的细胞株。活体成像设备体外检测不同数量细胞的发光强度,最后以5×106个细胞皮下接种BALB/c nu/nu裸鼠,活体成像系统动态记录接种后肿瘤的信号并与肿瘤的体积对比。结果:成功构建慢病毒表达质粒pLenti-luc2并包装出慢病毒颗粒,病毒感染后嘌呤霉素筛选6天得到鼻咽癌细胞株SUNE1-luc2。细胞株传代后有稳定的发光强度,且经活体检测的每秒光子数与细胞数成正相关(R2=0.96);活体成像观察发现裸鼠接种第2天接种部位的发光强度就达到3.2×108,而且成瘤过程中发光强度的变化与肿瘤大小一致。结论:成功构建适用于活体成像的人鼻咽癌SUNE1细胞的裸鼠成瘤模型,该模型从细胞接种开始即可有效动态监测鼻咽癌皮下瘤的生长及转移,从而为鼻咽癌的成瘤机制及药物干预研究提供一个新的手段。 展开更多
关键词 荧光素酶 sune1细胞 慢病毒 活体成像
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