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靶向人SSH1L的siRNA真核表达载体的构建及鉴定
1
作者 邢志军 赵建武 +1 位作者 王岩 高忠礼 《中国实验诊断学》 北大核心 2009年第1期12-14,共3页
目的构建靶向人SSH1L的siRNA真核表达载体(pSUPER-SSH1L)。方法将设计好的SSH1L的siRNA的寡聚脱氧核苷酸链与真核表达载体pSUPER连接,构建重组pSUPER-SSH1L真核表达载体。对该重组表达载体进行酶切鉴定及DNA测序;通过Western blot检测SS... 目的构建靶向人SSH1L的siRNA真核表达载体(pSUPER-SSH1L)。方法将设计好的SSH1L的siRNA的寡聚脱氧核苷酸链与真核表达载体pSUPER连接,构建重组pSUPER-SSH1L真核表达载体。对该重组表达载体进行酶切鉴定及DNA测序;通过Western blot检测SSH1L蛋白的表达。结果酶切鉴定、DNA测序以及Western blot检测结果证实表达质粒构建成功,无碱基突变。结论成功构建了靶向人SSH1L基因表达的siRNA干扰质粒载体pSUPER-SSH1L,为进一步运用RNA干扰技术进行SSH1L基因功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 ssh1l SIRNA 真核表达载体
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体外肝细胞极性重建中cofilin的去磷酸化及其调节
2
作者 陈天宇 张先杰 +2 位作者 孙家邦 孙海晨 李非 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 2007年第9期629-631,共3页
目的观察SSH1L对肝细胞cofilin去磷酸化的调节作用。方法通过体外三明治构型培养肝细胞诱导cofilin的去磷酸化，应用免疫共沉淀法进行SSH1L的体外酶活性分析。进一步对体外培养大鼠肝细胞进行野生型和无活性型SSH1L质粒的转染以实现SSH1... 目的观察SSH1L对肝细胞cofilin去磷酸化的调节作用。方法通过体外三明治构型培养肝细胞诱导cofilin的去磷酸化，应用免疫共沉淀法进行SSH1L的体外酶活性分析。进一步对体外培养大鼠肝细胞进行野生型和无活性型SSH1L质粒的转染以实现SSH1L在肝细胞的过表达，观察肝细胞的cofilin去磷酸化水平。结果三明治构型培养肝细胞96h和1周后，与对照组相比，cofilin的去磷酸化增加，SSH1L酶活性增强。野生型SSH1L在肝细胞的过表达与无活性SSH1L过表达相比，P-cofilin去磷酸化显著增加。结论三明治构型培养肝细胞存在cofilin的去磷酸化，且为SSH1L活性所调节。 展开更多
关键词 肝细胞 COFIlIN 三明治构型 ssh1l
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钙调素蛋白磷酸酶对Slingshot-1L的调控作用
3
作者 王杨 王岩 +1 位作者 赵建武 高忠礼 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期353-355,共3页
目的探讨钙调素依赖蛋白激酶(Calcinenurin/PP2B/CnA/Cn)对Slingshot-1L(SSH-1L)活性的调控作用。方法用脂质体法将含YFP-SSH-1L的重组质粒转染至MG63细胞,经钙离子载体A23187诱导10min,进行免疫细胞化学染色,观察细胞形态变化;体内及... 目的探讨钙调素依赖蛋白激酶(Calcinenurin/PP2B/CnA/Cn)对Slingshot-1L(SSH-1L)活性的调控作用。方法用脂质体法将含YFP-SSH-1L的重组质粒转染至MG63细胞,经钙离子载体A23187诱导10min,进行免疫细胞化学染色,观察细胞形态变化;体内及体外实验检测PP3B对SSH-1L的活性调控作用;应用免疫共沉实验检测PP2B与SSH-1L的相互结合情况。结果Ca2+信号诱导骨肉瘤细胞形成伪叶,同时SSH-1L与F-actin移位共聚集至细胞膜伪叶,但是被PP2B有效抑制剂Cypermethrin完全阻断;在体外,SSH-1L磷酸酶活性测定实验以及SSH-1L与PP2B结合实验证实SSH-1L与PP2B在细胞内是一对相互结合的蛋白质,同时PP2B具有促进SSH-1L酶活性的作用。结论PP2B通路对细胞伪叶的形成及细胞运动具有重要调控作用,同时对SSH-1L酶具有促进其活性的作用。 展开更多
关键词 钙调磷蛋白激酶(Calcineurin/PP2B/Cna/Cn) Slingshot-1l(ssh-1l) 骨肉瘤
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钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ调控SSH-1L活性的作用
4
作者 王杨 王岩 +1 位作者 赵建武 高忠礼 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期474-476,共3页
目的探讨钙(Ca2+)/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)对Slingshot-1L(SSH-1L)活性的调控作用。方法用脂质体法将含Myc-SSH-1L的重组质粒转染至MG63细胞,经不同浓度的钙离子载体A23187诱导10min,蛋白印迹实验,观察P-cofilin、P-SSH1L、P-CaM... 目的探讨钙(Ca2+)/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)对Slingshot-1L(SSH-1L)活性的调控作用。方法用脂质体法将含Myc-SSH-1L的重组质粒转染至MG63细胞,经不同浓度的钙离子载体A23187诱导10min,蛋白印迹实验,观察P-cofilin、P-SSH1L、P-CaMKⅡ水平的变化;体内及体外实验检测CaMKⅡ对SSH-1L的磷酸化及活性调控作用。结果当A23187浓度为1μmol/L时CaMKⅡ活性达到了最大,同时此浓度下P-cofilin水平以及SSH-1L的978位点丝氨酸的磷酸化水平升高。体外实验证实CaMKⅡ可使SSH-1L(WT)磷酸化,但是对其突变体SSH-1L(2SA)无作用;同时CaMKⅡ明显抑制了SSH1L(WT)的活性,但对SSH-1L(2SA)的活性无作用。结论CaMKⅡ对SSH-1L的活性具有明显调控作用,且与SSH-1L的丝氨酸位点密切相关。 展开更多
关键词 钙(Ca2%PlUS%)/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ) Slingshot-1l(ssh-1l) 骨肉瘤
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