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O型口蹄疫病毒VP3蛋白的可溶性表达与反应原性分析 被引量：5
1
作者 刘运超 冯丽丽 +5 位作者 赵宝磊 陈玉梅 姬鹏超 王聚财 邓瑞广 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第11期124-128,共5页
按照大肠杆菌密码子偏爱性优化合成了O型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP3基因,将该基因亚克隆到原核表达载体p E-SUMO中,构建重组表达质粒p SUMO-VP3,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导SUMO-VP3融合蛋白表达,在IPTG浓度0.1 mmol/L、温... 按照大肠杆菌密码子偏爱性优化合成了O型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP3基因,将该基因亚克隆到原核表达载体p E-SUMO中,构建重组表达质粒p SUMO-VP3,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导SUMO-VP3融合蛋白表达,在IPTG浓度0.1 mmol/L、温度16℃、诱导8 h时融合蛋白表达量最高。SDS-PAGE电泳及Western blot结果表明,p ESUMO-VP3重组表达载体获得的融合蛋白以可溶性表达为主,且融合蛋白均可被FMDV阳性血清识别,反应原性良好。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 结构蛋白VP3 蛋白可溶性表达 sumo标签
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多形拟杆菌肝素酶Ⅰ的SUMO融合表达及酶学特性分析 被引量：2
2
作者 张川 张悦 +3 位作者 丁啸虎 李中媛 宋亚囝 罗学刚 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1318-1330,共13页
【目的】克隆多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron) Heparinase I基因,在大肠杆菌(Escherichiac。")中进行基因工程表达获得重组酶SUMO-Bt-HepI和Bt-HepI,并研究其酶学特性。【方法】对B.thetaiotaomicron肝素酶I (Bt-HepI)... 【目的】克隆多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron) Heparinase I基因,在大肠杆菌(Escherichiac。")中进行基因工程表达获得重组酶SUMO-Bt-HepI和Bt-HepI,并研究其酶学特性。【方法】对B.thetaiotaomicron肝素酶I (Bt-HepI)的基因序列进行密码子优化,PCR扩增得到目的基因,构建表达载体pET-28a-Bt-HepI和pE-SUMO-Bt-HepI,并转化至E. colt Rosetta (DE3)进行表达,分别得到重组产物Bt-HepI和SUMO-Bt-HepI,以肝素钠为底物研究两者的酶学性质。【结果】SDS-PAGE检测显示Bt-HepI和SUMO-Bt-HepI的分子量大小分别约为42.5 kDa和55 kDa。与Bt-HepI相比,融合SUMO-Tag后的肝素酶I比酶活提高了 48.9%。酶学性质表明:Bt-HepI和SUMO-Bt-HepI的最适pH和温度均为pH 9、45℃,二者在pH 5-9都具有很好的稳定性,但pH<5时,SUMO-Bt-HepI的耐酸性明显高于Bt-HepI0同时,在温度低于50 ℃时,SUMO-Bt-HepI的比酶活高于Bt-Hepl。此外,Ca^2+和Mg^2+对重组肝素酶I具有明显的促进作用,而CU^2+、Mr^2+、Zt^2+则表现出一定的抑制作用,提示在多形拟杆菌肝素酶I的结构中除了存在已知的Ca2+结合位点外,可能还存在Mg2+的结合位点。【结论】本研究首次将多形拟杆菌来源的肝素酶I和SUMO-Tag进行了融合表达,使其比酶活得到了显著的提高,为其生产应用奠定了基础。 展开更多
关键词 多形拟杆菌 肝素酶I sumo-tag 融合表达 酶学性质
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猫泛白细胞减少症病毒的分离鉴定及其结构蛋白VP2可溶性表达的调控 被引量：1
3
作者 刘丽春 徐国伟 +9 位作者 茹毅 李亚军 杨明星 梁超 刘晓飞 张世栋 李建喜 王学智 孙研 周雨霞 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期706-714,共9页
为了研究猫泛白细胞减少症病毒(FPV)的生物学特性,可溶性表达FPV结构蛋白,研发基于VP2的新型亚单位疫苗,采集40份疑似FPV阳性的中华田园猫粪便样本,通过qPCR对样本检测后利用细胞培养、血凝试验、PCR和电镜观察等试验鉴定分离株,并对其... 为了研究猫泛白细胞减少症病毒(FPV)的生物学特性,可溶性表达FPV结构蛋白,研发基于VP2的新型亚单位疫苗,采集40份疑似FPV阳性的中华田园猫粪便样本,通过qPCR对样本检测后利用细胞培养、血凝试验、PCR和电镜观察等试验鉴定分离株,并对其VP2基因进行同源性比对。同时,构建pET-28a-VP2、pET-28a-SUMO-VP2和pET-22a-SUMO-VP2重组质粒并利用大肠杆菌进行表达。结果显示,成功分离出1株FPV毒株;生物信息学分析表明,该毒株的VP2基因与此前报道的毒株同源性高达99%。蛋白表达结果显示,单独使用SUMO标签对VP2蛋白的可溶性表达影响较低;然而,当带有SUMO标签的重组质粒与4个分子伴侣(pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pTf16)分别共表达时,可溶性VP2的表达量可显著提高。该研究可为FPV亚单位疫苗研发提供数据和有效的生物材料。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 中华田园猫 sumo标签 分子伴侣 亚单位疫苗
原文传递
O型口蹄疫病毒VP0和VP1蛋白的可溶性表达与反应原性分析 被引量：4
4
作者 赵宝磊 刘运超 +5 位作者 陈玉梅 姬鹏超 王聚财 刘畅 杨素珍 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第2期105-110,共6页
为了高效可溶性表达O型口蹄疫病毒(FMDV)VP0、VP1结构蛋白,根据大肠杆菌密码子的偏爱性优化合成VP0和VP1基因片段,并将其克隆到p E-SUMO载体中,构建重组质粒SUMOVP0和SUMO-VP1,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表... 为了高效可溶性表达O型口蹄疫病毒(FMDV)VP0、VP1结构蛋白,根据大肠杆菌密码子的偏爱性优化合成VP0和VP1基因片段,并将其克隆到p E-SUMO载体中,构建重组质粒SUMOVP0和SUMO-VP1,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,并优化诱导温度、时间和IPTG浓度等表达条件。结果显示,SUMO-VP0可溶性蛋白表达的最佳条件为:20℃条件下,0.1 mmol/L IPTG诱导表达8 h;SUMO-VP1可溶性蛋白表达的最佳条件为:37℃条件下,0.1 mmol/L IPTG诱导表达12 h。SDS-PAGE电泳和Western blot结果表明,表达的SUMOVP0、SUMO-VP1可溶性蛋白能够被抗FMDV的阳性血清识别,具有很好的反应原性。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 VP0、VP1结构蛋白 可溶性表达 sumo标签
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基于开放式三明治酶联免疫分析的雌二醇检测方法的建立
5
作者 王文皓 闫若辰 +1 位作者 魏琳纳 袁玉华 《天津医科大学学报》 2022年第2期200-204,共5页
目的:通过建立开放式三明治酶联免疫分析方法(OE-ELISA),对雌二醇进行检测。方法:通过基因拼接构建质粒后在原核表达系统中制备小分子泛素相关修饰物蛋白-大肠杆菌麦芽糖结合蛋白-抗体轻链可变区(sumo-MBP-VL)和碱性磷酸酶-抗体重链可变... 目的:通过建立开放式三明治酶联免疫分析方法(OE-ELISA),对雌二醇进行检测。方法:通过基因拼接构建质粒后在原核表达系统中制备小分子泛素相关修饰物蛋白-大肠杆菌麦芽糖结合蛋白-抗体轻链可变区(sumo-MBP-VL)和碱性磷酸酶-抗体重链可变区(ALP-VH)融合蛋白,并从产量和可溶性角度对两种蛋白的表达条件进行优化。将得到的两种蛋白纯化后分别作为包被抗体和酶标抗体,建立检测雌二醇的OE-ELISA方法。应用竞争ELISA和OE-ELISA测定不同浓度的雌二醇标准品,绘制标准曲线并计算两种方法的敏感性。结果:在质粒中加入sumo标签后,实现了sumo-MBP-VL融合蛋白的可溶性表达。在Rosetta宿主菌中37℃诱导后得到大量的ALP-VH和sumo-MBP-VL融合蛋白。OE-ELISA测定雌二醇标准品的标准曲线为y=0.0296x+1.3029,r^(2)=0.9961,敏感性为532 pg/mL,优于竞争ELISA 803 pg/mL的敏感性。结论:成功建立了检测雌二醇的OE-ELISA方法。 展开更多
关键词 OE-ELISA 雌二醇 竞争ELISA sumo标签
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人乙醛脱氢酶2的原核表达及其条件优化
6
作者 孙莉 李智博 +2 位作者 秦飞 邓帅 杨君 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期123-128,共6页
为实现人乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因在原核生物中高效表达,将含有6×His标签和SUMO融合蛋白标签的人乙醛脱氢酶2基因的表达载体转化至宿主菌BL21(DE3)中。在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,目的基因在大肠杆菌内高效表达。通过... 为实现人乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因在原核生物中高效表达,将含有6×His标签和SUMO融合蛋白标签的人乙醛脱氢酶2基因的表达载体转化至宿主菌BL21(DE3)中。在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,目的基因在大肠杆菌内高效表达。通过对表达条件的优化,37℃使用终浓度0.3mmol/L的IPTG诱导3h,重组大肠杆菌的表达量可占全菌蛋白的16%。SUMO融合蛋白标签的加入以及较低的诱导温度(16℃)有利于提高人乙醛脱氢酶2基因在大肠杆菌内的可溶性表达。 展开更多
关键词 乙醛脱氢酶 原核表达 sumo蛋白 表达优化
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低分子量麦谷蛋白基因XYGluD3-LMWGS1原核表达增溶体系的探索
7
作者 刘曾甄 刘缙 郭蔼光 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1513-1520,共8页
为研究SUMO标签增溶体系和小麦低分子量麦谷蛋白亚基功能,利用SUMO标签构建XYGluD3-LM-WGS基因原核表达可溶性增强的系统,采用PCR方法从已有质粒XYGluD3-LMWGS1/pGEM-Teasy中克隆到该基因不含上游启动子片段XYGluD3-LMWGS1-no Promoter ... 为研究SUMO标签增溶体系和小麦低分子量麦谷蛋白亚基功能,利用SUMO标签构建XYGluD3-LM-WGS基因原核表达可溶性增强的系统,采用PCR方法从已有质粒XYGluD3-LMWGS1/pGEM-Teasy中克隆到该基因不含上游启动子片段XYGluD3-LMWGS1-no Promoter 798 bp(简称LnoP),构建原核表达载体LnoP/pGEX-4T-1,并借助已有质粒SUMO1/pET-41a(+)构建原核表达载体LnoP-SUMO1/pET-41a(+)与LnoP-SUMO1-N2/pET-41a(+)以及LnoP-SUMO1/pET-32a(+),分别诱导表达融合蛋白分析其可溶性,结果显示;(1)融合蛋白GST-LnoP、GST-SUMO1-LnoP、SUMO1-LnoP和Trx-SUMO1-LnoP表达成功;(2)电泳和Western blot分析显示,GST-LnoP和GST-SUMO1-LnoP的可溶蛋白表达均为电泳不可见,SUMO1-LnoP与Trx-SUMO1-LnoP有微量可溶表达.结果表明,试验首次实现人的SUMO1标签在麦谷蛋白低分子量亚基中的融合表达;尽管人的SUMO1做为融合标签对于增加低分子量麦谷蛋白D位点亚基可溶性的作用并未达到预期效果,但研究结果为SUMO标签增溶体系的建立和小麦低分子量麦谷蛋白亚基功能研究奠定了基础. 展开更多
关键词 LMW-GS 半胱氨酸残基 原核表达 sumo1-tag
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